Nghiên cứu xác định môi trường nuôi cấy cây Cà Gai Leo (Solanum Procumbens) In Vitro

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH -0O0 BÁO CÁO TỐNG KÉT ĐÈ TÀI CHƯƠNG TRÌNH SINH VIÊN NCKH NĂM 2020 TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN cứu XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY CÂY CÀ GAI UEO (SOLANUMPROCUMBENS) IN VITRO Mã số đề tài: Chủ nhiệm đề tài: Phạm Thanh Tân Giảng viên hướng dẫn: ThS Mai Thị Phương Hoa ThS Đỗ Tiến Vinh Khoa: khoa Công nghệ Sinh học Các thành viên tham gia: STT Họ tên Phạm Thanh Tân MSSV 1711547416 TP Hồ Chỉ Minh, tháng 10 năm 2020 Lớp 17DSH1A MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG, sơ ĐÒ, HÌNH ẢNH iv DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT V CHƯƠNG TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Tổng quan Cà Gai Leo .2 1.2.1 Phân loại khoa học 1.2.2 Đặc điểm thực vật 1.2.3 Giá trị dược liệu giá trị kinh tế 1.2.4 Thành phần hóa học 1.3 Tình hình phát triển cơng trình nghiên cứu 1.3.1 Tình hình phát triển 1.3.2 Các cơng trình nghiên cứu nước 1.3.3 Các cơng trình nghiên cứu nước CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nơi thực 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Sơ đồ tổng quan 10 2.3.2 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng javel đến q trình vơ trùng mẫu hạt Cà Gai Leo 11 2.3.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng thành phần môi trường khoáng đến sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo 11 ii 2.3.4 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Cà Gai Leo 12 2.3.5 Thí nghiệm 4: khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Cà Gai Leo 13 2.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 14 2.4.1 Phương pháp thu thập số liệu 14 2.4.2 Xử lý số liệu 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ 15 3.1 Ket thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng javel đến trình vơ trùng mẫu hạt Cà Gai Leo 15 3.2 Ket thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo 18 3.3 Ket thí nghiệm 3: khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Cà Gai Leo 21 3.4 Ket thí nghiệm 4: khảo sát ảnh hưởng hàm lượng Auxin đến trình tạo rễ Cà Gai Leo 25 CHƯƠNG KẾT LUẬN 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 iii DANH MỤC BẢNG, sơ ĐỊ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cà Gai Leo .2 Hình 2.1 Sơ đồ tổng quan nội dung nghiên cứu 10 Bảng 2.1 Các nghiệm thức vô trùng Cà Gai Leo 11 Bảng 2.2 Các nghiệm thức khảo sát mơi trường khống Cà Gai Leo 12 Bảng 2.3 Các nghiệm thức khảo sát môi trường bổ sung chấtđiều hòa sinh trưởng BA kinetin Cà Gai Leo 13 Bảng 2.4 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng auxin tới trình tạo rễ Cà Gai Leo 14 Bảng 3.1 Ket vô trũng mẫu Cà Gai Leo ỉn vitro 16 Hình 3.1 Vơ trùng mẫu Cà Gai Leo ỉn vitro 18 Bảng 3.2 Ket khảo sát mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển 19 Cà Gai Leo in vitro 19 Hình 3.2 Chồi Cà Gai Leo in vitro mơi trường khống 20 Bảng 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Cà Gai Leo 22 Hình 3.3 chồi Cà Gai Leo mơi trường WPM có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BA cvà kinetin 24 Bảng 3.4 Ket khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Cà Gai Leo 26 Hình 3.4 Chồi Cà Gai Leo nuôi cấy môi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng auxin .27 IV DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT IBA : Indol-3-acetic acid IAA : P-indol-acetic acid NAA : a-Naphthaleneacetic acid WHO : Tổ chức y tế giới MT : Môi trường NT : Nghiệm thức BA : Benzylaminopurin benzyl adenin MS : Môi trường Murashige & Skoog - 1926 cv : Hệ số biến động CRD : Completely Randomized Design V CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Cà Gai Leo cịn gọi Cà Gai Dây, Cà Vạnh, Cà Quýnh, Cà Lù, Cà Bị, Có tên khoa học Solanum Procumbens, loài thực vật thuộc họ Solanaceace, mọc rải rác ven rừng, ven đường, bãi hoang, độ cao 300 m phân bố rãi rác khắp tỉnh thành Việt Nam chủ yếu phân bố tỉnh miền Bắc Theo tổ chức Y tế giới (WHO), có đến 80% dân số nước phát triển dựa vào thuốc thảo dược để chăm sóc sức khỏe cộng đồng Ỏ nước có nông nghiệp phát triển, 25% số thuốc thống kê đơn có chứa hoạt chất thảo dược Ngày nay, việc tìm kiếm hoạt chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao để làm thuốc xu nhà khoa học quan tâm Tại Việt Nam, theo báo cáo Cục Quản lý Dược - Bộ Y tế, mồi năm nước ta tiêu thụ khoảng 50 - 60 nghìn dược liệu khác nhau, sử dụng vào việc chế biến thuốc y học cổ truyền, nguyên liệu ngành công nghiệp dược xuất Cà Gai Leo loại thuốc quý, rễ người dùng làm thuốc chữa phong thấp, đau nhức răng, chảy máu chân răng, chữa say rượu, ho, dị ứng, cảm cúm Đặc biệt, Cà Gai Leo có nhiều chất hóa học có tác dụng bảo vệ gan tốt, kiềm hãm làm âm tính virus viêm gan, ngăn chặn q trình sơ gan, dùng chữa bệnh liên quan đến gan Tuy nhiên, từ trước đến Cà Gai Leo khai thác từ nguồn hoang dại số nông dân trồng dược liệu, nguồn nguyên liệu không đủ đáp ứng cho việc nghiên cứu điều trị Hiện nay, tình hình tiêu thụ Cà Gai Leo gia tăng số khu vực, đặc biệt khu vực Đơng Nam Á Chính điều làm cho nguồn nguyên liệu Cà Gai Leo tự nhiên nguồn cung cấp doanh nghiệp không đủ số lượng chất lượng sản phẩm Giá bán loại thị trường dạng khô dao động từ 100 200 nghìn đồng/kg Ngồi ra, nguồn dược liệu từ Cà Gai Leo mọc hoang dại thường không đồng dược liệu bảo quản Tuy nhiên, thực tế cho thấy nhiều trang trại hộ gia đình đem lại hiệu kinh tế cao nhờ trồng loại Chính vậy, để cung cấp nguồn Cà Gai Leo chất lượng tốt đồng nhất, đáp ứng nhu cầu Chương Tổng quan tài liệu chăm sóc sức khỏe cho người, việc nhân giống dược liệu Cà Gai Leo hướng phát triển bền vững Có nhiều phương pháp nhân giống loại trồng nhân giống phương pháp nuôi cấy mô xem phương pháp hữu ích Ni cấy mơ ỉn vitro phương pháp có ưu điểm vượt trội có tiềm lớn việc nhân nhanh số lượng trồng lớn thời gian ngắn, hàm lượng họp chất cao, chủ động quy trình sản xuất tạo nguồn nguyên liệu cấp thiết phục vụ cho ngành dược liệu, sản xuất nơng nghiệp khó khăn nói Cho nên nhân giống ỉn vitro Cà Gai Leo cần thiết Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn thực đề tài “Nghiên cứu xác định môi trường nuôi cấy Cà Gai Leo (Solatium Procumbens) in vitro'' 1.2 Tổng quan Cà Gai Leo 1.2.1 Phân loại khoa học Giới (regnum) :Plantae Bộ (ordo) : Solanales Họ (familia) : Solanaceae Lồi (species) ■.s.procumceae Hình 1.1 Cà Gai Leo Cà Gai Leo có tên khoa học Solanum Procumbens, cịn có tên khác Cà Gai Dây, Cà Vạnh, Cà Quýnh, Cà Lù, Cà Bò, Cà Hải Nam, Cà Quạnh, Gai Cườm, loài thực vật thuộc họ Solanaceae, phân bố chủ yếu tỉnh miền bắc Việt Nam số nước nhiệt đới Campuchia, Thái Lan, đảo Hải Nam - Trung Quốc h Lồi xem thuốc nam có tác dụng giải độc gan tốt 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cà Gai Leo thường mọc nơi hoang dại Cà Gai Leo trồng số cách giâm cành, gieo hạt chiết cành Thời gian thu hoạch Cà Gai Leo lâu loài ngắn ngày khác (theo kinh nghiệm dân gian Cà Gai Leo thu hoạch từ - tháng cho dược tính cao nhất) Ngoài suốt tháng trồng Chương Tổng quan tài liệu phát triển mạnh dấu hiệu ngừng phát triển để lâu cho xuất sản lượng cao Thân: Cà Gai Leo thuộc thân leo gỗ, có thân dài từ 60 - 100 cm, có cao tự nhiên, chia nhiều cành Thân có nhiều lông bao phủ gai cong, màu vàng, nhọn, khoảng cách gai giảm dần từ gốc tới ngọn, thân non có màu xanh, thân già có màu nâu xám2 Lá: Cà Gai Leo có đơn, mọc xen kẽ nhau, hình bầu dục, gốc lệch, phiến có thùy nông không đều, mặt xanh xám, mặt nhạt, hai mặt phủ đầy lông bao phủ, màu trắng có gai gân lá, phía mặt trên, phiến dài từ - cm, rộng 5,5 cm, cuống dài 0,5 - cm, có gai dài - mm2 Hoa: Cà Gai Leo có hoa màu trắng tím, mọc thành chũm từ - 11 hoa mọc kẽ lá, hoa đều, lưỡng tính, khơng gai2 Quả: Quả dạng mọng bóng, hình cầu, non có màu xanh nhạt đến đậm, chín có màu đỏ tươi, hình cầu đường kính 7-9 mm Hạt màu vàng, hình đĩa, kích thước khoảng 3x2 mm, mồi có từ 15 - 30 hạt, có vị đắng nhẹ Cà Gai Leo loại ưa sáng, có khả chịu hạn cao, không chịu ngập úng Cà Gai Leo thích nghi với nhiều loại khí hậu khác nhau, loại đất khác như: đất phù sa, đất pha cát, đất ba gian Cả ba miền Bắc, Trung, Nam trồng thuốc Cây phát triển nhanh, nhân giống hạt, sống lâu năm trồng lần thu hái nhiều năm, khâu chăm sóc khơng phải tốn nhiều cơng chăm sóc mùa vụ 1.2.3 Giá trị dược liệu giá trị kinh tế 1.2.3.1 Giá trị dược liệu Cây Cà Gai Leo mang nhiều giá trị dược liệu giá trị kinh tế cao Rễ có chứa tinh bột có nhiều chất hóa học khác