XÁC ĐỊNH các KIỂU GEN THỤ THỂ PROLACTIN TRÊN một số GIỐNG HEO CÔNG NGHIỆP BẰNG kỹ THUẬT PCR RFLP

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  ĐỖ MINH TRÍ XÁC ĐỊNH CÁC KIỂU GEN THỤ THỂ PROLACTIN TRÊN MỘT SỐ GIỐNG HEO CÔNG NGHIỆP BẰNG KỸ THUẬT PCR - RFLP LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUN NGÀNH: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC XÁC ĐỊNH CÁC KIỂU GEN THỤ THỂ PROLACTIN TRÊN MỘT SỐ GIỐNG HEO CÔNG NGHIỆP BẰNG KỸ THUẬT PCR - RFLP LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực TS VÕ THỊ TUYẾT ĐỖ MINH TRÍ KS BÙI THỊ TRÀ MI KHÓA: 2002 - 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY DETECTING THE PRESENCE OF GENOTYPES OF PRLR IN PUREBRED YORKSHIRE AND LANDRACE IN BY USING PCR ─ RFLP TECHNIQUE GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor Student Dr VO THI TUYET DO MINH TRI COURSE: 2002 - 2006 HCMC, 9/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƢỚNG DẨN Họ tên sinh viên thực tập: Đỗ Minh Trí Tên luận văn: Xác định diện kiểu gen prolactin receptor số giống heo công nghiệp phƣơng pháp PCR - RFLP Đã hoàn thành luận văn theo yêu cầu giáo viên hƣớng dẫn, ý kiến nhận xét, đóng góp hội đống chấm thi tốt nghiệp Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Giáo viên hƣớng dẫn TS Võ Thị Tuyết KS Bùi Thị Trà Mi iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Với tất lòng thành, đời đời nhớ ơn công lao sinh thành, dƣỡng dục tất cha mẹ dành cho để có đƣợc nhƣ ngày hơm Với tất lịng kính trọng, em xin cảm ơn Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Bộ môn Công Nghệ Sinh Học, tất Quý Thầy Cô giảng dạy truyền thụ kiến thức cho em suốt bốn năm học qua Con xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Thị Tuyết - ngƣời tận tâm hƣớng dẫn, dạy dỗ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập làm khóa luận Trƣờng Đại Học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Em xin chân thành cảm ơn Kỹ sƣ Bùi Thị Trà Mi - Giảng viên Khoa Chăn Nuôi - Thú Y tạo điều kiện giúp đỡ em hồn thành khóa luận Trong lúc thực đề tài này, chúng tơi có đƣợc giúp đỡ tận tình Ban giám đốc Xí nghiệm heo giống Đồng Hiệp, anh chị công nhân viên, kỹ thuật viên tạo điều kiện thuận lợi, cung cấp cho thông tin cần thiết để thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn chị Hƣng, anh Vũ, chị Hạnh, chị Vƣơng, anh Trƣờng, anh chị trung tâm phân tích thí nghiệm hóa sinh Trƣờng Đại Học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn động viên ủng hộ tinh thần cho em suốt thời gian thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn bạn Lê Hồng Chung lớp Chăn ni 28 giúp đỡ thực hiên đề tài Tôi xin cảm ơn bạn lớp DH02SH - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh gắn bó giúp đỡ suốt bốn năm học qua SV: Đỗ Minh Trí iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TĨM TẮT KHĨA LUẬN Đỗ Minh Trí, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 “ Xác định diện kiểu gen Prolactin receptor số giống heo công nghiệp phƣơng pháp PCR-RFLP ” Hội đồng hƣớng dẫn: TS VÕTHỊ TUYẾT KS BÙI THỊ TRÀ MI Gen thụ thể prolactin (PRLR) gen đánh dấu có liên quan đến tính trạng sinh sản heo Từ kết nghiên cứu năm gần giới cho thấy gen thực có ảnh