BÁO CÁO KHOA HỌC, NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG, ĐẠI HỌC BÁO CÁO KHOA HỌC, NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG, ĐẠI HỌC BÁO CÁO KHOA HỌC, NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG, ĐẠI HỌC BÁO CÁO KHOA HỌC, NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG, ĐẠI HỌC BÁO CÁO KHOA HỌC, NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG, ĐẠI HỌC
TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HQC HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 KHOA - KŸ THUAT 31 KHÃO SÁT KHà NĂNG TÁI SINH CÙA CÃI XANH (Brassica juncea) VÀ BC DÄU CHUN GEN NHỊ Agrobacterium tumefacien THÔNG QUA THÄM HÚT CHÂN KHÔNG (Vacuum Infiltration) Ngiiyên Lê Tń Trâm! , Thói Hen Phú! , Nguyên Văn Uyen3 m th: Lá mam tru mam tč câv xanh in vitro ngày ti dỉoc gây nhiem khn Agrobacterium tumefaciens băng máy hút chân khơng 0’mơi tru:ịng Murashige-Skoog (MS) có bơ sung benzyladenin (B.4) mg/1, naphthalene acetic acid (NỈ4) mg/1 và.4gNO3 mg/1 cho tÿ le choi tái sinh cao nhat (95%) ô’lá mam,‘ dó, ơ’ tru mam, niơi tru:ị’ng có bo sung mg/1 BA 0,5 nig/1 NAA cho IQ lê tćii sinh choi cao nhat (64,1%) Môi tricõng dùng de chpn loc cćìy chun gen có chÚa phosphinothricin (PPT) 3nig/l t"i khn du:yc sỉ dung cho thí nghiem chúng Agrobacterium tumefaciens F.HA fì5 chi"ca plasmid ITB2 mang gen cryIA(c), gen bar gen gusA Các choi tái sinh hình thành re du:‹yc mơi trỉõng MS có chú:a PPT 3mg/l, sau dó tion hành kiem tro gen du:‹tc chuyên vào mam, tru mam, tćii sinh, chuyên gene, tham hút chân khơng VAT LIEU VÀ PHÙNG PHÁP V;ât lieu Hat giong cäi xanh loai cao duqc cung cap bưi Cơng ty giong Trang Nơng, Tp Ho Chí Minh Hat cai xanh duos lac loai 70% (1 phút), rùa s3ch vói nc cat vơ trùng (3 Ian) Tiep theo, khù trùng hąt bang nuóc javel có hoat cut Hypochlorit Natrium 36 g/l (v/v) (15 phút) Cuoi cùng, rna sach hit bang nc cat vơ trùng nhieu lan Hąt duqc gieo mơi trng MS (Murashige Skoog, 1962) có bơ sung 30 g/l dng sucrose, g/l agar Các rnåu duoc dat ni phịng tăng trng có ánh sáng 2500 lux (10 giị/ngày), nhiet 27 2oC, âm 70% Các mam tru mam sau ngày duqc lap kích cõ khoăng cm dùng làm vat lieu thí nghiem Mơi trirịng tái sinh choi tïr mam tru mam Sù dung mơi trng cø bän MS có bơ sung mg/1 AgNO3, 30 g/l duõng sucrose, g/1 agar BA, NAA có nong thay dơi, pH 5,8 Các måu cay dupc dat bình tarn giác có dung tích 250 Trng DH Khoa hoc Tp Nhiên Tp.HCM Trng DH hfó Tp.HCM ^Trng DH Yersin — Dà Lat TĄP CHI KHOA HOC SÖ 1(16) -2010 ml vói 50 ml inơi trng Thành phïÏn chíÏt dieu hịa tăng trng thqc vat ket hop mơi trng tái sinh choi tù mhm: BA 1, 2, mg/1 ket h9p NAA 1, mg/1; doi vói trot mam: BA 1, 2, mg/1 ket hip NAA 0,5, mg/1 Vi khuan, mơi trirịng ni