ankaloỉt, glycoankaloit3 có khả bảo vệ gan tốt, kìm hãm làm âm tính virus viêm gan, ngăn chặn trình xơ gan, dùng chữa bệnh liên quan đến gan Tiến sĩ Nguyễn Thị Minh Khai (1988) tác dụng chống viêm gan, ngăn chặn phát triển xơ gan chống oxy hóa Chương Tổng quan tài liệu dạng chiết toàn phần dạng hoạt chất glycoalkaoid mơ hình thực nghiệm sinh vật Thuốc áp dụng cho nhóm bệnh nhân tình nguyện, khơng mang tác dụng phụ, hội đồng khoa học chấp thuận thực nghiệm lâm sàng Ngoài ra, người ta thông thường đào rễ cây, rửa sạch, thái mỏng, phơi khô để làm thuốc chữa phong thấp, đau nhức răng, chảy máu chân Người bị say rượu lấy rễ Cà Gai Leo sát vào nhấm rễ để tránh say rượu 1.2.3.2 Giá trị kinh tế Đối với nước ta, Cà Gai Leo nhiều người biết đến thần dược trị viêm gan B, chữa viêm gan, xơ gan, giải độc rượu, tăng cường khả giải độc gan, bảo vệ hạn chế tổn thương gan rượu Cà Gai Leo dễ trồng, dễ chăm sóc, thích hợp với nhiều loại khí hậu loại đất Trồng lần thu hoạch năm liên tiếp Sau trồng sau tháng kể từ lúc trồng, cắt thu hoạch toàn để lại phần gốc khoảng 10 - 15 cm để phát triển vào vụ Tại trung tâm dược liệu giống Việt Nam Cà Gai Leo thu hoạch - vụ năm thu hoạch từ - năm Sau canh tác - năm ta cải tạo lại đất trồng thêm vụ Giá bán Cà Gai Leo tươi khoảng 10,000 - 15,000 vnđ/kg Cà Gai Leo khô từ 30,000 - 50,000 vnđ/kg Năng suất trung bình Cà Gai Leo tươi từ 20 - 30 tấn/ha/năm Cà Gai Leo khô từ - 10 tấn/ha/năm 1.2.4 Thành phần hóa học Thành phần hóa học Cà Gai Leo có tồn nhiều tập trung rễ có ankaloit Trong rễ cịn có thành phần khác tinh bột, saponozit, flavonozit solasodin, solasodinon, glycoalkaloid 3’6 Ngoài ra, vào năm 2018 Nguyễn Xuân Hải, Nguyễn Trung Nhân, Nguyễn Thị Thanh Mai nghiên cứu thành phần hóa học Cà Gai Leo cho kết có thêm họp chất ziganein, benzoic acid, salicylic acid, 4-hydroxybenzaldehyde, vanillic acid indole-3-carbaldehyde Trong y học Việt Nam The Giới đánh giá cao Cà Gai Leo thuốc tốt giải độc gan Trong Cà Gai Leo có chất glycoalkaloid tác dụng Chương Tổng quan tài liệu ức chế chép virus viêm gan B Loại thực vật cịn giúp giải rượu, giải độc gan5 1.3 Tình hình phát triển cơng trình nghiên cứu 1.3.1 Tình hình phát triển Cà Gai Leo trồng nhiều vườn để sản xuất cho địa phương dùng để làm số thực phẩm loại tốt để điều trị bệnh gan Cây Cà Gai Leo bán thị trường nước với sản phẩm tổ chức WHO công nhận (tiêu chuẩn GACP) Với công dụng đặc biệt Cà Gai Leo bệnh gan, Cà Gai Leo sử dụng ngày phổ biến với sản phẩm trà, thực phẩm chức năng, Cà Gai Leo sấy khô, Cà Gai Leo tươi, Giá thành sản phẩm dao động từ 100.000 - 500.000 vnđ/sản phẩm 1.3.2 Các cơng trình nghiên cứu ngồi nước Năm 2010, Moon-Sik Yang, Tae-Geum Kim cộng nghiên cứu đề tài “Production of glycoalkaloids from callus cultures of Solanum hainanense Hance” Các mẫu Solanum hainanense, nuôi cấy môi trường MS bổ sung kinetin 0,5 mg/1 2,4-D mg/1 Đe trì tăng sinh, mô sẹo nuôi cấy môi trường MS có bo sung BAP mg/1 2,4-D 0,5 mg/1 Hàm lưọưg glycoalkaloid mô sẹo đạt tối đa sau 10 tuần nuôi cấy (188,65 mg/g), mẫu đối chứng 22,22 mg/g rễ 5,99 mg/g thân Glycoalkaloid chiết xuất từ mô sẹo ức chế hoạt động collagenase gel collagen Phân tích sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) cho thấy hình thành biotrans xảy mô sẹo phát triển môi trường bổ sung nguồn cacbon khác Những kết cho thấy mô sẹo hainanense nguyên liệu tốt để sản xuất glycoalkaloid Năm 2016, tài nguyên thực vật hoang dã trung quốc có nói đến luận văn “Những tiến nghiên cứu Cà Gai Leo” Ruan Wenxiu Liu Jihua báo cáo cụ thể hình thái, ni cấy mơ, thành phần hóa học hoạt động dược lý Cà Gai Leo Hải Nam Chương Ket thảo luận Xét tiêu số từ NT 1.1 đến NT 1.7 ta thấy có giảm dan, NT 1.1 có số cao (4,07 lá/mẫu) cao nghiệm thức lại từ 1,2 đến 1,9 lần Xét tiêu số rễ Cà Gai Leo từ NT 1.1 đến NT 1.3 với nồng độ javel 50% khoảng thời gian phút; 10 phút 15 phút cho thấy số rễ từ NT 1.1 đến NT 1.3 có giảm dần, cụ the NT 1.1 có số rễ cao (4,26 rễ/mẫu), số rễ NT 1.2 (3,35 rễ/mẫu), số rễ NT 1.3 (2,42 rễ/mẫu) Và từ NT 1.4 đến NT 1.6 với nồng độ javel 75% thời gian phút; 10 phút 15 phút số rễ có giảm dần từ (2,11 cm) NT 1.4 đến (1,35 cm) NT 1.6 Từ cho thấy hai nồng độ javel 50% 75% khoảng thời gian phút; 10 phút 75 phút nồng độ javel 50% thời gian phút NT 1.1 có số rễ cao