Nghiên cứu tác động của fluoxetine đến nồng độ cAMP, progesterone và testosterone trong tế bào HEK293 khi kích thích bởi hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TAO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN NGUYỄN QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETINE ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP, PROGESTERONE VÀ TESTOSTERONE TRONG TẾ BÀO HEK293 KHI KÍCH THÍCH BỞI hFSH TÁI TỔ HỢP CHUỖI ĐƠN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Bình Định - Năm 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TAO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN NGUYỄN QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETINE ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP, PROGESTERONE VÀ TESTOSTERONE TRONG TẾ BÀO HEK293 KHI KÍCH THÍCH BỞI hFSH TÁI TỔ HỢP CHUỖI ĐƠN Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Mã số: 8420114 Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực hoàn thành luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Quỳnh Nga LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc đến q Thầy Cơ Ban giám hiệu Trường Đại học Quy Nhơn, quý Thầy Cô trường tạo điều kiện, dạy dỗ suốt trình học tập trường Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp tạo điều kiện tốt nhất, quan tâm, hướng dẫn nhiệt tình nhất, tạo động lực lớn giúp tơi vượt qua khó khăn q trình hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn quý Thầy Cô Học viện Quân Y, Hà Nội hết lòng giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi suốt q trình nghiên cứu thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Quỹ Đổi sáng tạo Vingroup (VINIF) tài trợ kinh phí cho chúng tơi thực đề tài nghiên cứu Cuối xin gởi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, người thân tập thể lớp Sinh học thực nghiệm K23 động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Do thời gian thực hiểu biết thân có hạn nên luận văn khó tránh khỏi sai sót Tơi mong nhận lời góp ý, bảo Thầy Cơ để hồn thiện luận văn Quy Nhơn, ngày 20 tháng năm 2022 Tác giả luận văn Nguyễn Quỳnh Nga MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Những đóng góp đề tài NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Fluoxetine 1.2 cAMP chế hình thành tế bào 1.2.1 cAMP chế hình thành tế bào 1.2.2 Adenylate cyclase vai trò hình thành tế bào 1.3 Hormone kích nỗn bào tố ( hFSH) 13 1.3.1 Tổng quan hormone kích nỗn bào tố FSH 13 1.3.2 Vai trò hormone FSH sinh sản 15 1.4 Progesterone vai trò sinh sản 17 1.4.1 Tổng quan Progesterone 17 1.4.2 Vai trò Progesterone sinh sản 19 1.5 Testosterone vai trò sinh sản 22 1.5.1 Tổng quan Testosterone 22 1.5.2 Vai trò Testosterone sinh sản 24 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị hóa chất đối tượng nghiên cứu 26 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.1.2 Nguyên vật liệu 26 2.1.3 Thiết bị hóa chất 26 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 2.3 Nội dung nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp nuôi cấy tế bào 27 2.4.2 Phương pháp xác định cAMP nội bào 27 2.4.3 Phương pháp đánh giá khả sống tế bào HEK293 28 2.4.4 Phương pháp xác định nồng độ Progesterone 29 2.4.5 Phương pháp xác định nồng độ testosterone 30 2.4.6 Phương pháp xác định mức lượng ATP tế bào 31 2.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 32 3.1 Ảnh hưởng Fluoxetine đến tỷ lệ sống tế bào HEK293 32 3.2 Ảnh hưởng Fluoxetine đến nồng độ cAMP nội bào tác động kích thích hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn 36 3.3 Ảnh hưởng Fluoxetine đến nồng độ ATP tế bào HEK293 40 3.4 Ảnh hưởng Fluoxetine đến trình tạo steroid tế bào HEK293 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 50 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (BẢN SAO) DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT TỪ VIẾT TẮT TỪ ĐẦY ĐỦ AC adenylyl cyclase ACs Adenylyl cyclases ACTH Adrenocorticotropic hormone ART assisted reproductive technology cAMP cyclic Adenosine