cay Vi khuan Vi khuân duqc sú dung cho thí nghiem chung A tumefaciens EHA 105 chúa plasmid ITB2 mang gen cryIA(c), gen bar gen gus A Mơi trirịng ni cay xi khuan Sù dung mơi tiũng LB có bơ sung thêm Kanamycine 100 mg/1 25mg/1 Rifampicine dê giïi giong Dê phqc vq cho nghiên cúu chuyên gen vào thuc vat, vi khn dirpc ni lac (250 vịng/phút) 24 giị mơi trng AB (Chilton cong sq, 1974) cüng chúa chíÏt kháng sinh nói nhiet 28oC Sau 24 giị ni cay, duc ö OD600 dat 0,8 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 Bieu kien thí nghiem 150, 200, 250 mg/1) Dieu kien phịng ni in vitro: Nhiet : 25 2OC Quang chu kì : 10 giị/ngày Cng chieu sáng : 2500a 500 lux : 70% Nhiet 30 + C Do âm trung bình 85% Ánh sáng tu nhiên 3000a 500 lux Phuong ¡Pháp Khào sát tái sinh cùa cài xanh tir mam try mam Lá mam tru mam duoc cô lâp tù nhïing xanh in vitro ngày tuôi Chúng duoc cay :' bô sung BA, NAA Eng ning khác tính khang PPT Xhão sát ãnh hỉăng cńa nong PPT den khâ iaăng tăi sinh cifia Iá mam +'á thu mzzm Các mâu míÏm tru km dirpc cô lap tù căi xanh in vitro ngày ti, lan lupt cay vào mơi trng tái sinh choi tot it có bơ sung PPT vói nong duo: 0, 1, 2, 3, mg/1 Khăo sót árih hu:Eng cûa nong PPT den sq sinh tr eng cua choi anh tói sinh tỵ ló mam 1›à try mhm Choi cäi xanh tái sinh tü km tm mama d m S b 4ung PP T caá hun Giai doin 1: Chuän bi vat lieu chuyen gen Các mâu mam trot mam duqc dat mơi trng tái sinh choi ngày Dung di.ch vi khuân A tumefaciens do duc OD600 dat 0,8 D u kien ngg “òn uom: Khao sát (Photphinothricin) Chuyen gen vào mam, trp mam bang A tumefaciens có tham hút chân khơng Các mam tni míÏm dirqc dat dìa có chúa dung d|ch vi khn A tumefaciens, diat vào bình hút chân khơng Tao mơi trng chân khơng vói áp suit 200 mmHg tri chân khơng khoăng thịi gian 10 phút, sau dó cho tró lai áp suat bình thirũng Cọc mau cay duos thùẽm khụ big giay lỗc vơ trùng cay lan lupt ląi mơi trng tái sinh choi, thịi gian ni chung ngày Giai doin 3: Di“ęt vi tumefaciens saii chuyen gen khuân A Rùa vi khuân báin mănh km tru mam bang nc cat vơ trùng lan, sau dó ngâm måu dung dich Cefotaxime 500 mg/1, lac nhę 30 phút ThíÏm khơ mâu Giai doin 4: Dca vào môi tru:Eng chân ldc Lá trot mam dupc thíÏm khơ cay lai mơi trng tái sinh choi có bơ sung PPT 500 mg/1 Cefotaxime Cay chuyen mâu mơi trng mói sau moi tuíÏn Phirtrng pháp kiem tra chuyen gen igs n’pp’ ' ’' lă mam tru dd tha dôi: 0,11 2, M, 4c mg/1 mam tr ên'm“ tru: Khâo sót PPT (thuäc try cõ Basta) gây chs căi xanh ngồi vu'ưn com Quan sát khă tái sinh choi cùa mâu sau chuyên gen mơi trng có PPT Hat xanh dirpc gieo chííu có kích thũc 25 x 30 cm, có chúa hon hip dat, tro trau, phân chuong vói ti le 1:1:1, moi chíỴu Sau tháng phun thuoc Basta vói nong (0, 