XÁC ĐỊNH TẦN SUẤT ĐỘT BIẾN 185DELAG TRÊN GEN BRCA1 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ NỮ TẠI BỆNH VIỆN K HÀ NỘI 166 Lê Thị Phượng XÁC ĐỊNH TẦN SUẤT ĐỘT BIẾN 185DELAG TRÊN GEN BRCA1 Ở BỆNH NHÂN NỮ UNG THƯ VÚ TẠI B[.]
Lê Thị Phượng 166 XÁC ĐỊNH TẦN SUẤT ĐỘT BIẾN 185DELAG TRÊN GEN BRCA1 Ở BỆNH NHÂN NỮ UNG THƯ VÚ TẠI BỆNH VIỆN K HÀ NỘI IDENTIFICATION OF FREQUENCY OF THE 185DELAG MUTATION IN FEMALE PATIENTS WITH BREAST CANCER AT K HOSPITAL IN HANOI CITY Lê Thị Phượng Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải Dương; phuongsinh@ymail.com Tóm tắt - Mục tiêu: Nghiên cứu nhằm xác định tần xuất đột biến 185delAG gen BRCA1 phụ nữ ung thư vú (UTV) Bệnh viện K Hà Nội Abstract - Purposes: This study aimed to determine the frequency of the 185 delAG mutation in the BRCA1 gene in women with breast cancer (BC) at K hospital Đối tượng, phương pháp: Với 150 bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến vú lựa chọn ngẫu nhiên Bệnh viện K Hà Nội từ tháng 9/2007 đến tháng 3/2009.Chúng sử dụng phương pháp PCR đa mồi khuếch đại đoạn DNA-185delAG để phát đột biến Sau tiến hành đọc trình tự đoạn DNA -185delAG (sản phẩm PCR) khẳng định chắn có đột biến Subjects, methods: 150 patients with breast carcinoma were randomly selected at K Hospital in Hanoi from September 2007 to March 2009 We used multiple primer pairs for PCR amplification of DNA fragments -185delAG to detect mutations 185delAG DNA was sequenced (PCR product) to identify mutations Kết quả: Chúng tơi khơng tìm thấy đột biến 185delAG gen BRCA1 150 bệnh nhân nữ UTV lựa chọn ngẫu nhiên Bệnh viện K Hà Nội Nhưng tình cờ chúng tơi phát thay đổi nucleotid T nucleotide A vị trí 93957 gen BRCA1 Sự thay đổi gợi ý xuất nhiều đột biến khác gen BRCA1 bệnh nhân ung thư vú Việt Nam Results: The results showed that there was no identification of 185delAG in BRCA1 gene in 150 female breast cancer patients who were randomly selected at K Hospital in Hanoi It was a chance that we found a change from nucleotide T to nucleotide A at 93957 A of BRCA1 while performing DNA-185delAG sequencing This change suggested that there would be possibly many different mutations in BRCA1 in Vietnamese breast cancer patients Kết luận: Đột biến 185delAG gen BRCA1 đột biến phổ biến bệnh nhân UTV nữ Việt Nam Conclusion: 185delAG mutation of BRCA1 was not the common mutation in female breast cancer patients in Vietnam Từ khóa - lựa chọn ngẫu nhiên; đột biến 185delAG; gen BRCA1; tần suất; ung thư vú Key words - randomly selected; 185delAG mutation; BRCA1 gene; frequency; breast cancer Đặt vấn đề Gen BRCA1 phát vào năm 1994 nhà khoa học Viện Nghiên cứu Sức khoẻ Quốc gia Hoa Kỳ Gen nằm vai dài NST 17, vùng 2, băng 1, băng phụ Bao gồm 24 exon intron, có kích thước khoảng 80 kb, từ cặp nucleotide 92.500 - 173.688, tương đương 81.188 bp Trong đó, exon 11 lớn nhất, chiếm 55% chiều dài gen BRCA1 Kích thước phiên mã mARN 7,8 kb, mã hoá cho phân tử protein gồm 1.863 aa [3] Gen BRCA1 biết