Mono Photphate ATP Adenosine triphosphate CG chorionic gonadotropin CRP catabolite reactive protein CYP2D6 cytochrome P450 2D6 10 DNA Deoxyribonucleic acid 11 FSH Follicle Stimulating Hormone 12 FSHR The follicle-stimulating hormone receptor 13 GPCR G protein-coupled receptor 14 GPCRs G-protein coupled receptors 15 GnRH Gonadotropin-releasing hormone 16 hFSH Human follicle-stimulating hormone 17 HEK293 293 Human Embryonic Kidney 293 18 LH luteinizing hormone 19 MC4Rs Melanocortin-4 receptors; 20 PKA protein kinase A 21 SSRIs Selective serotonin reuptake inhibitors DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Số hiệu bảng 3.1 Tỷ lệ tế bào HEK293 sống theo nồng độ Fluoxetine Trang 32 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu hình Tên hình Trang 1.1 Cơng thức hóa học Fluoxetine 1.2 Tố chức chức lộ trình tín hiệu cAMP 1.3 Các cấu trúc đại diện AC 10 1.4 Cấu trúc domain adenylyl cyclase (AC) 11 1.5 Cấu trúc mơ cơng thức hóa học 14 hormone FSH 1.6 Mơ hình cấu trúc phân tử cấu trúc không gian 19 progesterone 1.7 Mơ hình cấu trúc khơng gian cấu trúc phân tử 24 testosterone 2.1 Cơ chế hoạt động Glosensor Luciferin 28 phản ứng tạo cAMP 2.2 Ảnh đại diện xét nghiệm Cell Titer Blue với 29 tế bào HEK293 2.3 Cơ chế phản ứng phát quang Lucifenin 31 CellTiter-Glo 2.0 xúc tác enzyme luciferase ion Mg2+ 3.1 Ảnh hưởng Fluoxetine đến khả sống 33-34 sót tế bào HEK293 3.2 Hình ảnh tế bào HEK293 tế bào sau nhuộm thuốc thử phát huỳnh quang Cell Titer Blue 35 3.3 Biểu tín hiệu cAMP tác động kích 37 thích r-hFSH sau 60 phút ủ tế bào với Fluoxetine nồng độ khác 3.4 Biểu tín hiệu cAMP tác động kích 38 thích r-hFSH sau phút ủ tế bào với Fluoxetine nồng độ khác 3.5 Ảnh hưởng Fluoxetine đến nồng độ ATP 41 tế bào HEK293 3.6 Ảnh hưởng Fluoxetine đến sản xuất 44 progesterone kích thích hFSH HEK293 3.7 Ảnh hưởng Fluoxetine đến sản xuất testosterone kích thích hFSH HEK293 45-46 53 protein controls vibrio cholerae gene expression in response to host colonizationm Bio, [19] McDonough KA, Rodriguez A (2011) The myriad roles of cyclic AMP in microbial pathogens: from signal to sword Nat Rev Microbiol, 10: 2738 [20] Ahuja N, Kumar P, Bhatnagar R (2004) The adenylate cyclase toxins Crit Rev Microbiol, 30: 187-196 [21] Drum CL, Yan SZ, Bard J, Shen YQ, Lu D, Soelaiman S, Grabarek Z, Bohm A, Tang WJ (2002) Structural basis for the activation of anthrax adenylyl cyclase exotoxin by calmodulin Nature, 415: 396-402 [22] Guo Q, Shen Y, Lee Y-S, Gibbs CS, Mrksich M, Tang W-J (2005) Structural basis for the interaction of Bordetella pertussis adenylyl cyclase toxin with calmodulin EMBO J, 24: 3190-3201 [23] Belyy A, Raoux-Barbot D, Saveanu C, Namane A, Ogryzko V, Worpenberg L, David V, Henriot V, Fellous S, Merrifield C, Assayag E, Ladant D, Renault L, Mechold U (2016) Actin activates Pseudomonas aeruginosa ExoY nucleotidyl cyclase toxin and ExoY like effector domains from MARTX toxins Nat Commun, 7, 13582 [24] Khanppnavar B, Datta S (2018) Crystal structure and substrate specificity of ExoY, a unique T3SS mediated secreted nucleotidyl cyclase toxin from Pseudomonas aeruginosa Biochim Biophys Acta (BBA), 1862: 2090-2103 [25] Belyy A, Mechold U, Renault L, Ladant D (2018) ExoY, an actinactivated nucleotidyl cyclase toxin from P aeruginosa: a minireview Toxicon, 149: 65-71 54 [26] Bassler J, Schultz JE, A, Lupas AN (2018) Adenylate cyclases: receivers, transducers, and generators of signals Cell Signal, 46: 135-144 [27] Lory S, Wolfgang M, Lee V, Smith R (2004) The multi-talented bacterial adenylate cyclases Int J Med Microbiol, 293: 479-482 [28] Fulcher NB, Holliday PM, Klem E, Cann MJ, Wolfgang MC (2010) The Pseudomonas aeruginosa Chp chemosensory system regulates intracellular cAMP levels by modulating adenylate cyclase activity Mol Microbiol, 76: 889-904 [29] Topal H, Fulcher NB, Bitterman J, Salazar E, Buck J, Levin LR, Cann M, Wolfgang MC, Steegborn C (2012) Crystal structure and regulation mechanisms of the