Phân lập và xác định một số yếu tố động lực của các chủng Staphylococcus aureus từ da người.pdf

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YÉU TỐ ĐỘC Lực CỦA CÁC CHỦNG Staphylococcus aureus TỪ DA NGƯỜI Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Kim Cương MSSV : 1311516615 GVHD : TS Nguyền Hữu Hùng TP HCM, 2019 ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YÉU TỐ ĐỘC Lực CỦA CÁC CHỦNG Staphylococcus aureus TỪ DA NGƯỜI Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Kim Cương MSSV : 1311516615 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học GVHD : TS Nguyễn Hữu Hùng TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TÁT THÀNH CỘNG HÒA XÃ HÒI CHÙ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CÒNG NGHỆ SINH HỌC Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc - - oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Họ tên: Nguyễn Thị Kim Cương MSSV: 1311516615 Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Lớp: 14DSH02 Đầu đề luận văn: Phân lập xác định số yếu tố độc lực chủng Staphylococcus aureus từ da người Mục tiêu - Phân lập chủng Staphylococcus aureus từ da người - Xác định số yếu tố độc lực Staphylococcus aureus phân lập Nội dung: Phân lập Staphylococcus aureus từ da người Định danh Staphylococcus aureus hình thái phản ứng sinh hố Phát gen mã hoá độc tố Staphylococcus aureus phương pháp PCR Phân tích kháng sinh đồ chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Thời gian thực hiện: tháng 02/2019 đến tháng 8/2019 Người hướng dần: TS Nguyền Hữu Hùng Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày thảng năm20 Bộ MÔN (Ký ghi rõ họ tên) CÁN Bộ HƯỚNG DẢN (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Với chân thành nhất, xin cảm ơn quý Thầy, Cô Khoa Công Nghệ Sinh học, Trường Đại học Nguyền Tất Thành tạo điều kiện thuận lợi truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian học tập Đặc biệt, xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Hừu Hùng, cô Thái Thị Tuyết Trinh anh chị Phịng thí nghiệm Sinh hố - Sinh dược - Ký sinh trùng Te bào gốc, Bộ môn Công nghệ sinh học Y dược, Khoa Công nghệ sinh học tận tình giúp đờ, hướng dẫn động viên khó khăn q trình thực đề tài Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn ông bà, cha mẹ, anh chị hồ trợ động viên tinh thần lẫn vật chất cho suốt thời gian qua Trong thời gian thực khoá luận, dù cố gắng hoàn thiện đề tài, trao đoi tiếp thu ý kiến đóng góp vi khả kinh nghiệm thân nhiều giới hạn nên luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót Vì tơi mong nhận mong nhận thông cảm ý kiến đóng góp chân thành cùa q Thầy, nhằm góp phần bổ sung giúp hồn thiện khố luận Xin trân trọng cám ơn! (Sinh viên ký tên) Nguyễn Thị Kim Cương Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyền Tất Thành MỤC LỤC SUMMARY V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIẾU .vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐỀ ix CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tông quan Staphylococcus aureus 1.1.1 Lịch sử phát 1.1.2 Đặc điểm chung vi khuẩn Staphylococcus aureus 1.1.3 Phân loại khoa học 1.1.4 Đặc tính sinh hố 1.1.5 Các yếu tố độc lực 1.2 Tổng quan bệnh nhiễm trùng da 1.2.1 Nhiễm trùng da 1.2.2 Triệu chứng bệnh 1.3 Các nghiên cứu khoa học 1.3.1 Các nghiên cứu nước 1.3.2 Các nghiên cứu nước CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nơi thực 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Vật liệu nghiên cứu ii 2.3.1 Thiết bị, dụng cụ 2.3.2 Hoá chất thuốc thử .10 2.4 Phương pháp nghiên cứu 11 2.4.1 Phân lập định danh s aureus phương pháp sinh hóa 11 2.4.2 Định danh s aureus xác định số gen gây độc sinh học phân tử (PCR) 14 2.4.3 Phương pháp kháng sinh đồ 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Phân lập Staphylococcus