Phân lập một số chủng xạ khuẩn có khả năng ức chế vi sinh vật gây bệnh đường ruột ở gia súc

TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LÂM NGHIỆP oo0oo KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI SINH VẬT GÂY BỆNH ĐƢỜNG RUỘT Ở GIA SÚC NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 7420201 Giáo viên hướng dẫn : Th.s Nguyễn Thị Minh Hằng Sinh viên thực : Đỗ Thị Trang Mã SV : 1553070555 Lớp : K60 - Công nghệ sinh học Khóa học : 2015 - 2019 Hà Nội, 2019 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu trƣờng Đại học Lâm nghiệp nỗ lực thân nhận đƣợc quan tâm, giúp đỡ nhiều cá nhân tập thể Nhân dịp hồn thành xong khóa luận tốt nghiệp, xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trƣờng, Ban lãnh đạo thầy cô Viện công nghệ sinh học Lâm nghiệp cho phép tạo điều kiện thuận lợi để đƣợc học tập nghiên cứu Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Th.s Nguyễn Thị Minh Hằng tận tình giúp đỡ hƣớng dẫn tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Mặc dù tơi có cố gắng nỗ lực nhiều xong kiến thức hạn chế, thời gian thực đề tài ngắn nên chuyên đề nghiên cứu khơng tránh khỏi sai sót mong nhận đƣợc đóng góp quý báu thầy để chun đề đƣợc hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Đỗ Thị Trang i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii NH MỤ K HIỆU, H VI T TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ HƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu xạ khuẩn 1.1.1.Vị trí phân loại phân bố xạ khuẩn tự nhiên 1.1.2.Đặc điểm sinh học xạ khuẩn 1.1.3.Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 1.2 Phƣơng pháp phân loại xạ khuẩn 1.2.1 Phân loại theo phƣơng pháp truyền thống 1.2.2 Phân loại theo phƣơng pháp đại 10 1.3 Đại cƣơng chất kháng sinh 11 1.3.1 Chất kháng sinh (Antibiotic) 11 1.3.2 Lịch sử nghiên cứu chất kháng sinh 11 1.3.3 Sự hình thành chất kháng sinh xạ khuẩn 12 1.3.4 Các chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn 13 1.4 Ứng dụng chất kháng sinh 15 1.4.1 Ứng dụng y học 15 1.4.2 Ứng dụng bảo vệ thực vật chăn nuôi thú y 16 1.5 Gia súc vi sinh vật gây bệnh đƣờng ruột gia súc 18 1.5.1 Gia súc số loại bệnh đƣờng ruột thƣờng gặp gia súc 18 1.5.2 Các vi sinh vật gây bệnh đƣờng ruột gia súc 20 1.6 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 23 ii HƢƠNG MỤC TIÊU – NỘI DUNG - NGUYÊN LIỆU PHƢƠNG PH P NGHIÊN CỨU 28 2.1 Mục tiêu nghiên cứu .28 2.2 Nội dung nghiên cứu 28 2.3 Nguyên liệu 28 2.3.1 Mẫu đất 28 2.3.2 Đối tƣợng nghiên cứu 28 2.3.3 Dụng cụ, thiết bị hóa chất 28 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu .29 2.4.1 Phƣơng pháp phân lập xạ khuẩn từ đất 29 2.4.2 Phƣơng pháp khiết bảo quản giống 31 2.4.3 Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng sinh 31 2.4.4 Phƣơng pháp lên men thu nhận sinh khối tế bào xạ khuẩn 32 2.4.6 Xác định hoạt tính enzyme xạ khuẩn phƣơng pháp khếch tán đĩa thạch 32 2.4.7 Phƣơng pháp xử lý số liệu 33 HƢƠNG