cyab adenylyl cyclase from the human pathogen Pseudomonas aeruginosa J Mol Biol, 416: 271-286 [30] Shenoy AR, Visweswariah SS (2006) Mycobacterial adenylyl cyclases: biochemical diversity and structural plasticity FEBS Lett, 580: 33443352 [31] Agarwal N, Lamichhane G, Gupta R, Nolan S, Bishai WR (2009) Cyclic AMP intoxication of macrophages by a Mycobacterium tuberculosis adenylate cyclase Nature, 460: 98-102 [32] Dias JA, Cohen BD, Lindau-Shepard B, Nechamen CA, Peterson AJ, Schmidt A (2002) Molecular, structural, and cellular biology of follitropin and follitropin receptor Vitam Horm; 64: 249–322 [33] Simoni M, Gromoll J, Nieschlag E (1997) The follicle-stimulating hormone receptor: biochemistry, molecular biology, physiology, and pathophysiology Endocr Rev, 18: 739–773 [34] Pierce JG, Parsons TF (1981) Glycoprotein hormones: structure and function Annu Rev Biochem, 50: 465–495 55 [35] Wu H, Lustbader JW, Liu Y, Canfield RE, Hendrickson WA (1994) Structure of human chorionic gonadotropin at 2.6 Å resolution from MAD analysis of the selenomethionyl protein Structure, 2: 545–558 [36] Lapthorn AJ, Harris DC, Littlejohn A, Lustbader JW, Canfield RE, Machin KJ, Morgan FJ, Isaacs NW (1994) Crystal structure of human chorionic gonadotropin Nature, 369: 455–461 [37] Fox KM, Dias JA, Van Roey P (2001) Three-dimensional structure of human follicle-stimulating hormone Mol Endocrinol, 15: 378–389 [38] Themmen APN, Huhtaniemi IT (2000) Mutations of gonadotropins and gonadotropin receptors: elucidating the physiology and pathophysiology of pituitary-gonadal function Endocr Rev, 21: 551– 583 [39] Ascoli M, Fanelli F, Segaloff DL (2002) The lutropin/choriogonadotropin receptor, a 2002 perspective Endocr Rev, 23: 141–174 [40] Szkudlinski MW, Fremont V, Ronin C, Weintraub BD (2002) Thyroidstimulating hormone and thyroid-stimulating hormone receptor structure-function relationships Physiol Rev, 82: 473–502 [41] Hussein TS, Thompson JG, Gilchrist RB (2006) Oocyte-secreted factors enhance oocyte developmental competence Dev Biol, 296: 514–521 [42] Foote WD, Thibault C (1969) Recherches experimentales sur la maturation in vitro des ovocytes de truie et de de veau Ann Biol Anim Biochim Biophys, 9: 329–349 [43] Wide L, Eriksson K, Sluss PM, Hall JE (2009) Serum half-life of pituitary gonadotropins is decreased by sulfonation and increased by sialylation in women J Clin Endocrinol Metab, 94:,958–964 56 [44] Lombardi A, Andreozzi C, Pavone V, Triglione V, Angiolini L, Caccia P (2013) Evaluation of the oligosaccharide composition of commercial follicle stimulating hormone preparations Electrophoresis, 34: 2394– 2406 [45] Ulloa-Aguirre A, Timossi C, Barrios-de-Tomasi J, Maldonado A, Nayudu P (2003) Impact of carbohydrate heterogeneity in function of folliclestimulating hormone: studies derived from in vitro and in vivo models Biol Reprod, 69: 379–389 [46] de Vitt UA, Kloosterboer HJ, Rose UM, Mulders JW, Kiesel PS, Bete S, Nayudu PL (1998) Isoforms of human recombinant follicle-stimulating hormone: comparison of effects on murine follicle development in vitro Biol Reprod, 59: 854–861 [47] Wide L, Naessén T, Sundström-Poromaa I, Eriksson K (2007) Sulfonation and sialylation of gonadotropins in women during the menstrual cycle, after menopause, and with polycystic ovarian syndrome and in men J Clin Endocrinol Metab, 92: 4410–4417 [48] Zambrano E, Olivares A, Mendez JP, Guerrero L, Díaz-Cueto L, Veldhuis JD, Ulloa-Aguirre A (1995) Dynamics of basal and gonadotropinreleasing hormone-releasable serum follicle-stimulating hormone charge isoform distribution throughout the human menstrual cycle J Clin Endocrinol Metab, 80: 1647–1656 [49] Wide L, Eriksson K (2013) Dynamic changes in glycosylation and glycan composition of serum FSH and LH during natural ovarian stimulation Ups J Med Sci, 118: 153–164 [50] Anserini P, Costa M, Remorgida V, Venturini PL (2000) A prospective, randomized, controlled clinical study of a new