Tác động của đa hình đơn gen ABCB1 và OPRD1 đến liều điều trị Methadone thay thế ở bệnh nhân nghiện chất dạng thuốc phiện

Bài viết Tác động của đa hình đơn gen ABCB1 và OPRD1 đến liều điều trị Methadone thay thế ở bệnh nhân nghiện chất dạng thuốc phiện trình bày đánh giá mối liên quan giữa đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB1 và rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1 với liều điều trị methadone thay thế ở bệnh nhân nghiện CDTP.

TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 519 - THÁNG 10 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 TÁC ĐỘNG CỦA ĐA HÌNH ĐƠN GEN ABCB1 VÀ OPRD1 ĐẾN LIỀU ĐIỀU TRỊ METHADONE THAY THẾ Ở BỆNH NHÂN NGHIỆN CHẤT DẠNG THUỐC PHIỆN Trần Khánh Chi1, Trần Văn Chiều1, Nguyễn Quỳnh Giao1, Đặng Thị Ngọc Dung1 TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá mối liên quan đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB1 rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1 với liều điều trị methadone thay bệnh nhân nghiện CDTP Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 400 bệnh nhân nghiện CDTP điều trị methadone xác định đa hình nucleotid đơn phương pháp giải trình tự gen Sanger mẫu bệnh phẩm máu toàn phần Kết quả: Các cá thể mang kiểu gen CT đa hình nucleotid đơn rs1045642 gen ABCB1 yêu cầu sử dụng nhóm liều cao (≥ 90mg/ngày) cao kiểu gen CC 1,59 lần (p=0.03, OR = 1,59) Các cá thể mang kiểu gen CC đa hình nucleotid đơn rs2234918 gen OPRD1 yêu cầu điều trị nhóm liều cao (≥ 90mg/ngày) cao kiểu gen TT lần (p=0.049, OR = 2) Các cá thể mang kiểu gen CT – CC (rs1045642 gen ABCB1 - rs2234918 gen OPRD1) yêu cầu điều trị nhóm liều cao (≥ 90mg/ngày) cao kiểu gen đồng hợp thể hoang dại CC - TT 4,00 lần (p=0.02, OR = 4,00) Kết luận: Có mối liên quan biến thể di truyền đa hình nucleotid đơn rs2032582 gen ABCB1, rs2234918 gen OPRD1 với liều Đại học Y Hà Nội Chịu trách nhiệm chính: Trần Khánh Chi Email: Trankhanhchi@hmu.edu.vn Ngày nhận bài: 19.9.2022 Ngày phản biện khoa học: 23.9.2022 Ngày duyệt bài: 24.9.2022 điều trị methadone thay bệnh nhân nghiện CDTP Từ khóa: Methadone, gen ABCB1, gen OPRD1 SUMMARY IMPACT OF ABCB1 AND OPRD1 GENETIC POLYMORPHISMS ON METHADONE DOSAGE REQUIREMENTS IN OPIOIDDEPENDENT PATIENTS Objective: Evaluation of the association between single nucleotide polymorphisms rs1128503, rs2032582, rs1045642 of the ABCB1 gene and rs2234918, rs581111, rs529520 of the OPRD gene and methadone substitution therapy in patients with opioid addiction Material and methods: 400 opiate-addicted patients receiving methadone treatment were identified for single nucleotide polymorphisms by Sanger gene sequencing Results: Individuals carrying CT genotype of single nucleotide polymorphism rs1045642 of the ABCB1 gene required high dose group (≥ 90mg/day) 1.59 times higher than CC genotype (OR=1,59, p=0.03) For the single nucleotide polymorphism rs2234918 of the OPRD1 gene, individuals carrying the CC genotype required