Xét tiêu tỷ lệ hạt nảy mầm, thời gian nảy mầm tất nghiệm thức khoảng thời gian từ đến 10 ngày tỷ lệ nảy mầm có giảm dần qua nghiệm thức, nồng độ javel 50% thời gian phút cho tỷ lệ nảy mầm cao (97,78%), tỷ lệ nảy mầm giảm dan javel 50% thời gian 10 phút (93,37%), javel 50% thời gian 15 phút (71,15%), javel 75% thời gian phút (64,45%), javel 75% thời gian 10 phút (55,56%) javel 75% thời gian 15 phút (35,56%) Dựa vào kết thí nghiệm trên, chất vơ trùng thích họp để đánh giá tỷ lệ nảy mầm tỷ lệ vô trùng đến q trình vơ trùng mẫu hạt Cà Gai Leo in vitro javel So sánh kết cho thấy tương đồng nghiên cứu Cà Chua Thân Gỗ Nguyễn Thị Ngọc Quyên cho kết vô trùng mẫu hạt Cà Chua Thân Gỗ với tỷ lệ nảy mầm cao (99,03%) tỷ lệ nhiễm thấp (0,97%) nồng độ javel 75% với thời gian 15 phút 16, kết nghiên cứu Lan Kim Tuyến tác giả Nguyễn Văn Thiết cho kết mẫu chồi khử trùng nồng độ javel 30% thời gian 20 phút cho tỷ lệ mẫu sống 50% 17 tương đồng với kết nghiên cứu Oải Hương tác giả Đồ Tiến Vinh cho kết vơ trùng mẫu hạt Oải Hương nồng độ javel thời gian khử trùng thích hợp 75% 10 phút (tỷ lệ vô trùng 75,45% tỷ lệ nảy mầm 30,71%)18 Như vậy, thời gian khử trùng nồng độ chất khử trùng ảnh hưởng lớn đến trình nảy mầm mẫu cấy với NT 1.1 (ngâm cồn 70° phút ngâm javel 50% phút) vừa đủ, vừa có khả tiêu diệt mầm, vừa có tỷ lệ sống cao tiết kiệm thời gian nhiều so với nghiệm thức lại Do 17 Chương Ket thảo luận đó, tơi chọn nồng độ javel 50% phút để xử lý vô trùng mẫu hạt Cà Gai Leo để tạo nguyên liệu cho thí nghiệm Hình 3.1 Vơ trùng mẫu Cà Gai Leo in vitro Mầu sau vô trùng (A); Sau 10 ngày (B); Sau 17 ngày (C); Sau 25 ngày (D) 3.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo Trong nuôi cấy ỉn vitro thành phần mơi trường khống quan trọng cho sinh trưởng phát triển Vừa cung cấp chất dinh dưỡng, hoạt động trao đổi chất sinh lý Các nguyên tố nitơ (N), lưu huỳnh (S), phospho (P) thành 18 Chương Ket thảo luận phần khoáng thiết yếu thực vật Magie (Mg) tham gia vào q trình quang họp hơ hấp Canxi (Ca) hình thành họp chất tạo nên màng thực vật có vai trị quan trọng việc ngăn chặn xâm nhiễm nấm Kali (K) giúp cân bang anion vô hữu cây, giúp ổn định áp suất thẩm thấu môi trường tế bào Tất nguyên tố cần thiết cho sinh trưởng phát triển thực vật Nhu cầu dinh dưỡng loài khác giai đoạn sinh trưởng khác khác Do đó, nuôi cấy Cà Gai Leo bước quan trọng lựa chọn thành phần khoáng thích họp cho sinh trưởng phát triển lồi Bảng 3.2 Ket khảo sát mơi trường khoáng đến sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo ỉn vitro Chỉ tiêu khảo sát NT MT Số Chiều cao (cm) Số rễ (rễ/mẫu) (lá/mẫu) 1.1 MS 2,74c 4,45b 4,56c 1.2 WPM 4,64a 5,45a 7,45a 1.3 B5 3,68b 4,45b 6,34b 1.4 LV 2,71c 4,56b 4,45c 3,99 4,14 4,21 cv (*chú thích: kí tự nằm phía trên, bên phải số kí tự biêu thị khác biệt cấp độ Các chữ cải khác cột thể sai khác có ỷ nghĩa mức LSDo.01) Ở thí nghiệm này, bốn loại mơi trường sử dụng MS, WPM, LV, B5 có bổ sung đưòng sucrose 30 g/1, agar 8,0 g/1 Vật liệu sử dụng đoạn thân Cà Gai Leo thí nghiệm trước, cắt thành đoạn, có mầm cấy vào môi trường chuẩn bị, quan sát 30 ngày cho kết bảng 3.2 Dựa vào bảng số liệu 3.2 cho thấy khác rõ rệt chiều cao, số chồi, số rễ số Xét tiêu chiều cao Cà Gai Leo cho thấy mơi trường WPM có chiều cao vượt trội so với môi trường cịn lại Cụ thể chiều cao mơi trường WPM đạt (4,64 cm), mơi trường cịn lại thấp môi trường WPM gấp 1,2 đến 1,7 lần, môi trường B5 (3,68 cm), môi trường MS (2,74 cm), môi trường LV (2,71 cm) Ngồi ra, thân mơi trường WPM to có màu xanh đậm hơn, có số nhiều 19 Chương Ket thảo luận nhiều mơi trường cịn lại (5,45 lá/mẫu) Đối với môi trường B5, môi trường MS, môi trường LV số thấp môi trường WPM gấp 1,2 lần Tuy nhiên môi trường LV mơi trường MS có dấu hiệu bị vàng chậm phát triển Bên cạnh đó, số rễ Cà Gai Leo môi trường WPM nhiều (7,45 rễ/mẫu), dài phát triển to tròn, dài trắng, số rễ môi trường WPM cao gấp 1,2 lần so với môi trường B5 cao gấp 1,6 lần so với mơi trường LV Hình 3.2 Chồi Cà Gai Leo ỉn vitro môi trường khống Mơi trường MS (A); mơi trường LV (B); mơi trường B5 (C); môi trường WPM (D) 20 Chương Ket thảo luận So sánh cho thấy kết tương đồng với kết nghiên cứu “Vi nhân giống Oải Hương (Lavandula angustifoUay tác giả Đỗ Tiến Vinh năm 2016 cho kết môi trường WPM