Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ức CHÉ NÀM Neoscytalidium dimidiatum GÂY BỆNH ĐÓM T[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ức CHÉ NÀM Neoscytalidium dimidiatum GÂY BỆNH ĐÓM TRẮNG HẠI THANH LONG CỦA PHỨC Zn2+ - OLIGOCHITOSAN TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Sinh viên thực : Phan Thị Kha My Chuyên ngành TP.HCM, tháng năm 2018 & : Công nghệ sinh học Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ức CHẾ NÂM Neoscytalidium dimỉdiatum GÂY BỆNH ĐÓM TRẮNG HẠI THANH LONG CỦA PHỨC Zn2+- OLIGOCHITOSAN TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Sinh viên thực : Phan Thị Kha My Mã số sinh viên : 131 1516527 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần : ThS Trần Lệ Trúc Hà KS Lê Thành Hưng TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn! Cha mẹ người thân gia đình tạo điều kiện thuận lợi cho đến ngày hôm Ban Giám Hiệu Nhà Trường, Thầy, Cô khoa dạy em trình học tập Ban chủ nhiệm Khoa Thầy, Cô khoa Khoa học Nông nghiệp Công nghệ Sinh học trường Đại học Nguyễn Tất Thành truyền đạt kiến thức cho suốt năm học Giảng viên chủ nhiệm ThS Trần Lệ Trúc Hà Kỳ sư Lê Thành Hưng thầy tận tình hướng dẫn dành nhiều thời gian hướng dần suốt trình làm luận văn Trung tâm Nghiên cứu phát triển nông nghiệp công nghệ cao đà hồ trợ dụng cụ thiết bị nghiên cứu để tơi hồn thành khóa luận Tập thể lóp 14DSH02 giúp đờ tơi suốt thời gian qua TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 Sinh viên thực Phan Thị Kha My Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyền Tất Thành II MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix ĐẬT VÁN ĐÈ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tông quan chitin, chitosan, oligochitosan .2 1.1.1 Chitin 1.1.2 Chitosan 1.1.3 Oligochitosan 1.2 Phương pháp chế tạo oligochitosan 1.3 ứng dụng chitin, chitosan, oligochitosan 1.3.1 ứng dụng lĩnh nông nghiêp công nghệ sinh học 1.3.2 ứng dụng lĩnh vực khác 1.4 Giới thiệu phức Zn2+ - oligochitosan 1.5 Giới thiệu vê nâm Neoscytalidium dimidiatum 1.5.1 Phân loại 1.5.2 Phân bố phạm vi kí chủ nấm Neoscytcdidium dimidiatum 1.5.3 Đặc điếm hình thái nấm Neoscytalidium dỉmỉdiatum 1.5.4 Tông quan vê Thanh long 1.5.5 Tinh hình nghiên cứu ngồi nước oligochitosan phức Zn2+- oligochitosan 1.5.5.1 Tinh hình nghiên cứu nước 1.5.5.2 Tinh hình nghiên cứu ngồi nước CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 11 2.1 Thời gian, địa điểm 11 2.2 Vật liệu 11 2.3 Hóa chất 11 iii 2.4 Thiết bị: 11 2.5 Nội dung phương pháp nghiên cứu 12 2.5.1 Thí nghiệm 1: Chế tạo phức Zn2+- oligochitosan xác định đặc trưng 12 phức 2.5.1.1 Chế tạo phức Zn2+- oligochitosan 12 2.5.1.2 Phương pháp xác định đặc trưng cấu trúc phức chế tạo 13 2.5.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng phức Zn2 - oligochitosan lên phát triển hệ sợi nấm môi trường thạch 14 2.5.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ phức Zn2+- oligochitosan lên phát triển hệ sợi nấm môi trường thạch 16 2.6 Phương pháp phân tích xử lí số liệu 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Khối lượng phân tử oligochitosan dùng đe tạo phức Zn2'- oligochitosan 18 3.2 Ảnh hưởng cùa phức Zn2- oligochitosan lên phát triển hệ sợi nấm môi trường thạch 21 3.3 Ảnh hưởng nồng độ xử lý phức Zn2 - oligochitosan lên phát triến hệ sợi nấm môi trường thạch 25 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC 31 IV TÓM TẮT Thanh long loại trái ưa chuộng nước mang lại kinh tế cao Đe tài: “Đánh giá khả ức chế nấm Neoscytalidiuni dimidiatum gây bệnh đốm trắng hại Thanh long phức Zn2+ - oligochitosan điều kiện in vitro'"1 thực từ tháng 1/2018 đến tháng 8/2018 Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp công nghệ cao Đe tài thực với mục tiêu xác định khả ức chế nấm Neoscytaỉidium dimidiatum điều kiện invitro chúng nồng độ khác để chọn nồng độ tốt ức chế nấm tốt Đe tài gồm ba nội dung: Chế tạo phức Zn2+- oligochitosan; đánh giá ảnh hưởng phức Zn2’- oligochitosan lên phát triển hệ sợi nấm Neoscytaỉidium dimidiatum môi trường thạch đánh giá nồng độ xử lí phức Zn2+oligochitosan lên phát triển hệ sợi nấm Neoscytalidium dimidiatum mơi trường thạch Các thí nghiệm bố trí thí nghiệm hồn tồn ngầu nhiên Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Đã