PHÂN TÍCH hàm LƯỢNG AFLATOXIN b1 TRONG bắp và đậu PHỘNG

BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN ĐỀ TÀI: PHÂN TÍCH HÀM LƢỢNG AFLATOXIN B1 TRONG BẮP VÀ ĐẬU PHỘNG Giảng viên hƣớng dẫn : THS NGUYỄN THANH NAM Lớp : 01DHTP1 Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Khóa học : 2010-2014 Năm học : 2012-2013 TP Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2012 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN ĐỀ TÀI: PHÂN TÍCH HÀM LƢỢNG AFLATOXIN B1 TRONG BẮP VÀ ĐẬU PHỘNG Giảng viên hƣớng dẫn : THS NGUYỄN THANH NAM Sinh viên thực Lớp : : HUỲNH TẤN ĐẠT NGUYỄN HOÀNG PHÚC NGUYỄN HỮU NHÂN NGUYỄN TẤN PHÚC BIỆN THỊ HỒNG THẮM VÕ MINH TRÍ PHẠM QUỐC HUY NGUYỄN VŨ M.CƢỜNG PHAN HƢNG THỊNH TRẦN VĂN TOÀN 2005100054 2005100031 2005100262 2005100040 2005100062 2008100088 2005100171 2005100150 2005100286 2005100428 01DHTP1 Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Khóa học : 2010-2014 Năm học : 2012-2013 TP Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2012 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC LỜI NÓI ĐẦU DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii CHƢƠNG TỔNG QUAN VỀ ĐỘC TỐ AFLATOXIN 1.1 Tổng quan độc tố aflatoxin 1.2 Điều kiện gây nhiễm bẩn aflatoxin 1.3 Các dạng aflatoxin chuyển hóa chúng CHƢƠNG PHÂN TÍCH HÀM LƢỢNG AFLATOXIN B1 TRONG BẮP VÀ ĐẬU PHỘNG 2.1 Đặt vấn đề 2.2 Các phương pháp xác định aflatoxin B1 2.3 Tổng quan phương pháp sắc ký mỏng 2.3.1 Chuẩn bị sắc ký 2.3.2 Kỹ thuật 2.3.3 Phân tích 2.4 Áp dụng phân tích aflatoxin B1 bắp đậu phộng 2.4.1 Nguyên liệu 2.4.2 Thiết bị hóa chất 2.4.3 Tiến trình 2.4.4 Kết bàn luận 10 2.4.4.1 Tỷ lệ mức độ nhiễm Aflatoxin B1 mẫu phân tích 10 2.4.4.2 So sánh tỉ lệ phát cột IAC cột Silicagel 11 2.4.5 Kết luận khuyến nghị 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO 14 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI MỞ ĐẦU Trong sống đại ngày nay, ý thức vệ sinh an toàn thực phẩm người tiêu dùng nâng cao đáng kể thông qua phương tiện truyền thơng, sách báo, báo đài,…Do đó, ý thức thói quen sử dụng thực phẩm an toàn ngày quan tâm trọng Các chứng rõ ràng nhà hàng, dịch vụ ăn uống, siêu thị ngày trở nên gần gũi quen thuộc với người tiêu dùng Bên cạnh đó, cịn sở sản xuất thực phẩm nhỏ, lẻ, quán ăn lề đường,…vẫn cịn nhiều bất cập vấn đề an tồn thực phẩm chưa quan tâm cách Cùng với lo lắng đó, “Phân tích thực phẩm” công cụ hữu dụng, giúp phân tích, đánh giá mối nguy nguy tiềm ẩn thực phẩm phát ngăn chặn kịp thời Trong tương lai khơng xa, ngành “Phân tích thực phẩm” trở thành phần thiếu, giúp người tự tin dùng thực phẩm mang lại cảm giác an toàn cho người tiêu dùng Đề tài: Phân tích hàm lượng aflatoxin B1 bắp đậu phộng” nhóm chúng tơi triển khai nhằm mục đích xem xét độc tố loại nấm mốc sản phẩm có dầu đậu, vừng, bắp,…Nhằm có nhìn tổng quát hạn chế chúng thực phẩm ngày Dù cố gắng nhiều khó tránh khỏi sai sót, mong nhận góp ý từ Thầy (Cơ) bạn để tiểu luận sau đầy đủ TẬP THỂ NHÓM LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT HPLC High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng cao áp) ML Maximum Level (giới hạn tối đa) RIA Radioimmunoassay (miễn dịch phóng xạ) ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay (miễn dịch enzyme) FDA Food and Drug Amination (Cục dược phẩm thực phẩm Hoa Kỳ) TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký mỏng) IAC Immuno Affinity Chromatography (Sắc ký lực miễn dịch) i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Hàm lƣợng aflatoxin số loại thức ăn chăn nuôi VN Bảng 1.2 Các giới hạn tối đa hàm lƣợng aflatoxin thực phẩm Bảng 1.3 Các giới hạn tối đa (ML) theo quy định Bộ Y tế Việt Nam Bảng 2.1 Hàm lƣợng Aflatoxin B1 mẫu chợ Bà Chiểu Tân Sơn Nhất 11 Bảng 2.2 So sánh tỉ lệ phát Aflatoxin B1 cột IAC Silicagel 12 ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ĐẶT VẤN ĐỀ Lương thực, thực phẩm, đặc biệt nơng sản thóc, gạo, ngơ, khoai, sắn, đậu, đỗ lạc nguồn lượng ni sống lồi người Vì việc nghiên cứu để nâng cao chất lượng nông sản vấn đề tổ chức quốc tế quan khoa học lương thực thực phẩm giới đặc biệt quan tâm Việc nâng cao chất lượng nông sản bao gồm kĩ thuật bảo quản gìn giữ giá trị dinh dưỡng chúng, ngăn chặn chất độc hại nhiễm nơng sản đồng thời chế biến chúng thành thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao Nước ta nước nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm, điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển Do hoạt động mạnh mẽ vi sinh vật có hại gây tổn thất lớn cho nông sản giai đoạn sau thu hoạch, tổn thất gây nên nấm mốc chiếm phần đáng kể Ngoài việc gây tổn thất lượng cho nơng sản nấm mốc cịn sinh độc tố đặc biệt nguy hiểm với sức khoẻ người động vật kinh tế Nấm mốc phát triển lương thực sử dụng chất dinh dưỡng hạt: Protein, glucid, lipit vitamin, chúng tiết độc tố Độc tố aflatoxin Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus Aspergillus moninus tạo độc tố nguy hiểm thường nhiễm nông sản, gây độc cho người gia súc, gây tác dụng cấp tính, gây tổn thương gan (ung thư gan…), gây quái thai, gây đột biến, …thậm chí với liều lượng cao dẫn tới tử vong Trên giới nay, việc nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc độc tố nấm lương thực, thực phẩm vấn đề quan trọng nhằm bảo vệ sức khoẻ người động vật kinh tế Do vậy, có nhiều cơng trình nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc độc tố mốc, biện pháp phòng trừ độc tố mốc lương thực, thực phẩm Giới hạn mức nhiễm aflatoxin tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Tổng quan độc tố aflatoxin GVHD: Ths Nguyễn Thanh Nam CHƢƠNG TỔNG QUAN VỀ ĐỘC TỐ AFLATOXIN 1.1 Tổng quan độc tố aflatoxin Aflatoxin độc tố vi nấm sản sinh tự nhiên số loài Aspergillus, loại nấm mốc, đáng ý Aspergillu flavus vàAspergillus parasiticus Aflatoxin độc tố tác nhân gây ung thư Sau thâm nhập vào