Oải Hương sinh trưởng phát triển tốt với tiêu chồi phát sinh (2,46 chồi), số (15,20 lá) chiều cao (5,28 cm) 18, kết giống với nghiên cứu “Nhân giống trà Hoa Vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensís Ninh et Hakoda) kỹ thuật nuôi cấy ỉn vitro” tác giả Nguyễn Văn Việt cho kết môi trường WPM mơi trường thích họp cho tái sinh tạo chồi, chồi mập, khỏe trịn có màu xanh thẫm, tỷ lệ mẫu tái sinh chồi đạt 94,44% chiều cao chồi đạt 4,5 cm 19 Ket nghiên cứu “Khảo sát khả nhân giống Trà My hoa đỏ (Camelliapiquetiana (pierre) Sealy) ỉn vitro) tác giả Nguyễn Trung Thành cho kết mơi trường thích họp cho sinh trưởng phát triển Trà My hoa đỏ môi trường WPM 20 giống Cà Gai Leo, môi trường WPM Cà Gai Leo sinh trưởng phát triển tốt với tiêu chiều cao (4,64 cm), số (5,45 lá), số rễ (7,45 rễ) Như vậy, mơi trường khống thích họp cho sinh trường phát triển Cà Gai Leo ỉn vitro môi trường WPM 3.3 Ket thí nghiệm 3: khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Cà Gai Leo Chất điều hịa sinh trưởng cơng cụ giúp nghiên cứu sâu phát sinh hình thái thực vật chủ động định hướng cho phát triển thực vật nuôi cay ỉn vitro Các thành phần chất điều hịa sinh trưởng giúp kích thích sinh trưởng, phát triển, phân chia tế bào, thay đổi ưu ngọn, phân hóa chồi BA kinetin chất điều hịa sinh trưởng nhân tạo thuộc nhóm cytokinin Các cytokinin dẫn xuất adenine, liên quan đến tới phân chia tế bào, phân hóa chồi từ mô sẹo từ quan khác, tăng cường phát sinh chồi phụ Chức cytokinin chủ yếu kích thích phân chia tế bào, kích thích phát sinh chồi ni cấy mơ, kích thích phát sinh chồi nách kiềm hãm ảnh hưởng ưu chồi đỉnh, tạo nhân callus, Do đó, chúng tơi chọn chất điều hịa sinh trưởng BA kinetin với nồng độ khác Cà Gai Leo 21 Chương Ket thảo luận Trong thí nghiệm này, hai loại BA kinetin sử dụng với nồng độ 0,25; 0,5; 1,5 mg/1 mơi trường WPM có bổ sung đưòng 30 g/1, agar 8,0 g/1 kết thu bảng 3.3 Bảng 3.3 Ket khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Cà Gai Leo Chỉ tiêu khảo sát BA Kinetin - Số Số chồi Số rễ (lá/mẫu) (chồi/mẫu) (rễ/mẫu) 4,44b 7,67b 4,1 lbc 5,34c - 2,84d 6,45c 3,78cd 4,67c - 2,46d 6,56c 3,45de 3,45d 1.4 1,5 - 2,59d 4,56d 3,22e 3,56d 1.5 - 0,25 4,53b 7,67b 4,45b 5,34c 1.6 - 0,5 4,36b 7,12bc 3,91bcd 6,23b 1.7 - 5,73a 9,12a 5,78a 7,34a 1.8 - 1,5 3,72c 6,44c 3,45de 4,56c 4,66 4,77 6,75 5,72 NT (mg/1) (mg/1) Chiều cao (cm) 1.1 0,25 - 1.2 0,5 1.3 cv (*chú thích: ki tự năm phía trên, bên phải số kí tự biêu thị khác biệt cấp độ Các chữ cải khác cột thể sai khác có ỷ nghĩa mức LSDo.01) Ket bảng 3.3 cho thấy môi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng BA chiều cao nghiệm thức xét thấy từ nghiệm thức 1.1 (NT 1.1) với nồng độ (0,25 mg/1) đến nghiêm thức NT 1.4 với nồng độ (1,5 mg/1) chiều cao thu giảm từ (4,44 cm) NT 1.1 (2,59 cm) NT 1.4 Từ cho thấy chiều cao Cà Gai Leo bổ sung BA với nồng độ javel 0,25 mg/1 NT 1.1 cao Khi mơi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng kinetin chiều cao nghiệm thức cho thấy từ NT 1.5 đến NT 1.8 với nồng độ 0,25 mg/1; 0,5 mg/1; mg/1 1,5 mg/1 kết thu chiều cao môi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng kinetin với nồng độ 1,5 mg/1 NT 1.8 thấp (3,72 cm), mơi trường WPM có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng kinetin với nồng độ mg/1 NT 1.7 cao (5,73 cm) Khi xét mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng BA kinetin ta thấy mơi trường 22 Chương Ket thảo luận WPM có chất điều hịa sinh trưởng kinetin tốt so với môi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng BA Xét tiêu số từ NT 1.1 đến NT 1.4 mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng BA với nồng độ 0,25 mg/1; 0,5 mg/1; mg/1 1,5 mg/1, số có giảm dần từ NT 1.1 đến NT 1.4 số NT 1.1 cao (7,67 lá/mẫu) thấp NT 1.4 (4,56 lá/mẫu) Từ NT 1.5 đến NT 1.8 mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng kinetin với nồng độ 0,25 mg/1; 0,5 mg/1; mg/1; 1,5 mg/1 cho thấy, NT 1.7 có số cao (9,12 lá/mẫu) cao so với NT lại từ 1,2 đến 1,4 lần Khi mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng BA kinetin số mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng kinetin cao Mặc khác, môi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng BA với nồng độ 0,25 mg/1; 0,5 mg/1; mg/1 1,5 mg/1 Cà Gai Leo