hƣởng đến số đẻ số sống heo Để tiếp tục nghiên cứu vấn đề này, đề tài “Xác định diện kiểu gen Prolactin receptor số giống heo công nghiệp phƣơng pháp PCR-RFLP” đƣợc tiến hành từ ngày tháng năm 2006 đến ngày tháng năm 2006 đàn nái Y, L, D XNCN heo giống Đồng Hiệp Các kết thu đƣợc: + Ở nhóm heo thuộc giống L đƣợc khảo sát, kiểu gen PRLR xuất với tần số kiểu gen BB cao 20/48 (47,46 %), AB 19/20 (35,59%), AA 9/48 (16,95 %) Trên nhóm heo Y, tỷ lệ mẫu thành cơng 11/23 Trong kiểu gen BB chiếm 8/11(72,73 %) mẫu, AB 2/11 (18,18 %), cuối AA 1/11 (9,09 %) + Phân tích mối liên quan kiểu gen giống heo L với suất sinh sản cho thấy nái mang kiểu gen BB có trung bình số ổ cao (11,59 ± 2,83 con/ổ), nái mang kiểu gen AB 11,11 ± 3,31 con/ổ, nái mang kiểu gen AA 10,84 ± 3,06 con/ổ Đây khác biệt có ý nghĩa Có thể nói nái có kiểu gen BB có suất sinh sản cao nái có kiểu gen khác v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ADSTRACT The prolactin receptor gene (PRLR) has been researched for recent years as a gene indicated the traits relevant to reproduction power of sows Researching in 110 purebred sows in Donghiep farm, there had 84 Landrace, 23 Yorkshire, and Duroc The results were the purebred sows had the genotypes of BB, their reproduction power got highest, and this genotype appeared with high frequency, the next was AB, and the last was AA In 84 samples of Landrace, there had 48 samples gave positive (57,14 %), with the positive samples was homozygote BB appeared with high frequency and these sows had high reproduction power (41,67 %), the homozygote AA gave lowest reproduction power (18,75 %), the genotype AB was 39,58 % In 23 samples of Yorkshire, there were 11 positive samples (47,83 %), there were 8/11 samples with homozygote BB (72,73 %), the genotype AB was 2/11 (18,18 %), and the last AA was 1/11 (9,09 %) With totally samples, The Duroc has been assayed and gotten the results well All of almost samples gave homozygote AA (100 %), although quantity of sample was low but this could point out the way to analyze about Duroc Comparison among the reproduction power and the genotype of sows, there were significant association of the PRLR locus with reproduction performance traits Through the results gave above and previous researchs of Vo Thi Tuyet et al (2005), we can foresee to conclude that in purebred sows with the homozygote BB give high reproduction power vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC TRANG Trang tựa Xác nhận giáo viên iii Lời cảm ơn .iv Tóm tắt khóa luận v Abstract vi Mục lục vii Danh sách chữ viết tắt .x Danh sách bảng .xi Danh sách hình xii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Sơ lƣợc tình hình chăn ni heo nái sinh sản Xí nghiệp chăn ni heo Đồng Hiệp .3 2.1.1 Lịch sử Xí nghiệp .3 2.1.2 Vị trí địa lí 2.2 Đặc điểm giống 2.2.1 Heo Yorkshire 2.2.2 Heo Landrace 2.2.3 Heo Duroc 2.3 Năng suất sinh sản 2.4 Những yếu tố ảnh hƣởng đến thành tích sinh sản heo nái 2.5 Giới thiệu vật liệu di truyền .6 2.5.1 Lịch sử nghiên cứu thành tựu di truyền học kỹ thuật gen 2.5.2 Acid nucleic vật liệu di truyền .7 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.5.3 Cấu trúc đặc điểm DNA 2.5.4 Cơ chế tự nhân