Đề tài Nghiên cứu xây dựng mô hình tổn thương cắt da trên chuột cống trắng bị đái tháo đường và rối loạn lipid nghiên cứu nhằm 2 mục tiêu: Xây dựng quy trình gây vết thương cắt da trên chuột cống trắng bị đái tháo đường và rối loạn lipid; theo dõi quá trình liền thương trên vết thương cắt da ở chuột cống trắng bị đái tháo đường và rối loạn lipid.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MƠ HÌNH TỔN THƯƠNG CẮT DA TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG BỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG VÀ RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MƠ HÌNH TỔN THƯƠNG CẮT DA TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG BỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG VÀ RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2017.Y Người hướng dẫn: ThS.BSNT Hồ Mỹ Dung ThS.BS Đỗ Thị Quỳnh Hà Nội - 2022 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc lời cảm ơn chân thành đến ThS.BSNT Hồ Mỹ Dung, ThS.BS Đỗ Thị Quỳnh, giảng viên môn Y Dược học sở - Đại học Y Dược, ĐHQGHN Các cô hướng dẫn từ ngày thực đề tài, sẵn sàng giúp đỡ tơi gặp khó khăn, giúp trau dồi thêm kiến thức, kỹ cần thiết truyền cho tơi niềm đam mê, lịng nhiệt huyết với nghề Tôi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giảng viên Bộ môn Y Dược học sở hết lòng quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi thực nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến tồn thể thầy, giảng viên Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội cho tơi kiến thức q báu q trình học tập nhà trường Đồng thời xin cảm ơn đề tài “Nghiên cứu xây dựng mơ hình tởn thương da chuột cống trắng gây đái tháo đường rối loạn lipid”, mã số nhiệm vụ CS.21.06 – Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội hỗ trợ nghiên cứu Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè quan tâm, chăm sóc, động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Hạnh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương – TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh đái tháo đường biến chứng loét chi mạn tính 1.1.1 Định nghĩa dịch tễ học bệnh đái tháo đường 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh đái tháo đường 1.1.3 Biến chứng loét chi mạn tính bệnh nhân đái tháo đường 1.2 Đại cương tình trạng rối loạn lipid 1.3 Các phương pháp gây đái tháo đường rối loạn lipid động vật thực nghiệm 1.3.1 Gây đái tháo đường động vật hóa chất 1.3.2 Gây đái tháo đường rối loạn lipid động vật chế độ ăn giàu chất béo 1.3.3 Gây đái tháo đường cách kết hợp chế độ ăn giàu chất béo streptozotocin liều thấp 1.3.4 Các phương pháp gây đái tháo đường thực nghiệm khác 1.4 Các phương pháp gây mơ hình vết thương ngồi da động vật 10 1.4.1 Quá trình liền thương sinh lý 10 1.4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình liền thương 11 1.4.3 Các mơ hình gây tởn thương da động vật thực nghiệm 11 1.5 Các nghiên cứu gây tổn thương da động vật đái tháo đường Việt Nam 14 Chương – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Động vật nghiên cứu 16 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất thí nghiệm 16 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm 16 2.2.2 Hóa chất 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Gây mơ hình chuột cống trắng bị đái tháo đường/rối loạn lipid 18 2.3.2 Gây mơ hình vết thương cắt da chuột bị đái tháo đường/rối loạn lipid 19 2.3.3 Theo dõi, đánh giá sau gây vết thương 20 2.3.4 Xử lý số liệu 22 Chương – KẾT QUẢ 23 3.1 Xây dựng mơ hình chuột đái tháo đường rối loạn lipid 23 3.2 Theo dõi mơ hình vết thương da chuột cống trắng đái tháo đường/rối loạn lipid 26 Chương – BÀN LUẬN 32 4.1 Về mơ hình gây đái tháo đường rối loạn lipid chuột cống trắng32 4.2 Về mơ hình vết thương da chuột cống trắng mắc đái tháo đường rối loạn lipid 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ADA Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kỳ (American Diabetes Association) CHO Cholesterol toàn phần CRP Protein phản ứng C (C – reactive protein) ĐTĐ Đái tháo đường ENU N- Ethyl Nitrosourea GLUT2 Chất vận chuyển glucose (Glucose transporter 2) HDL-C Cholesterol lipoprotein tỷ trọng cao (High Density Lipoprotein Cholesterol) HE Hematoxylin & Eosin IDF Liên đoàn Đái tháo đường giới (International Diabetes Federation Diabetes Atlas) IL - 1β Interleukin 1β IL – Interleukin LDL-C Cholesterol lipoprotein tỷ trọng thấp (Low Density Lipoprotein Cholesterol) RLLP