Đang tải... (xem toàn văn)
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH NGUYỄN MINH TIẾN KHẢO SÁT PHÂN ĐOẠN CÓ HOẠT TÍNH CHÓNG OXI HOÁ CAO NHẤT BẰNG SẮC KÝ CỌT CỦA CAO THÂN CÂY AN XOA (Helicteres hừsuta Lour ) Chuyên[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH NGUYỄN MINH TIẾN KHẢO SÁT PHÂN ĐOẠN CÓ HOẠT TÍNH CHĨNG OXI HỐ CAO NHẤT BẰNG SẮC KÝ CỌT CỦA CAO THÂN CÂY AN XOA (Helicteres hừsuta Lour.) Chuyên ngành : Sán xuất phát triền thuốc KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược ĐẠI HỌC Hướng dẫn khoa học: Ths Phan Thị Thanh Thuỷ TpHCM - 2018 Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học Lời cam đoan LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học cùa Ths Phan Thị Thanh Thủy Các số liệu, kết nêu báo cáo trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Minh Tiến Nguyền Minh Tiến Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học Lời cảm ơn LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ths Phan Thị Thanh Thủy Trưởng mơn Hóa Dược - Đại học Nguyễn Tất Thành, người tận tình báo, hướng dẫn thực đề tài Cô định hướng mở rộng đường nghiên cứu cho tơi lúc khó khăn bế tắc nhất, Cô nhà giảo quan tâm, tôn trọng dành quan tâm đặc biệt cho sinh viên Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới tập Thầy Cô giáo môn trường Đọc Nguyễn Tất Thành, người tận tâm ho trợ, giúp đờ xử trí vấn đề khó khăn tơi trình thực đề tài Đồng thời, xin cám ơn Ban chủ nhiệm Khoa Dược Ban giám hiệu trường Đại học Nguyễn Tat Thành tạo điệu kiện cho tơi nói riêng sinh viên trường nói chung, trang thiết bị phịng Lab đê chủng tơi thực đề tài TP Hồ Chí Minh, thảng năm 2018 Nguyền Minh Tiến Khóa luận tơt nghiệp Dược sĩ đại học Mục lục MỤC LỤC ĐẶT VÁN ĐÈ CHƯƠNG TỐNG QUAN 2.1 VỊ TRÍ TRONG HỆ THỐNG PHÂN LOẠI THựC VẬT 2.2 TỐNG QUAN THựC VẬT HỌC 2.2.1 Đặc điềm hình thái 2.2.2 Nguồn gốc, sinh thái phân bố 2.2.3 Bộ phận dùng 2.3 THÀNH PHÀN HĨA HỌC VÀ TÌNH HÌNH NGHIÊN cúư TRONG VÀ NGỒI NƯỚC 2.4 CHÁT CHỐNG OXI HÓA 10 2.5 TÁC DỤNG Dược LÝ 11 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 13 3.1 VẬT LIỆU 13 3.1.1 Nguyên liệu 13 3.1.2 Bột dược liệu 13 3.1.3 Vi phẫu 13 3.1.4 Dụng cụ, hóa chất 13 3.1.5 Thiết bị nghiên cứu 14 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 14 3.2.1 Khảo sát đặc điểm hình thái 14 3.2.2 Khảo sát đặc điếm giải phẫu 14 3.2.3 Chuẩn bị nguyên liệu 14 3.2.4 Phương pháp chiết xuất dược chất từ bột thân An xoa 15 3.2.5 Khảo sát phân đoạn có hoạt tính chống oxi hóa sắc ký cột 18 3.2.6 Phương pháp FOLIN-CIOCALTEU xác định hàm lượng phenolic tổng cộng 19 Ngun Minh Tiên i Khóa luận tơt nghiệp Dược sĩ đại học Mục lục 3.2.7 Phương pháp DPPH làm dọn dẹp gốc tự do, đánh giá hoạt tính chống oxi hóa 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 4.1 KẾT QUẢ CÁC CHỈ TIÊU NGUYÊN LIỆU 25 4.2 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT HỌC BAN CỦA CÂY AN XOA 25 4.2.1 Đặc điểm hình thái 25 4.2.2 Đặc diem giải phẫu 26 4.2.3 Đặc điếm bột dược liệu 32 4.3 CHIẾT XUÁT DƯỢC LIỆU VÀ THU CAO PHÂN ĐOẠN 34 4.3.1 Ket chiết cao toàn phần 