50, 100, Khâ sinh tru:Eng cua chäi mơi tru:õng có PPT Quan sát khă phát triên choi căi TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 xanh tái sinh sau chun gen mơi trng có PPT Nhuom Gits mơ te bo two mụ sỗo rat tot (Bựi Trang Viet, 2002) Do dó, khã dáp úng cùa vat lieu mơi trng có CDHSTTV rõ rat; doc biet, tai vi trí cat, choi tái sinh sóm nhåt Xác d|nh khă xâm nhap cùa vi khuân vào te bào bang cách kiem tra biêu hien - Choi tái sinh tù mam (gom phïÏn cuong phien lá) nhu sau: phíÏn cuong cho khă two mơ tarn thịi cùa gen gus A Các inau cùa sęo tot so vói phíÏn phien lá, choi díÏu tiên duoc duoc nhuoin vói thuoc thù X-gluc (5-bromo-4tái sinh piÏn mơ sęo cuong Phan cuong (vói chloro-3-indolyl glucuronide) ị 37oC Sau 24 giị, mơ vị) có khuynh hng two mơ sgo høn mô rùa måu tuyet doi Mau có dau hieu (Duong Cơng Kiên, 2003); phïÏn phien lá, duói ltop biêu hien gen gus së xuat hien nhïing dom màu xanh chám (Nguyên Văn Uyên, 1996) KËT QUÁ VÀ THÁO LULAN Khà tái sinh cùa mam trp mam mơi trng có CDHST ïï/‹//:‘ïP1/:ïnï/nlp ìï/hi/i Báng Khâ tái sinh cûa mam Mơi trng BA(mg7ł) 7VAA(mgł) Tong so mau mam So mau tąo mô sęo Tÿ lê tái sinh mô sęo (%) So mau tái sinh choi Tÿ lê tái sinh choi sau tuan(%) 1 120 116 96,6+3,2 114 95+3,9 120 120 100 109 90,8+5,1 2 120 111 92,5+4,7 104 86,6+6,1 120 100 83,3+6,7 85 70,8+8,1 Tong so mau trș ø¡am So mau tąo mô sęo Tÿ le tái sinh mô sęo (%) So mau tái sinh choi Tÿ le tái sinh choi sau tuan(%) Báng 2: Khá tái sinh cúa try mam Mơi trng BA(mg7ł) 7VAA(mg7ł) 0,5 120 115 95,8+3,5 57 47,5+8,9 0,5 120 120 100 77 64,lż8,6 120 118 98,3+2,3 51 42,5+8,8 120 120 100 39 32,5+8,4 Ket quă thí nghiem cho thy ” - Trot mam noi chúa mô phân sinh lóng thãn, có nguon goc tù mơ phãn sinh ngon, xen giüa nhïing vùng mơ dã nhieu phân hóa Nhüng te bào vùng mơ có kha tăng trng ma.Rh VG bào; nhị vȘay, te bào nhu mơ có vai trị hán gan Vet thuong thũng duoc dùng ni cay te bào in vitro Các te bào nhu mô dê dàng tąo mô sęo mơi trũng có auxin (Bùi Trang Viet, 2002) Trong thí nghiem 1, chúng tơi nhân thïíy TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 sq phát sinh choi tù dat tÿ le cao nhát ó mơi trng có bơ sung ing/l BA + ing/l NAA, choi xuat hiên tù vat liêu tru mam nhieu nhåt mơi trng có bơ sung mg/1 BA + 0,5 mg/1 NAA Ơ tuan tliú 2, so rrøÏm mơi trng có ing/l PPT b| chet khoăng 87,5%, so mam cịn l3i vân giïi màu xanh nhung khơng có khă tái sinh so vói doi chúng Các mơi trũng có nong PPT mg/1 mâu chet 100%, có màu vàng sam Khi lap inåu dat cay mơi trng nhân tąo, mau cay thuòng xuat hien ety lene, mot Vay nong PPT (3 mg/1) duqc sù dung dê hormone thqc vat giúp sq lão hóa te bào — mot doi chon loc mhm sau chuyên gen kháng cùa thqc vat bi vet thuong hay