high-dose group therapy (≥ 90mg/day) has higher times more than TT genotype (OR = 2, p=0.049) Individuals carrying the CT-CC genotype (rs1045642 ABCB1 gene - rs2234918 OPRD1 gene) requiring high dose group treatment (≥ 53 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC 90mg/day) has higher 4,00 times more than wildtype CC - TT genotype (OR = 4,00, p=0.02) Conclusion: There is an association between genetic variant of single nucleotide polymorphism rs2032582 of the ABCB1 gene and rs2234918 of the OPRD1 gene and methadone substitution therapy in patients with opioid addiction Keywords: Methadone, ABCB1 gene, OPRD1 gene I ĐẶT VẤN ĐỀ Chất dạng thuốc phiện (CDTP) tên gọi chung cho nhiều chất thuốc phiện, morphine, heroin, methadone, buprenorphine Nghiện CDTP thuốc phiện, morphin, heroin chất gây nghiện mạnh, thời gian tác dụng nhanh thời gian bán hủy ngắn nên người nghiện sử dụng lặp lặp lại nhiều lần với liều lượng ngày tăng, dẫn đến trạng thái nhiễm độc chu kỳ, mạn tính, bị lệ thuộc thể chất tâm thần Trong đó, methadone dù CDTP tổng hợp, có tác dụng dược lý tương tự CDTP khác không gây nhiễm độc hệ thần kinh trung ương khơng gây khối cảm liều điều trị, có thời gian bán huỷ dài (trung bình 24 giờ) nên cần sử dụng lần ngày đủ để không xuất hội chứng cai Vì vậy, số liệu pháp điều trị nghiện CDTP nay, liệu pháp điều trị thay methadone đánh giá hiệu triển khai rộng rãi toàn giới Việt Nam.1 Tuy nhiên, liều methadone dao động lớn cá thể, điều đặt khó khăn thực hành lâm sàng Nhiều yếu tố đề cập, có 54 yếu tố hệ gen dược lý tiềm liên quan chuyển hóa thuốc q trình thuốc tác động vào thụ thể Trong đó, nghiên cứu giới tập trung vào nhóm gen nằm phân nhóm mục tiêu gen ABCB1, OPRD1 Gen ABCB1 (ATP binding cassette subfamily B member 1) mã hố cho protein vận chuyển thuốc thuộc nhóm Pglycoprotein Đây protein vận chuyển methadone vào tế bào, hoạt tính protein ảnh hưởng tới vận chuyển methadone số mô, đặc biệt ruột non, thận não.2 OPRD1 mã hóa thụ thể δ opioid (DOR), ba thụ thể opioid não Thụ thể DOR ảnh hướng tới trình thuốc tác động vào não Nhiều nghiên cứu chứng minh đa hình nucleotid đơn (SNP) gen ABCB1 OPRD1 ảnh hưởng tới chức protein mà chúng tổng hợp, từ gây ảnh hưởng tới hiệu liều điều trị methadone.2,4 Các nghiên cứu giới tập trung vào đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB1 rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1 bệnh nhân điều trị thay nghiện CDTP methadone Do đó, nghiên cứu thực với mục tiêu đánh giá tác động đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB1 rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1 đến liều điều trị methadone thay bệnh nhân nghiện CDTP II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 519 - THÁNG 10 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 Đối tượng nghiên cứu: 400 bệnh nhân chẩn đoán nghiện CDTP điều trị methadone thay chia thành nhóm: Nhóm điều trị liều thấp (≤ 60 mg/ngày) 200 bệnh nhân nhóm điều trị liều