chậm phát triển, thân thấp, vàng lá, số rễ bị phù, thấp NT 1.4 (3,56 rễ/mẫu) Đối với mơi trường có bổ sung kinetin với nồng dộ 0,25 mg/1; 0,5mg/l; mg/1 1,5 mg/1 phát triển tốt thân to khỏe, màu xanh đậm, phát triển tốt, to, màu xanh đậm, có xuất gai, có số rễ cao NT 1.7 (7,34 rễ/mẫu), rễ phát triển to dài, màu trắng khỏe Đặc biệt, số chồi Cà Gai Leo ni cấy mơi trường WPM có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng kinetin nồng độ mg/1 cho số chồi cao (5,78 chồi/mẫu) cao hẳn so với tất nghiệm thức lại gấp 1,3 đến 1,8 lần Ket giống với kết nghiên cứu “Nhân giống in vitro Cà Chua Thân Gỗ (Solanum hetaceumỴ' tác giả Nguyễn Thị Ngọc Qun mơi trường có bổ sung kitenin tốt đến khả tạo chồi 16 Ket thí nghiệm Cà Gai Leo tương đồng với kết thí nghiệm Khoai Lang Tím Nhật tác giả Mai Vũ Duy cho kết môi trường MS có chất điều hịa sinh trưởng kinetin giai đoạn nhân chồi, giúp số chồi gia tăng cao 21 Ket thí nghiệm lan Dendrobium hybrid tác giả Nguyễn Thị Tâm 22 có tương đồng với kết Cà Gai Leo cho kết mơi trưởng có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng kinetin cho hệ số nhân cao Mồi có nồng độ phát triển khác nhiên mơi trường có bo sung kinetin thích họp cho khả tạo chồi Cà Gai Leo Cà Chua Thân Gỗ Cây sinh trưởng phát triển tốt, thân 23 Chương Ket thảo luận to khỏe, số nhiều, màu xanh đậm, rễ mọc dài trắng, số chồi không bị chết Vậy mơi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng thích hợp cho q trình tạo chồi Cà Gai Leo in vitro kinetin mg/1 Hình 3.3 chồi Cà Gai Leo mơi trường WPM có bố sung chất điều hịa sinh trưởng BA cvà kinetin Mau ban đầu (A); Mau BA có nồng độ 0,25 mg/1 (B); Mầu kinetin có nồng độ mg/1 (C), (D) 24 Chương Ket thảo luận 3.4 Kết thí nghiệm 4: khảo sát ảnh hưởng hàm lượng Auxin đến trình tạo rễ Cà Gai Leo Auxin chất điều hòa sinh trưởng sử dụng thường xuyên ni cấy ỉn vitro Đặc điểm auxin tính chất phân chia tế bào Auxin có tác dụng tốt đến trình sinh trưởng tế bào, hình thành rễ, tượng ưu ngọn, tính hướng động thực vật, sinh trưởng tạo khơng hạt Auxin kích thích sinh trưởng tế bào Nhưng kích thích với hàm lượng cao, tác dụng mạnh xảy tượng ức chế ngược trở lại, lúc auxin trở thành chất ức chế Hormone auxin có hoạt tính tăng trưởng chiều dài thân, tính hướng (sáng, đất), tính ưu ngọn, tạo rễ Đối với ni cấy mô, auxin sử dụng phân chia tế bào phân hóa rễ Các nhóm auxin thường sử dụng nuôi cay in vitro NAA, IAA, IBA Do đó, chúng tơi tiến hành thực thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng IAA, IBA, NAA Cà Gai Leo Thí nghiệm sử dụng đoạn thân Cà Gai Leo cắt thành đoạn tương đối sau cấy vào mơi trường WPM có bổ sung đưòng sucrose 30 g/1, agar 8,0 g/1 bổ sung chất điều hòa sinh trưởng NAA, IAA, IBA với nồng độ sau 0,1; 0,5; mg/1 Ket thể bảng 3.4 Ket thí nghiệm 3.4 cho thấy, xét tiêu chiều cao từ nghiệm thức đối chứng (NT DC) đến NT 2.3 cho thấy, NT 1.3 chiều cao phát triển cao (7,93 cm) thấp NT DC (5,76 cm) Chiều cao từ NT 1.4 đến NT 1.6 chiều cao NT 1.6 cao (3,43 cm) Nhưng so với NT DC NT 1.5 thấp gấp 1,6 lần tiêu chiều cao, từ NT 1.7 đến NT 1.9 ta thấy, chiều cao cao NT 1.9 (6,73 cm) có chiều cao vượt trội so với NT DC gap 1,2 lần Tuy nhiên, NT 1.9 lại phát triển chậm nhiều so với NT 1.2 gấp 1,2 lần Cho nên, xét tiêu chiều cao Cà Gai Leo NT 1.2 có chiều cao vượt trội so với nghiệm thức lại Xét tiêu số ta thấy, mơi trường WPM có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng NAA, IAA, IBA với nồng độ 0,1 mg/1; 0,5 mg/1; mg/1 môi trường WPM khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, số mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng NAA có số cao Cụ thể, mơi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trường NAA với nồng độ 0,5 mg/1 có số cao (8,61 lá/mẫu) môi trường WPM 25 Chương Ket thảo luận có chất điều hịa sinh trưởng IAA có nồng độ o,lmg/l có số thấp (5,00 lá/mẫu) Ngoài ra, bên cạnh phát triển chiều cao, thân phát triển to khỏe, màu xanh đậm, phiến to dày, xuất gai thân lá, rễ phát triển nhiều mơi trường có chất điều hịa sinh trưởng NAA NT 1.2 (7,78 rễ/mẫu), rễ mọc dài, màu trắng có nhiều rễ con, chênh lệch NT 1.2 với nghiệm thức lại từ 1,1 đến 2,8 lần Cịn mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng IAA, IBA môi trường WPM