K T QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Kết phân lập xạ khuẩn 34 3.1.1 Phân lập xạ khuẩn 34 3.1.2 Phân bố xạ khuẩn theo nhóm màu 34 3.1.3 Số lƣợng khuẩn lạc mọc đĩa thạch 36 3.1.4 Thuần khiết bảo quản giống chủng XK phân lập đƣợc 36 3.2 Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh 37 3.2.1 Tuyển chọn sơ ban đầu phƣơng pháp đục lỗ thạch 37 3.2.2 Tuyển chọn chủng XK có HTKS cao 40 3.3 Xác định hoạt tính enzyme ngoại bào chủng XK tuyển chọn 45 3.4 Quan sát đặc điểm khuẩn lạc chủng XK tuyển chọn 47 K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO iii NH MỤC C C HIỆU, CÁC CH VIẾT TẮT CFU Colony Forming Unit BVTT Bảo vệ thực vật GI Môi trƣờng Gause I VSVKĐ Vi sinh vật kiểm định HSKS Hệ sợi kh sinh HSCC Hệ sợi chất TB Tế bào VSV Vi sinh vật CMC Cacborxyl Methyl cellulose hất Kháng sinh CKS HTKS Hoạt tính kháng sinh XK Xạ khuẩn HTSH Hoạt t nh sinh học VK Vi khuẩn G Gram G (+) Gram dƣơng G (-) Gram âm iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Kháng sinh đƣợc phát qua năm 12 Bảng 3.1 Số lƣợng phân bố xạ khuẩn theo nhóm màu 34 Bảng 3.2 Số lƣợng khuẩn lạc mọc đĩa thạch nồng độ 10-5 10-6 .36 Bảng 3.3 HTKS 15 chủng XK với chủng vi khuẩn E.coli, Salmonella, Shigella………………………………………………………………………………38 Bảng 3.4 HTKS 15 chủng xạ khuẩn theo nhóm màu .39 Bảng 3.5 HTKS chủng XK tuyển chọn phƣơng pháp thỏi thạch 40 Bảng 3.6 HTKS chủng XK đƣợc nuôi cấy môi trƣờng GI lỏng khoảng thời gian khác 41 Bảng 3.7 Hoạt tính enzyme chủng XK 46 Bảng 3.8 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng XK tuyển chọn 47 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Khuẩn lạc xạ khuẩn Hình 1.2 Hình dạng cuống sinh bào tử bề mặt bào tử chủng Streptomyces cinereoruber subp Hình 3.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc số chủng XK theo nhóm màu 35 Hình 3.2 Các chủng XK đƣợc khiết bảo quản ống thạch nghiêng.37 Hình 3.3 HTKS chủng XKĐ8 lên chủng vi khuẩn gây bệnh .43 Hình 3.4 HTKS chủng XKĐ12 lên chủng vi khuẩn gây bệnh .43 Hình 3.5 HTKS chủng XK kháng vi khuẩn gây bệnh .45 Hình 3.6 Hoạt tính enzyme dịch lên men chủng XK tuyển chọn 46 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Nƣớc ta nƣớc nằm khu vực nhiệt đới gió mùa ẩm, lƣợng mƣa lớn, nhiệt độ độ ẩm không kh cao điều kiện thuận lợi cho vi sinh vật phát triển có nhiều loại vi sinh vật có hại gây ảnh hƣởng trực tiếp tới đời sống ngƣời đặc biệt với q trình sản xuất nơng nghiệp Có nhiều vi sinh vật gây bệnh cho động vật, thực vật theo ghi nhận hàng năm gây thiệt hại lớn cho ngành sản xuất nông – lâm – ngƣ nghiệp Để giảm thiểu nguy hại vi sinh vật gây bệnh, năm phải sử dụng lƣợng lớn chất bảo vệ thực vật hóa học, thuốc kháng sinh cho động vật đem lại hiệu nhanh tức thời xong hệ lụy để lại khơng nhỏ Các chất độc hóa học khó tan, lắng đọng, gây nhiễm nguồn nƣớc, không kh , đất ảnh hƣởng xấu tới sống ngƣời sinh vật Chính Hội nghị tƣ vấn khu vực hâu Thái Bình ƣơng F O năm 1992 khẳng