cao (≥ 90 mg/ngày) 200 bệnh nhân *Tiêu chuẩn chọn đối tượng nghiên cứu: Tuổi ≥ 18 tuổi đạt liều điều trị methadone trì, khơng tái sử dụng CDTP tháng *Tiêu chuẩn loại khỏi nghiên cứu: Phụ nữ mang thai, cho bú bệnh nhân có giảm chức gan, thận: creatinin huyết ≥ 1.5 lần giới hạn bình thường; AST ALT ≥ 2.5 lần giới hạn bình thường; bilirubin huyết tồn phần ≥ 1.5 lần giới hạn bình thường Thiết bị hóa chất sử dụng: Tách chiết DNA Exgene™ Blood SV Kit GeneAll, Khuyếch đại gen Taq 2X Master Mix New England Biolabs Thời gian nghiên cứu: 11/2020 đến tháng 7/2022 Địa điểm nghiên cứu: sở điều trị methadone tỉnh Ninh Bình; Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm y học - Đại học Y Hà Nội 2.2 Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp nghiên cứu: mơ tả cắt ngang Quy trình nghiên cứu: - Tiến hành thu thập thông tin nghiên cứu mẫu máu toàn phần bệnh nhân - Xác định đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB1 rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1: + Tách DNA từ máu toàn phần Exgene™ Blood SV Kit GeneAll + Tiến hành phản ứng PCR khuếch đại đoạn đoạn gen có chứa đa hình nucleotid đơn với trình tự mồi (bảng 1), thể tích phản ứng PCR 25 µL gồm 12.5 µL Taq 2X master mix, 10.5 µL nước, 0.5 µL mồi µL DNA mẫu; phản ứng thực với chu kỳ nhiệt: Gia nhiệt 940C phút; [biến tính 940C 30s, gắn mồi 30s (với nhiệt độ gắn mồi đa hình nucleotid đơn rs1128503, rs2032582, rs1045642 gen ABCB; rs2234918, rs581111, rs529520 gen OPRD1 550C, 55.50C, 560C, 55,40C, 54,40C, 54,40C), kéo dài 720C 30s]x35 chu kì; bảo quản 40C + Điện di gel agarose 1,5%, 100V, 30 phút kiểm tra kết với UV visualizer + Tinh sản phẩm PCR giải trình tự gen phương pháp Sanger sử dụng Applied Biosystems™ Sanger Sequencing Kit Bảng Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu Gen Tên mồi rs1128503 ABCB1 rs2032582 Trình tự F: 5’AAGAGTGGGCACAAACCAGATA-3’ R: 3’-GCTCGCATGGGTCATCTCA-5’ F: 5’-GCAAATCTTGGGACAGGAAT-3’ R: 3’-GAGCATAGTAAGCAGTAGGGA-5’ Độ dài khuyếch đại 421 bp 255 bp 55 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC F: 5’-CAAAGTGTGCTGGTCCTGAAGT -3’ 376 bp R: 3’-GTAAGGGTGTGATTTGGTTGCT-5’ F: 5’-GCCCATCCACATCTTCGTCA -3’ rs2234918 393 bp R: 5’- CTACACCTCACCCCGTCATC -3’ OPRD1 F: 5’-CTCAGAGAAGCCATTGTTGACC-3 rs581111 647 bp rs529520 R: 5’-TGTTGGTCTAACCGAATGGGAG-3’ 2.3 Đạo đức nghiên cứu: Nghiên cứu chấp thuận Hội đồng Đạo đức Trường Đại học Y Hà Nội số 357/HMUIRB rs1045642 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đặc điểm nhóm nghiên cứu Bảng 2: Đặc điểm nhóm nghiên cứu Nhóm liều trìNhóm (≤ 60 mg/ngày) Đặc điểm (n = 200) Nam (%) 99,5 Tuổi trung bình ± SD (năm) 42,37 ± 7,56 Cân nặng ± SD (kg) 58,31 ± 7,39 Tuổi lần đầu dùng CDTP ± SD (năm) 25,32 ± 6,87 Nhóm (≥ 90mg/ngày) (n = 200) 100 41,49 ± 7,53 58,38 ± 6,75 23,79 ± 7,08 p 0,34 0,92 0,24 0,03* Số năm dùng CDTP ± SD (năm) 6,92 ± 4,47 7,15 ± 5,06 0,63 Chích CDTP (%) 80 86,5 0,08 Liều trung bình ± SD (mg/ngày) 42.71 ± 13.96 127.17 ± 50.42 *p