không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng Cà Gai Leo chậm phát triển, chiều cao thấp, thân ốm, bị vàng rụng nhiều, rễ có mọc mọc NT 1.5 1.6 (2,78 lá/mẫu) Cuối cùng, xét tiêu số chồi từ NT DC đến NT 1.9 số chồi phát triển tất nghiệm thức số chồi nhiều NT 1.2 (5,31 chồi/mẫu) chồi phát triển nách lá, khơng có chồi bị héo chết, số chồi NT 1.2 cao gấp 1,3 đến 3,3 lần so với nghiệm thức lại Bảng 3.4 Ket khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Cà Gai Leo Chỉ tiêu khảo sát NAA IAA IBA NT (mg/1) (mg/1) Chiều Số Số chồi Số rễ cao (cm) (lá/mẫu) (chồi/mẫu) (rễ/mẫu) (mg/1) DC - - - 5,76cd 6,56de 2,89de 4,1 le 1.1 0,1 - - 5,90bcd 7,45bc 3,33cd 6,67bc 1.2 0,5 - - 7,93a 8,61a 5,31a 7,78a 1.3 - - 6,52bc 7,56b 4,07b 6,45bc 1.4 - 0,1 - 3,36ef 5,00g l,55f 5,1 ld 1.5 - 0,5 - 3,43e 5,44fg l,78f 2,78f 1.6 - - 2,56f 6,71cd 2,45e 2,78f 1.7 - - 0,1 5,31d 6,78cd 3,89bc 7,12ab 1.8 - - 0,5 6,04bcd 6,1 ldef 3,45cd 6,89bc 1.9 - - 6,73b 5,89ef 3,lld 6,22c 6,72 5,03 7,72 6,49 cv (*chú thích: ki tự nằm ởphia trên, bên phải số kí tự biểu thị khác biệt cấp độ Các chữ cải khác cột thể sai khác có ỷ nghĩa mức LSDo.01) 26 Chương Ket thảo luận Hình 3.4 Chồi Cà Gai Leo ni cấy mơi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng auxin IAA có nồng độ 0,1 mg/1 (A),(B); Mơi trường DC (WPM) (C); IBA có nồng độ 0,1 mg/1 (D); NAA có nồng độ 0,5 mg/1 (E), (F) 27 Chương Ket thảo luận Dựa vào kết bảng 3.4 cho thấy mơi trường có chất điều hịa sinh trưởng NAA thích họp đến q trình hình thành rễ Cà Gai Leo Cây phát triển mơi trường có chất điều hịa sinh trưởng NAA có thân phát triển to khỏe, màu xanh đậm, phiến to dày, có màu xanh đậm, xuất gai thân lá, chồi mọc khơng có chồi bị héo chết, rễ mọc to dài Ket giống với kết đề tài “Nhân giống ỉn vitro Cà Chua Thân Gồ (Solanum Betaceum)” khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Cà Chua Thân Gỗ cho kết mơi trường có chất điều hịa sinh trưởng NAA tốt so với mơi trường có chất điều hịa sinh trưởng khác thí nghiệm 16 Ket thí nghiệm Cà Gai Leo tương đồng với kết thí nghiệm Mật Nhân tác giả Trần Đình Giáp cho kết mơi trường MS có chất điều hịa sinh trưởng NAA 1,5 mg/1 kết họp BA 0,1 mg/1 phù họp cho tạo rễ bất định từ mẫu mầm ỉn vitro 23 Ket Cà Gai Leo in vitro tương đồng với kết thí nghiệm Sen tác giả Phạm Văn Lộc cho kết nồng độ NAA có ảnh hưởng đến trình tạo rễ Sen nồng độ NAA 0,5 mg/1 rễ hình thành nhiều, rễ trắng ngà, khỏe Tiếp tục tăng nồng độ NAA từ 1,0 - 2,0 mg/1, có ức chế kéo dài rễ số lượng rễ tạo thành Có thể auxin nồng độ cao kích thích tạo sơ khởi rễ cản trở tăng trưởng sơ khởi Hàm lượng NAA 0,5 mg/L phù họp cho việc tạo rễ sen24 Như vậy, môi trường WPM có chất điều hịa sinh trưởng tốt cho trình hình thành rễ Cà Gai Leo ỉn vitro NAA với nồng độ 0,5 mg/1 28 CHƯƠNG KÉT LUẬN Đe tài đáp ứng mục tiêu xác định thành phần mơi trường khống chất điều hòa sinh trưởng Cà Gai Leo ỉn vitro với kết quả: - Cây nảy mầm nồng độ javel 50% thời gian phút có tỷ lệ nảy mầm 97,78% - Mơi trường WPM thích họp để nhân giống Cà Gai Leo in vitro - Mơi trường thích họp ni cấy Cà Gai Leo in vitro trình tạo chồi là: mơi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng kinetin mg/1, đường 30 g/1, agar 8,0 g/1 - Mơi trường thích họp ni cấy Cà Gai Leo ỉn vitro trình tạo rễ là: mơi trường WPM có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng NAA 0,5 mg/1, đưòng 30 g/1, agar 8,0 g/1 29 TÃI LIỆU THAM KHẢO Phạm Hoàng Hộ cỏ Việt Nam Nhà xuất trẻ 2003:455-456 Phùng Thị Thu Hà , Phạm Thị Huyền Trang, Nguyễn Hữu Cuờng Đặc điểm thực vật học số biện pháp kỹ thuật trồng Cà Gai Leo Gia Lâm, Hà Nội Tạp khoa học công nghệ Việt Nam 2017;15(2): 146-154 Phạm Kim Mãn, Nguyễn Bích Thu, Trần Văn Hanh Tác dụng chống ung thư Cà Gai Leo Tạp dược liệu 1999;3(4): 126 Nguyễn Thị Minh Khai, nghiên cứu tác động Cà Gai Leo thực nghiệm xơ gan, biên niên sử công trình khoa học dược y học Việt Nam Viện vật liệu dượcphâm 1988:31-35 Nguyễn Bích Thu, Nguyễn Minh Khai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu Nghiên cứu tác dụng Cà Gai Leo (solanum hainanense) collagenase Tạp dược liệu 2000;5(5):149-152 Đồ Huy Bích, Đặng Quang Trang, Bùi Xuân Chương Cây thuốc động vật làm thuốc Nhà xuất khoa học nghệ thuật 2006:293-296 Nguyễn Xuân Hải, Nguyễn Trang Nhân, Nguyễn Thị Thanh Mai Thành