định đấu tranh sinh học tảng trƣơng trình IPM (Quản lý dịch hại tổng hợp) Trong số tác nhân sinh học thƣờng đƣợc sử dụng để ức chế vi sinh vật gây bệnh, xạ khuẩn nhóm có nhiều tiềm có khả sinh chất kháng sinh cao, có nhiều chất kháng sinh kháng nấm mạnh Xạ khuẩn, đặc biệt loài thuộc chi Streptomyces đƣợc xem nguồn sản xuất chất kháng sinh nhiều Cho tới nay, khoảng 8.000 chất kháng sinh đƣợc biết giới, 80% xạ khuẩn sinh (Dhanasekaran et al., 2012) Vì vậy, việc tìm kiếm chủng xạ khuẩn có khả sinh chất kháng sinh kháng nấm bệnh (Fusarium spp., Phytophthora spp., Botryosphaeria spp., Sclerotium hydrophylum) góp phần vào cơng tác bảo vệ trồng xây dựng nơng nghiệp an tồn bền vững Việc chăn nuôi gia súc phận quan trọng nông nghiệp Theo báo cáo Bộ NN&PTNT, năm 2018 chăn nuôi Việt Nam đạt thành tựu to lớn Trong năm 2018 mức tăng trƣờng đàn vật nuôi tốt quy mô sản lƣợng Hệ sinh thái đƣờng ruột gia súc đa dạng Bao gồm nhiều loài vi sinh vật, giúp chúng tiêu hóa thức ăn, bên cạnh sâm nhập, phát mạnh lồi có hại gây bệnh đƣờng ruột cho gia súc Mức độ lây lan bệnh đƣờng ruột gia súc nhanh, dễ bùng phát ổ dịch khó khiểm sốt, ảnh hƣởng lớn đến kinh tế mơi trƣờng, việc sử dụng chất KS chƣa gây ảnh hƣờng lớn đến sức khỏe ngƣời, vật nuôi mơi trƣờng sống Vì vậy, việc sử dụng CKS có nguồn gốc từ VSV, từ XK cần thiết việc tìm kiếm chủng XK có khả đối kháng, ức chế VSV gây bệnh đƣờng ruột có tầm quan trọng đặc biệt, góp phần giảm dịch bệnh, xây dựng nơng nghiệp an tồn bền vững Xuất phát từ tình hình thực tiễn trên, theo xu hƣớng công nghệ sinh học giới nay, nhƣ để góp phần khai thác nguồn lợi VSV phong phú đất, tiến hành thực đề tài: “Phân lập số chủng xạ khuẩn có khả ức chế vi sinh vật gây bệnh đường ruột gia súc.” CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu xạ khuẩn 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố xạ khuẩn tự nhiên Xạ khuẩn nhóm vi sinh vật đa dạng đa số sinh trƣởng hiếu khí tạo khuẩn ty phân nhánh tƣơng tự nhƣ nấm Tên xạ khuẩn – actinomycete – bắt nguồn từ tiếng Hy Lạp “actys” (tia) “mykes” (nấm) ban đầu xạ khuẩn đƣợc coi vi nấm chúng sinh trƣởng giống với nấm Mạng lƣới phân nhánh thể sợi thƣờng phát triển bề mặt chất rắn (tạo thành hệ sợi khí sinh) lẫn bên (tạo thành hệ sợi chất) [28] Đây đặc điểm để phân loại xạ khuẩn Theo hệ thống phân loại nay, xạ khuẩn thuộc Tenericutes (gồm vi khuẩn gram dƣơng xạ khuần, thuộc giới vi khuẩn thật (Eubacteria) siêu giới nhân sơ (prokaryota) [36] Xạ khuẩn thuộc lớp Actinobacteria, phân lớp Actinobacteridae, Actinomycetales, bao gồm 10 phân bộ, 35 họ, 110 chi 1000 lồi, có 478 loài thuộc chi Streptomyces 500 loài thuộc chi cịn lại đƣợc xếp vào nhóm XK [13, 44] Streptomyces đặc biệt nhiều đất nơi chúng phân hủy hoại sinh nhiều hợp chất hữu enzyme ngoại bào Một phần lớn chất kháng sinh đƣợc sử dụng hiệu điều trị có nguồn gốc từ lồi Streptomyces, đƣợc biết đến streptomycin, erythromycin, tetracyclin [42] Xạ khuẩn nhóm VSV