sinh ly stress Viec bơ sung AgNO3 vào mơi trng ni cay vói mong muon vai trị su sinh tơng hop etylen cua ion Ag+ giúp cän di su lão hóa cua mv Sau tuân nuôi cay, nhȘan by mơi nhân Nhu Khanh mơi trng có bơ sung PPT mg/1 da so trq cay truòng tao (Ngun rrøÏm van cịn xanh so vói doi chúng, inot so b| vàng, 2002) Lá km Tru mïÏm Hình 1: Sir tái sinh choi cùa mam trp mam cài xanh Thïì nghiem tính kháng PPT Khão săt ănh hu:õmg cûa PPT den khó nóng tói sinh cua ló mam thâm den Các nong duo lai, mau trot mam deu bi váng, thâm den, có dau hieu chet díÏn Báng Khá tái sinh cúa mam trén mơi tru:ãng có PPT Nghiem thčrc Nong PPT (mg/1) Tong so mau So mau chet Tÿ le mau chet (%) Doi chúng 120 0 1 120 55 45,8 + 8,9 2 120 105 87,5 3 120 120 100 4 120 120 100 5,9 Sau tÏn ni cay, chúng tơi nlnan thíỴy Ơ tuan thú 2, so tni mam mơi trng mơi trng ni cay có bơ sung PPT mg/l có mg/1 PPT b| chet khoăng 81,6 %, so trot mam mg/1, mâu van cịn xanh so vói doi chúng cịn lai vân giir màu xanh nlurng khơng có khà Nong duo mg/1 có mot so måu b| mât màu tùng tái sinh so vói doi chúng Các mơi trng có nong m /1, mâu deu b| vàng, a mg/1 mâu chet 100%, trot mam có ph uy h g cTe4 u g TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 TAP CHI KHOA HOC SO 1(16) -2010 Báng 4: Khá nâng tái sinh cúa try mam trén mói tru:óng có PPT Nghiem thúc Nong PPT (mg/1) Tong so mau So mau chet Ty le mau chet (%) Doi chúng 120 0 1 120 98 81,6 + 6,9 2 120 120 100 3 120 120 100 4 120 120 100 Vay nong PPT (2 mg/1) di«yc sú dung dê chon loc tni sau chuyên gen triên Ô nong 100 mg/l, tat cà ngà sang vàng, héo rir nhung có hien ti«yng phuc hoi ó Khâo sat" nong d PPT (thuoc true có Basta) gãy chet câi xanh ngồi vu:Un u:om choi nách eua mot so Ô nong tú 150 mg/1 tro lên, Dt cà xanh deu chet khô Chúng chpn nong dão 150 mg/1 nong Sau tuan phun thuoc Basta (hoat cit kiêm tra cai xanh chuyên gen tháng ti ngối PPT) ta nhân by ó nong 50 mg/l b| mat vuõn nem màu quanh mép lá, màu chuyên sang màu xanh dííin, phien loi lõm Các xú ly ó nong 100, Chuyen gen vào mann tru mam bang 150, 200, 250 mg/1 b¡ cháy vàng, co lai, khơ héo A tumefaciens có thâm hút chân khơng ngirng phát triên » õ nãng tói sinh cia t'tt m t ry mam Tiep tuc theo dõi tói tuan thú 2, a nong trén mơi trũrig chân lic có PPT 50 mg/l, da so deu có dau hieu phuc hoi, chuyên sang mu xanh, ú ngỗn lỏ non bat dau phỏt Bỏng 5: Khá nâng tái sinh cúa mam trén môi trvõng chon loc PPT Nghiem thirc Tong so mau mam So mau tái sinh choi Ty le tái sinh sau tuan (%) Doi chérng 30 o Chuyen gen nhiYA.firme/aciens 350 0,28 Chuyen gen nhÕA.firme/nciens có tham hút chân không 350 0,8J Bàng Khà nàng tái sinh cúa try mim môi tru:õng chon loc PPT Nghiêm thúc Doi chú’ng Chuyen gen