thể, aflatoxin gan chuyển hóa thành dạng trung gian epoxit hoạt hóa thuỷ phân trở thành M1 độc Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo aflatoxin 1.2 Điều kiện gây nhiễm bẩn aflatoxin Các loài sinh aflatoxin thuộc chi Aspergillus phân bố rộng tự nhiên Chúng tạo khuẩn lạc gây nhiễm vào hạt trước thu hoạch trình bảo quản Cây chủ dễ bị gây nhiễm Aspergillus sau phơi nhiễm kéo dài môi trường có độ ẩm cao bị tổn thương điều kiện xấu hạn hán Các môi trường sống địa Aspergillus đất, thực vật mục nát ngũ cốc bị giảm sức đề kháng vi sinh vật xâm nhập tất loại chất hữu có điều kiện thuận lợi cho phát triển Điều kiện thuận lợi bao gồm độ ẩm cao (ít 7%) nhiệt độ cao Các loại nông sản thường bị nhiễm aflatoxin ngũ cốc (ngô, kê, lúa miến, gạo, lúa mì), hạt có dầu (lạc, đậu tương, hạt hướng dương, hạt bơng), gia vị Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Tổng quan độc tố aflatoxin GVHD: Ths Nguyễn Thanh Nam (ớt, hạt tiêu đen, rau mùi, nghệ, gừng) loại hạt khác hạt dẻ, dừa… Aflatoxin xuất sữa động vật cho ăn thức ăn nhiễm aflatoxin Bảng 1.1 Hàm lƣợng aflatoxin số loại thức ăn chăn nuôi VN Tên thực phẩm n Hàm lƣợng AF trung bình (ppb) Bắp hạt 25 205 Gạo gạo 22 Đậu nành hạt 50 Cám gạo 29 Khô dầu mè Khô dầu dừa 17 Khô dầu đậu nành 12 Khơ dầu đậu phộng 29 1200 Bột khoai mì lát 40 Thức ăn hỗn hợp 28 105 Hầu tất nguồn bơ lạc thương mại Hoa Kỳ có hàm lượng aflatoxin từ ppb đến 20 ppb cho tiêu dùng trực tiếp, thức ăn dùng để vỗ béo cho bò thịt/lợn/gia cầm giai đoạn cuối chấp nhận mức 300 ppb thực tế thường thấp nhiều mức khuyến cáo an toàn Cục Dược phẩm Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) FDA đưa mức khuyến cáo hàm lượng aflatoxin thực phẩm thức ăn chăn nuôi nhằm bảo vệ sức khoẻ người tiêu dùng sức khoẻ động vật Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Tổng quan độc tố aflatoxin GVHD: Ths Nguyễn Thanh Nam Bảng 1.2 Các giới hạn tối đa hàm lƣợng aflatoxin thực phẩm Hàm lƣợng Tiêu chí (ppb) Đối với ngô loại hạt dùng cho vật nuôi chưa trưởng thành (kể 20 gia cầm chưa trưởng thành) vật nuôi cho sữa dùng cho mục đích khác khơng cơng bố; thức ăn chăn nuôi ngoại trừ ngô bột từ hạt 100 200 300 Đối với ngô loại hạt dùng cho giống vật ni (bị, lợn) gia cầm trưởng thành Đối với ngô loại hạt dùng cho lợn thịt từ 100 pound trở lên Đối với ngô loại hạt dùng cho bị giai đoạn cuối (ví dụ vỗ béo) bột hạt bơng dùng cho bị, lợn gia cầm Bảng 1.3 Các giới hạn tối đa (ML) theo quy định Bộ Y tế Việt Nam ML (microgam/kg) Tiêu chí Đối với Aflatoxin B1 thực phẩm nói chung 15 Đối với Aflatoxin B1, B2, G1, G2 thực phẩm nói chung Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Tổng quan độc tố aflatoxin 0,5 1.3 GVHD: Ths Nguyễn Thanh Nam Đối với Aflatoxin M1 sữa sản phẩm sữa Các dạng aflatoxin chuyển hóa chúng Có 13 dạng aflatoxin khác có tự nhiên Aflatoxin B1 coi dạng độc sản sinh Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Aflatoxin