đến gen ức chế tạo u, có chức ngăn ngừa phát triển phân chia nhanh chóng khơng kiểm sốt tế bào Mặt khác, gen BRCA1 sản sinh loại protein tham gia trực tiếp vào việc sửa chữa trình tái DNA, trì ổn định thơng tin di truyền tế bào Ngồi ra, BRCA1 cịn có chức điều hịa phát triển biểu mô tuyến vú Các nghiên cứu phát gần nghìn đột biến gen BRCA1, số nhiều đột biến làm tăng nguy UTV đột biến thường đột biến xố chèn (chủ yếu đột biến xóa) [9, 2] Geoff L cộng (cs) khẳng định: gen BRCA1 bị biến đổi, chiếm tới 65% nguyên nhân gây UTV phụ nữ Phát đánh giá bước đột phá, đặt móng quan trọng trình điều trị hiệu bệnh nguy hiểm [7] Anca cs cho rằng, có đột biến gen BRCA1 nguy ung thư vú lên đến 80% đời họ [1] Easton lại cho gen BRCA1 dễ bị tổn thương, ước tính tỷ lệ đột biến gen BRCA1 1/700 phụ nữ, chiếm khoảng 71% số đột biến gen nguy UTV số 62%, ung thư buồng trứng 11% tuổi 60 [5] Marcus Tavani cho thấy UTV đột biến gen BRCA1 thường biểu tuổi trẻ giai đoạn sớm so với ung thư vú nói chung (tuổi trung bình 42,8 so với UTV chung 62,9) Phụ nữ có đột biến gen BRCA1 nguy phát triển UTV đối bên 64% nguy ung thư buồng trứng 44 - 63% [11] Foulkes cho thấy có 13,6% bệnh nhân UTV mang đột biến gen BRCA1 Nhưng điều đáng quan tâm bệnh nhân mang đột biến BRCA1 có tỷ lệ tử vong cao nhiều so với bệnh nhân không mang đột biến (50%/ 89,6%) [6] Như vậy, đột biến 185delAG gen BRCA1 xuất với tần suất khác tộc người khác có liên quan mật thiết với bệnh UTV Việc phát người bệnh mang đột biến nguyên khởi có ý nghĩa việc tiên lượng điều trị dự phòng Mặt khác, việc phát người lành mang gen đột biến giúp nhà tư vấn di truyền đưa lời khuyên lời cảnh báo nguy UTV cho thành viên gia đình họ Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng 150 bệnh nhân tuổi từ 25 đến 75, xác định mắc ung thư vú Bệnh viện K Hà Nội Các trường hợp lựa chọn ngẫu nhiên từ tháng 3/2007 - 3/2009 Sau đó, lấy mẫu DNA để xác định đột biến 185delAG gen BRCA1 Ngoài ra, số bệnh nhân xác định không mắc UTV lấy mẫu DNA dùng để chuẩn kỹ thuật dùng làm mẫu đối chứng với mẫu bệnh nhân xét nghiệm gen BRCA1 ISSN 1859-1531 - TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG, SỐ 5(90).2015 2.2 Phương pháp nghiên cứu: Mô tả cắt ngang 2.2.1 Quy trình lấy mẫu Nhóm ung thư vú: Mỗi bệnh nhân lấy mẫu mô từ mô UTV Một phần bệnh phẩm ngâm cồn 70o, bảo quản 4oC tách DNA Phần lại đưa lên Khoa Giải phẫu bệnh Tế bào để xác định độ mô học typ mô học, đánh dấu số hiệu tiêu ghi lại thông tin bệnh nhân Nhóm khơng mắc ung thư vú: Mỗi bệnh nhân lấy 10ml máu chống đông EDTA hàm lượng 1,5mg/ml Các mẫu bảo quản -20oC tách DNA 167 marker DNA 100 bp Các băng DNA hình dạng vạch đỏ màu da cam gel điện di So sánh kích thước ước đoán mẫu nghiên cứu với mẫu chứng dương marker phân tử để xác định đột biến 185delAG Kết thảo luận 3.1 Kết tách chiết tinh DNA Tách chiết DNA từ mẫu mô 150 bệnh nhân ung thư vú mẫu máu người lành, tiến hành kiểm tra nồng độ độ tinh DNA phương pháp đo mật độ quang điện di gel agarose 1,5% 