nhÕA.tiime/aciens Chuyen gen nhÕ A.tumefaciens có tham hút chân khơng Tong so mau trỗ mann So mau tỏi sinh choi Ty le tỏi sinh sau 30 350 0 0 350 tuan (%) 0,57 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠIHQC HỌC -MỞ KHOA KŸTP.HCM THUAT- SỐ (1) 2010 Bien hien cua gen gas saii bien nip gen Mot so mô sęo cua tru mam choi cùa mhm cho ket q duong tính vói thuoc thù gus A Dua vào ket quă trên, có thê sø bo ket luțan rang vi khuân A fume/aciens chung EHA 105 có khă chun gen tù pITB02 vào inơ cai xanh (B juncea L.) Ket qua thí nghiëm cho they: Lá mam trti mam căi xanh {B juncea L.) có nhüng biên chi.u dimg thuoc tıù co PPT khác Nhüng mâu mam tru mam non, khơng trãi qua q trinh quang tu dũng nên có ngũng chon loc thíÏp (2 mg/1 PPT doi vói tru mam, mg/1 doi vói mïÏm) Nhin chung, u mam tru rrøÏm non nha.y căin vói dieu kien bien nip ch9n loc, nên tÿ le song sau trinh bien nap khơng cao ó că hai phuong pháp chuyen gen: chuyen gen nhị vi khn A.tumefaciens có hút chân khơng chun gen Ni“a vi khn A.tumefaciens khơng thíÏm hút chân khơng Trong q trinh chon loc mau chun gen ó thí nghiem này, so u míÏm tru mam sau bien riąp gen ó că hai phuong pháp dã hinh thành mơ sęo vói mot tÿ le khơng cao Mot so it mô sęo phát sinh thánh choi Tuy nhiên, sau vái Ibn cay chuyen, tíÏt că choi deu khơng phát triên có hien tupng vàng lá, chet Hien tupng tirong vói ket quă chuyên gen ó thào B campestris (Zhang cuong sq, 2000), cäi ngpt B integrifoli‹i (Lê Tan Dúc cong sq, 2005) Theo Yang cong sq (2000), hien tuong duoc coi escape phô bien trinh chuyên gen, lám cho nhïing choi không chun gen cfing có kha phát triên binh thng mơi trng có chat chon loc hoğc choi ị thê khäm Ngoài ra, chuyên gen doi tuong khác nhu thuoc (Nicotian i tabacum), hơng (Paulownia fortunei) thi mau có khă tái sinh choi cao tù xung quanh ria ó nhieu v| trí cat, nên vi khuân A tumefaciens có thê xâm nhâ.p vào nhieu vi trí có khà tái sinh Trong ó mam cäi xanh sq tái sinh tai cuong trtl mam xanh thirịng xăy dau mă.t cat, nên vi khn.4.tumefaciens chi có hay v| trí dê có thê xâm nhâ.p vào tao chuyên gen Dong thòi, viec chuyên gen vi khuân A.tume aciens dùc khói sq tù vet thùng, te bào thqc vat tao phenol nhir acetosyrigon (có nhieu ị u cua thuoc lá) Do dó nhà nghiên cúu thng bơ sung ring acetosyrigon nham làm tăng hieu quă chuyên gen vào Tuy nhiên, thí nghiem chi den thuan tim hiêu tác dong cùa sq lôi cuon chân không den inåu chuyên gen nên không bô sung luong acetosyrigon Met khác, theo cø che chon loc cùa PPT, dom nhò te bào dã dinyc bien p gen cfing có nguy b| chet quỏ trinh chỗn lỗc lupng chíÏt doc ammonia tích th ị múc cao tai nhïing vùng te bào không duqc bien ri p gen xung quanh theo cø che khuyech tán m3nh vào