G1 G2 sinh từ A parasiticus Sự có mặt Aspergillus sản phẩm thực phẩm lúc thị mức aflatoxin có hại mà biểu thị cho rủi ro đáng kể sử dụng thực phẩm Aflatoxin M1, M2 thường phát sữa bò cho ăn loại hạt bị nhiễm nấm mốc Các độc tố sản phẩm q trình chuyển hóa gan động vật Tuy nhiên, aflatoxin M1 có mặt sản phẩm lên men Aspergillus parasiticus  Aflatoxin B1 & B2 : sinh Aspergillus flavus A parasiticus  Aflatoxin G1 & G2 : sinh Aspergillus parasiticus  Aflatoxin M1 : chất chuyển hóa aflatoxin B1 người động vật  Aflatoxin M2 : chất chuyển hóa aflatoxin B2 sữa bò cho ăn thức ăn nhiễm aflatoxin  Aflatoxicol Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam CHƢƠNG PHÂN TÍCH HÀM LƢỢNG AFLATOXIN B1 TRONG BẮP VÀ ĐẬU PHỘNG 2.1 Đặt vấn đề Thức ăn gia súc, thực phẩm loại hạt có dầu, thảo dược,…đều có khả nhiễm độc tố nguy hiểm aflatoxin B1 lồi vi nấm điển hình Aspergillus flavus Aspergillus paraciticus gây nên Các aflatoxin tinh thể màu vàng tan số dung môi hữu (clorofoc, methanol, acetone,…) độc tính cao, bền vững với tác nhân hóa lí , bị huỷ nhiệt độ 1200C môi trường kiềm Do cấu trúng hóa học có vịng dihydrofuran (hình 2) nên aflatoxin B1 liên kết với số enzym làm cản trở trao đổi chất dẫn đến tử vong Ngoài ra, aflatoxin B1 cịn tương tác đồng hóa trị với vật chất di truyền (DNA, RNA) gây tổn thương gan gây ung thư gan Với phụ nữ mang thai, hấp thu lượng định dẫn đến di tật thai nhi quái thai, nặng chết non Do đó, việc kiểm tra thực phẩm có nguy nhiễm aflatoxin B1 cần thiết Hình 2.1 Aspergillus flavus 2.2 Các phƣơng pháp xác định aflatoxin B1 Theo tiêu chuẩn Việt Nam, thực phẩm dùng cho người lượng aflatoxin không vượt 10ppb Để phát định lượng aflatoxin, nhóm phương pháp sau:  Nhóm phương pháp hóa lí: sắc kí lớp mỏng, sắc kí lỏng cao áp (HPLC) Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam  Nhóm phương pháp miễn dịch học: miễn dịch phóng xạ (RIA), miễn dịch enzym (ELISA) cột sắc kí lực miễn dịch Đối với phương pháp sắc kí lỏng cao áp, trước phát phải trải qua nhiều thao tác phức tạp chiết lấy aflatoxin từ vật liệu, sau phải đặc trước định lượng nên tốn nhiều thời gian thao tác kĩ thuật, thiết bị đầu tư đắt tiền Với phương pháp ELISA, lại có nhiều hạn chế aflatoxin thường không bám đặc hiệu vào giếng polystirene, khoảng phát hẹp, cần phải có aflatoxin đánh dấu kháng thể đánh dấu, sai số lớn có độ nhạy cao Vì lí đó, tiến hành đề tài: “Xác định hàm lượng độc tố aflatoxin B1 phương pháp sắc kí mỏng sử dụng cột lực miễn dịch cột silicagel” mẫu hay nhiễm đậu phộng bắp với ưu điểm sau:  Cô đặc cột với nồng độ thấp loại bỏ tạp chất ảnh hưởng đến qui trình định lượng  Thời gian tiến hành nhanh, độ nhạy cao, thiết bị đơn giản hóa chất 2.3 Tổng quan phƣơng pháp sắc ký mỏng Sắc kí lớp mỏng (Thin Layer Chromatography - TLC) kĩ thuật sắc kí dùng để tách chất hỗn hợp Phương pháp sắc kí lớp mỏng bao gồm pha tĩnh lớp mỏng chất hấp phụ, thường silica