2.2.2 Quy trình tách chiết DNA từ mẫu mơ Cắt mẩu mô khoảng 100 mg, thấm khô cồn, nghiền nhỏ cối chày sứ Thêm vào 600 µl dung dịch đệm phá tế bào nghiền tiếp thành dạng bột mịn; thêm µl ProteaseK (20 mg/ml), lắc nhẹ cho ủ 56oC qua đêm (khoảng 16 giờ) để phá màng tế bào màng nhân, giải phóng DNA; thêm 400 µl Phenol Chlorofom Isoamyl (tỷ lệ 25:24:1) đảo nhẹ cho đều, ly tâm 8000 rpm, 4oC, 10 phút, hút dịch DNA; thêm 400 µl Chlorofom: Isoamyl (tỷ lệ 24:1), đảo nhẹ cho đều, ly tâm 8000 rpm, 4oC, 10 phút, thu dịch trong; thêm 1000 µl cồn tuyệt đối, để tủ lạnh -30oC - giờ, DNA kết tủa, ly tâm 12000 rpm, 4oC, 20 phút, thu tủa DNA Rửa DNA cồn 700 thu tủa DNA Hồ tan DNA 50µl TE Bảo quản DNA 4oC để sử dụng cho thí nghiệm 2.2.3 Quy trình tách chiết DNA từ mẫu máu 0,5 ml máu toàn phần với 0,5 ml lysis buffer Ly tâm thu cặn, lặp lại lần Thêm 0,5 ml Protease K, ly tâm thu cặn Thêm 0,5 ml lysis buffer; 12,5µl SDS 10%; 10µl ProteaseK; ủ 56oC từ 2-3 Thêm 0,5 ml Phenol: Chlorofom: Isoamyl (tỷ lệ 25:24:1), ly tâm thu dịch chứa DNA Thêm 400 µl Chlorofom: Isoamyl (tỷ lệ 24:1), ly tâm thu dịch Tủa DNA cồn tuyệt đối, để -20oC qua đêm, ly tâm thu tủa DNA Bảo quản - 200C thực phản ứng PCR Bảng Trình tự mồi cho phản ứng PCR nhân đoạn DNA-185delAG Mồi Trình tự mồi (5’-3’) Kích thước F (P1) ggttggcagcaatatgtgaa R (P2) gctgacttaccagatgggactctc 335 bp MR (P3) cccaaattaatacactcttgtgctgacttaccagatggg acagta 354 bp Trình tự mồi 185delAG công bố Parvin cs năm 2006 [9] a b Hình a) Kết đo OD kiểm tra nồng độ độ tinh DNA; b) Hình ảnh điện di DNA tổng số Nồng độ DNA tách chiết có giá trị từ 400-2000 ng/µl độ tinh mẫu đạt yêu cầu, với tỷ lệ mật độ quang đo bước sóng 260/280 nm nằm khoảng 1,8 - 2,0 Qua điện di đồ (hình b), gel agarose 1,5% xuất băng DNA có kích thước phân tử lớn, khơng có tượng đứt gãy Với độ tinh mẫu DNA tách chiết theo phương pháp chúng tơi thành cơng sử dụng cho thí nghiệm 3.2 Kết xác định đột biến 185delAG 3.2.1 Kết phản ứng PCR đa mồi nhân đoạn DNA185delAG Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật PCR đa mồi xác định đột biến 185delAG Cả mồi P1, P2, P3 sử dụng phản ứng PCR để khuếch đại đoạn gen có kích thước 335 bp alen bình thường, 354 bp alen đột biến CA ĐC M 2.2.4 Thực phản ứng PCR Thành phần phản ứng PCR khuếch đại đoạn DNA185delAG (10µl tổng số) gồm: 1,0µl Buffer10x; 0,25µl dNTP (10 mM); 0,5µl loại mồi xi ngược; 0,3 đơn vị Taq - polymerase; 1,0µl DNA khn; 6,2µl H2O Chu trình nhiệt phản ứng: 95oC-5 phút; 35 chu kỳ x (95 C-20 giây; 58oC-30 giây; 72oC-30 giây); 72oC-5 phút o 2.2.5 Quy trình xác định đột biến 185delAG Sau phản ứng PCR kết thúc, lấy 10 l sản phẩm mẫu nghiên cứu, chạy điện di với mẫu chứng dương Hình Kết điện di đồ xác định đột biến 185delAG CA: Mẫu chứng âm; 1-5: Mẫu bệnh nhân; M: Thang Lê Thị Phượng 168 DNA chuẩn 100 bp; ĐC: Mẫu đối chứng (người lành không mang đột biến) Trong nghiên cứu này, để xác định đột biến 185delAG, sử dụng phương pháp PCR đa mồi, phương pháp PCR sử dụng đồng thời nhiều cặp mồi