subcutaneous, purified, urinary FSH preparation for controlled ovarian hyperstimulation in in vitro fertilization Gynecol Endocrinol, 14: 75–80 57 [51] Pang SC (2005) A pen injection device for self-administration of recombinant follicle-stimulating hormone for fertility treatments Expert Rev Med Devices, 2: 27–32 [52] Pierce KL, Premont RT, Lefkowitz RJ (2002) Seven-transmembrane receptors Nat Rev Mol Cell Biol, 3: 639–650 [53] Simoni M, Gromoll J, Nieschlag E (1997) The follicle-stimulating hormone receptor: Biochemistry, molecular biology, physiology, and pathophysiology Endocr Rev, 18: 739–773 [54] Tao YX, Segaloff DL (2009) Follicle stimulating hormone receptor mutations and reproductive disorders Prog Mol Biol Transl Sci, 89: 115–131 [55] Rastrelli G, Corona G, Mannucci E, Maggi M (2014) Factors affecting spermatogenesis upon gonadotropin-replacement therapy: A metaanalytic study Andrology, 2: 794–808 [56] Casarini L, Santi D, Brigante G, Simoni M (2018) Two Hormones for One Receptor: Evolution, Biochemistry, Actions, and Pathophysiology of LH and hCG Endocr Rev, 39: 549–592 [57] Santi D, Poti F, Simoni M, Casarini L (2018) Pharmacogenetics of Gprotein-coupled receptors variants: FSH receptor and infertility treatment Best Pract Res Clin Endocrinol Metab; 32: 189–200 [58] Rohayem J, Sinthofen N, Nieschlag E, Kliesch S, Zitzmann M (2016) Causes of hypogonadotropic hypogonadism predict response to gonadotropin substitution in adults Andrology, 4: 87–94 [59] Santi D, De Vincentis S, Alfano P, Balercia G, Calogero AE, Cargnelutti F, Coccia ME, Condorelli RA, Dal Lago A, De Angelis C, Gallo M, Iannantuoni N, Lombardo F, Marino A, Mazzella M, Pallotti F, Paoli 58 D, Pivonello R, Rago R, Rampini M, Salvio G, Simoni M (2020) Use of follicle-stimulating hormone (FSH) for the male partner of idiopathic infertile couples in Italy: Results from a multicentre, observational, clinical practice survey Andrology, 8(3): 637-644 [60] King TL, Brucker MC (2010) “Pharmacology for Women's Health” Jones & Bartlett Publishers, 372- 373 [61] Kumar P, Magon N (2012) Hormones in pregnancy Niger Med J, 53(4): 179-83 [62] Goletiani NV, Keith DR, Gorsky SJ (2007) Progesterone: review of safety for clinical studies Exp Clin Psychopharmacol, 15(5): 427-44 [63] Taraborrelli S (2015) Physiology, production and action of progesterone Acta Obstet Gynecol Scand, 161: 8-16 [64] Reed BG, Carr BR, Feingold KR, Anawalt B, Boyce A, Chrousos G, de Herder WW, Dhatariya K, Dungan K, Hershman JM, Hofland J, Kalra S, Kaltsas G, Koch C, Kopp P, Korbonits M, Kovacs CS, Kuohung W, Laferrère B, Levy M, McGee EA, McLachlan R, Morley JE, New M, Purnell J, Sahay R, Singer F, Sperling MA, Stratakis CA, Trence DL, Wilson DP, editors (2018) The Normal Menstrual Cycle and the Control of Ovulation Endotext [Internet] MDText.com, Inc.; South Dartmouth (MA) [65] Deligdisch L (2000) Hormonal pathology of the endometrium Mod Pathol, 13(3): 285-94 [66] Arab H, Alharbi AJ, Oraif A, Sagr E, Al Madani H, Abduljabbar H, Bajouh OS, Faden Y, Sabr Y (2019) Role of progestogens in threatened and idiopathic recurrent miscarriage Int J Women’s Health, 11: 589-596 [67] Chappell CA, Rohan LC, Moncla BJ, Wang L, Meyn LA, Bunge K, Hillier 59 SL (2014) The effects of reproductive hormones on the physical properties of cervicovaginal fluid Am J Obstet Gynecol, 211(3): 226.e1-7 [68] Kaore SN, Langade DK, Yadav VK, Sharma P, Thawani VR, Sharma R (2012) Novel actions of progesterone: what we know today and what will be the scenario in the future? J Pharm Pharmacol, 64(8): 1040-62 [69] Plant TM, Marshall GR (2001) The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates Endocr Rev, 22(6):764-86 [70] Clark BJ, Prough RA, Klinge CM (2018) Mechanisms of Action of Dehydroepiandrosterone Vitam Horm, 108: 29-73 [71] Kalfa N, Gaspari L, Ollivier M, Philibert P, Bergougnoux A, Paris F, Sultan C (2019) Molecular genetics of hypospadias and cryptorchidism recent