đôi DNA 2.5.5 Sự biến tính hồi tính DNA .11 2.5.6 Phƣơng pháp tách chiết DNA 11 2.6 Kỹ thuật PCR 11 2.6.1 Nguyên tắc 11 2.6.2 Các yếu tố ảnh hƣởng 12 2.6.2.1 DNA mẫu 12 2.6.2.2 Dung dịch đệm 12 2.6.2.3 Taq DNA polymerase 12 2.6.2.4 Các nucleotide (dNTP) 13 2.6.2.5 Các chu kì phản ứng .13 2.6.2.6 Nhiệt độ pH 13 2.6.2.7 Các vấn đề thƣờng gặp PCR phƣơng pháp khắc phục 14 2.6.2.8 Các enzyme cắt giới hạn .15 2.6.2.9 Ứng dung kỹ thuật PCR 15 2.7 Kỹ thuật PCR-RFLP 16 2.7.1 Nguyên tắc 16 2.7.2 Ứng dụng 16 2.8 Gen prolactin 17 2.8.1 Nguồn gốc cấu tạo 17 2.8.2 Tác dụng prolactin 17 2.8.3 Cơ chế tác động prolactin 17 2.8.4 Gen thụ thể prolactin 18 2.8.5 Tính đa hình gen prolactin 19 2.8.5.1 Tính đa hình gen 19 2.8.5.2 Tính đa hình gen thụ thể prolactin 20 PHẦN III NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Thời gian địa điểm .21 3.2 Đối tƣợng khảo sát 21 3.3 Nội dung thực 21 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.4.1 Vật liệu, dụng cụ, máy móc thiết bị làm thí nghiệm 21 3.4.2 Thu thập mẫu 22 3.4.3 Ly trích DNA .22 3.4.3.1 Ly trích DNA từ mẫu da tai 22 3.4.3.2 Định lƣợng DNA quang phổ kế 23 3.4.3.3 Khuyếch đại mẫu cắt enzyme giới hạn 23 3.4.4.3 Điện di gel agarose 25 3.4.4.4 Đọc kết điện di .26 3.4.4.5 Thu thập số liệu suất .26 3.5 Các tiêu theo dõi 26 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Đánh giá quy trình ly trích DNA từ mẫu da tai .27 4.2 Tỷ lệ thành công phản ứng PCR 28 4.3 Tỷ lệ thành công xử lý enzyme cắt tần số xuất kiểu gen gen thụ thể prolactin 30 4.4 Năng suất sinh sản nái ứng với kiểu gen gen PRLR 32 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 32 Biểu đồ 4.1 Tần số kiểu gen PRLR nái Landrace Biểu đồ 4.2 Tần số kiểu gen PRLR nái Yorkshire Nhìn chung ta thấy kiểu gen BB giống điều chiếm tỷ lệ cao (ở giống heo Landrace 41,67 %, Yorkshire 72,73 %), kiểu gen AB (ở giống heo Landrace 39,58 %, Yorkshire 18,18 %) Trong tần số xuất kiểu gen AA thấp giống ( giống heo Landrace 18,75 %, Yorkshire %), kết hoàn toàn giống nhƣ kết nghiên cứu Bùi Thị Trà Mi (2005) Nghĩa kiểu gen BB xuất với tần số cao nhất, kiểu gen AB thấp kiểu gen AA 4.4 So sánh tính tƣơng quan suất sinh sản thực tỷ lệ xuất kiểu gen nái  Năng suất sinh sản giống heo Y L XNCN heo Đồng Hiệp Bảng 4.4 cho thấy quần thể heo đƣợc khảo sát XNCN heo giống Đồng Hiệp có trung bình tuổi đẻ lứa đầu 380 ngày, số đẻ đạt 11 với trọng lƣợng heo sơ sinh 1,48 kg, trọng lƣợng toàn ổ 14,27 kg Trung bình quần thể số LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 33 sống 9,6 con, số heo cai sữa đạt 6,67 kg/con trọng lƣợng heo cai sữa toàn ổ 61,19 kg/ổ Bảng 4.4 Một số tiêu suất sinh sản giống heo Y L Quần thể Y (n = 23) L (n = 84) Chỉ tiêu STT X ± SD X ± SD X ± SD Tuổi đẻ lứa đầu (ngày) 391 ± 27 378,1 ± 25,8 380,5 ± 26,3 Số đẻ (con) 10 ± 2,83 10,94 ± 2,96 10,75 ± 3 Số sống (con) 9,4 ± 2,67 9,8 ± 2,82 9,62 ± 2,84 1,47 ± 0,24 1,49 ± 0,23 1,48 ± 0,25 13,81 ± 3,98 14,63 ±4 14,27 ± 4,19 8,9 ± 2,4 8,94 ± 2,1 8,87 ± 2,19 6,3 ± 1,95 6,82 ± 1,63 6,67 ± 1,75 58,1 ± 21,4 62,69 ± 19,1 61,19 ± 19,98 Trọng lƣợng heo sơ sinh (kg) Trọng lƣợng heo sơ sinh toàn ổ (kg) Số heo cai sữa (con) Trọng lƣợng heo cai sữa (kg) Trọng lƣợng heo cai sữa toàn ổ (kg) So sánh