đặc hiệu khác để nhân đoạn gen đặc trưng khác phân tử DNA [8] Điều quan trọng phương pháp phải thiết kế cặp mồi có nhiệt độ bắt cặp lên DNA đích, đồng thời mồi khơng bắt cặp với phản ứng PCR Cơ sở phương pháp phải thực từ thiết kế mồi, P1 mồi xi bình thường có trình tự nucleotid 5' GGTTGGCAGCAATATGTGAA 3', P2 mồi ngược bình thường có trình tự nucleotid 5'GCTGACTTACCAGATGGGACTCTC3' Mồi P1 P2 nhân đoạn DNA-185delAG có kích thước 335 bp alen bình thường Do bị đột biến xố AG alen bình thường nên mồi P2 khơng cịn trình tự AG đầu tận 5' Nhưng điện di agarose 3%, kích thước hai đoạn DNA nucleotid khó phân biệt vị trí chúng gel Vì mà phải thiết kế mồi ngược đột biến P3 dài mồi ngược thường P2 khoảng 20 bp Mồi xuôi P1 mồi ngược đột biến P3 nhân đoạn DNA-185delAG có kích thước 354 bp alen đột biến Mồi ngược đột biến P3 có trình tự nucleotid 5'CCCAAATTAATACACTCTTGTGCTGACTTAC CAGATGGGACAGTA3'.Vì kích thước đoạn DNA185delAG nhân lên cặp mồi P1-P2 cặp mồi P1-P3 khoảng 20 bp, đó, điện di gel agarose 3%, ta dễ dàng phát vị trí alen bình thường alen đột biến Mặt khác, chạy đồng thời mồi P1, P2 P3 điều kiện giống phản ứng PCR, có cạnh trạnh mồi với Mồi có ưu nhân lên dễ dàng Nếu mẫu bệnh nhân có alen đột biến mồi ngược đột biến P3 mồi xi P1 phát huy tác dụng, đoạn DNA-185delAG nhân lên với kích thước 354 bp Ngược lại, mẫu bệnh nhân khơng có alen đột biến, mồi xi P1 mồi ngược P2 phát huy tác dụng, đoạn DNA-185delAG nhân lên với kích thước 335 bp Theo Pak Cheung cs (1996), sử dụng đồng thời mồi P1, P2, P3 phản ứng PCR xảy trường hợp sau: Trường hợp 1: Nếu gel điện di xuất băng DNA với kích thước ước đốn 335 bp (cho alen bình thường) 354 bp (cho alen đột biến), chứng tỏ bệnh nhân mang đột biến 185delAG trạng thái dị hợp Trường hợp 2: Nếu gel điện di xuất băng với kích thước ước đốn 335 bp, chứng tỏ bệnh nhân không mang đột biến 185delAG Trường hợp 3: Nếu gel điện di xuất băng với kích thước ước đốn 354 bp, chứng tỏ bệnh nhân mang đột biến 185delAG trạng thái đồng hợp tử [8] Năm 2006, Pavin cs phân tích đột biến 185delAG 400 bệnh nhân người Iran ung thư vú thời kỳ đầu phương pháp PCR đa mồi đưa kết luận tương tự Pak Cheung [9] Kết điện di đồ (Hình 2) cho thấy, ngồi mẫu chứng âm không xuất băng DNA, mẫu xét nghiệm từ 1-5 xuất băng DNA, băng trùng với vị trí băng mẫu đối chứng - mẫu người lành khơng mang đột biến 185delAG có kích thước ước đoán 335 bp Chứng tỏ mẫu bệnh nhân từ giếng 1-5 không mang đột biến 185delAG Tuy nhiên, để khẳng định chắn mẫu xét nghiệm không mang đột biến 185delAG, chọn ngẫu nhiên số mẫu, tiến hành nhân dòng đoạn gen vừa khuếch đại, sau tách DNA plasmide để đọc trình tự 3.2.2 Kết tạo dịng đoạn DNA-185delAG Sản phẩm PCR nhân đoạn DNA-185delAG đưa vào vector tách dịng pJET1.2 đầu bằng, có kích thước 2974 bp Sau đó, DNA tái tổ hợp biến nạp vào tế bào khả biến E.coli để chọn lọc tạo dịng Chúng tơi tiến hành tách chiết DNA plasmid từ khuẩn lạc mang đoạn DNA185delAG Kết điện di thể Hình 123M Hình DNA plasmid tách chiết từ khuẩn lạc M: Thang DNA chuẩn kb; 1-3: plasmid mang đoạn DNA-185delAG Kết điện di đồ cho thấy sản phẩm tái tổ hợp DNAPlasmid có kích thước 3000 bp Chứng tỏ đoạn DNA185delAG biến nạp vào tế bào khả biến E.coli pJET1.2 thành cơng 123M 360 bp 300 bp Hình Sản phẩm cắt enzyme giới hạn plasmid mang đoạn 185delAG với enzyme XhoI XbaI M: Marker 100 bp; 1-3: Sản phẩm cắt plasmid DNA plasmid tái tổ hợp xử lý với enzyme XhoI XbaI, để sàng lọc plasmid mang đoạn gen cần tách dòng Điểm cắt enzyme XhoI nằm vị trí 352 vector pJET1.2 Điểm cắt enzyme ISSN 1859-1531 - TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG, SỐ 5(90).2015 XbaI nằm vị trí 377 vector pJET1.2 Sản phẩm cắt plasmid sau phân tách gel agarose gồm băng DNA có kích thước khoảng 2949 bp (gần tương ứng với kích thước vector 2974 bp) băng DNA có kích thước khoảng 360 bp (gần tương ứng với kích thước đoạn DNA-185delAG 335 bp) Kết điện di thể Hình cho thấy, đoạn DNA-185delAG tách dịng thành cơng 3.3 Kết đọc trình tự đoạn DNA-185delAG Plasmid mang đoạn DNA-185delAG tiến hành đọc trình tự cặp mồi pJET 1.2 so sánh với trình tự BRCA1 Genbank mã số 005905 Kết thể Hình Sau thực nhân dịng thành cơng đoạn DNA185delAG, chúng tơi tiến hành đọc trình tự đoạn DNA185delAG mẫu bệnh nhân mang mã số A047, đối chiếu với trình tự nucleotid Genbank gen BRCA1 mã số 005905 NCBI (National Center for Biotechnology Information) cung cấp Kết cho thấy kích thước đoạn DNA-185delAG mẫu xét nghiệm 335 bp, phù hợp với tính tốn lý thuyết khơng có đột biến 185delAG mẫu bệnh nhân A047 Điều cho thấy phương pháp xác định đột biến 185delAG PCR đa mồi có độ tin cậy cao 169 không thực giải trình tự gen BRCA1 tất trường hợp UTV nghiên cứu để xác định đột biến 185delAG đột biến khác Do xác định thay đổi nucleotid loại T nucleotid loại A vị trí 93957, mà chưa xác định thay đổi có phải đột biến thay hay không Kết tỷ lệ đột biến 185delAG Bảng Tỷ lệ bệnh nhân mang đột biến 185delAG Kết Khơng có đột biến Có đột biến Tổng số Số lượng BN Tỷ lệ % 150 100 0 150 100 Như vậy, không bệnh nhân số 150 bệnh nhân UTV Bệnh viện K Hà Nội mang đột biến 185delAG Kết luận Bằng phương pháp PCR đa mồi, khuếch đại đoạn DNA-185delAG xác định đột biến 150 bệnh nhân ung thư vú nữ Bệnh viện K Hà Nội, tất không mang đột biến 185delAG Như đột biến 185delAG không đột biến phổ biến dân số Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Hình Kết đọc trình tự đoạn DNA-185delAG Thật tình cờ, đọc trình tự chiều đoạn DNA185delAG mẫu bệnh nhân A047, phát thay đổi nucleotid T nucleotide A vị trí 93957 gen BRCA1 Sự thay đổi gợi ý xuất nhiều đột biến khác gen BRCA1 bệnh nhân ung thư vú Việt Nam Đây minh chứng để chứng minh cho dân số Châu Á, đột biến không tập trung vùng hospot (các vùng mang đột biến thông thường) tộc người Ashkenazi người phương Tây, mà dải xuất đột biến rộng gen BRCA1 bệnh nhân ung thư vú Kết phù hợp với kết nghiên cứu Sng cs, không phát đột biến 185delAG bệnh nhân ung thư vú người Trung Quốc lại phát 10 đột biến khác gen