34 4.3.2 Ket chiết cao phân đoạn 35 4.4 KÉT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHỐNG OXI HÓA CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN THU ĐƯỢC TỪ SẮC KÝ CỘT 36 4.4.1 Ket phân đoạn thu từ sắc ký cột nhanh 36 4.4.2 Ket thử hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn tập họp 38 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 5.1 KẾT LUẬN 47 5.1.1 Tiêu chuân nguyên liệu 47 5.1.2 Đặc diêm thực vật học cùa An xoa 47 5.1.3 Quy trình chiết xuất thu cao 47 5.1.4 Đánh giá hoạt tính chống oxi hóa cao phân đoạn thu từ sắc ký cột 47 5.2 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHAO PHỤ LỤC Nguyên Minh Tiên ii Khóa luận tôt nghiệp Dược sĩ đại học Danh mục DANH MỤC CHỮ VIÉT TẤT DPPH : 1,1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl GAE : Gallic acid equivalent - đương lượng Acid gallic IC : Nồng độ ức chế MeOH : Methanol VitC : Vitamin c SKLM : Sắc ký lớp mỏng HPLC High Performance Liquid Chromatography: Sac ký lỏng hiệu : cao Lu LNCaP : : Human lung carcinoma: Te bào ung thư biểu mô phổi người Hormone-dependent human prostate carcinoma: Te bào ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt phụ thuộc hc- môn người MCF-7 : Human breast carcinoma: Te bào ung thư biểu mô tuyến vú người HƯVEC : Human umbilical vein endothelial: Te bào màng tĩnh mạch rốn người Ngun Minh Tiên ỉii Khóa luận tơt nghiệp Dược sĩ đại học Danh mục DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Khả gây độc tế bào lignansa,btrong An xoa Bảng 3.1 Nồng độ cao đem định lượng 20 Bảng 3.2 Quy trình xây dựng chuẩn Acid gallic 21 Bảng 3.3 Dãy nồng độ pha dung dịch thử gốc 23 Bảng 3.4 Quy trình thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH 24 Bảng 4.1 Ket giảm khối lượng sấy khô thân An xoa thô 25 Bảng 4.2 Ket xác định độ ấm bột dược liệu 25 Bảng 4.3 Ket chiết cao toàn phần 35 Bảng 4.4 Ket chiết cao phân đoạn 35 Bảng 4.5 Ket phân đoạn thu từsắc ký cột nhanh 37 Bảng 4.6 Tương quan hàm lượng Acid gallic giá trị OD760 nin 39 Bảng 4.7 Hàm lượng phenolic tổng cao phân đoạn A6 - A9 40 Bảng 4.8 Thông số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A6 41 Bảng 4.9 Thông số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A7 42 Bảng 4.10 Thông số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A8 43 Bảng 4.11 Thông số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A9 44 Bảng 4.12 Giá trị IC50 mầu cao phân đoạn tập hợp 45 Ngun Minh Tiên iv Khóa luận tơt nghiệp Dược sĩ đại học Danh mục DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Đặc điểm lồi An xoa Hình 2.2 So sánh đặc điểm cùa lồi chi với An xoa Hình 2.3 An xoa mọc khắp nước ta từ Bắc vào Nam Hình 2.4 Các phận dùng An xoa (thân, rễ lá) Hình 2.5 Cấu tạo lignans An xoa Hình 3.1 Mô tả nguyên tắc phương pháp DPPH 22 Hình 4.1 Lá An xoa tươi 26 Hình 4.2 Vi phẫu gân An xoa 27 Hình 4.3 Các thành phần vi phẫu An xoa 29 Hình 4.4 Vi phẫu cuống An xoa 30 Hình 4.5 Các thành phần vi phẫu cuống An xoa 31 Hình 4.6 Bột thân An xoa 32 Hình 4.7 Các thành phần bột thân An xoa .34 Hình 4.8 Sắc ký