gel, aluminium oxide, cellulose phủ mặt phẳng chất trơ Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích hịa tan dung mơi thích hợp hút lên sắc kí mao dẫn, tách dung dịch thí nghiệm dựa tính phân cực thành phần dung dịch Sắc kí lớp mỏng sử dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực:  Xét nghiệm độ tinh khiết hóa chất phóng xạ dược khoa  Xác định sắc tố tế bào thực vật  Phát thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng thức ăn, Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam  Nhận biết hóa chất chất cho sẵn  Giám sát phản ứng hữu Một số cải tiến kết hợp phương pháp truyền thống để tự động hóa vài bước, làm tăng độ dung giải sắc kí lớp mỏng cho số liệu xác Phương pháp gọi sắc kí lớp mỏng hiệu cao (high performance TLC HPTLC) 2.3.1 Chuẩn bị sắc ký Bản sắc kí làm cách trộn chất hấp phụ, silica gel, với lượng nhỏ chất trơ để kết dính, calcium sulfate (thạch cao), nước Hỗn hợp trải lớp vữa đặc bề mặt chất trơ, thủy tinh, nhơm, nhựa Bản sắc kí để khơ kích hoạt cách nung nóng lò 30 phút nhiệt độ 110 °C Độ dày lớp hấp phụ thường 0.1-0.25 mm cho hóa học phân tích, khoảng 1-2mm cho sắc kí lớp mỏng dự bị Trong kĩ thuật sắc kí bao gồm pha động pha tĩnh 2.3.2 Kỹ thuật Phương pháp tiến hành giống với sắc kí giấy với lợi nhanh hơn, tách hỗn hợp hiệu hơn, có lựa chọn "pha tĩnh" khác Bởi tính đơn giản nhanh, sắc kí lớp mỏng thường dùng để giám sát phản ứng hóa học phân tích chất lượng sản phẩm phản ứng Một vệt nhỏ dung dịch chứa mẫu thử thấm lên sắc kí, khoảng cm từ lên Bản sắc kí sau nhúng vào dung mơi thích hợp, ethanol nước, đặt vào vật chứa có nắp Dung mơi di chuyển lên sắc kí mao dẫn, gặp phải mẫu thử dịch chuyển mẫu thử lên sắc kí Các hợp chất khác hỗn hợp mẫu thử dịch chuyển với tốc độ khác chúng có sức hút khác pha tĩnh, độ tan khác dung mơi Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Các hợp chất tách dựa cạnh tranh chất tan pha động để có chỗ liên kết với pha tĩnh Thí dụ, silica gel dùng pha tĩnh, xem phân cực Cho trước hợp chất có tính phân cực khác nhau, chất có tính phân cực lớn có liên kết với silica gel lớn có khả đẩy pha động khỏi chỗ liên kết Do đó, hợp chất có tính phân cực nhỏ di chuyển lên cao sắc kí (kết hệ số lưu Rf lớn hơn) Nếu pha động thay dung môi phân cực hỗn hợp dung mơi, có khả để đẩy chất tan khỏi chỗ liên kết với silica gel, tất hợp chất sắc kí dịch chuyển lên cao Trên thực tế, dùng hỗn hợp ethyl acetate heptane pha động, tăng thêm ethyl acetate cho hệ số lưu Rf cao cho tất hợp chất sắc kí Thay đổi độ phân cực pha động không làm hợp chất có thứ tự di chuyển ngược lại sắc kí Nếu muốn có thứ tự ngược lại sắc kí, pha tĩnh khơng phân cực sử dụng, C18-chức hóa silicagel Dung mơi thích hợp dùng sắc kí lớp mỏng dung mơi có tính phân cực khác với pha tĩnh Nếu dung môi phân cực dùng để hòa tan mẫu thử pha tĩnh phân cực, vệt nhỏ mẫu thử lan trịn mao dẫn, vệt khác trộn lẫn vào Do đó, để hạn chế