Mục tiêu của đề tài Đánh giá kết quả điều trị của tia plasma lạnh áp suất khí quyển với tổn thương da trên mô hình chuột cống trắng mắc đái tháo đường – rối loạn lipid mô tả quá trình liền vết thương sử dụng CAP trên các tổn thương da ở chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid; đánh giá sơ bộ kết quả tái cấu trúc mô da vi thể và khử khuẩn của CAP trên các tổn thương da ở chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THU HÀ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ CỦA TIA PLASMA LẠNH ÁP SUẤT KHÍ QUYỂN VỚI TỔN THƯƠNG DA TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỐNG TRẮNG MẮC ĐÁI THÁO ĐƯỜNG – RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THU HÀ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ CỦA TIA PLASMA LẠNH ÁP SUẤT KHÍ QUYỂN VỚI TỔN THƯƠNG DA TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỐNG TRẮNG MẮC ĐÁI THÁO ĐƯỜNG – RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2017.Y Người hướng dẫn: ThS.BS Đỗ Thị Quỳnh ThS.BSNT Hồ Mỹ Dung HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến ThS.BS Đỗ Thị Quỳnh ThS.BSNT Hồ Mỹ Dung – Bộ môn Y dược học sở, Trường Đại học Y Dược, giao đề tài, trực tiếp hướng dẫn ln tận tình bảo, giúp đỡ tơi suốt q trình hồn thành đề tài Đồng thời, xin cảm ơn đề tài “Nghiên cứu xây dựng mơ hình tổn thương chuột cống trắng gây đái tháo đường rối loạn lipid”, mã số nhiệm vụ CS.21.06 – Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội hỗ trợ nghiên cứu cho suốt trình thực đề Tiếp đến, xin gửi lời cảm ơn đến bạn Nguyễn Thị Hạnh – sinh viên lớp Dược học khoá QH.2017.Y tơi thực nghiên cứu nhiệt tình hỗ trợ nhiều Qua đây, xin trân trọng cảm ơn Ban chủ nhiệm Trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, toàn thể thầy cô giáo công tác trường tạo điều kiện cho học tập tận tâm truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, giúp đỡ suốt năm học trường Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Y dược học sở tạo điều kiện để thực đề tài khố luận tốt nghiệp Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè, người quan tâm, chăm sóc, động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tuy có nhiều cố gắng, kiến thức kinh nghiệm tơi cịn hạn chế nên khơng tránh khỏi thiếu sót đề tài nghiên cứu Kính mong nhận lời nhận xét, góp ý q thầy để Khố luận tốt nghiệp tơi hồn thiện Trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 01 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thu Hà DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ TỪ VIẾT TẮT ĐTĐ Đái tháo đường IDF Liên đoàn Đái tháo đường Quốc tế – International Diabetes Federation DFS Hội chứng bàn chân đái tháo đường – Diabetic Foot Syndrome CAP Plasma lạnh áp suất khí – Cold Atmospheric Plasma RLLP Rối loạn lipid ECM Chất ngoại bào – Extracellular matrix HIF-1α Yếu tố cảm ứng thiếu oxy – Hypoxia-inducible factor 1-alpha VEGF-A Các yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu – Vascular endothelial growth factor A MMPs Metalloproteinase TIMPS Chất ức chế Metalloproteinase – Tissue inhibitors of metalloproteinase STZ Streptozocin ROS Các hoạt chất chứa oxy – Reactive oxygen species RNS Các hoạt chất chứa nito – Reactive nitrogen species TG Triglyceride CHO Cholesterol toàn phần HDL-C Lipoprotein tỉ trọng cao – High Density Lipoprotein cholesterol LDL-C Lipoprotein tỉ trọng thấp – Low Density Lipoprotein cholesterol CRP Protein C phản ứng – C-reactive protein DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Các tiêu chí đánh giá vết thương da chuột thời gian gây làm thí nghiệm 19 Bảng 3.1 Thay đổi cân nặng chuột q trình làm thí nghiệm 23 Bảng 3.2 Nồng độ số lipid máu hai lơ thí nghiệm 23 Bảng 3.3 Sự thay đổi nồng độ glucose máu trước sau tiêm STZ 24 Bảng 3.4 Các số công thức máu sau gây mơ hình vết thương ngồi da 25 Bảng 3.5 Điểm tổn thương trình theo dõi vết thương da 27 Bảng 3.6 Sự thay đổi diện tích vết thương q trình nghiên cứu 28 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học Streptozocin Hình 1.2: Máy phát tia Plasma lạnh PlasmaMed ® 10 Hình 2.1 Quy trình gây mơ hình điều trị vết thương da chuột cống trắng ĐTĐ/RLLP 15 Hình 2.2 Mơ hình vết thương cắt da chuột cống trắng ĐTĐ/RLLP 17 Hình 2.3 Điều trị vết thương CAP chuột cống trắng ĐTĐ/RLLP 18 Hình 3.1 Hình ảnh đại thể vết thương trình liền thương lơ chứng bệnh (A) lơ mơ hình (B) 26 Hình 3.2 Tỷ lệ co hồi vết thương nhóm thử nghiệm nghiên cứu 29 Hình 3.3 Hình ảnh mơ da nhóm chứng bệnh (A) nhóm CAP (B) ngày thứ ngày thứ 14 30 Hình 3.4 Phân bố số lượng dạng khuẩn lạc mẫu vi sinh vết thương 31 Hình 3.5 Tỉ lệ xuất tụ cầu vàng mẫu vi sinh da chuột hai lô chứng bệnh lơ mơ hình 32 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh đái tháo đường 1.1.1 Định nghĩa phân loại bệnh đái tháo đường 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh 1.1.3 Các biến chứng vết thương da mạn tính đái tháo đường 1.2 Phương pháp nghiên cứu mơ hình đái tháo đường động vật thực nghiệm 1.3 Plasma áp suất khí lạnh – Cold atmospheric plasma 1.3.1 Tổng quan chung 1.3.2 Tác dụng sinh học CAP điều trị liền thương 10 1.3.3 Các nghiên cứu hiệu CAP điều trị vết thương da 12 CHƯƠNG – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất thí nghiệm 14 2.2.1 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 14 2.2.2 Hóa chất 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Phương pháp gây vết thương ngồi da mơ hình chuột ĐTĐ/RLLP 16 2.3.2 Phương pháp đánh giá hiệu tia plasma lạnh chuột ĐTĐ/RLLP mang vết thương da 17 2.3.3 Theo dõi, đánh giá kết sau tiến hành thí nghiệm 18 2.3.4 Xử lý số liệu 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ 23 3.1 Đặc điểm sinh trắc học hai nhóm nghiên cứu 23 3.2 Kết theo dõi trình liền vết thương sử dụng CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid 24 3.3 Bước đầu đánh giá kết tái cấu trúc mô da vi thể khử khuẩn CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid 29 CHƯƠNG BÀN LUẬN 33 4.1 Một số đặc điểm số sinh trắc học hai nhóm thí nghiệm 33 4.2 Hiệu sử dụng CAP q trình liền thương mơ hình vết thương da chuột cống trắng ĐTĐ/RLLP 34 4.3 Đánh giá kết tái cấu trúc mô da vi thể khử khuẩn sử dụng CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh ĐTĐ/RLLP 36 KẾT LUẬN 39 KIẾN NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường bệnh lý rối loạn chuyển hóa khơng đồng nhất, đặc trưng nồng độ glucose máu mức cao Tăng glucose mạn tính thời gian dài gây rối loạn chuyển hóa carbohydrate, protide, lipid, gây tổn thương nhiều quan khác nhau, đặc biệt tim, mạch máu, thận, chi, mắt thần kinh Theo Liên đoàn Đái tháo đường Quốc tế (International Diabetes Federation Diabetes Atlas IDF), năm 2019 tồn giới có 463 triệu người (trong độ tuổi 20 – 79) mắc bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) dự kiến năm 2030 có khoảng 578 triệu người mắc ĐTĐ 2045 700 triệu người Ngoài ra, ước tính năm 2019, có khoảng triệu người tử vong nguyên nhân liên quan đến ĐTĐ Tại Việt Nam, theo