lớp mởng cao phân đoạn tập họp từ A1-A10 (1-10) 38 Hình 4.9 Đường chuan acid gallic 39 Hình 4.10 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A6 41 Hình 4.11 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cùa cao phân đoạn A7 42 Hình 4.12 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A8 43 Hình 4.13 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn A9 44 Ngun Minh Tiên V Khóa luận tơt nghiệp Dược sĩ đại học Danh mục DANH MỤC • Sơ ĐỊ Sơ đồ 3.1 Quy trình chiết xuất cao phân đoạn từ thân An xoa 17 Sơ đồ 4.1 Ket chiết cao tống thu cao phân đoạn từ thân An xoa 36 DANH MỤC • BIẺƯ ĐỊ Biếu đồ 4.1 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn (A6 - A9) so với cao Ethyl acetat Vitamin c 45 Nguyên Minh Tiên vi Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học Tóm tắt Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - Năm học 2013-2018 KHẢO SÁT PHÂN ĐOẠN CĨ HOẠT TÍNH CHĨNG OXI HỐ CAO NHÁT BẰNG SẮC KÝ CỘT CỦA CAO THÂN CÂY AN XOA (Helicteres hừsuta Lour.) Nguyễn Minh Tiến Hướng dẫn khoa học: ThS Phan Thị Thanh Thuỷ Nội dung tóm tắt Mở đầu Hiện việc sữ dụng An xoa đe điều trị bệnh chủ yếu dựa kinh nghiệm dân gian Hơn nữa, hiểu biết hoạt tính sinh học An xoa chưa công bố cách đầy dữ, đặc biệt hoạt tính chống oxi hoá Đối tượng phương pháp nghiên cứu Thân An xoa (Helicteres hirsuta Lour.) lấy thị trấn Lộc Ninh, tinh Bình Phước Cao chiết từ thân sữ dụng đế khảo sát hoạt tính chống oxi hố dựa hai mơ hình: định lượng phenolic tong cộng bang phương pháp Folin-Ciocalteu thứ hoạt tính chống oxi hố mơ hình DPPH Kết Đặc điểm hình thái, giãi phẫu bột dược liệu cùa An xoa tương tự tài liệu tham khảo miêu tả sắc ký cột nhanh cao phân đoạn Ethyl acetat thu 10 phân đoạn từ Al - A10 Trong phân đoạn từ A6 - A9 có tìm nên tiên hành định lượng hàm lượng phenolic tổng với kết quà tăng dàn theo thứ tự: A8 (225,863 pgGAE/mg), A6 (225,863 pgGAE/mg), A9 (243,593 pgGAE/mg), A7 (331,300 pgGAE/mg) kết quà thừ hoạt tính chống oxi hóa tâng dần theo thứ tự: A8 (IC50 - 17,084 pg/ml), A6 (IC50 = 16,236 pg/ml), A9 (IC50 = 12,728 pg/ml), A7 (IC50 = 7,624 pg/ml) Kết luận Từ kết quà nêu trên, phan cung cấp thông tin đặc diem thực vật cùa An xoa công tác định danh tìm phân đoạn A7 phân đoạn trội ve khà chống oxi hoá, làm tiền đề đe tiến hành phân lập họp chất tinh khiết cụ thể sau Từ khóa: Helicteres hirsuta, DPPH, phenolic, chong oxy hóa, sắc ký cột Nguyên Minh Tiên ... THU CAO PHÂN ĐOẠN 34 4.3.1 Ket chiết cao toàn phần 34 4.3.2 Ket chiết cao phân đoạn 35 4.4 KÉT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHỐNG OXI HÓA CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN THU ĐƯỢC TỪ SẮC KÝ CỘT... chiết xuất cao phân đoạn từ thân An xoa 17 Sơ đồ 4.1 Ket chiết cao tống thu cao phân đoạn từ thân An xoa 36 DANH MỤC • BIẺƯ ĐỊ Biếu đồ 4.1 Hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn (A6 -... chọn làm đối tượng cho đề tài nghiên cứu với tên đề tài: ? ?Khảo sát phân đoạn có hoạt tính chống oxi hố cao bang sắc ký cột cao thân An xoa (Helicteres hừsuta L.)”, mong muốn cung cấp liệu khoa