developments Clin Genet, 95(1): 122-131 [72] Nguyen TMD, Klett D, Filliatreau L, Combarnous Y (2019) Inhibition by fluoxetine of LH-stimulated cyclic AMP synthesis in tumor Leydig cells partly involves AMPK activation PLoS One ,14 (6), e0217519 [73] Nguyen TMD, Filliatreau L, Klett D, Combarnous Y (2016) Comparative effects of sub-stimulating concentrations of non-human versus human Luteinizing Hormones (LH) or chorionic gonadotropins (CG) on adenylate cyclase activation by forskolin in MLTC cells General and Comparative Endocrinology, 261: 23-30 [74] Dwivedi Y, Pandey GN (2008) “Adenylyl cyclase-cyclic AMP signaling in mood disorders: role of the crucial phosphorylating enzyme protein kinase A” Neuropsychiatr Dis Treat, 4(1): 161-176 [75] Mukherjee J, Das MK, Yang ZY, Lew R (1998) “Evaluation of the 60 binding of the radiolabeled antidepressant drug, 18F-fluoxetine in the rodent brain: an in vitro and in vivo study” Nucl Med Biol, 25: 605610 [76] Curti C, Mingatto FE, Polizello AC, Galastri LO, Uyemura SA, Santos AC (1999) Fluoxetine interacts with the lipid bilayer of the inner membrane in isolated rat brain mitochondria, inhibiting electron transport and F1F0-ATPase activity Mol Cell Biochem, 199, 103-109 [77] Charles E, Hammadi M, Kischel P, Delcroix V, Demaurex N, Castelbou C, Vacher A-M, Devin A, Ducret T, Nunes P, Vacher P (2017) The antidepressant fluoxetine induces necrosis by energy depletion and mitochondrial calcium overload” Oncotarget, 8(2): 3181-3196 [78] Tarasov AI, Griffiths EJ, Rutter GA (2012) Regulation of ATP production by mitochondrial Ca2+ Cell Calcium, 52: 28-35 [79] Spät A, Szanda G, Csordás G, Hajnóczky G (2008) Highand low-calciumdependent mechanisms of mitochondrial calcium signalling Cell Calcium, 44: 51-63 [80] Zoratti M, Szabò I (1995) The mitochondrial permeability transition Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Reviews on Biomembranes, 1241: 139-176 [81] Leist M, Single B, Castoldi AF, Kühnle S, Nicotera P (1997) Intracellular Adenosine Triphosphate (ATP) Concentration: A Switch in the Decision Between Apoptosis and Necrosis The Journal of Experimental Medicine, 185: 1481-1486 [82] Rasola A, Bernardi P (2011) Mitochondrial permeability transition in Ca2+-dependent apoptosis and necrosis Cell Calcium, 50: 222-233 61 [83] De Marchi U, Castelbou C, Demaurex N (2011) Uncoupling Protein (UCP3) Modulates the Activity of Sarco/Endoplasmic Reticulum Ca2+ATPase (SERCA) by Decreasing Mitochondrial ATP Production Journal of Biological Chemistry, 286: 32533-32541 [84] Deak F, Lasztoczi B, Pacher P, Petheӧ GL, Kecskeméti V, Spät A (2000) Inhibition of voltage-gated calcium channels by fluoxetine in rat hippocampal pyramidal cells Neuropharmacology, 39: 1029-1036 [85] Pancrazio JJ, Kamatchi GL, Roscoe AK, Lynch C 3rd (1998) Inhibition of neuronal Na+ channels by antidepressant drugs J Pharmacol Exp Ther, 284: 208-214 [86] Liu JH, Wu ZF, Sun J, Jiang L, Jiang S, Fu WB (2012) Role of AC-cAMPPKA Cascade in Antidepressant Action of Electroacupuncture Treatment in Rats Evid Based Complement Alternat Med, 2012: 932414 [87] Waterman MR (1994) Biochemical diversity of cAMP-dependent transcription of steroid hydroxylase genes in the adrenal cortex J Biol Chem, 269(45): 27783-27786 PHỤ LỤC Kết đo phát quang oxiluciferin tạo cAMP Time 0.65 1.3 1.95 2.6 3.25 3.9 4.55 5.2 5.85 6.5 7.15 7.8 8.45 9.1 9.75 10.4 11.05 11.7 12.35 13 13.65 14.3 14.95 15.6 16.25 16.9 17.55 18.2 18.85 19.5 20.15 20.8 21.45 22.1 22.75 23.4 24.05 24.7 25.35 26 26.65 27.3 27.95 28.6 29.25 29.9 30.55 31.2 113 392 1095 1942 3126 3990 5151 5964 6545 7121 7584 7901 8252 8206 8462 8480 8907 8954 8838 9356 9245 9618 9596 9256 9507 9176 9270 9059 9424 8878 9135 9339 9040 9052 8834 8714 8377 8691 8825 8659 8440 8453 8394 8389 8412 8182 8035 7769 7636 163 622 1335 2378 3356 4280 5242 5920 6706 6852 7398 7769 7866 8028 8321 8023 8411 8427 8736 8846 8822 8839 8830 9042 8776 8592 8509 8464 8648 8616 8449 