liệu cập nhật IDF, năm 2019 tỷ lệ người trưởng thành mắc ĐTĐ chiếm 6% dân số dự báo ĐTĐ trở thành bảy bệnh gây tử vong tàn tật hàng đầu Việt Nam vào năm 2030 Những số biết nói cho thấy dấu hiệu đáng báo động gia tăng nhanh chóng số người mắc ĐTĐ, gây nhiều ảnh hưởng nghiêm trọng tới sức khỏe người, kéo theo gánh nặng kinh tế xã hội nhằm kiểm soát, điều trị bệnh biến chứng bệnh Khi mắc ĐTĐ, sức đề kháng thể bệnh nhân thường suy giảm, dẫn đến người bệnh có nguy nhiễm trùng cao Trong đó, hội chứng bàn chân đái tháo đường (Diabetic Foot Syndrome – DFS) tổn thương loét da mạn tính biến chứng mạch máu thường gặp bệnh nhân ĐTĐ Các vết loét bệnh nhân ĐTĐ thường khó điều trị (do rối loạn liền thương) thường dẫn đến biến chứng nặng nhiễm trùng toàn thân phải cắt cụt chi để bảo tồn 4,5 Do vậy, nhiều nhóm nghiên cứu Việt Nam giới tiếp tục nghiên cứu phương pháp tiếp cận chữa lành vết thương bệnh nhân ĐTĐ để cải thiện hiệu điều trị, gia tăng chất lượng sống cho người bệnh Các phương pháp điều trị thơng thường băng bó vết thương, liệu pháp tế bào hay liệu pháp oxy bước đầu nghiên cứu cho thấy hiệu việc cải thiện tình trạng mơ vết thương, hỗ trợ trình liền vết thương người mắc ĐTĐ nhiên hiệu chưa cao, chưa gia tăng tác dụng kháng khuẩn, chi phí điều trị tốn cần tiếp tục cải thiện để tối ưu hóa điều trị Trong năm gần đây, plasma lạnh áp suất khí (Cold Atmospheric Plasma – CAP) áp dụng phương pháp điều trị hỗ trợ liền thương, có tính khả thi điều trị vết thương mạn tính, đặc biệt vết thương ĐTĐ Các nghiên cứu in vitro 7, nghiên cứu tiền lâm sàng vết thương mạn tính động vật thử nghiệm bước đầu người 9,10 cho thấy CAP làm giảm số lượng vi khuẩn vết thương, thúc đẩy trình tái tạo mô chữa lành vết thương mà không gây tổn hại mô xung quanh Trên giới số nghiên cứu tiến hành sử dụng phương pháp CAP điều trị vết thương bệnh nhân ĐTĐ số thiết bị phát tia CAP nước sáng chế, nhiên thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng hạn chế số lượng thiết kế nghiên cứu Tại Việt Nam, năm 2019 Bộ Y tế cấp phép cho sử dụng máy PlasmaMed Việt Nam sản xuất cho việc điều trị vết thương da bệnh nhân Theo công bố gần đây, chủ yếu sở y tế dùng CAP cho việc điều trị vết thương phẫu thuật vết bỏng, liệu nghiên cứu hiệu CAP vết thương mạn tính có ĐTĐ cịn hạn chế Do đó, để mở rộng, cung cấp liệu cho việc phát triển, xây dựng phương pháp điều trị an toàn hiệu vết thương ĐTĐ, tiến hành đề tài “Đánh giá kết điều trị tia plasma lạnh áp suất khí với tổn thương da mơ hình chuột cống trắng mắc đái tháo đường – rối loạn lipid” với hai mục tiêu sau: Mơ tả q trình liền vết thương sử dụng CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid Đánh giá sơ kết tái cấu trúc mô da vi thể khử khuẩn CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid ... DƯỢC NGUYỄN THU HÀ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ CỦA TIA PLASMA LẠNH ÁP SUẤT KHÍ QUYỂN VỚI TỔN THƯƠNG DA TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỐNG TRẮNG MẮC ĐÁI THÁO ĐƯỜNG – RỐI LOẠN LIPID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC... pháp điều trị an tồn hiệu vết thương ĐTĐ, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Đánh giá kết điều trị tia plasma lạnh áp suất khí với tổn thương da mơ hình chuột cống trắng mắc đái tháo đường – rối loạn. .. thương sử dụng CAP tổn thương da chuột cống trắng mắc bệnh đái tháo đường – rối loạn lipid 24 3.3 Bước đầu đánh giá kết tái cấu trúc mô da vi thể khử khuẩn CAP tổn thương da chuột cống trắng