bên te bào dã di«yc chuyên gen gây chet te bào Mac dù nhïing te bào bien nąp có thê dã có sq hoat d{ong cùa gen bar gen mã hố cho enzym phosphinothricin acetyl transferase, phân giái thc trù cị PPT thành dang acetyl, khơng cịn úc che q trinh sinh tơng hip glutamin giai tịa sq tích tą amonia (Block cong sq, 1997) Do dó, q trinh chuyen gen có xác xuat thành cơng khơng cao Hien nay, phuong pháp chuyên gen gián tiep nh“a A.tumefaciens thơng qua hút chân khơng chi mói áp dung thành công nhieu o doi tuqng Arapidopsis thailana (Steve Clough Andrew Bent, 1998), Medicago trucatula (Anthony T Trieu cuong str, 2000) Các tác gia dã dùng he thong hút chân khơng phá võ bot khí ngăn cán sq xâin nhap cua vi khuân 4.tumefaciens vào bțo phíin hoa cùa cây, täng cng tan suat chun gen Mot nghiên cúu dáng ghi nhân ö dau lăng (Lens culinaris M.) nh“a Rao kÿ thuíít tham hút chân khơng vói dung dich vi khn A.tumefaciens (Mehrzad Mahmoudian cong sq, 2002) Cây dau lăng loai man căm vói dịng vi khn A.tumefaciens (Warkentine McHughen, 1991; Khawar Ozcan, 2000) Các báo cáo truóc dây cho they not mïÏm dau lăng không thê áp dung chuyên gen giántiep nhò A.tumefaciens (Warkentine McHughen, 1993) Phuong pháp chun genthích TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2010 hpp ó d}au lãng kJ thuat xung dien (Cliowrira cong su, 1995, 1996) Tuy nhiên, Mahinoudian công sir (2000) dã su dung thong chân không nhiem làm tãng mà.t dão te bào A.tumefaciens mơ th¡rc vat, tãng tan suat chun gen a dau lãng Tác già dã thánh công klii chuyên gen gus vào not iriam gián tiep Ni“a A.tume aciens thông qua he thong tham hút chân không Các nghiên cúu bien pp gen hQ Brassicaceae dã duoc thqc hien thành công cãi dau B napus (Moloney cong su, 1989), bap cãi B oleracea (De Block cong sq, 1989), cài xanh B juncea (Barfield Pua, 1991), thao B campestris (Zhang v Takahata, 2000), cõy cai ngỗt B integrifolia (Lê Tan Dúc cong su, 2005) thông qua vi khuân A tumefaciens Tuy nhiên cho den nay, chúng tơi chua có thơng tin ve nghiên cúu bien nap gen vào mâu mô cai nhõ A tumefaciens thông qua he thong thám hút chân khơng Ket q bc dau chuyên gen nhõ he thong têm liút chân không vói dung dlch vi khn A tumefaciens, chúng tơi dã thu nhân duoc so mô sgo choi tái sinh có biêu hien gen gus A cao gap dơi so vói phuong pháp chuyen gen nhõ vi khuân A tumefaciens, tuong ter vói ket quà chuyên gen ó not mim dííu lãng duqc de cap trc dó Tóm lai, ky thuat chuyên gen bang A tumefaciens thông qua hút chân không &mh 2: Sir tái sinh choi cúa mam tru mam dinyc chuyen gen môi trirõng chpn lpc -A, A’: Choi tái sinh tir tm mann mơi trũng có PPT — Doi chúng chuyen gen -B, B’: Nhuom gus Eu mô tru Em — Doi chúng chuyên gen -C, C’: Choi tái sinh tú mam mơi trũng có PPT — Doi chúng chuyên gen 10 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠIHQC HỌC MỞ - SỐ (1) 2010 KHOA - KŸTP.HCM THUAT 17 Thù nghiem tính kháng PPT mot phuong pháp mói, døn gian, ton hieu quă Chính vay, phịng thí nghiêin nc ta có thê áp dung phuong pháp dê chuyên gen mang nhüng doc diêm có lcri vào có tiem kinh te cao KËT LULAN He thong tái sinh - Tái sinh cäi xanh tù mam cho tÿ lê tái sinh cao nhåt mơi trng MS + mg/1 AgNO3 + mg/l BA + mg/l NAA dat 95% Dây mơi trng thích hip cho viec tái sinh xanh tù - Tái sinh cäi xanh tù trq mam cho tÿ lê tái sinh cao nhíÏt ị mơi trng MS + mg/1 AgNO3 + mg/1 BA + 0,5 ing/l NAA dat 64,1% Dây l mụi truũng thớch hỗp cho viec tỏi sinh cõy cäi xanh tù tru - Nong PPT dùng chon loc mam căi xanh chuyên gen mg/1 tni míÏm căi xanh chuyên gen mg/1 - Nong PPT kiêm tra cäi xanh chuyên gen tái sinh mg/1 - Nong PPT (thuoc trù cò Basta) dùng dánh giá căi xanh tháng ti chun gen ngồi uom 150 mg/1 Chuyen gen - Phuong pháp chuyên gen nhò vi khn A tumefaciens thơng qua thíÏin hút chân khơng có so mô sgo so choi tái sinh tù mam, trot mam sau chuyên gen cao gap dôi so vói phuong pháp chun gen khơng thíÏm hút chân khơng Bên canh dó chúng ning có phan úng dirong tính vói thuoc thù X-gluc TĂI LIEU THAM KHÃO [l] LÊ TÄN DOC, NGUYËN HÜU HÖ, PHAM THț HĄNH, NGUYfiN VÃN UYËN, 2005 Nghiên cú'u two cãi right (Brassica integrifolia) chuyen gen khóng sâu tú' try mam thơng qua vi khuân Agrobacteri um tumefaciens Báo cáo hoi nghi khoa hỗc toỏn quoc, tr 201 204 [2] NGUYậN VN UN, 1995 Nhỵing phu:eng phóp cơng nghe sinh hoc thgc vat, tap NXB Nông Nghiep, tr 83 — 96 [3] NGUN VĂN UYEN, 1996 Hhỵing phirdng phóp cơng nghe sinh hgc thirc vat, top NXB Nông Nghiep, tr — 22 [4] CLOUGH S T., & BENT A F., 1998 Floral dip: a simplified method for Agrobacterium — mediated trasformation ofArabidopsis thaliana Plant J 16: 735 — 743 [5] MEHRZAD MAHMOUDIAN, MERAL YUCEL AND HUSEYIN AVNI OKTEM, 2002 Transfomation ofLentil (Lens ciifinoris M.) cotyledonary nodes by vacuum infiltration ofAgrobacterium tumefaciens Plant Molecular Biology Reports, 20: 251 — 257 ... Tóm lai, ky thuat chuyên gen bang A tumefaciens thông qua hút chân không &mh 2: Sir tái sinh choi cúa mam tru mam dinyc chuyen gen môi trirõng chpn lpc -A, A’: Choi tái sinh tir tm mann mơi trũng... khă tái sinh choi cao tù xung quanh ria ó nhieu v| trí cat, nên vi khn A tumefaciens có thê xâm nhâ.p vào nhieu vi trí có khà tái sinh Trong ó mam cäi xanh sq tái sinh tai cuong trtl mam xanh. .. thí nghi? ?in ö nuóc ta có thê áp dung phuong pháp dê chuyên gen mang nhüng doc diêm có lcri vào có tiem kinh te cao KËT LULAN He thong tái sinh - Tái sinh cäi xanh tù mam cho tÿ lê tái sinh cao