lan trịn vệt mẫu, dung mơi sử dụng để hịa tan mẫu thử phải khơng phân cực, phân cực phần, pha tĩnh phân cực, ngược lại 2.3.3 Phân tích Do số hóa chất tách trở nên khơng màu, vài phương pháp sử dụng để quan sát vệt này:  Thông thường, lượng nhỏ chất huỳnh quang, thường maganeseactivated zinc silicate, cho thêm vào chất hấp phụ để quan sát vệt ánh sáng đen (tia cực tím UV254) Lớp hấp phụ tự phát ánh sáng lục, vệt mẫu làm tắt ánh sáng  Hơi Iodine loại thuốc thử cho màu giống Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam  Một số thuốc thử cho màu riêng biệt dùng để nhúng sắc kí vào, phun lên sắc kí  Trong trường hợp chất béo, sắc phổ chuyển qua màng polyvinylidene fluoride (PVDF) sau phân tích sâu hơn, chẳng hạn khối phổ Một trở nên quan sát được, hệ số lưu Rf vệt mẫu xác định cách chia khoảng cách di chuyển hợp chất cho khoảng cách di chuyển dung môi Những số liệu phụ thuộc vào loại dung môi sử dụng loại sắc kí, khơng phải số 2.4 Áp dụng phân tích aflatoxin B1 bắp đậu phộng 2.4.1 Nguyên liệu Bắp hạt đậu phộng lấy từ chợ Bà Chiểu, Chợ Tân Sơn Nhất 2.4.2 Thiết bị hóa chất Thiết bị: + Bột thiết bị chạy sắc kí TLC + Dụng cụ làm khơ gia nhiệt, bình thổi khí, đèn soi + Các silicagel 10 x 10 cm mua từ Merk + Microsylinge Halmilton 10µ + Các dụng cụ thủy tinh cần thiết Hóa chất: Acetonlintril, methanol, benzen (tinh khiết) nước cất + Dung dịch triển khai: Chloroform 18 Benzen 98  ; dung dịch hòa cặn:  Acetone Aceto ln itril2 + Aflatoxin B1 chuẩn 0,5ppm dung dịch hịa cặn 2.4.3 Tiến trình Phân tích thực phẩm Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Cột IAC Bắp hạt+đậu phộng Kết IAC Sắc ký mỏng TLC Cột silicagel Kết silicagel Sơ đồ phân tích hàm lƣợng Aflatoxin B1 cột IAC:  chiết xuất (5g NaCl, 37,5ml nước cất, methanol Mẫu phân tích (25gam)   lọc thường (thu 15 ml cho thêm 15ml nước cất) 87,5ml, thời gian 30 phút)    lọc giấy thủy tinh (thu 45ml dịch lọc)   qua cột IAC (2 giọt/phút)   làm  định lượng TLC khô dịch chiết (trong N2/40 – 500C)  Sơ đồ phân tích hàm lƣợng Aflatoxin B1 cột Silicagel:  Chuẩn bị cột Silicagel  cho 5gam Na2SO4 khan   cho CHCl3 tới ½ ống   cho Sắc ký cột   rửa thành ống 20ml CHCl3   cho từ từ 15gam Na2SO4 khan 10g silicagel    cho CHCl3 chảy tới đỉnh Na2SO4  Tiến hành  chiết xuất (25ml nước cất, 250ml CHCl3, đậy kín Mẫu phân tích (50gam)   lọc thường (thu 50 ml)   cột silicagel (đã chuẩn lắc mạnh 30 phút)   rửa giải tạp (lần 1: 150ml C6H6, lần 2: 150ml (C2H5)2O)   rửa giải bị)   thu dịch Aflatoxin B1 vào bình Aflatoxin B1 (150ml CH3OH : CHCl3 = 3:97)   làm khô với máy cô quay chân không   hòa cặn (2ml CHCl3)   làm cầu   định lượng Aflatoxin B1 khô (trong N2/40 – 500C chân không/400C)  2.4.4 Kết bàn luận 2.4.4.1 Tỷ lệ mức độ nhiễm Aflatoxin B1 mẫu phân tích Phân tích thực phẩm Trang 10 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Bảng 2.1 Hàm lƣợng Aflatoxin B1 mẫu chợ Bà Chiểu Tân Sơn Nhất Cột IAC Cột Silicagel Hàm lƣợng Aflatoxin B1 (ppb) STT Tên mẫu Bắp không phát không phát Bắp Bắp không phát Bắp không phát Bắp không phát không phát Đậu phộng 2,5 Đậu phộng không phát Đậu phộng không phát không phát Đậu phộng 30 25 10 Đậu phộng không phát Nhận xét: theo bảng 3.2, mức độ nhiễm mẫu ≤ 20ppb cột IAC phát mẫu/10 mẫu cột silicagel phát mẫu/10 mẫu Nhìn chung, mức độ nhiễm bắp đậu phộng ≤ 10ppb Như vậy, độ nhạy cột IAC cao so với cột silicagel 2.4.4.2 So sánh tỉ lệ phát cột IAC cột Silicagel Phân tích thực phẩm Trang 11 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Bảng 2.2 So sánh tỉ lệ phát Aflatoxin B1 cột IAC Silicagel Cột IAC Số mẫu nhiễm Tỉ lệ nhiễm (%) Cột Silicagel Số mẫu Tỉ lệ nhiễm nhiễm (%) Mẫu Tổng số mẫu Khách hàng 16 18,75 12,50 Mua chợ 10 70,0 30,0 Ủ ẩm 4 100 100 Tổng 30 14 46,67 30,0 Nhận xét: theo bảng 3.3, cột có IAC độ nhạy phát tốt cột Silicagel 2.4.5 Kết luận khuyến nghị Kết luận: Trong tổng số 34 mẫu thu nhận phân tích phịng Sinh hóa, Cơng ty FCC có 30,77% mẫu nhiễm Aflatoxin B1 với mức độ nhiễm ≤ 20ppb có 10 mẫu nhiễm với mức độ < 50ppb Độ nhạy phát Aflatoxin B1 cột IAC cao so với cột Silicagel Trong 30 mẫu, cột IAC phát 14 mẫu (chiếm 46,67%) cột silicagel phát mẫu (chiếm 30%) Cột silicagel không phát mẫu nhiễm Aflatoxin B1 hàm lượng 2ppb Khuyến nghị: Với phương pháp đơn giản, tốn phổ phát nhạy rộng nên phương pháp dùng cột IAC để phát Aflatoxin B1 sản phẩm nguyên liệu có dầu phương pháp tối ưu Hi vọng phương pháp sớm áp dụng rộng đặc biệt chợ, nguồn thu mua nguyên liệu Phân tích thực phẩm Trang 12 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Phương pháp thử nghiệm số mẫu giới hạn, đề tài cần nghiêu cứu thêm nội dung sau:  Khảo sát thêm số mẫu thuộc nguồn nguyên liệu khác  Khảo sát thêm số khu vực khác  Khảo sát thêm số mẫu thời điểm khác Phân tích thực phẩm Trang 13 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: Ths Nguyễn Thanh Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt (tham khảo chỉnh) [1] Huỳnh Minh Duy, Nguyễn Văn Phú, Xác định hàm lượng độc tố Aflatoxin B1 bắp đậu phộng phương pháp sắc ký mỏng, Khoa công nghệ sau thu hoạch-Đại học Nông lâm TP.HCM, 2010 Tài liệu internet [2] http://afamily.vn/suc-khoe/nam-moc-trong-thuc-pham-nguy-hiem-the-nao20120522042524660.chn [3] http://vi.wikipedia.org/wiki/S%E1%BA%AFc_k%C3%AD Phân tích thực phẩm Trang 14 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam CHƢƠNG PHÂN TÍCH HÀM LƢỢNG AFLATOXIN B1 TRONG BẮP VÀ ĐẬU PHỘNG 2.1 Đặt vấn đề Thức ăn gia súc, thực... Aflatoxin B1 mẫu phân tích Phân tích thực phẩm Trang 10 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chương Phân tích aflatoxin B1 GVHD: ThS Nguyễn Thanh Nam Bảng 2.1 Hàm lƣợng Aflatoxin. .. dung môi Những số liệu phụ thuộc vào loại dung môi sử dụng loại sắc kí, khơng phải số 2.4 Áp dụng phân tích aflatoxin B1 bắp đậu phộng 2.4.1 Nguyên liệu Bắp hạt đậu phộng lấy từ chợ Bà Chiểu, Chợ