suất sinh sản nhóm giống Landrace Yorkshire (do số lƣợng heo Duroc q nên khơng xét đến) khơng thấy khác biệt chì tiêu suất sinh sản (P > 0,05) Theo kết thống kê Bùi Thị Trà Mi (2005) tiêu sinh sản giống heo Landrace Yorkshire XNCN lợn giống Đông Á với kết bảng 4.4 rõ ràng giống heo XNCN heo giống Đồng Hiệp có suất sinh sản cao Cụ thể số heo đẻ quần thể heo giống XNCN heo giống Đông Á quần thể heo giống XNCN heo giống Đồng Hiệp 10,75 con,…  Năng suất sinh sản nái ứng với kiểu gen gen PRLR Sau phân tích kiểu gen thống kê số nái ứng với kiểu gen PRLR đợt khảo sát, kết giống heo Landrace có nái có kiểu gen AA, 19 nái có kiểu gen AB, 20 nái có kiểu gen BB Ở giống heo Yorkshire có số lƣợng mẫu ta có kết có nái kiểu gen AA, nái có kiểu gen AB, nái có kiểu gen BB Phân tích tiêu suất sinh sản, chúng tơi có kết nhƣ bảng 4.5 4.6 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 34 Bảng 4.5 Năng suất sinh sản ứng với kiểu gen nái Landrace Kiểu gen Chỉ tiêu Số heo sơ sinh (con/ổ) Số heo sơ sinh sống (con/ổ) Trọng lƣợng heo sơ sinh (kg/con) Trọng lƣợng heo sơ sinh toàn ổ (kg/ổ) X SD X SD X SD X SD AA n=9 10,84 3,06 9,7 3,23 1,48 0,32 14,77ab 4,83 AB n = 19 11,11 3,31 9,67 3,03 1,40 0,29 13,58a 4,32 BB n = 20 11,59 2,83 10,44 2,64 1,50 0,22 15,47bc 3,63 Ý nghĩa P = 0,05 P > 0,05 P < 0,05 P < 0,05 Bảng 4.6 Năng suất sinh sản ứng với kiểu gen nái Yorkshire Kiểu gen Chỉ tiêu Số heo sơ sinh (con/ổ) Số heo sơ sinh sống (con/ổ) Trọng lƣợng heo sơ sinh (kg/con) Trọng lƣợng heo sơ sinh toàn ổ (kg/ổ) X SD X SD X SD X SD AA n=1 8,0 6,93 6,67 5,77 0,92a 0,81 9,23 8,05 AB n=2 10,29 3,95 9,00 3,61 1,46c 0,25 13,09 5,14 BB n=8 10,68 2,70 9,51 2,41 1,46bc 0,18 13,64 3,68 Ý nghĩa P > 0,05 P > 0,05 P < 0,05 P > 0,05 So với kết Vincent (1998) nghiên cứu prolactin dòng heo Large White cho thấy ảnh hƣởng kiểu gen AA số heo sơ sinh số heo sống cao so với kiểu gen AB, BB (trích dẫn Bùi Thị Trà Mi, 2005) Kết phân tích 204 ổ đẻ thuộc 48 nái Landrace có xuất kiểu gen PRLR, kết cho thấy: + Kiểu gen BB cho số đẻ số sống ổ cao kiểu gen lại (11,59 con/ổ 10,44 con/ổ) Kiểu gen AA cho kết thấp (10,84 con/ổ 9,7 con/ổ) Ở kiểu gen BB số đẻ ổ cao, đồng thời trọng lƣợng sơ sinh cao (1,50 kg/con) Kết hoàn toàn giống phân tích 47 ổ đẻ thuộc 11 nái giống Yorkshire Kiểu gen BB cho số ổ cao LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 35 (10,68 con), kiểu gen AB (10,29 con) thấp kiểu gen AA (8,0 con) Số sống cao kiểu gen BB (9,51 con) Trọng lƣợng sơ sinh heo thuộc nái Yorkshire có kiểu gen BB AB cao tƣơng đƣơng (1,46 kg/con), kiểu gen AA có trọng lƣợng sơ sinh thấp (0,92 kg/con) Kết khảo sát heo nái Y, L XNCN heo Đồng Hiệp hoàn toàn phù hợp với kết Bùi Thị Trà Mi (2005) khảo sát Xí nghiệp lợn giống Đơng Á Với kết này, nái Yorkshire Landrace có kiểu gen BB thật đƣợc quan tâm tiêu suất sinh sản kiểu gen cao kiểu gen AA AB LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 36 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận o Tần số xuất kiểu gen PRLR +Cả kiểu gen AA, AB, BB xuất giống heo Landrace Yorkshire, riêng giống heo Duroc phân tích mẫu, nhƣng kết cho kiểu gen AA Kết phân tích thấy kiểu gen AA có tỷ lệ xuất thấp (ở giống heo Landrace 18,75 %, Yorkshire %) kiểu gen BB xuất với tần số cao (ở giống heo Landrace 41,67 %, Yorkshire 73 %), kiểu gen AB chiếm 39,58 % giống Landrace 18 % giống Yorkshire o Ảnh hƣởng kiểu gen lên suất sinh sản + Kiểu gen BB giống heo Landrace tần số cao, cho suất sinh sản cao, ƣu vƣợt trội so với kiểu gen AA, AB Ở giống heo Yorkshire vậy, nhƣng số lƣợng mẫu phân tích chƣa nhiều nên chƣa có kết luận + Ở giống heo Landrace, 3/4 tiêu có khác biệt có ý nghĩa là: số heo sơ sinh, trọng lƣợng heo sơ sinh, trọng lƣợng heo sơ sinh tồn ổ Sự khác biệt có ý nghĩa thể chổ: nái có kiểu gen BB có số heo sơ sinh 11,59 con, nái có kiểu gen AA 10,84 con, kiểu gen AB 11,11 con; Ở tiêu trọng lƣợng heo sơ sinh nái có kiểu gen BB 1.5 kg/con, cịn AA 1,48 kg/con, AB 1,41 kg/con; Còn tiêu lƣợng heo sơ sinh tồn ổ nái có kiểu gen BB 15,47 kg/ổ, cịn kiểu gen AA 14,77 kg/ổ, kiểu gen AB 13,74 kg/ổ + Chỉ tiêu số heo sơ sinh sống (ở nái Landrace) nái có kiểu gen BB 10,44 con, kiểu gen AA 9,7 con, kiểu gen AB 9,67 Kiểu gen BB chiếm ƣu nhƣng khác biệt khơng có ý nghĩa ( P >0,05) 5.2 Đề nghị - Khi phân tích gen PRLR heo nên lấy mẫu từ da tai - Số lƣợng mẫu chạy PCR khơng nhiều đề nghị thiết kế cặp mồi khác chuyên biệt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 37 - Chạy nhiều mẫu da tai giống heo Landrace Yorkshire XNCN heo giống Đồng Hiệp để thấy rõ khác biệt của suất sinh sản nái ứng với kiểu gen - Số lƣợng mẫu giống heo Duroc ít, nhƣng kết chạy tốt, bƣớc đầu cho thấy quy trình phù hợp để phát PRLR giống heo Duroc Chúng ta cần chạy nhiều mẫu để đánh giá suất sinh sản ứng với kiểu gen PRLR - Tiếp tục phân tích nái giống trại heo khác để thấy rõ khác biệt kiểu gen PRLR LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang, 2004 Di truyền phân tử Nhà xuất Thành phố Hồ Chí Minh Đồn Ngun Đức, 2005 Khảo sát sức sinh sản heo nái lai từ hai giống heo Yorkshire, Landrace Xí nghiệp chăn ni heo Đồng Hiệp Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Chăn Ni, Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Việt nam Nguyễn Tuấn Kiệt, 2005 Ứng dụng kỹ thuật PCR - RFLP xác định kiểu gen thụ thể prolactin giống heo Yorkshire Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ Sinh học, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Việt nam Nguyễn Thị Lang, 2002 Phƣơng pháp nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất Nông nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Bùi Thị Trà Mi, 2005 Ứng dụng kỹ thuật PCR - RFLP để phát gen thụ thể prolactin giống heo Yorkshire, Landrace Xí nghiệp lợn giống Đơng Á Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Chăn nuôi - Thú y, Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Việt nam Khuất Hữu Thành, 2003 Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội TIẾNG NƢỚC NGOÀI Birgitte T.T.M van rens, Tette van der Lende, 2002 Litter size and piglet traits of gigts with different prolactin receptor genotypes Animal Breeding and Genetics Group, WIAS, Wageningen University, P O Box 338, 6700 AH Wageninge, The Netherlands Drogemuller C, H Hamann, O Distl, 2001 Candidate gene markers for litter size in different German pig lines Institute of Animal Breeding and Genetics, School of Veterinary Medicine Hannover, Bünteweg 