aureus từ da người bệnh 19 3.2 Xác định số đặc diem hình thái sinh hóa chủng s aureus 21 3.3 Phân tích gene định danh gene độc lực s aureus phương pháp PCR 23 3.3.1 Nhóm gene bổ sung xác định chủng aureus 23 3.3.2 Nhóm gene mã hoá độc lực vi khuẩn 24 3.4 Đánh giá khả kháng kháng sinh của chủng aureus 25 KỂT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC 31 iii TÓM TẤT Đe tài: “Phân lập xác định số yếu tố độc lực chủng Staphylococcus aureus từ da” thực từ tháng đến năm 2019 Phịng thí nghiệm Sinh hoá - Sinh dược - Ký sinh trùng Te bào gốc, Bộ môn Công nghệ sinh học Y dược, Khoa Công nghệ sinh học, Trường đại học Nguyền Tất Thành toạ lạc 2347 Quốc lộ 1A, phường Trung Mỹ Tây, quận 12, Tp Hồ Chí Minh Đe tài phân lập chủng aureus từ da người môi trường nuôi cấy chọn lọc đặc điểm sinh lý, sinh hoá sinh học phân tử vi khuân Một số gen độc lực gồm spa, cỉfA, clfB, eap, hla, mecA, eta, etb mà vi khuẩn dùng đe gây bệnh ngồi da mơ đánh giá PCR Ngồi ra, tính kháng kháng sinh vi khuấn xác định có chủng thuộc nhóm kháng Methilcillin chủng cịn lại thuộc nhóm nhạy cảm với Methilcillin Các chủng vi khuẩn sử dụng mơ hình phát triển thuốc kháng s aureus hệ thay dùng kháng sinh trị liệu iv SUMMARY Thesis: "Isolation and identification of a number of virulence factors of Staphylococcus aureus strains from the skin.", Department of Biotechnology for Medicine and Pharmacy, Faculty of Biotechnology, Nguyen Tat Thanh University is located at 2347 National Road 1A, Trung My Tay Ward, District 12, Ho Chi Minh City The thesis has isolated aureus strains from human skin by selective culture and physiological, biochemical and molecular biology characteristics of bacteria Some virulence genes include spa, elfA, clfB, eap, hla, mecA, eta, and etb that bacteria used to cause skin and tissue diseases are evaluated by PCR In addition, the antibiotic resistance of bacteria was also determined, of which strains belong to the Methilcillin-resistant group and the rest belong to Methilcillin sensitive group These strains of bacteria can be used in the new generation of s aureus drug development models to replace antibiotics in therapy V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH • Hình 1.1 Hình ảnh tụ cầu vàng kính hiến vi Hình 1.2 A Mơ tả bệnh viêm mô tế bào; B Mô tả bệnh chốc lở Hình 2.1 Sơ đo bố trí thí nghiệm 11 Hình 3.1 Phân tích đặc điểm sinh hóa chùng vi khuẩn sau phânlập 23 Hình 3.2 Phân tích khả kháng kháng sinh chủng L9 L10 26 VI DANH MỤC • BẢNG BIÉƯ Bảng 1.1 Những đặc tính s.aureus S.epidermỉdis Bảng 2.1 Danh mục thiết bị nghiên cứu Bảng 2.2 Danh mục dụng cụ sử dụng nghiên cứu 10 Bảng 2.3 Danh mục hoá chất thuốc thử sử dụng nghiên cứu 10 Bảng 2.4 Thừ nghiệm Catalase phân biệt Staphylococci với Pneumococci Streptococci 13 Bảng 2.5 Thử nghiệm tăng truởng lên men Mannitol s.aureus với S.epidermidis S.saprophyticus 13 Bảng 2.6 Danh sách cặp mồi chu trình nhiệt tương ứng1' 15 Bảng 2.7 Các thành phần phản ứng PCR 16 Bảng 2.8 Bảng tham chiếu xác định tính kháng loại kháng sinh theo nhà sản xuất 17 Bảng 3.1 Danh sách mầu phân lập aureus 19 Bảng 3.2 Phân tích số yếu tố độc lực chủng aureus phương pháp PCR 25 Bảng 3.3 Tính kháng kháng sinh chủng s aureus Ll, L2, L4, L5, L7, L9, L10 vàL13a 27 vii ... lập xác định số yếu tố độc lực chủng Staphylococcus aureus từ da người Mục tiêu - Phân lập chủng Staphylococcus aureus từ da người - Xác định số yếu tố độc lực Staphylococcus aureus phân lập Nội... lý chọn định thực đề tài: ? ?Phân lập xác định số yếu tố độc lực chùng Staphylococcus aureus từ da người” Nội dung nghiên cứu đề tài Phân lập Staphylococcus aureus từ da người Định danh Staphylococcus. .. HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YÉU TỐ ĐỘC Lực CỦA CÁC CHỦNG Staphylococcus aureus TỪ DA NGƯỜI Sinh viên thực