8054 8339 8277 8296 8151 8140 8206 8089 7638 7674 8042 7686 7548 7696 7352 7138 7346 7261 6,25 130 150 560 544 1226 1199 2308 2173 3391 3386 4397 4495 5375 5514 5954 5932 6898 6840 7320 7826 7645 8198 7941 8284 8447 8699 8464 8545 8808 8879 9010 8858 9188 9415 8945 9214 9392 9673 9250 9361 9172 9348 9587 9948 9529 9651 9903 9681 9674 9955 9396 9599 9511 9545 9488 9175 9470 9460 9137 9595 8823 9415 8934 9305 8847 8835 8659 9240 8993 9062 8662 9113 9128 9022 8649 8909 8599 8719 8495 8913 8310 8511 7940 8686 8595 8297 8077 8198 7888 8111 8001 8202 7890 8223 8071 7929 7671 7862 12,5 147 168 561 660 1253 1476 2374 2589 3510 3686 4237 4885 5343 5892 6171 6597 6473 7279 6816 7534 7616 7945 8301 8372 8419 8261 8093 8562 8218 8581 8491 9023 8853 9163 8497 8817 8671 8766 8850 9206 8726 9108 8471 8859 8496 8589 8652 8406 8851 8210 8310 8538 8278 8512 8651 8242 8428 8362 8080 7823 8121 8113 8073 8125 7903 7827 8109 8202 7636 7420 7599 7659 7601 7563 7275 7409 7394 7441 7108 7237 7226 7111 7374 7562 7162 6948 7280 7127 7101 6998 6807 6973 6822 6847 6435 6556 6894 6839 25 116 339 937 1650 2491 3181 4121 4615 5099 5265 5664 6142 6275 6408 6412 6451 6463 6359 6733 6653 6909 6487 6581 6437 6456 6551 6378 6380 6329 6473 5970 6149 6070 5941 5693 5743 5376 5495 5425 5244 5163 5211 5112 5061 5246 4929 4778 4713 4840 50 164 492 1210 2080 2975 3955 4414 4995 5479 5638 6199 6195 6409 6473 6285 6078 6654 6626 6249 6024 5989 6013 6149 5693 5759 5588 5570 5311 4966 4899 4710 4826 4454 4682 4602 4363 4309 4477 4674 4193 3905 3971 4223 4117 4042 3828 4039 3993 4003 177 369 673 1218 1580 2015 2177 2308 2481 2395 2791 2858 2913 2728 2694 2749 2845 2775 2751 2560 2656 2316 2430 2407 2279 2223 2085 2206 1796 2068 1876 1749 1471 1800 1670 1688 1384 1512 1444 1245 1244 1356 1259 1289 1176 1135 972 1160 1075 100 119 251 563 819 1190 1580 1619 1847 1953 1784 1909 1965 1911 1787 1723 1675 1680 1525 1672 1580 1460 1549 1272 1295 1220 1177 1082 1095 1011 868 927 884 924 885 842 853 737 680 711 634 791 722 730 768 594 704 830 675 645 114 130 240 296 393 433 491 467 456 497 539 433 398 417 465 386 443 370 272 316 311 230 286 226 210 222 252 187 199 206 186 162 179 216 127 118 121 126 136 95 100 88 94 91 110 80 98 90 102 119 131 158 199 199 241 233 235 254 230 248 230 248 244 177 206 144 127 148 168 150 154 157 118 143 106 103 131 117 104 99 134 127 86 113 115 106 94 86 107 69 79 73 97 57 90 72 66 56 31.85 32.5 33.15 33.8 34.45 35.1 35.75 36.4 37.05 37.7 38.35 39 39.65 40.3 40.95 41.6 42.25 42.9 43.55 44.2 44.85 45.5 46.15 46.8 47.45 48.1 48.75 49.4 50.05 50.7 51.35 52 52.65 53.3 53.95 54.6 55.25 55.9 56.55 57.2 57.85 58.5 59.15 59.8 60.45 61.1 7772 7878 7762 7650 7221 7385 7390 7347 7447 7112 7131 7382 7139 6857 7017 6726 6639 6800 6526 6676 6659 6384 6081 6082 6302 6134 6265 5884 5767 5856 5956 5509 5636 5556 5606 5308 5517 5355 5454 5098 5186 5031 5015 5099 4904 4853 7377 7146 7035 6741 6840 6916 6795 6707 6462 6641 6775 6663 6499 6276 6157 6280 6167 6231 6098 6110 5997 6066 5970 5618 5519 5478 5562 5627 5237 5284 5213 5450 5090 5055 5245 4900 4727 4782 4753 4763 4763 4607 4488 4529 4404 4381 7766 7526 7570 7732 7493 6968 6897 7212 6935 7242 6900 6638 6600 6696 6807 6690 6745 6170 6459 6562 6109 6339 6337 6081 5769 5984 5925 5642 5529 5424 5156 5506 5496 5219 5548 5510 5255 5352 5053 5180 4856 4976 4761 4755 4752 4317 7687 7710 7519 7615 7356 7263 7261 7708 7341 6899 7226 7215 6832 6898 6746 6656 6617 6507 6768 6619 6446 6346 6436 6214 6076 5852 5833 5877 5820 5874 5403 5564 5486 5578 5549 5538 5385 5524 5282 5163 4999 5073 5197 4912 4854 4863 6375 6585 6666 6490 6244 6373 6205 6161 5985 6002 5968 5789 5680 5790 5679 5813 5925 5718 5575 5736 5408 5440 5153 5412 5284 5260 5166 5043 4765 4739 4992 4904 4899 4502 4917 4795 4599 4504 4666 4591 4368 4235 4362 4385 4242 4315 6342 6678 6587 6666 6199 6329 6315 6158 5991 5969 5904 5949 6066 5815 6102 5866 5568 5575 5493 5600 5552 5599 5326 5385 5109 5137 5234 5311 5108 5077 4843 5079 