17 p, 30559 Hannover, Germany LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 39 Ernst M, J Kuciel, T Urban, 2003 Analysis of genetic variation of eight candidate genes in two wild boar subspecies Department of genetics, Department of Forest protection and game Management, Mendel University of Agriculture and Forestry, brno, Czech Republic Kmieć M, A Dybus, A Terman, (2001) Prolactin receptor gene polymorphism and its association with litter size in polish landrace Arch Tierz., Dummerstorf Linville R C, D Pomp, R K Johnson, M F Rothschild, 2001 Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovolation rate in swine Department of Animal Science, University of Nebraska, Lincoln 68583 and Separment of Animal Science, Iowa State University, Ames 50011- 3150 Putnová L, A Knoll, J Dvořák, S Čepica, 2001 A new HpaII PCR – RELP within the porcine prolactin (PRLR) gene and study of its effect on litter size and number of teats Mendel University of Agriculture and Forestry Brno, Department of Genetics, Brno, Crzech Republic and Institute of Animal Physiology and genetics, Academy of Sciences of the Crzech Republic, Liběchov, Crzech Republic TÀI LIỆU TỪ CÁC TRANG WEB http://www.journals.elsevierhealth.com/periodicals/the/issues?Vol=57 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/clust.cgi?ORG=Hs&CID=1905&MAX EST=1101 http://www.blackwell-synergy.com/doi/full/10.1111/j.1439-0388.2005.00547.x http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_pdf&pid=S141395962003000500008&lng=en&nrm=iso&tlng=pt http://www.rndsystems.com/molecule_detail.aspx?m=2012 http://www.hprd.org/protein/01457?selectedtab=SUMMARY LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC Trên toàn ổ Bảng phân tích ANOVA số đẻ (SCDR) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 93.50 4021.44 4114.94 Mean 10.463 9.957 11.046 11.315 MS 31.17 8.76 StDev 2.685 3.659 3.344 2.812 2.960 F 3.56 P 0.014 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) ( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ 9.60 10.40 11.20 Bảng phân tích ANOVA số sống (SCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 73.68 3662.93 3736.61 Mean 9.498 8.766 9.621 10.161 MS 24.56 7.98 StDev 2.608 3.725 3.066 2.596 2.825 F 3.08 P 0.027 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ 8.00 8.80 9.60 10.40 Bảng phân tích ANOVA số cai sữa (SCCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 456 459 N 205 46 87 122 Pooled StDev = SS 11.80 2203.11 2214.91 Mean 8.863 8.413 8.989 8.959 2.198 MS 3.93 4.83 StDev 2.190 2.729 2.054 2.087 F 0.81 P 0.487 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( -* -) ( -* ) ( * ) ( -* -) -+ -+ -+ -+8.00 8.50 9.00 9.50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng sơ sinh tồn ổ (TLSSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 145.4 7970.3 8115.7 Mean 14.402 13.323 13.533 14.921 MS 48.5 17.4 StDev 3.951 5.595 4.360 3.729 4.167 F 2.79 P 0.040 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( * -) -+ -+ -+ 13.0 14.0 15.0 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng heo sơ sinh (TLSSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 61.5 18565.2 18626.7 Mean 2.185 1.455 1.400 1.491 MS 20.5 40.4 StDev 9.535 0.369 0.283 0.211 6.360 F 0.51 P 0.678 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( * ) ( * -) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+-0.0 1.0 2.0 3.0 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa toàn ổ (TLCSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 2218 182189 184407 Mean 61.16 55.10 63.24 62.13 19.92 MS 739 397 StDev 20.18 22.76 18.03 19.62 F 1.86 P 0.135 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( * -) ( * -) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ -50.0 55.0 60.0 65.0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa heo (TLCSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 459 462 N 205 47 87 124 Pooled StDev = SS 16.28 1393.20 1409.47 Mean 6.661 6.161 6.863 6.752 MS 5.43 3.04 StDev 1.666 2.292 1.448 1.815 1.742 F 1.79 P 0.149 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * ) ( -* -) ( * -) ( -* -) -+ -+ -+ 6.00 6.50 7.00 Trên giống heo Landrace Bảng phân tích ANOVA số đẻ (SCDR) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 68.50 2978.35 3046.85 Mean 10.490 10.838 11.112 11.586 MS 22.83 8.63 StDev 2.749 3.060 3.307 2.831 2.938 F 2.64 P 0.049 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) ( * ) ( * -) -+ -+ -+ 10.50 11.20 11.90 Bảng phân tích ANOVA số sống (SCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 51.42 2708.89 2760.31 Mean 9.483 9.703 9.675 10.437 2.802 MS 17.14 7.85 StDev 2.646 3.231 3.035 2.636 F 2.18 P 0.090 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+9.10 9.80 10.50 11.20 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA số cai sữa (SCCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 344 347 N 145 36 80 87 Pooled StDev = SS 4.47 1475.27 1479.73 Mean 8.814 9.139 9.012 9.000 MS 1.49 4.29 StDev 2.170 1.930 2.009 2.012 2.071 F 0.35 P 0.791 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( * -) ( * ) -+ -+ -+ 8.80 9.20 9.60 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng sơ sinh toàn ổ (TLSSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 152.3 5807.0 5959.3 Mean 14.473 14.765 13.572 15.468 MS 50.8 16.8 StDev 4.045 4.832 4.321 3.634 4.103 F 3.02 P 0.030 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( * -) ( -* ) ( * ) ( * -) + -+ -+ -+-13.0 14.0 15.0 16.0 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng heo sơ sinh (TLSSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 87.1 18519.2 18606.4 Mean 2.467 1.475 1.394 1.504 7.327 MS 29.0 53.7 StDev 11.336 0.322 0.286 0.222 F 0.54 P 0.654 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.5 3.0 4.5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa toàn ổ (TLCSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 522 126332 126854 Mean 62.00 60.26 63.49 64.14 MS 174 366 StDev 20.35 20.01 18.03 17.59 19.14 F 0.48 P 0.700 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( -* -) ( -* ) ( * -) ( -* -) -+ -+ -+ -+56.0 60.0 64.0 68.0 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa heo (TLCSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 345 348 N 145 37 80 87 Pooled StDev = SS 7.25 918.82 926.07 Mean 6.790 6.471 6.854 6.991 MS 2.42 2.66 StDev 1.633 2.033 1.493 