Hiện nay, phẩm màu đươc sử dụng rất phổ biến trong công nghiệp thực phẩm. Phẩm màu giúp tạo màu sắc đẹp mắt cho đồ ăn, thức uống,… kích thích vị giác người sử dụng. Tuy nhiên, phẩm màu thực phẩm rất đa dạng về chủng loại và nguồn gốc, gây khó khăn trong việc nghiên cứu đánh giá đầy đủ ảnh hưởng của nó đối với con người. Hình ảnh “bát mỳ tôm kèm một chai Sting” không còn xa lạ với giới trẻ, nhất là các game thủ. Và cùng với các sản phẩm khác như: Trân châu, thạch, nước giải khát, bánh kẹo, tương ớt, tương cà, v.v… được người tiêu dùng sử dụng, đặc biệt là giới trẻ, đều có chất tạo màu đỏ và vàng. Trong bài thực tập, nhóm chúng em chọn ra hai chất màu được sử dụng rất phổ biến trong công nghiệp thực phẩm là phẩm màu đỏ (Tạo màu chonước tăng lực Sting đỏ, tương ớt,…) và phẩm màu vàng (Tạo màu cho mỳ tôm, Sting vàng,…), tiến hành phơi nhiễm trên phôi cá ngựa vằn. Hai chất màu này được mua ở chợ Đồng Xuân nên được sử dụng khá rộng rãi ở các mô hình sản xuất quy mô hộ gia đình. Kết quả cho thấy cả hai chất màu ở các nồng độ khác nhau đều ảnh hưởng xấu đến quá trình phát triển của phôi cá ngựa vằn (gây chết, dị dạng). Kết quả góp phần đưa ra dự đoán nguy cơ đối với sực khỏe con người khi sử dụng các sản phẩm có chứa hai loại phẩm màu trên. Cho đến nay, chưa có các số liệu thống kê chính thức về ảnh hưởng của các phẩm màu đó đối với sức khỏe, đời sống con người. Các thử nghiệm trên động vật bậc cao như: chuột, tinh tinh,… thì bị hạn chế bởi vấn đề đạo đức và thời gian. Và mô hình thử độc tính trên phôi cá ngựa vằn khắc phục được những khó khăn trên. Bộ gen cá ngưa vằn có 12 000 gen tương đồng với bộ gen người; nhiều đặc điểm giải phẫu, sinh lý giống với các động vật có xương sống khác.Bên cạnh đó chúng có kích thước cơ thể nhỏ, phát triển nhanh, vòng đời ngắn, khả năng sinh sản nhanh, cho một lượng phôi lớn trong mỗi lần đẻ, phôi được bao bọc bởi lớp màng trong suốt, dễ quan sát, giai đoạn phôi rất nhạy cảm. Do đó cá ngựa vằn là một sinh vật mô hình lý tưởng cho thí nghiệm thử độc tính.
ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CỦA PHẨM MÀU THỰC PHẨM LÊN SỰ PHÁT TRIỂN PHÔI CÁ NGỰA VẰN I Giới thiệu: Hiện nay, phẩm màu đươc sử dụng phổ biến công nghiệp thực phẩm Phẩm màu giúp tạo màu sắc đẹp mắt cho đồ ăn, thức uống,… kích thích vị giác người sử dụng Tuy nhiên, phẩm màu thực phẩm đa dạng chủng loại nguồn gốc, gây khó khăn việc nghiên cứu đánh giá đầy đủ ảnh hưởng người Hình ảnh “bát mỳ tơm kèm chai Sting” khơng cịn xa lạ với giới trẻ, game thủ Và với sản phẩm khác như: Trân châu, thạch, nước giải khát, bánh kẹo, tương ớt, tương cà, v.v… người tiêu dùng sử dụng, đặc biệt giới trẻ, có chất tạo màu đỏ vàng Trong thực tập, nhóm chúng em chọn hai chất màu sử dụng phổ biến công nghiệp thực phẩm phẩm màu đỏ (Tạo màu chonước tăng lực Sting đỏ, tương ớt,…) phẩm màu vàng (Tạo màu cho mỳ tôm, Sting vàng,…), tiến hành phơi nhiễm phôi cá ngựa vằn Hai chất màu mua chợ Đồng Xuân nên sử dụng rộng rãi mơ hình sản xuất quy mơ hộ gia đình