Rối loạn lipid STZ Streptozotocin TNF – α Yếu tố hoại tử khối u α (Tumor Necrosis Factors) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Các tiêu chí đánh giá vết thương da chuột thời gian gây mơ hình………………………………………………………………………21 Bảng 3.1: Thay đởi cân nặng chuột q trình làm thí nghiệm……… 23 Bảng 3.2: Nồng độ số lipid máu sau gây béo phì chế độ ăn giàu chất béo…………………………………………………………………23 Bảng 3.3: Các số công thức máu protein phản ứng C sau gây mơ hình vết thương da 27 Bảng 3.4: Sự thay đởi diện tích vết thương q trình gây mơ hình .28 Bảng 3.5: Điểm tởn thương q trình theo dõi vết thương da……… 30 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc hóa học Streptozotocin………………………………8 Hình 1.2: Quy trình gây vết thương………………………………………… 13 Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu mơ hình vết thương ngồi da chuột cống trắng đái tháo đường/rối loạn lipid…………………………………………………18 Hình 2.2: Vết thương gắn vòng silicon băng phẫu thuật ……20 Hình 3.1: Sự thay đởi nồng độ glucose máu trước sau tiêm STZ…… 24 Hình 3.2: Hình ảnh vi thể mô gan chuột sau ăn chế độ giàu chất béo, độ phóng đại 10X 40X 25 Hình 3.3: Hình ảnh vi thể mơ tụy chuột sau tiêm STZ độ phóng đại 4X 10X……………………………………………………………………… 26 Hình 3.4: Hình ảnh tiến triển vết thương da nhóm chuột (A: nhóm chứng sinh lý; B: nhóm mơ hình) ……………………………………………27 Hình 3.5: Tỷ lệ co hồi vết thương nhóm thử nghiệm nghiên cứu………………………………………………………………………… 29 Hình 3.6: Thời gian liền thương hồn tồn nhóm thử nghiệm .29 Hình 3.7: Hình ảnh vi thể mơ da nhóm chứng sinh lý (A) nhóm đái tháo đường (B), độ phóng đại 10X……………………………………………… 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo thống kê Liên đoàn Đái tháo đường giới (International Diabetes Federation Diabetes Atlas – IDF), tính đến năm 2019 giới có đến 463 triệu người mắc đái tháo đường (ĐTĐ), chiếm 9,3% tổng số người trưởng thành Con số dự báo tăng lên nhanh chóng đạt mức 700 triệu người mắc vào năm 2045 [20] Đái tháo đường không ảnh hưởng tới sức khỏe người bệnh mà tác động xấu tới kinh tế phát triển xã hội Bệnh đái tháo đường gây nhiều biến chứng nguy hiểm nhiều quan thể tim mạch, thần kinh, mắt, thận làm tăng nguy tử vong Trong loét bàn chân đái tháo đường biến chứng phở biến khó điều trị Các nghiên cứu cho thấy có đến 6,3% bệnh nhân ĐTĐ mắc biến chứng loét da mạn tính [31] Loét chi mạn tính gây viêm mãn tính kéo theo nhiều biến chứng khác hoại tử, viêm xương khớp, nhiễm trùng huyết,… Loét chi mạn tính vấn đề chậm liền vết thương không ảnh hưởng đến sức khỏe, khả vận động người bệnh mà cịn gánh nặng kinh tế cho tồn xã hội Tại Mỹ, chi phí điều trị loét chi mạn tính bệnh nhân ĐTĐ hàng năm lên đến tới 13 tỷ la, nhiên cịn chưa đạt kỳ vọng hiệu điều trị [22] Do đó, việc thử nghiệm phương pháp điều trị vết thương mạn tính động vật đái tháo đường quan tâm, tạo tiền đề cho việc áp dụng vào điều trị người Trên giới có nhiều nghiên cứu mơ hình vết thương da mạn tính khác động vật vết bỏng, vết cắt da, loét tì đè,… kết chưa đồng Hiện tại, Việt Nam, mơ hình gây tởn thương da động vật có rối loạn chuyển hóa cịn nhiều hạn chế kích thước vết thương nhỏ, chưa mơ trình liền thương bệnh nhân đái tháo đường Vì vậy, với mong muốn cung cấp thêm thơng tin chế bệnh sinh loét chi mạn tính bệnh nhân đái tháo đường tạo tiền đề trước thử nghiệm tiền lâm sàng cho phác đồ điều trị tởn thương da mạn tính tiềm tương lai, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu xây dựng mơ hình tổn thương cắt da chuột cống trắng bị đái tháo đường rối loạn lipid” với mục tiêu chính: - Xây dựng quy trình gây vết thương cắt da chuột cống trắng bị đái tháo đường rối loạn lipid - Theo dõi trình liền thương vết thương cắt da chuột cống trắng bị đái tháo đường rối loạn lipid ... trình gây vết thương cắt da chuột cống trắng bị đái tháo đường rối loạn lipid - Theo dõi trình liền thương vết thương cắt da chuột cống trắng bị đái tháo đường rối loạn lipid Chương – TỔNG QUAN 1.1... 32 4.1 Về mơ hình gây đái tháo đường rối loạn lipid chuột cống trắng3 2 4.2 Về mô hình vết thương ngồi da chuột cống trắng mắc đái tháo đường rối loạn lipid 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ... DƯỢC NGUYỄN THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MƠ HÌNH TỔN THƯƠNG CẮT DA TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG BỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG VÀ RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2017.Y Người