Trên cây con, thân ngầm, gốc cây và đọt non thường có triệu chứng thối nhũn, trên cây trưởng thành triệu chứng thể hiện là thối giả hành và cây bị chết.. Để có thể bảo vệ địa lan một các
Trang 1Vi khuẩn Erwinia carotovora tác nhân gây bệnh thối nhũn
cây Địa Lan Cymbidium sp ở Đà Lạt Studies on Erwinia carotovora causing solf rot diseases on Cymbidium sp
Abstract
The solf rot diseases on Cymbidium sp was found in Da Lat Lam Dong This
disease usually happened in wet season when rain- water bring pathogens cause rotten parts of plants, or cause the plant to die Pathogens were isolated on TTC medium Then, colony of bacteria grew on petri were obtained after 1-2 days Carrot had been infected in vitro with this bacteria After that strong plants had been infected in vivo with this bacteria All plants were infectious The result
showed that bacteria Erwinia carotovora was an agent cause the solt rot
disease
Key words: Solf solf rot diseases, Cymbidium sp., Erwinia carotovora
I- Mở đầu Địa Lan là loài hoa đặc hữu của cao
nguyên Lang Biang- Đà Lạt, Lâm
Đồng Địa Lan có giá trị thẩm mỹ và
giá trị kinh tế cao nhờ vẻ đẹp của hoa
và của phát hoa Địa Lan được trồng ở
quy mô hộ gia đình và trang trại, đã
đem lại thu nhập đáng kể cho người
dân Đà Lạt và góp phần tạo thương
hiệu cho xứ sở của các loài hoa Năm
2001, bệnh chết cây, thối giả hành đã
được phát hiện trên cây Địa Lan ở Đà
Lạt Bệnh thể hiện trong tất cả các giai
đoạn sinh trưởng của cây Trên cây
con, thân ngầm, gốc cây và đọt non
thường có triệu chứng thối nhũn, trên
cây trưởng thành triệu chứng thể hiện
là thối giả hành và cây bị chết Thối giả hành là một bệnh hại chính, gây hại nặng trên lan, có những vườn có tới 70% số chậu bị nhiễm bệnh Theo kết quả nghiên cứu kết hợp giữa trường Đại học Nông lâm thành phố
Hồ Chí Minh và Chi cục Bảo vệ thực vật Lâm Đồng, Đia lan bị chết là do nhiễm một hay nhiều tác nhân khác nhau như nấm, vi khuẩn hay virus gây
ra Các tác nhân gây bệnh khó phân biệt chính xác trong nhiều trường hợp
Do không xác định được chính xác nguyên nhân việc phòng trừ bệnh gặp rất nhiều khó khăn Các loài thuốc hoá học trừ bệnh được phun thử nghiệm ở các vườn lan trong giai đoạn
2004-2005 ở Đà Lạt đã không mang lại hiệu quả [1]
1 Viện Hóa học Viện KH&CNVN
2 Viện Bảo vệ thực vật Bộ
NN&PTNT
Trang 2Trên thế giới nguyên nhân gây
bệnh thối nhũn hoa lan đã được xác
định là do vi khuẩn Erwinia
carotovora Vi khuẩn đã gây bệnh và
phát hiện được ở hầu hết các vùng
trồng lan trên thế giới (Bradbury,1986;
en.vikipedia.org/wiki/list_cattleya_disea
ses; Hội bệnh Cây hoa Kỳ
http:/www.apsnet.org/online/common/
name/cattlya.asp)
Để có thể bảo vệ địa lan một
cách hiệu quả trước sự xâm nhiễm
và gây bệnh chết cây, thối giả hành
ở vùng Đà Lạt việc cần thiết là phải
xác định được chính xác nguyên
nhân gây bệnh và đề ra giải pháp
phòng trừ bệnh đúng, hợp lý
II- Vật liệu