Kết cho thấy hai chất màu nồng độ khác ảnh hưởng xấu đến q trình phát triển phơi cá ngựa vằn (gây chết, dị dạng) Kết góp phần đưa dự đoán nguy sực khỏe người sử dụng sản phẩm có chứa hai loại phẩm màu Cho đến nay, chưa có số liệu thống kê thức ảnh hưởng phẩm màu sức khỏe, đời sống người Các thử nghiệm động vật bậc cao như: chuột, tinh tinh,… bị hạn chế vấn đề đạo đức thời gian Và mơ hình thử độc tính phơi cá ngựa vằn khắc phục khó khăn Bộ gen cá ngưa vằn có 12 000 gen tương đồng với gen người; nhiều đặc điểm giải phẫu, sinh lý giống với động vật có xương sống khác.Bên cạnh chúng có kích thước thể nhỏ, phát triển nhanh, vịng đời ngắn, khả sinh sản nhanh, cho lượng phôi lớn lần đẻ, phôi bao bọc lớp màng suốt, dễ quan sát, giai đoạn phôi nhạy cảm Do cá ngựa vằn sinh vật mơ hình lý tưởng cho thí nghiệm thử độc tính II Hóa chất vật liệu Hóa chất: Chất màu đỏ vàng (Chợ Đồng Xuân) pha với nước đóng bình với dải nồng độ tương ứng: 5, 7.5, 10, 12, 15, 20 (g/l) Đối chứng âm nước đóng bình khơng them phẩm màu Vật liệu: Phôi cá ngựa vằn lựa chọn từ giai đoạn có tế bào trở lên III Phương pháp nghiên cứu: Phối cá thu phôi: Ghép cá đực cá (được ni riêng trước đó) vào chậu, nước nước đóng bình, lót rổ nhựa (lỗ đủ lớn để trứng rơi xuống cá chui qua) Duy trì nhiệt độ khoảng 25 oC, để tối qua đêm Bật đèn vào sáng hôm sau để cá phối đẻ Thu phôi, rửa, chọn lựa phôi tốt dùng cho thí nghiệm Phơi nhiễm: Phơi cá ngựa vằn phơi nhiễm đĩa 24 giếng Với chất màu có đĩa tương ứng với nồng độ: 5, 7.5, 10, 12, 15, 20 (g/l) Mỗi đĩa gồm giếng đối chứng 20 giếng chứa phẩm màu pha nồng độ (chất màu đỏ 20mg/ml làm với 18 phôi không đủ phôi) Phôi ấp giếng chứa 1ml môi trường Môi trường thay 50% sau 24h Các mẫu thí nghiệm quan sát kính hiển vi thời điểm 24h, 48h, 72h, 96h (kể từ thụ tinh) Các tiêu đánh giá xử lý số liệu: -Phôi chết: Phôi đông tụ, phôi nỗn hồng bị tan (24h), thiếu nhịp tim (48h – 96h) Quan sát dị dạng thường gặp như: hoại tử, phù màng nỗn hồng, phù màng bao tim, dị dạng - Từ kết thu được, tính nồng độ gây chết 50% (LC50) IV Kết thảo luận: Ảnh hưởng phẩm màu đỏ lên phát triển phôi cá ngựa vằn Đỏ [24h] 1.2 Tỷ l ệ phôi s ống 0.8 Sau 24h phơi nhiễm, chất màu đỏ ảnh hưởng đến khả sống sót phơi Sau 48h, 72h, 96h, số phôi chết tăng lên tỷ lệ 0.6 1.2 0.4 0.2 0.8 (g/l) 0 10 15 20 0.6 0.4 0.2 1.2 Đỏ [72h] Tỷ l ệ phôi s ống 0.8 0.4 0.4 0.2 0.2 (g/l) 10 15 20 25 (g/l) 10 15 20 0.8 0.6 Đỏ [96h] 0.6 Tỷ l ệ phơi s ống 25 phơi sống sót nồng độ thể 1.2 Đỏ [48h] 25 Tỷ l ệ phôi s ống (g/l) 0 10 15 20 25 đồ thị thay đổi không đáng kể so với thời điểm 24h Chứng tỏ giai đoạn 24 đầu giai đoạn nhạy cảm phôi chất nhuộm đỏ Nồng độ gây chết 50% (LC50) tính dựa đường quy hồi đồ thị: LC50 (g/l) 24h 15,20 48h 15,20 72h 15,17 96h 15,15 LC50 giảm theo thời gian chứng tỏ chất nhuộm đỏ có tác động gây chết lên phôi cá ngựa vằn chủ yếu giai đoạn 24h đầu Tỷ lệ phôi nở sau 96h ấp: Tỷ lệ phôi nở = số phôi nở/số phôi sống sót Ta thấy, nồng độ phẩm màu đỏ ảnh hưởng rõ rệt đến tỷ lệ nở phôi sau 96h ấp 1.2 [96h] Tỷ l ệ phôi nở Pol y (Tỷ l ệ phôi nở) 0.8 0.6 0.4 0.2 0 10 15 20 Một số dị dạng quan sát được: Đối chứng Không đầu 24h Đối chứng Đầu xuất hiệu sau Dị dạng nặng 25(g/l) 48h Dị dạng đuôi Dị dạng đuôi Không đuôi 96h Ảnh hưởng phẩm màu vàng lên phát triển phơi cá ngựa vằn Tỷ lệ sống sót qua giai đoạn ảnh hưởng hóa chất nồng độ khác 24h 120% 48h 120% 100% 100% 80% 80% 60% 24h 40% 60% 48h 40% 20% 20% 0% 0% 10 20 30 10 72h 20 30 96h 120% 120% 100% 100% 80% 80% 60% 72h 60% 40% 40% 20% 20% 0% 96h 0% 10 20 30 10 20 30 Nhận thấy tỷ lệ sống sót qua giai đoạn khơng thay đổi nhiều Có thể nhận thấy phẩm màu ảnh hưởng nhiều đến giai đoạn 24h phôi Nồng độ gây chết 50% (LC50) tính dựa đường quy hồi đồ thị LC50 24h 15.5 48h 15.45 72h 15.45 96h 15.42 Nhìn vào bảng trên, thấy giá trị LC50 giảm qua giai đoạn chứng tỏ chất nhuộm vàng gây chết phôi chủ yếu giai đoạn 24h Tỷ lệ phôi nở qua giai đoạn: 120% 100% 7.5 10 12 15 20 80% 60% 40% 20% 0% -20% Từ đồ thị thấy phẩm màu có ảnh hưởng đến rõ rệt đến trình nở phơi Tỷ lệ dị dạng ảnh hưởng hóa chất nồng độ khác quan sát giai đoạn 96h %dị dạng 20 18 16 14 12 10 %dị dạng 0 10 15 20 Các loại dị dạng nhận thấy được: phù nỗn hồng chủ yếu, cong đi, sắc tố tụ máu Một số dị dạng quan sát được: Đối chứng Phù nỗn hồng, cong đi, sắc tố Tụ máu cong đuôi Nhận xét Nhận xét số dị dạng: - Ở dị dạng 24h xuất đi: Tín hiệu chia cắt nỗn hồng bị ảnh hưởng khiến nỗn hồng chia cắt bất thường hình Đến 48h lại quan sát thấy đầu hình thành nhỏ bình thường, đồng thời thấy nhịp tim Đến 72h khơng cịn nhịp tim - Dị dạng không đuôi: 48h quan sát thấy nhịp tim 72h không thấy nhịp tim - Dị dạng nặng không rõ đầu đuôi + phù màng bao tim: 48h quan sát thấy nhịp tim 72h khơng cịn nhịp tim - Dị dạng (Phù đi, gập đi): Sống sót nở sau 96h hoạt động bơi diễn bình thường - Dị dạng phù nỗn hồng, cong đuôi, sắc tố: 72h quan sát thấy nhịp tim, 96h khơng cịn nhịp tim Số lượng dị dạng quan sát nồng độ chưa đủ để có ý nghĩa thống kê Có thể thấy đa số dị dạng nặng chết giai đoạn 72h sau thụ tinh Các dị dạng khác gập đi, phù đi, phù nỗn hồng thường sống sót đến phơi nở Nhận xét độc tính chất phẩm màu - Cả chất phẩm màu thử nghiệm ảnh hướng nhiều đến phát triển phôi giai đoạn 24h Chất gây ảnh hưởng rõ rết đến khả nở phôi Thông qua loại dị dang tần số dị dạng mẫu hóa chất, thấy chất phẩm màu đỏ có độc tính mạnh so với chất phẩm màu vàng ... hưởng phẩm màu đỏ lên phát triển phôi cá ngựa vằn Đỏ [24h] 1.2 Tỷ l ệ phôi s ống 0.8 Sau 24h phơi nhiễm, chất màu đỏ ảnh hưởng đến khả sống sót phôi Sau 48h, 72h, 96h, số phôi chết tăng lên tỷ... gây chết lên phơi cá ngựa vằn chủ yếu giai đoạn 24h đầu Tỷ lệ phôi nở sau 96h ấp: Tỷ lệ phôi nở = số phơi nở/số phơi sống sót Ta thấy, nồng độ phẩm màu đỏ ảnh hưởng rõ rệt đến tỷ lệ nở phôi sau... sau Dị dạng nặng 25(g/l) 48h Dị dạng đuôi Dị dạng đuôi Không đuôi 96h Ảnh hưởng phẩm màu vàng lên phát triển phôi cá ngựa vằn Tỷ lệ sống sót qua giai đoạn ảnh hưởng hóa chất nồng độ khác 24h 120%