đa dạng đa số sinh trƣởng hiếu khí tạo khuẩn ty phân nhánh tƣơng tự nhƣ nấm mốc Đa số xạ khuẩn sống tự do, hoại sinh phân bố rộng rãi đất, nƣớc xác thực vật Xạ khuẩn đóng vai trị quan trọng mặt sinh thái vịng tuần hồn tự nhiên Chúng phân hủy sử dụng chất hữu khó phân hủy nhƣ humic acid đất [44] Nhiều chủng xạ khuẩn có khả hịa tan lignnin cách sinh enzyme thủy phân cellulose, hemicellulose peoxidase ngoại bào [35] Các chủng xạ khuẩn xuất môi trƣờng giàu chất hữu nhƣ compost, hai pha ơn hịa (mesophilic) chịu Bảng số liệu 3.6 cho ta thấy đƣờng kính vịng kháng khuẩn chủng XKĐ8 XKĐ12 tƣơng đối cao Thời gian nuôi chủng XK ngày, ngày ngày XK đƣợc ni ngày chủng có hoạt t nh đối kháng cao với loài VSVKĐ X Đ8 X Đ12 cho HTKS cao chủng vi khuẩn E.coli (13,4mm) (13,8mm) Với X Đ8 cho HTKS thấp chủng vi khuẩn Shigella (7 ngày – 7,6mm) Chủng X Đ12 cho HTKS thấp chủng vi khuẩn Salmonella (7 ngày – 7,4mm) CKS sản phẩm trao đổi thứ cấp trình ni cấy XK KS đƣợc tổng hợp đƣờng thông qua trao đổi chất phản ứng emzyme hiệu suất trao đổi chất hiệu suất phản ứng emzyme cao lúc HTKS mạnh Sau đạt cực đại hiệu suất giảm sinh khối tế bào tăng, chất dinh dƣỡng giảm không đủ để đáp ứng trình trao đổi chất nhƣ phản ứng enzyme đạt hiệu suất cao nhất, kéo theo HTKS giảm dần Ngồi KS có hoạt t nh đối kháng thời gian định để lâu KS hoạt tính vốn có So với kết nghiên cứu thực trƣớc kết tơi cịn thấp 42 HTKS lên men dịch thể môi trƣờng GI lỏng Đ2 chủng XK tuyển chọn đƣợc thể qua biểu đồ Hình 3.3 Hình 3.4 Đƣờng k nh vịng vơ khuẩn HTKS (mm) 16 13.4 14 12 10 10.6 9.4 9.3 6.7 4.4 7.6 7.5 5.8 Category Ngày nuôi xạ khuẩn E.coli Salmonella Shigella Hình 3.3 HTKS chủng XKĐ8 lên chủng vi khuẩn gây bệnh Đƣờng k nh vịng vơ khuẩn HTKS (mm) 16 13.8 14 12 10 12.5 11.6 11.3 9.4 8.7 7.4 6.8 5.4 Ngày nuôi xạ khuẩn E.coli Salmonella Shigella Hình 3.4 HTKS chủng XKĐ12 lên chủng vi khuẩn gây bệnh 43 Kết hợp bảng số liệu Bảng 3.3 Bảng 3.6 cho thấy HTKS chủng XK đƣợc tuyển chọn không thay đổi chuyển từ môi trƣờng thạch đĩa sang môi trƣờng dịch thể Mặt khác, bảng số liệu 3.6 cho thấy khả ức chế vi khuẩn gây bệnh chủng XK tuyển chọn tăng lên đƣợc nuôi môi trƣờng dịch thể điều lần cho thấy ảnh hƣởng rõ rệt yếu tố điều kiện môi trƣờng lên khả sinh KS chủng XK đƣợc tuyển chọn Điều đƣợc lý giải điều kiện nuôi lắc tế bào sinh trƣởng tốt tiếp xúc với môi trƣờng dinh dƣỡng đồng đều, độ thơng thống khí tốt nên khả sinh hoạt chất sinh học tốt môi trƣờng nuôi tĩnh (đĩa thạch) Dựa vào bảng số liệu nhƣ biểu đồ, nhận thấy khoảng thời gian ngày thứ q trình ni lắc hầu hết chủng XK tuyển chọn cho HTKS mạnh nhất, sau khoảng thời gian HTKS giảm dần Tiến hành phƣơng pháp nhỏ dịch lên men chủng XK tuyển chọn để kiểm tra HTKS với chủng vi khuẩn gây bệnh E.coli, Salmonella, Shigella, kết thu đƣợc đƣợc thể qua Hình 3.5 (A) (B) 44 (C) Hình 3.5 HTKS chủng XK kháng vi khuẩn gây bệnh (A) Kháng Shigella (B) Kháng Salmonela (C) Kháng E.coli 3.3 Xác định hoạt