chế tạo mẫu dung dịch phức Zn2 - oligochitosan với tỷ lệ phần mol 1:1 Đã xác định số đặc trưng cấu trúc phố ƯV-Vis, FT-IR Phức Zn2+- oligochitosan có xuất vài cấu trúc đặc trưng cho liên kết giừa Zn2 oligochitosan Hoạt tính ức chế nấm phức ZnCOS cao hon so với sử dụng oligochitosan có Mw~ 2,5 kDa, Mw~ kDa, Mw~ kDa Cụ the, môi trường PDA, hoạt lực ức chế nấm Neoscytcdidium dimidiatum cùa oligochitosan có Mw ~ kDa cao nồng độ 1% đạt 100 % Hoạt lực ức chế nấm Neoscytcdidium dimidiatum cùa phức ZnCOS - 2,5 kDa cao nồng độ % đạt 83,5 % Hoạt lực ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum phức ZnCOS-5 kDa cao nong độ % đạt 100% V SUMMARY Dragon fruit is one of the most popular fruits both domestically and abroad that is highly economical.The topic about "In vitro study on the anfifungal of Zn2 - oligochitosan on Neoscytalidium dimidiatum causing white spot syndrome in dragon fruit" was conducted from January 2018 to August 2018 at the Research and Development Center for Hi-Tech Agriculture The research was conducted with the aim of determining the antifungal of Neoscytalidium dimidiatum in vitro of the different concentrations and to selected best concentration for the antifungal The subject has three sections: Prepared Zn2+ - oligochitosan products; the in vitro test of antifungal effect of product and concentrations effect ofNeoscytalidium dimidiatum colonies in a Potato Dextrose Agar (PDA) The experiments were completely randomized The obtained results showed: Has produce of Zn2' - oligochitosan was prepared at 1:1 molar ratio The UVVis spectrum, FT-IR spectrum have been showed structures that characterize the bonding between Zn2+ and oligochitosan The antifungal activity of ZnCOS complex was higher than that of oligochitosan only with Mw ~ 2,5 kDa, Mw ~ kDa, Mw ~ kDa Specifically, in the PDA medium, the antifungal activity of oligochitosan had the highest Mw~ kDa at % concentration of 100 % The antifungal of the ZnCOS -2.5 kDa complex was highest at % concentration of 83.5 % The antifungal of the ZnCOS - kDa complex was highest at % concentration of 100 % vi DANH MỤC CÁC CHỦ VIẾT TẮT CTS: Chitosan COS: Oligochitosan ZnCOS: Zn2+- oligochitosan Mw: Khối lượng phân tử (Molercula weigh) PDA: Mơi trường Potato dextrose agar CRD: Thí nghiệm yếu tố hoàn toàn ngầu nhiên FT-IR: Phương pháp phân tích Phổ hồng ngoại KLPT: Khối lượng phân tử OD: Mật độ quang (Optical Density) w/v: Khối lượng/the tích Abs: Độ hấp thu Vll DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc chitin Hình 1.2 Cấu trúc chitosan Hình 1.3 Cấu trúc oligochitosan Hình 1.4 Chủng nâm Neoscytalidỉum dinúdiatum Hình 1.5 Hình Thanh long Hình 3.1 Mầu oligochitosan có khối lượng phân tử khác Hình 3.2 Các loại phức ZnCOS chế tạo Hình 3.3 Ket đo phố UV- Vis Hình 3.4 Phổ FT-IR OCTS 2,5 kDa OCT'S 2,5 kDa + Zn2+ Hình 3.5 Phổ FT-IR OCTS kDa OCTS kDa + Zn2+ Hình 3.6 Phổ FT-IR OCTS kDa kDa + Zn2+ Hình 3.7 Biểu đồ thể khả phát triển nấm N dimidiatum (%) môi trường PDA khối lượng phân tử (Mw) với nồng độ 0,5 % Hình 3.8 Đường kính tản nấm N dùnidiatum nồng độ 0,5 % ngày với khối lượng phân tử Hình 3.9 Biểu đồ the khả ức chế nấm N dỉmidiatum (%) môi trường PDA kDa với nồng độ phức khác Hình 3.10 Đường kính tản nấm N dimỉdiatnm môi trường PDA kDa với nong độ phức khác sau ngày VÍU DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Đường kính vịng nấm N dimidiatum (mm) khả ức chế nấm N dimidiatum (%) môi trường PDA với khối lượng phân tử (Mw) nồng độ 0,5 % Bảng 3.2 Đường kính vòng nấm N dimidỉatum (mm) khả ức chế nấm N dimidiatum ( %) môi trường PDA kDa với nong độ phức khác sau ngày IX ... ưa chuộng nước mang lại kinh tế cao Đe tài: ? ?Đánh giá khả ức chế nấm Neoscytalidiuni dimidiatum gây bệnh đốm trắng hại Thanh long phức Zn2+ - oligochitosan điều kiện in vitro'' "1 thực từ tháng 1/2018... kháng bệnh oligochitosan dạng vật liệu lai hừu vô (Zn2+- oligochitosan) đề tài ? ?Đánh giá khả ức chế nấm Neoscytalidiutn dỉmidiatum gây bệnh đốm trắng hại Thanh long phức Zn2+- oligochitosan điều kiện. .. khả ức chế nấm Neoscytaỉidium dimidiatum điều kiện invitro chúng nồng độ khác để chọn nồng độ tốt ức chế nấm tốt Đe tài gồm ba nội dung: Chế tạo phức Zn2+- oligochitosan; đánh giá ảnh hưởng phức