phần hóa học Cà Gai Leo (solanum procumbens) SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT JOURNAL 2018;2(6): 134-138 Moon - Sik Yang, Tae - Geum Kim, Nguyễn Hoàng Lộc, Nguyễn Hữu Thuận Anh, Bình Đào Hữu Nhật Production of glycoalkaloids from callus cultures of Solanum hainanense Hance Journal ofplant biotechnology 2010;37:96-101 Ruan Wenxiu Liu Jihua 2016.6(39-41 Những tiến nghiên cứu Cà Gai Leo Tài nguyên thực vật hoang dã Trung Quốc 2016;6:39-41 10 Nguyễn Minh Khai, Phạm Kim Mãn, Nguyễn Bích Thu, ctv Nghiên cứu điều chế thuốc Haina điều trị viêm gan B mạn hoạt động từ cà gai leo Tạp chi dược liệu 2001;6(l):68-71 11 Nguyễn Hoàng Lộc, Kiệt Huỳnh Văn Vi nhân giống cà gai leo Anais of biological reserch 2012;2(3):394-398 12 Hoàng Kim Toản, Nguyễn Ngọc Thảo, Trần Đăng Hịa, ctv Quy trình nhân giống cà gai leo phương pháp giâm cành Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Trường ĐHNơng Lảm Huế 2017;l(2):371-382 13 Hồng Kim Toản, Lê Văn Tình, Trần Thị Thu Giang, Trần Đăng Hịa, Lê Như Cương, Thi Nguyễn Đình Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật nhân giống từ hạt cà gai leo (solanum procumbens) Tạp Khoa học Đại học Huế: Khoa Học Tự Nhiên 2017;127(lC):59-170 14 Trịnh Thị Thanh, Trương Xuân Sinh, Nguyễn Tài Toàn, Phan Xuân Diệu, Khánh Lê Văn Ảnh hưởng mật độ trồng phân bón đến sinh trưởng, 30 suất chất lượng cà gai leo huyện cuông, tỉnh Nghệ An Tạp chi khoa học công nghiệp nơng nghiệp 2018;2(3) 15 Đồn Ngọc Hân, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Thanh Phưong, Trinh Nguyễn Văn Ảnh hưởng ánh sáng LED, chất kích ứng đến sinh trưởng hoạt tính chống oxy hóa callus cà gai leo Tạp chí khoa học Nơng Nghiệp việt Nam 2019;17(l):64-70 16 Đồ Tiến Vinh, Mai Thị Phưong Hoa, Nguyễn Thị Ngọc Quyên Nhân giống In Vitro Cà Chua thân gỗ (Solanum Betaceum) Công nghệ sinh học môi trường (trường Đại học Nguyên Tất Thành) 2019:61 17 Nguyễn Thị Lệ Hà, Phạm Thị Mận, Cao Minh Thủy Nguyên, Phạm Thụy Nhật Truyền, Nguyễn Xuân Cường, Nguyễn Văn Thiết Nghiên cứu kỹ thuật vi nhân giống lan kim tuyến (Anoectochilus sp.) Tạp chí KHLN Chuyên san 2017;1859(0373):8-15? 18 Đỗ Tiến Vinh, Mai Thị Phương Hoa, Lê Bảo Ngọc, Minh Trần Văn Vi nhân giống Oải Hương (Lavandula angustifolia) Tạp chí Khoa học Trường Đại học An Giang 2016;l l(3):42-49 19 Nguyễn Thị Hường, Kiệt Nguyễn Văn Nhân giống trà Hoa Vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) kỹ thuật nuôi cay in vitro Tạp Khoa học Công nghệ Lâm nghiệp 2017;4:17-22 20 Nguyễn Văn Ket, Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Trung Thành Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camelliapiquetiana (Pierre) Sealy) in vitro Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ 2014;3(30): 17-25 21 Mai Vũ Duy, Nguyễn Chí Dũng, Võ Thị Huyền Trân Khảo sát ảnh hưởng benzyladenine (ba), kinetin, gibberelic acid (ga3), napthalene acetic acid (naa) đến tái sinh chồi nhân chồi khoai lang tím nhật (ipomoea batatas lam.) nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Journal of Science 2015;7(7):l-7 22 Nguyễn Thị Tâm, Vũ Thị Lan, Nguyễn Thành Luân Ảnh hưởng số yếu tố môi trường giá thể đến sinh trưởng lan dendrobium hybrid in vitro Tạp Khoa học Công nghệ 2007;3(43) 23 Trần Đình Giáp, Nguyễn Nhật Minh, Bùi Thế Vinh, Phạm Văn Lộc Nghiên cứu tạo rễ mật nhân (eurycoma longifolia jack.) phương pháp nuôi cấy ỉn vitro Tạp Khoa học công nghệ Thực phẩm 2017; 13( 1):84-88 24 Phạm Văn Lộc, Nguyễn Vương Vũ, Trần Bảo Quốc Khảo sát ảnh hqởng số yếu tố đến tăng sinh chồi tạo rễ in vitro sen (nelumbo nucifera gaertn) Trường Đại học Công nghiệp Thực phàm Thành phố Hồ Chí Minh 2017 31 ... giống ỉn vitro Cà Gai Leo cần thiết Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn thực đề tài ? ?Nghiên cứu xác định môi trường nuôi cấy Cà Gai Leo (Solatium Procumbens) in vitro' ' 1.2 Tổng quan Cà Gai Leo 1.2.1... phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo Mục tiêu: xác định mơi trường khống thích họp cho sinh trưởng phát triển Cà Gai Leo Vật liệu: chồi Cà Gai Leo in vitro Môi trường: MS,... hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Cà Gai Leo Mục tiêu: xác định hàm lượng auxin đến trình tạo rễ Cà Gai Leo Vật liệu thí nghiệm: chồi Cà Gai Leo in vitro Mơi trường khống: mơi trường WPM