tính enzyme ngoại bào chủng XK tuyển chọn Trong trình sinh trƣởng, enzyme đƣợc hình thành tế bào số đƣợc tiết môi trƣờng xung quanh Trong trình sản xuất enzyme từ xạ khuẩn chủ yếu thu nhận enzyme ngoại bào Không phải tất VSV có khả sinh enzyme nhƣ chủng lồi khơng có hoạt t nh nhƣ Vì vậy, tuyển chọn chủng giống phải tiến hành phân lập, kiểm tra lựa chọn chủng có hoạt tính enzyme mạnh, sinh nhiều enzyme mong muốn theo mục đ ch Để tuyển chọn chủng có hoạt t nh enzyme cao, trƣớc hết tiến hành kiểm tra sơ hoạt tính enzyme chủng XK tuyển chọn với loại mơi trƣờng có bổ sung loại chất là: Tinh bột CMC (carboxymethyl celluloza) tƣơng ứng với loại enzyme ngoại bào là: amylase cellulase Hai chủng XK đƣợc nuôi lắc môi trƣờng dịch thể GI mơi trƣờng lên men thích hợp cho XK Sau - ngày thu dịch lên men tiến hành kiểm tra hoạt tính enzyme phƣơng pháp đục lỗ thạch Kết xác định hoạt tính enzyme chủng XK đƣợc thể qua Bảng 3.7 45 Bảng 3.7 Hoạt tính enzyme chủng XK Hoạt tính enzyme De = (D – d,mm) Chủng XK Amylase (1%) CMC-ase (1%) X Đ8 3,3±0,14 15,1±0,31 X Đ12 3,1±0,24 12,3±0,27 Dựa vào kết Bảng 3.7 cho thấy chủng XK tuyển chọn có hoạt t nh enzyme đồng ổn định, hoạt tính enzyme amylase mức thấp hoạt tính cellulase mức cao Điều hoàn toàn phù hợp với số nghiên cứu trƣớc hoạt tính enzyme đa số XK Do sống chủ yếu đất thảm thực vật mục nát, thành phần môi trƣờng dinh dƣỡng cung cấp chủ yếu hợp chất cao phân tử cellulose khó phân giải nên hoạt tính enzyme cellulase cao giúp cho XK phân giải hợp chất cellulose phức tạp thành loại đƣờng đơn, đƣờng đa dễ phân giải nhằm cung cấp chất dinh dƣỡng để sinh trƣởng phát triển (1) (2) Hình 3.6 Hoạt tính enzyme dịch lên men chủng XK tuyển chọn (1) Hoạt tính enzyme cellulase (2) Hoạt tính enzyme amylase 46 3.4 Quan sát đặc điểm khuẩn lạc chủng XK tuyển chọn Đặc điểm hình thái khuẩn lạc giúp đánh giá sơ phân loại XK theo nhóm màu dựa vào yếu tố màu sắc khuẩn lạc, cấu trúc bề mặt, viền, mép, chất tiết, k ch thƣớc… ác chủng đƣợc nuôi môi trƣờng thạch đĩa GI ngày t0 = 300C Quan sát ghi nhận hình thái khuẩn lạc mọc mơi trƣờng Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng XK đƣợc thể qua Bảng 3.8 Bảng 3.8 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng XK tuyển chọn Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Màu ChủngXK XKĐ8 sắc Hình Kích Tiết HSKS dạng thƣớc Mép Bề mặt sắc (mm) tố Màu Khuẩn lạc trắng dính liền sữa 0,5 - Có Lồi, sợi bơng, trắng, xốp - dày Lồi, Tròn đều, Màu XKĐ12 khuẩn lạc 0,5 - 2,5 Sợi tia bơng nhỏ xốp, có vàng tách riêng giọt tiết Vàng rẽ bề mặt Chú thích (-): khơng tiết sắc tố 47 Hình ảnh KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Tiến hành phân lập thành công 15 chủng XK Tỷ lệ chủng XK theo nhóm màu nhƣ sau: màu trắng 40%, màu xám 26,66%, màu vàng 13,33%, màu xanh 6,67%, màu nâu 6,67% màu hồng 6,67% - Trong tổng số 15 chủng XK sàng lọc đƣợc chủng XK cho HTKS với chủng vi khuẩn gây bệnh chiểm tới 53,32% tổng