4818 4622 4619 4517 4589 4505 4403 4207 4277 4375 4443 4126 4484 4284 4860 4881 4954 4849 4487 4661 4607 4767 4535 4571 4451 4407 4577 4393 4416 4273 4171 4161 4281 3959 4242 3945 3815 3951 3888 3768 3913 3685 3726 3610 3722 3749 3751 3672 3700 3911 3586 3445 3413 3567 3536 3563 3299 3334 3361 3281 3785 3821 3638 3949 3724 3669 3697 3720 3510 3738 3708 3466 3384 3633 3644 3601 3674 3368 3619 3590 3331 3317 3431 3384 3422 3228 3132 3197 3163 3184 3171 3358 3210 2995 3221 3151 3160 2811 2990 3064 2902 2985 2945 3026 2911 2943 1076 1124 994 969 1078 1084 928 796 979 964 937 956 810 955 916 910 922 896 991 927 896 862 893 945 872 913 795 778 808 820 800 725 952 769 859 922 855 946 784 805 795 818 948 736 918 846 650 664 690 625 708 676 657 676 613 728 760 639 637 722 698 741 682 698 658 824 826 965 700 826 687 799 805 708 796 730 907 765 676 816 620 687 733 789 727 694 849 701 782 744 724 715 78 64 68 89 83 91 69 83 109 61 81 72 61 72 62 73 79 56 88 66 82 72 71 70 70 79 56 94 76 89 105 65 97 67 72 78 83 82 67 61 67 64 56 58 84 48 64 71 94 76 83 66 78 81 92 91 70 56 90 59 67 84 72 78 82 59 68 100 74 67 88 72 67 63 66 82 75 73 67 70 76 66 70 64 74 62 56 71 67 68 69 68 Time 6.25µM Ctrl 12.5µM 25µM 50µM 100µM 113 163 130 150 147 168 116 164 177 119 54 52 0.65 392 622 560 544 561 660 339 492 369 251 87 98 1.3 1095 1335 1226 1199 1253 1476 937 1210 673 563 141 166 1.95 1942 2378 2308 2173 2374 2589 1650 2080 1218 819 277 314 2.6 3126 3356 3391 3386 3510 3686 2491 2975 1580 1190 468 374 3.25 3990 4280 4397 4495 4237 4885 3181 3955 2015 1580 616 582 3.9 5151 5242 5375 5514 5343 5892 4121 4414 2177 1619 726 682 4.55 5964 5920 5954 5932 6171 6597 4615 4995 2308 1847 768 698 5.2 6545 6706 6898 6840 6473 7279 5099 5479 2481 1953 892 946 5.85 7121 6852 7320 7826 6816 7534 5265 5638 2395 1784 965 948 6.5 7584 7398 7645 8198 7616 7945 5664 6199 2791 1909 1072 909 7.15 7901 7769 7941 8284 8301 8372 6142 6195 2858 1965 891 922 7.8 8252 7866 8447 8699 8419 8261 6275 6409 2913 1911 1081 991 8.45 8206 8028 8464 8545 8093 8562 6408 6473 2728 1787 888 915 9.1 8462 8321 8808 8879 8218 8581 6412 6285 2694 1723 974 945 9.75 8480 8023 9010 8858 8491 9023 6451 6078 2749 1675 949 850 10.4 8907 8411 9188 9415 8853 9163 6463 6654 2845 1680 1055 958 11.05 8954 8427 8945 9214 8497 8817 6359 6626 2775 1525 939 764 11.7 8838 8736 9392 9673 8671 8766 6733 6249 2751 1672 951 848 12.35 9356 8846 9250 9361 8850 9206 6653 6024 2560 1580 818 745 13 9245 8822 9172 9348 8726 9108 6909 5989 2656 1460 899 683 13.65 9618 8839 9587 9948 8471 8859 6487 6013 2316 1549 901 695 14.3 9596 8830 9529 9651 8496 8589 6581 6149 2430 1272 746 722 14.95 9256 9042 9903 9681 8652 8406 6437 5693 2407 1295 818 693 15.6 9507 8776 9674 9955 8851 8210 6456 5759 2279 1220 798 594 16.25 9176 8592 9396 9599 8310 8538 6551 5588 2223 1177 744 574 16.9 9270 8509 9511 9545 8278 8512 6378 5570 2085 1082 719 556 17.55 9059 8464 9488 9175 8651 8242 6380 5311 2206 1095 830 501 18.2 9424 8648 9470 9460 8428 8362 6329 4966 1796 1011 822 502 18.85 8878 8616 9137 9595 8080 7823 6473 4899 2068 868 716 383 19.5 9135 8449 8823 9415 8121 8113 5970 4710 1876 927 661 446 20.15 9339 8054 8934 9305 8073 8125 6149 4826 1749 884 647 377 20.8 9040 8339 8847 8835 7903 7827 6070 4454 1471 924 620 404 21.45 9052 8277 8659 9240 8109 8202 5941 4682 1800 885 650 445 22.1 8834 8296 8993 9062 7636 7420 5693 4602 1670 842 560 348 22.75 8714 8151 8662 9113 7599 7659 5743 4363 1688 853 578 313 23.4 8377 8140 9128 9022 7601 7563 5376 4309 1384 737 478 297 24.05 8691 8206 8649 8909 7275 7409 5495 4477 1512 680 517 393 24.7 8825 8089 8599 8719 7394 7441 5425 4674 1444 711 517 329 25.35 8659 7638 8495 8913 7108 7237 5244 4193 1245 634 434 367 26 8440 7674 8310 8511 7226 7111 5163 3905 1244 791 439 337 26.65 8453 8042 7940 8686 7374 7562 5211 3971 1356 722 508 323 27.3 8394 7686 8595 8297 7162 6948 5112 4223 1259 730 444 266 27.95 8389 7548 8077 8198 7280 7127 5061 4117 1289 768 415 320 28.6 8412 