1.563 1.632 F 0.91 P 0.437 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( * -) ( * ) ( * ) ( * -) + -+ -+ -+ -6.00 6.40 6.80 7.20 Trên giống heo Yorkshire Bảng phân tích ANOVA số đẻ (SCDR) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 20.14 833.94 854.07 Mean 10.400 8.000 10.286 10.676 2.845 MS 6.71 8.10 StDev 2.546 6.928 3.946 2.698 F 0.83 P 0.481 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+ -5.0 7.5 10.0 12.5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA số cai sữa (SCCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 101 104 N 60 35 Pooled StDev = SS 11.44 594.70 606.13 Mean 8.983 7.000 8.714 8.857 MS 3.81 5.89 StDev 2.251 6.083 2.690 2.290 2.427 F 0.65 P 0.586 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * ) ( -* -) ( -* ) ( -* -) -+ -+ -+ 6.0 8.0 10.0 Bảng phân tích ANOVA số sống (SCS) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 25.06 732.84 757.91 Mean 9.533 6.667 9.000 9.514 MS 8.35 7.11 StDev 2.534 5.774 3.606 2.411 2.667 F 1.17 P 0.323 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( -* ) ( * -) ( -* -) ( * -) + -+ -+ -+ -4.0 6.0 8.0 10.0 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng sơ sinh toàn ổ (TLSSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 78.1 1602.0 1680.1 Mean 14.229 9.233 13.086 13.635 3.944 MS 26.0 15.6 StDev 3.741 8.053 5.137 3.682 F 1.67 P 0.177 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( -* ) ( -* -) -+ -+ -+ 7.0 10.5 14.0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng heo sơ sinh (TLSSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 0.9661 5.2645 6.2306 Mean 1.5030 0.9233 1.4643 1.4595 MS 0.3220 0.0511 StDev 0.2025 0.8053 0.2511 0.1803 0.2261 F 6.30 P 0.001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -(-*-) ( * -) ( -* ) ( *-) + -+ -+ -0.90 1.20 1.50 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa tồn ổ (TLCSTO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 1154 47516 48670 Mean 59.12 39.50 60.39 57.40 MS 385 461 StDev 19.79 36.51 19.17 23.30 21.48 F 0.83 P 0.478 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( *-) ( * -) ( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 20 40 60 80 Bảng phân tích ANOVA trọng lƣợng cai sữa heo (TLCSCO) với kiểu gen (KG) Source KG Error Total Level 11 12 22 DF 103 106 N 60 37 Pooled StDev = SS 23.37 379.19 402.56 Mean 6.349 3.730 6.969 6.191 1.919 MS 7.79 3.68 StDev 1.718 3.366 0.823 2.226 F 2.12 P 0.103 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( *-) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 2.0 4.0 6.0 8.0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC XÁC ĐỊNH CÁC KIỂU GEN THỤ THỂ PROLACTIN TRÊN MỘT SỐ GIỐNG HEO CÔNG NGHIỆP BẰNG KỸ THUẬT PCR - RFLP LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng... sinh sản, tầng số xuất gen thụ thể prolactin heo nái Yorkshire, Landrace, Duroc 3.3 Nội dung thực  Xác định diện gen thụ thể prolactin heo giống  Xác định tần số xuất kiểu gen prolactin receptor... luanvanchat@agmail.com 18 2.8.4 Gen thụ thể prolactin Cùng với phát gen thụ thể estrogen, gen halothan Ngƣời ta phát gen thụ thể prolactin Gen đƣợc nghiên cứu nhƣ gen dự tuyển công tác chọn giống dòng heo: Large