I PHẢN ỨNG BIURET: Nguyên tắc: - Các hợp chất có hay nhiều liên kết -CO-NH- liên kết với Cu 2+ môi trường kiềm tạo phức có màu đỏ tím đỏ đặc trưng (ohanr ứng Biuret) - Là phản ứng đặc trưng của liên kết peptide - Cường độ màu phức hợp phụ thuộc vào số lượng liên kết peptide mạch Cách tiến hành: - Lấy hai ống nghiệm tiến hành theo bảng sau: () Điều chế biuret từ ure: cho vào ống nghiệm vài tinh thể ure, đun nhẹ, ure ẽ chảy đông cứng lại tạo thành biuret NH3 bay - - - II Kết quả: Ống nghiệm 1: dung dịch có màu tím đỏ.(hình) Ống nghiệm 2: dung dịch có màu tím xanh (hình) Bàn luận: Giải thích ( ống nghiệm 1): đun nóng phân tử ure tạo thành biuret làm xuất liên kết peptide –CO-NH- Trong môi trường kiềm, biuret kết hợp với CuSO cho phức muối Cu có màu tím đỏ Ta có phương trình: Giải thích ( ống nghiệm 2): dung dịch protein trứng có liên kết peptit –CO-NH- nên cho phản ứng biuret tạo phức hợp muối Cu với polypeptit có màu xanh tím (pt) CÁC PHẢN ỨNG KẾT TỦA PROTEIN: A KẾT TUẢ PROTEIN BẰNG MUỐI TRUNG TÍNH: Ngun tắc: - Trong lịng trắng trứng có hai loại protein chủ yếu albumin globulin Albumin kết tủa nồng độ (NH4)2SO4 bão hòa Globulin kết tủa nồng độ (NH 4)2SO4 bán bão hòa - - Cách tiến hành: Lấy hai ống nghiệm thực sau: 3ml dung dịch protein trứng + 3ml (NH4)2S04 bão hòa Cho vào ống nghiệm Lắc Lọc tủa Thu dịch lọc + từ từ (NH4)2SO4 tinh thể không tan Cho vài ống nghiệm Lắc Tủa Kết quả: Khi cho dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa vào protein trứng thấy xuất kết tủa trắng Khi lọc, kết tủa trắng bị giữ lại ( globulin) Dung dịch nước lọc cho tinh thể (NH 4)2SO4 vào có tượng kết tủa trở lại ( albumin) - - - - - - - Bàn luận: Trong protein trứng có albumin globulin Đây protein mang tính axit yếu Ở điều kiện bình thường , trạng thái dung dịch, phân tử protein tích điện -, bên bao lớp áo nước với đầu + quay vào đầu – quay ra, nên lơ lửng môi trường Khi cho muối (NH4)2SO4 có nồng độ cao vào, muối tạo ion NH 4+ SO42- Các ion trung hòa tiểu phân tử protein trứng đồng thời lấy lớp áo nước bên tạo tượng kết tủa Ta thấy globulin tạo kết tủa trước có trọng lượng phân tử lớn, lớp áo nước bên lớn nên tạo ion NH4+ SO42- dễ nhanh dẫn đến trung hòa điện gây tủa Khi lọc, ta dung dịch bán bão hòa albumin Nên cho tinh thể (NH 4)2SO4 vào làm cho dung dịch lọc trạng thái bão hịa, lúc albumin có tượng kết tủa Kết luận: + phản ứng kết tủa protein muối trung tính thực mơi trường axit yếu kiềm yếu + dùng phản ứng tủa thuận nghịch để chiết protein dạng tinh khiết, điều chế sản phẩm men, nội tiết tố Vì q trình, muối kết tủa protein khơng tính chất vật lí, hóa học, sinh học đặc hiệu B KẾT TỦA PROTEIN BẰNG AXIT HỮU CƠ: Nguyên tắc: Kết tủa protein axit hữu kết tủa không thuận nghịch TCA ( tricloroacetid acid) muối hữu có tác dụng làm biến tính protein ( thay đổi tính tan, hoạt tính sinh học, cấu trúc, ) protein bị đơng tụ lại thành dạng keo khơng hịa tan ( kết tủa khơng thuận nghịch) Các nhân tố khác gây biến tính protein nhiệt độ cao, axit vơ đặc, số axit hữu cơ, kiềm đặc, muối kim loại nặng, nồng độ cao Cách tiến hành: Lấy hai ống nghiệm, cho vào ống ml protein trứng Thêm vào: ống 1: giọt TCA 10%, lắc nhẹ ống 2: giọt acid sunfolsalisilic 10% lắc nhẹ Kết quả: Cả hai ống nghiệm xuất tủa kết tủa có màu trắng Và ống nghiệm có nhiều kết tủa ống nghiệm (hình) Biện luận: Khi cho axit hữu vào dung dịch protein trứng tạo nên môi trường acid yếu, có khả gây kết tủa Ta thấy ống nghiệm có kết tủa nhiều ống nghiệm acid sunfolsalisilic tủa protein, polypeptit axit amin, cịn TCA có khả tủa protein Kết luận: điều kiện để tạo tủa protein phải trung tính hay có tính acid yếu C Kết tủa protein muối kim loại nặng: Nguyên tắc: - - - - - Dung dịch keo protein bền vững tiểu phần protein mang lớp áo nước bị ngăn cách tích điện dấu nên chúng đẩy Nếu làm hai yếu tố dẫn tới kết tủa tiểu phần protein Khi làm biến tính protein kim loại nặng xảy tượng kết tủa Cách tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dung dịch protein nhỏ từ từ dung dịch muối sau: Kết quả: Ống nghiệm 1: xuất kết tủa màu trắng đục, cho thêm muối dư vào tủa tan từ từ (hình) Ống nghiệm 2: xuất tủa trắng đục tan nhanh chưa cho thêm muối dư vào Ống nghiệm 3: xuất kết tủa màu vàng nâu, cho thêm muối dư vào tủa tan (hình) Ống nghiệm 4: xuất tủa màu xanh nhạt, cho thêm muối dư vào tủa tan Biện luận: Các muối kim loại nặng tác dụng với protein tạo phức chất không tan nước tan trở lại có lượng muối dư tương ứng ( trừ AgNO 3, HgCl2) Hiện tượng xảy hấp thụ ion kim loại nặng bề mặt tiểu phân tử protein làm chúng tích điện dương Muối kim loại nặng tạo tủa làm biến tính protein phá hủy sâu sắc cấu trúc bậc phân tử protein Kết luận: kết tủa protein với muối kim loại nặng ứng dụng để giải độc cho thể bị ngộ độc muối thủy ngân, đồng, chì,…khi thể cịn chưa kịp hấp thu chất độc dùng sữa lòng trắng trứng để giải độc D KẾT TỦA PROTEIN BẰNG NHIỆT: Nguyên tắc: - ... thái bão hịa, lúc albumin có tượng kết tủa Kết luận: + phản ứng kết tủa protein muối trung tính thực mơi trường axit yếu kiềm yếu + dùng phản ứng tủa thuận nghịch để chiết protein dạng tinh khiết,... tủa protein với muối kim loại nặng ứng dụng để giải độc cho thể bị ngộ độc muối thủy ngân, đồng, chì,…khi thể cịn chưa kịp hấp thu chất độc dùng sữa lòng trắng trứng để giải độc D KẾT TỦA PROTEIN...- - - - - - - Bàn luận: Trong protein trứng có albumin globulin Đây protein mang tính axit yếu Ở điều kiện bình thường , trạng thái dung