và phương pháp nghiên cứu
- Xác định nguyên nhân gây bệnh
được tiến hành theo chu trình Koch
- Thu thập mẫu cây Địa lan bị
bệnh và mô tả triệu chứng bệnh,
quan sát vi sinh vật gây bệnh dưới
kính hiển vi theo phương pháp của
Viện Bảo vệ thực vật [5 ]
- Phân lập vi khuẩn trên môi
trường lựa chọn TTC theo phương
pháp của De Boer và A.Kelman [4]
- Kiểm tra khả năng gây bệnh
trên cà rốt của dòng vi khuẩn phân
lập được theo phương pháp của De
Boer và A.Kelman
- Đánh giá độc tính của các dòng
vi khuẩn phân lập được bằng cách
tiêm dịch vi khuẩn lên lá cây thuốc
lá Theo dõi sự hình thành các vết chết hại sau 24h, 48h
- Chọn dòng vi khuẩn đã gây ra vết đốm hoại tử trên lá cây thuốc lá
và có khả năng gây thối cho củ cà rốt để dùng trong thí nghiệm lây bệnh cho cây Địa lan
- Địa lan được trồng trên giá thể
đã khử trùng ở 1,5 at trong 30 phút Phương pháp lây bệnh: theo phương pháp tạo vết thương cơ giới: dùng kim tạo vết thương nhẹ ở vùng thân gần gốc của cây Địa lan Bôi dịch vi khuẩn vào chỗ gây thương Nhúng bông thấm nước vào dịch vi khuẩn quấn quanh chỗ lây bệnh Để các cây Lan đã được lây bệnh trong nơi râm mát sau 3 ngày chuyển vào nhà lưới
- Đối chứng lây bệnh bằng nước cất
- Theo dõi thời gian bắt đầu xuất hiện triệu chứng bệnh
- Tỉ lệ cây bị nhiễm bệnh sau 1
tháng, 2 tháng và 3 tháng
III- Kết quả và thảo luận
1 Triệu chứng bệnh thối nhũn cây Địa lan
Địa lan thường xuất hiện triệu chứng thối, chết cây vào mùa mưa, đặc biệt khi độ ẩm không khí cao và khi mà trên cây có nhiều vết thương Trong mùa mưa, nếu cây không được chăm sóc kỹ bệnh rất dễ xảy ra , khi bị nhiễm bệnh nặng, địa lan có thể chết sau 2-3 ngày Triệu chứng
Trang 3ban đầu trên thân cây có những
chấm nhỏ màu nâu, úng nước vết
bệnh lan dần khắp cây Lan dễ bị
lá…Những vùng bị thối thường có
màu nâu, dính tay, nếu là củ hành thì
ấn thấy mềm nhũn, thường có mùi
khó chịu
2 Kết quả phân lập
Từ các cây Địa lan có triệu chứng
thối nhũn, chết cây con hay thối giả
hành thu thập từ Đà Lạt đều phân lập
được vi khuẩn Trên môi trường
TTC khuẩn lạc có màu vàng, ở giữa
có màu hồng nhạt Trên môi trường
PDA-pepton khuẩn lạc có hình tròn
nhỏ, hơi bóng, màu vàng nhạt hay
màu kem.Vi khuẩn hình gậy, hai
đầu hơi tròn, gram âm
Lây nhiễm các dòng vi khuẩn
phân lập được trên miếng cà rốt để
xuất hiện trên cà rốt Sau 48h thì
triệu chứng càng rõ nét, miếng cà rốt
từ màu vàng cam chuyển dần sang
màu nâu sẫm, thối nhũn lan nhanh
khắp bề mặt miếng cà rốt và dịch
màu nâu đen chảy ra Công thức đối
chứng cà rốt không bị thối
Theo dõi tốc độ tăng trưởng của vi
khuẩn bằng cách nuôi cấy dòng vi
khuẩn thuần khiết trong môi trường
trên máy quang phổ spectrometer ở
bước sóng 405nm Kết quả được thể
hiện ở hình 1
0
0 2
0 4
0 6
0 8 1
1 2
1 4
1 6
s au 0
s au 2
s au
4
s a h
s au
8h
s au
s au
sau
s au
16h
sau
s au
20h
s au
21h
s au
22h
s au
th o i g i a n
Hình 1: Đồ thị biểu diễn tốc độ sinh
trưởng của vi khuẩn Erwinia
carotovora
Vi khuẩn có tốc độ tăng trưởng rất nhanh, pha nghỉ (hay pha tiềm tàng) chỉ diễn ra trong 4-6h giờ đầu, sau 6-8h vi khuẩn đã bước vào pha tăng trưởng (hay pha log), pha log đạt cực đại ở thời điểm khoảng 13-14h, sau đó vi khuẩn bước vào pha cân bằng, khi đó số lượng tế bào đạt maximum và cuối cùng là pha suy vong
Dựa vào triệu chứng thối nhũn trên vườn lan và kết quả thu được
từ các thí nghiệm đối với các dòng
vi khuẩn phân lập được từ cây địa lan bị bệnh đã chứng tỏ nguồn vi khuẩn phân lập được là vi khuẩn
Erwinia carotovora
3 Kết quả lây bệnh nhân tạo trên cây con
Thí nghiệm lây bệnh nhân tạo cho
Trang 4địa lan đã được tiến hành tại nhà
lưới Viện Bảo vệ thực vật trong
tháng 8 năm 2006 Thí nghiệm được
tiến hành trên 60 cây con khoẻ Tổng
số cây được chia thành 2 công thức:
Công thức 1 có 30 cây lây bệnh với
nguồn vi khuẩn có độ độc cao đã
được đánh giá độc tính trên cây
thuốc lá; Công thức 2: 30 cây lây
bệnh bằng nước cất Kết quả lây
bệnh được thể hiện ở bảng 1:
Sau 3-5 ngày triệu chứng bệnh
đầu tiên xuất hiện trên một số cây
lây bệnh Tại phần thân cây sát gốc
xuất hiện những vệt màu nâu, dạng
ngấm nước, sau đó vết bệnh lan
rộng, và lan dần lên lá Lá mềm nhũn, sũng nước và có thể bị rụng Trong công thức đối chứng các cây đều khoẻ mạnh, phát triển bình thường
Từ các cây bị bệnh ở công thức lây bệnh nhân tạo đã phân lập
được vi khuẩn Erwinia carotovora
trong phòng thí nghiệm Triệu chứng bệnh trên đồng ruộng ở Đà Lạt và triệu chứng bệnh thu được trong thí nghiệm lây bệnh nhân tạo cũng giống như triệu chứng thối nhũn trên cây hoa lan đã được mô
tả bởi Yee Keong Chan và Hội Bệnh cây Hoa Kỳ
Bảng 1 Kết quả lây bệnh nhân tạo bằng vi khuẩn Erwinia carotovora
cho Địa lan (Viện Bảo vệ thực vật tháng 8-2006)
theo dừi
cất
Số cõy bị
cõy bị bệnh
% bị bệnh
Trang 5Từ các cây địa lan bị bệnh thối nhũn
chết cây đã phân lập được vi khuẩn
Erwinia carotovora Dùng vi khuẩn
phân lập được lây bệnh lại cho địa lan
sau 3 ngày triệu chứng bệnh xuất hiện
và sau 30 ngày tỷ lệ bệnh đạt tới 70%
Vi khuẩn Erwinia carotovora là tác
nhân gây bệnh thối giả hành, chết cây
Địa lan ở vùng Đà Lạt
2 Đề nghị
Tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về quy
luật phát sinh gây bệnh của vi khuẩn
và biện pháp phòng trừ bệnh thối nhũn
chết cây trên địa lan
TàI LIệU THAM KHảO
1 Nhóm nghiên cứu Đại học Nông lâm HCM và Chi cục BVTV Lâm
Đồng 2005 Bệnh chết cây Địa lan
Nguyên nhân và biện pháp phòng trừ
2 Trương Trỗ 1988 Đà Lạt
Cymbidium Ban Khoa học kỹ thuật
Đà Lạt và trạm nuôi cấy mô
3 Bradbury J.F 1986 Guide to
plant Pathogenic Bacteria C.A.B
Internatinal Farham House U.K p 331
4 De Boer S.H, Coplin D.L, Jones
A.L., 2001 Gram negative bacteria in
Plant Pathogenic Bacteria APS Press
Minnesota p 36 - 72
5 Viện Bảo vệ thực vật ,1999
Phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật, tập 1, NXB Nông nghiệp Hà Nội