BRCA1 [10] Crisle cs có kết luận tương tự Sng khảo sát tần suất đột biến 185delAG, 5382insC 6174delT dân số Porto Alegre, Brazil [3] Tuy nhiên, nghiên cứu cịn có điểm hạn chế [1] Anca Negură, Lucian Negură, “BRCA1 185delAG mutation can be easily detected by an adapted allele – specific PCR”, Secţiunea Genetică şi Biologie Moleculară, TOM XIII, 2012 [2] Ariane Sadr-nabavi, Mahtab dastpak, Fatemeh homaei-Shandiz, Ahmad reza bahrami, et all Analysis of novel mutations in BRCA1 in Iranian families with breast cancer, Hereditas 151, 2014, pp: 38-42 [3] Cornelis R.S, Neuhausen S.L, Arason A, et al Allele loss rate at 17q12-q21 in breast and ovarian tumors from 52 germline BRCA1mutation carriers, Genes Chrom Cancer, 13, 1995, pp:203-210 [4] Crisle V D, Isabel C.B, Taiana V.T, et all Prevalence of 185delAG and 5382insC mutations in BRCA1, and 185delAGin BRCA1 in women of Ashkenazi Jewish origin in southern Brazil, Genetics and Molecular Biology, 35, (3), 2012, pp: 599-602 [5] Easton D.F, Bishop D.T, Ford D, Crockford G.P Consortium, Genetic linkage analysis in familial breast and ovarian cancer: results from 214 families, Am J Hum Genet; 52, 1993, pp:678-701 [6] Foulkes W.D, Chappuis P.O, Wong N, Brunet J.S, Vesprini D, Rozen F, Yuan Z.Q, Pollak M.N, Kuperstein G, Narod S.A, Be'gin L.R., Primary node negative breast cancer in BRCA1 mutation carriers has a poor outcome, Am J Hum Genet 60, 2000, pp:505-514 [7] Geoff L and Jane V., Stem Cell 'Daughters' Lead To Breast Cancer, Sciencedaily 92, 504, 2009 [8] Pak C.R.C, Betty Y.L.W, Hilmi O, and David E.C.C Simple and Rapid Detection of BRCA1 and BRCA2 Mutations by Multiplex Mutagenically Separated PCR, Clinical Chemistry 45, No 8, 1999, pp:1285-1287 [9] Parvin M, Saied H.A, Arezoo S.E, Laleh H, Ehsan A, and Morteza A., Low Frequency of 185delAG Founder Mutation of BRCA1 Gene in Iranian Breast Cancer Patients, Journal of Cancer Molecules 2(3), 2006, pp: 123-127 [10] Sng J.H, Chang J, Feroze F, Rahman N, Tan W, Lim S, Lehnert M, Van D.P and Wong J.S., The prevalence of BRCA1 mutations in Chinese patients with early onset breast cancer and affected relatives, British Journal of Cancer 82(3), 2000, pp:538-542 [11] Tavani A, et al Risk factors for breast cancer in women under 40 years, Eur J Cancer, 35, 1999, pp:1361-1367 (BBT nhận bài: 03/04/2015, phản biện xong: 20/05/2015) ... vậy, không bệnh nhân số 150 bệnh nhân UTV Bệnh viện K Hà Nội mang đột biến 185delAG K? ??t luận Bằng phương pháp PCR đa mồi, khuếch đại đoạn DNA -185delAG xác định đột biến 150 bệnh nhân ung thư vú nữ. .. cứu Sng cs, không phát đột biến 185delAG bệnh nhân ung thư vú người Trung Quốc lại phát 10 đột biến khác gen BRCA1 [10] Crisle cs có k? ??t luận tương tự Sng khảo sát tần suất đột biến 185delAG, 5382insC... vị trí 93957, mà chưa xác định thay đổi có phải đột biến thay hay không K? ??t tỷ lệ đột biến 185delAG Bảng Tỷ lệ bệnh nhân mang đột biến 185delAG K? ??t Khơng có đột biến Có đột biến Tổng số Số lượng