số chủng phân lập đƣợc - Hai chủng XKĐ8 XKĐ12 có hoạt t nh đối kháng với đƣờng kính vịng kháng khuẩn là: + E.coli: (6,5mm) (7,8mm) + Salmonella: (5,7mm) (5,6mm) + Shigella: (3,4mm) (6,3mm) - Hai chủng XKĐ8 XKĐ12 có khả sinh enzyme ngoại bào với đƣờng kính vịng phân giải là: + Amylase (1%): (3,3mm) (3,1mm) + Cellulase (1%): (15,1mm) (12,3mm) Kiến nghị o thời gian tiến hành KLTN hạn chế nên chƣa thực đƣợc số nội dung nghiên cứu chuyên sâu chủng xạ khuẩn Nếu đƣợc tiếp tục nghiên cứu thời gian cho phép, thực công việc nghiên nhƣ: - Định danh đến tên loài cho chủng xạ khuẩn đƣợc tuyển chọn từ khu vực Xuân Mai kỹ thuật sinh học phân tử - Nghiên cứu điều kiện tối ƣu cho khả sinh KS áp dụng phƣơng pháp đại việc tinh KS chủng xạ khuẩn đƣợc tuyển chọn - Thực kỹ thuật sinh hóa để xác định chất kháng sinh xạ khuẩn sinh ra, có khả ức chế nấm, vi khuẩn 48 - Khảo sát HTKS chủng xạ khuẩn tuyển chọn lên đối tƣợng VSV gây bệnh đƣờng ruột khác - Tiến hành thử nghiệm khả đối kháng chủng xạ khuẩn tuyển chọn lên vi khuẩn gây bệnh đƣờng ruột gia súc thực tế 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Khoa học Công nghệ (2003), Báo cáo tổng kết đề tài KC 04 -09: “Nghiên cứu áp dụng công nghệ sản xuất kháng sinh hiệu cao nguyên liệu nước”, Hà Nội Chu Thanh Bình, Nghiên cứu nâng cao khả sinh tổng hợp vancomyxin xạ khuẩn Streptomyces orientalis, Luận văn Thạc sĩ, Hà Nội, 2012 Đặng Văn Tiến, Nguyễn Đình Tuấn, Vi Thị Đoan h nh, Ngơ Đình B nh, Nghiên cứu xạ khuẩn sinh kháng sinh kháng vi khuẩn Xanthomonasoryzae gây bệnh bạc lúa “Báo cáo khoa học Hội nghị CNSH toàn quốc”, 2009 Lê Gia Hy, Cơ sở công nghệ vi sinh vật ứng dụng, NXB Giáo dục Việt Nam, 2010 Lê Mai Hƣơng, Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh phân lập Hà Nội vùng phụ cận, Luận văn phó tiến sĩ Sinh học, Hà Nội, 1993 Lƣơng Thị Hƣơng Giang (2011), Tuy n ch n nghiên cứu hoạt tính sinh h c số chủng xạ khuẩn phân lập N i Pháo – ại Từ – Thái Ngun 7.Ngơ Đình B nh,Vi sinh vật h c cơng nghiệp, Trung tâm Khoa học Tự nhiên Công nghệ Quốc gia, tr 53-71, 2005 Nguyễn Lân ũng, Đoàn Xuân Mƣợu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty, Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật h c, Tập I, NXBKHKT Hà Nội, 1972 Nguyễn Hoàng Chiến, Nghiên cứu chủng xạ khuẩn streptomyces V6 sinh chất kháng sinh chống vi khuẩn gây bệnh héo xanh cà chua, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Hà Nội, 2000 10 Nguyễn Khang, Kháng sinh h c ứng dụng, NXB Y học, Hà Nội, 2005 11 Nguyễn Lân ũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật h c - tập II, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội, 1977 12 Nguyễn Lân ũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật h c, NXB Giáo dục, 2007 13 Nguyễn Lân ũng, Nguyễn Kim Nữ Thảo, Các nhóm vi khuẩn chủ yếu, Vietscience, 2006 14 Nguyễn Lân ũng, Phạm Thị Trân hâu, Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật h c - Tập III, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 1978 15 Nguyễn Lân ũng, Thực tập vi sinh vật h c NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội, 1993 16 Nguyễn Thành Đạt, Cơ sở sinh h c vi sinh vật, tập 1, NXB Đại học sƣ phạm, 2007 17 Nguyễn Thành Đạt, K Vinogradva V .Poltorac, Tính biến dị bề mặt bào tử xạ khuẩn sinh choromomycin , Act.A buraviensis, microbiologia, TXL III, N5, NXB Academia cccp, 1974 18 Nguyễn Văn Cách, Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB Khoa học kĩ thuật, tr.17, 2004 19 Nguyễn Văn ách, Lê Văn Nhƣơng, Cơ sở công nghệ sinh h c, tập - công nghệ vi sinh, NXB Giáo dục Việt Nam, 2009 20 Nguyễn Xuân Thành, Giáo trình vi sinh vật h c công nghiệp, NXB Giáo dục, 2007 21 Phan Quốc Kinh, Cơng nghiệp hóa chất, Thơng tin Kinh tế & Công nghệ, số 1, 2004 22 Phan Quốc Kinh, Vài nét tình hình sản xuất hóa dược giới, Tạp chí cơng nghiệp hóa chất, số 4, 2002 23 Trần Thị Thuận, Giáo trình Chăn nuôi th y bản, SỞ G ĐT Hà Nội 24 Trịnh Ngọc Hồng, Nghiên cứu tính đối kháng xạ khuẩn với số VSV gây nhiễm trùng bệnh viện, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, 2009 25 Trƣơng Minh Phụng, Lê Thị Thúy Hằng, Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn chủng xạ khuẩn nội sinh Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium) Tạp chí phát triển KH&CN, tập 20, số T5- 2017 26.Vi Thị Đoan h nh, Nghiên cứu khả nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng Streptomyces rimosus R77 Streptomyces hygroscopicus 5820 kỹ thuật dung hợp tế bà o trần, Luận án TS sinh học, Viện công nghệ sinh học, Hà Nội, 2000 27 Vi Thị Đoan h nh, Tuy n ch n nghiên cứu xạ khuẩn có khả đối kháng với số chủng vi khuẩn gây nhiễm trùng bệnh viện, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp Bộ Mã số B2009 - TN07 - 02 B TÀI LIỆU TIẾNG ANH 28 Ashutosh K, Pharmaceutical Microbiology, New Age International (P) Ltd, pp 89 – 101, 2008 29 Chen M., Xiao X., Wang P., Zeng X., Wang F, Arthrobacter ardleyensis sp nov isolated from Antarctic lake sediment and deep-sea sediment, Arch Microbiol, 183, pp 301- 305, 2008 30 Fred C Tenover, Mechanisms of antimicrobial resistance in bacteria, Amer.J Med, 119, pp 3–10, 2006 31 Geschva, A Shurk and W Romer Phosphate inhibition of secondary metabolism in Streptomyces hygroscopicus and its reversal by cyclic AMP, Arch Microbiol.121, p 91 – 96, (1979) 32 Hozzein W.N., Li W.J., Ali M.I.A., Hammouda O., Mousa A.S., Xu L.H., Jiang C.L., Nocardiopsis alkaliphila sp nov., a novel alkaliphilic actinomycete isolated from desert soil in Egypt, Int J Syst Evol Microbiol, 54, pp 247-252, 2004 33 J.H Auh, H.Y Chae, Y.R.Kim, K.H.Shim, S.H Yoo, K.H Park, Modification of Rice Starch by Seclective Degradation of Amylose Using Alkalophilic Bacillus Cyclomaltodextrinase, J Agric, Food Chem, 2006 34 MA Elberson, F Malekzadeh, M.T Yazdi, N Kameranpour, M.R Noori – Daloii, M.H Matte, M Shahamat, R.R Colwell, K.R Sower, Cellulomonas persica sp nov