7696 7888 8111 7101 6998 5246 4042 1176 594 467 303 29.25 8182 7352 8001 8202 6807 6973 4929 3828 1135 704 438 348 29.9 8035 7138 7890 8223 6822 6847 4778 4039 972 830 454 318 30.55 7769 7346 8071 7929 6435 6556 4713 3993 1160 675 407 283 31.2 7636 7261 7671 7862 6894 6839 4840 4003 1075 645 429 286 31.85 7772 7377 7766 7687 6375 6342 4860 3785 1076 650 363 264 32.5 7878 7146 7526 7710 6585 6678 4881 3821 1124 664 409 317 33.15 7762 7035 7570 7519 6666 6587 4954 3638 994 690 355 317 33.8 7650 6741 7732 7615 6490 6666 4849 3949 969 625 414 190 34.45 7221 6840 7493 7356 6244 6199 4487 3724 1078 708 417 332 35.1 7385 6916 6968 7263 6373 6329 4661 3669 1084 676 361 290 35.75 7390 6795 6897 7261 6205 6315 4607 3697 928 657 434 256 36.4 7347 6707 7212 7708 6161 6158 4767 3720 796 676 453 286 37.05 7447 6462 6935 7341 5985 5991 4535 3510 979 613 440 274 37.7 7112 6641 7242 6899 6002 5969 4571 3738 964 728 342 269 38.35 7131 6775 6900 7226 5968 5904 4451 3708 937 760 403 331 39 7382 6663 6638 7215 5789 5949 4407 3466 956 639 470 327 39.65 7139 6499 6600 6832 5680 6066 4577 3384 810 637 496 273 40.3 6857 6276 6696 6898 5790 5815 4393 3633 955 722 387 377 40.95 7017 6157 6807 6746 5679 6102 4416 3644 916 698 388 304 41.6 6726 6280 6690 6656 5813 5866 4273 3601 910 741 447 346 42.25 6639 6167 6745 6617 5925 5568 4171 3674 922 682 402 359 42.9 6800 6231 6170 6507 5718 5575 4161 3368 896 698 476 359 43.55 6526 6098 6459 6768 5575 5493 4281 3619 991 658 481 422 44.2 6676 6110 6562 6619 5736 5600 3959 3590 927 824 473 387 44.85 6659 5997 6109 6446 5408 5552 4242 3331 896 826 419 362 45.5 6384 6066 6339 6346 5440 5599 3945 3317 862 965 338 429 46.15 6081 5970 6337 6436 5153 5326 3815 3431 893 700 465 418 46.8 6082 5618 6081 6214 5412 5385 3951 3384 945 826 485 436 47.45 6302 5519 5769 6076 5284 5109 3888 3422 872 687 481 385 48.1 6134 5478 5984 5852 5260 5137 3768 3228 913 799 505 373 48.75 6265 5562 5925 5833 5166 5234 3913 3132 795 805 420 396 49.4 5884 5627 5642 5877 5043 5311 3685 3197 778 708 473 437 50.05 5767 5237 5529 5820 4765 5108 3726 3163 808 796 488 490 50.7 5856 5284 5424 5874 4739 5077 3610 3184 820 730 430 410 51.35 5956 5213 5156 5403 4992 4843 3722 3171 800 907 517 547 52 5509 5450 5506 5564 4904 5079 3749 3358 725 765 486 443 52.65 5636 5090 5496 5486 4899 4818 3751 3210 952 676 425 588 53.3 5556 5055 5219 5578 4502 4622 3672 2995 769 816 517 495 53.95 5606 5245 5548 5549 4917 4619 3700 3221 859 620 533 451 54.6 5308 4900 5510 5538 4795 4517 3911 3151 922 687 549 450 55.25 5517 4727 5255 5385 4599 4589 3586 3160 855 733 620 437 55.9 5355 4782 5352 5524 4504 4505 3445 2811 946 789 544 507 56.55 5454 4753 5053 5282 4666 4403 3413 2990 784 727 589 506 57.2 5098 4763 5180 5163 4591 4207 3567 3064 805 694 478 586 57.85 5186 4763 4856 4999 4368 4277 3536 2902 795 849 500 420 58.5 5031 4607 4976 5073 4235 4375 3563 2985 818 701 541 494 59.15 5015 4488 4761 5197 4362 4443 3299 2945 948 782 557 522 59.8 5099 4529 4755 4912 4385 4126 3334 3026 736 744 543 508 60.45 4904 4404 4752 4854 4242 4484 3361 2911 918 724 581 475 61.1 4853 4381 4317 4863 4315 4284 3281 2943 846 715 528 563 Những hình ảnh trình thực nghiên cứu tác giả ... với kích hoạt hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn tác động Fluoxetine 3.3 Xác định nồng độ ATP tạo tế bào HEK293 đáp ứng với kích hoạt hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn tác động Fluoxetine 3.4 Xác định nồng độ progesterone. .. DỤC VÀ ĐÀO TAO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN NGUYỄN QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETINE ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP, PROGESTERONE VÀ TESTOSTERONE TRONG TẾ BÀO HEK293 KHI KÍCH THÍCH BỞI hFSH TÁI TỔ HỢP CHUỖI... tế bào HEK293 đáp ứng với kích hoạt hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn với tác động Fluoxetine 3.5 Xác định nồng độ testosterone tạo tế bào HEK293 đáp ứng với kích hoạt hFSH tái tổ hợp chuỗi đơn với tác