and Cellulomonas iranensis sp nov., mesophilic cellulose – degrading bacteria isolated from forest soils, J Syst Evol Microbiol 50, p.993, 2000 35 Pasti M B., Pometto A P., Nuti M P., Crawford D L., Lignin-solubilizing ability of actinomycetes isolated from termite (Termitidae) gutt, Appl Environ Microbiol, pp 2213-2218, 1990 36 R Gupta, O.K Beg, P Lorenz, Bacterial alkaline proteases: molecular approaches and industrial applications, Appl Microbiol Biotechnol 59 (1) ,p 15, 2002 37 Ramasamy Thajuddin, Vijaykumar, nnamalai Chinnasamy Muthukumar, Panneerselvam, and Nooruddin Rengasamy Saravanamuthu, Studies on the diversity of actinomycetes in the Palk Strait region of Bay of Begal, India, Actinomycetologica, 2007 38 Saga T., Yamaguchi K, History of antimicrobial agents and resistant bacteria, J Japan Med Assoc, 137, pp 513 – 517, 2008 39 Seong C.N., Kim Y.S., Baik K.S., Lee S.D., Hah Y.C., Kim S.B., Goodfellow M, Mycolic acid-containing actinomycetes associated with activated sludge foam, J Microbiol, 37, pp 66-72, 1999 40 Shirling E.B., D Gottlieb, Methods for characterization of streptomyces species Vol 16 No International Journal of Systematic Bacteriology 41 Steger K, PhD Thesis: Composition of microbial communities in composts A tool to assess process development and quality of the final product Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala, 2006 42 Stuart H, Essential microbiology, John Wiley & Sons Ltd., England, pp 191 – 369, 2005 43 Valli S, Suvathi SS, Aysha OS, Nirmala P, Vinoth KP, Reena A.Asian Pac J Trop Biomed, Antimicrobial potential of Actinomycetes species isolated from marine environment 2012 Jun; 2(6):469-73 44 Waksman, S.A, The Actinomycetes Classification, identification and descriptions of genera and species, vol 2, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, USA, 1961 45 Zhang JF, Liu JJ, Lu MQ, Cai Cj, Yang Y, Li H ,Xu C, Chen GH, Rapamycin in hibits cell growth by induction of apoptosis on hepatocellular carcinoma cells in vitro, Transpl Immunol, 2007 PHỤ LỤC Công thức loại môi trƣờng sử dụng Công thức môi trƣờng Gause I Chất Hàm lƣợng (g/l) Tinh bột 20 Mg2SO4.7H2O K2HPO4 HNO3 KCl 0,5 FeSO4.7H2O 0,1 Agar 20 Công thức môi trƣờng Buffered Peptone Water – BPW Chất Hàm lƣợng (g/l) Peptone 10 NaCl Na2HPO4 3,5 KH2PO4 1,5 Agar 15 ... thực vật chăn nuôi thú y 16 1.5 Gia súc vi sinh vật gây bệnh đƣờng ruột gia súc 18 1.5.1 Gia súc số loại bệnh đƣờng ruột thƣờng gặp gia súc 18 1.5.2 Các vi sinh vật gây bệnh đƣờng ruột gia. .. công nghệ sinh học giới nay, nhƣ để góp phần khai thác nguồn lợi VSV phong phú đất, tiến hành thực đề tài: ? ?Phân lập số chủng xạ khuẩn có khả ức chế vi sinh vật gây bệnh đường ruột gia súc. ” CHƢƠNG... cứu - Phân lập đƣợc số chủng xạ khuẩn có hoạt t nh đối kháng với vi sinh vật gây bệnh đƣờng ruột gia súc (E.coli, Shigella, Salmonella) - Tuyển chọn đƣợc chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh