Đang tải... (xem toàn văn)
SLEUM LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Trang 2 ---&--- TRẦN THU HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY DÒNG AGS VÀ MKN45 CỦA CAO CHIẾT ETHANOL TỪ CÂY ĐÌA ĐỤM HELICIO
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC & TRẦN THU HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY DÒNG AGS VÀ MKN45 CỦA CAO CHIẾT ETHANOL TỪ CÂY ĐÌA ĐỤM (HELICIOPSIS LOBATA (MERR.) SLEUM) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN, 2021 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC & TRẦN THU HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY DÒNG AGS VÀ MKN45 CỦA CAO CHIẾT ETHANOL TỪ CÂY ĐÌA ĐỤM (HELICIOPSIS LOBATA (MERR.) SLEUM) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 8 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thanh Hương THÁI NGUYÊN, 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là nghiên cứu của tôi và dưới sự hướng dẫn của Cô giáo - TS Lê Thị Thanh Hương Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác Mọi trích dẫn trong luận văn đều ghi rõ nguồn gốc Mọi sự giúp đỡ của các cá nhân và tập thể đều được ghi nhận trong lời cảm ơn Tôi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm về những gì đã cam đoan ở trên Thái Nguyên, ngày 10 tháng 9 năm 2021 Học viên Trần Thu Hiền LỜI CẢM ƠN! Trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài luận văn thạc sĩ chuyên ngành Công nghệ Sinh học - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên, tôi đã nhận được sự ủng hộ, giúp đỡ của các thầy cô giáo, bạn bè và gia đình! Trước tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất đến Cô giáo - TS Lê Thị Thanh Hương - người đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quý báu để tôi có thể hoàn thành luận văn này Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Nguyễn Phú Hùng - Trưởng khoa Công nghệ Sinh học và các kỹ thuật viên phòng Thí nghiệm Y sinh trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài Xin cảm ơn các thầy cô giáo khoa Công nghệ Sinh học, bộ phận sau Đại học - trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập tại trường Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo, Khoa Huyết học và chẩn đoán tế bào, Phòng Đào tạo và nghiên cứu khoa học Bệnh viện Nội tiết Trung ương đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể gia đình, bạn bè và đồng nghiệp đã luôn cổ vũ, động viên tôi trong suốt thời gian qua! Trong quá trình thực hiện luận văn do còn hạn chế về mặt thời gian, kinh phí cũng như trình độ chuyên môn nên không tránh khỏi những thiếu sót Rất mong nhận được những ý kiến quý báu của các thầy cô giáo, các nhà khoa học, cùng bạn bè, đồng nghiệp! Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 10 tháng 9 năm 2021 Học viên: Trần Thu Hiền MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 1 Đặt vấn đề 1 2 Mục tiêu nghiên cứu 2 3 Nội dung nghiên cứu………………………………………….……… 2 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Ung thư dạ dày 3 1.1.1 Dịch tễ học ung thư dạ dày 3 1.1.2 Phân loại ung thư dạ dày và cách điều trị 4 1.1.3 Tế bào gốc ung thư dạ dày 7 1.2 Sự tăng sinh và chu kỳ tế bào 9 1.3 Apoptosis 13 1.4 Cây Đìa đụm Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum 21 1.4.1 Đặc điểm thực vật và phân bố 21 1.4.2 Tác dụng của cây Đìa đụm trong y học dân gian 21 1.4.3 Tình hình nghiên cứu cây Đìa đụm 22 CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu nghiên cứu………………………………………………… 25 2.2 Hóa chất và thiết bị nghiên cứu…………………………………… 25 2.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu………………………………… 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu………………………………………… 26 2.4.1 Phương pháp thu thập và xác định tên khoa học của cây Đìa đụm 26 2.4.2 Thu mẫu và chiết dịch từ lá bằng ethanol………………………… 26 2.4.3 Đánh giá kiểu hình và phân tích sự tăng sinh tế bào……………… 26 2.4.4 Phân tích sự biến đổi kiểu nhân của tế bào bằng thuốc nhuộm nhân 27 DAPI……………………………………………………………………… 2.4.5 Phương pháp phân tích chu kỳ tế bào và apoptosis bằng Flow cytometry………………………………………………………………… 28 2.4.6 Phương pháp phân tích thống kê………………………………… 28 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết quả về thu thập, định loại và thu cao chiết ethanol từ cây 29 Đìa đụm Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum………………… ………… 3.1.1 Kết quả thu thập và định loại cây Đìa đụm………………………… 29 3.1.2 Kết quả thu cao chiết ethanol từ cây Đìa đụm…………………… 29 3.2 Đánh giá tác động của cao chiết ethanol từ cây Đìa đụm lên kiểu hình tế bào ung thư dạ dày dòng AGS và MKN45…………………… 30 3.2.1 Tác động của dịch chiết lên kiểu hình tế bào AGS ……………… 30 3.2.2 Tác động của dịch chiết lên kiểu hình tế bào MKN45…………… 32 3.3 Tác động của dịch chiết lá cây Đìa đụm lên sự tăng sinh tế bào 34 ung thư…………………………………………………………………… 3.3.1 Tác động của dịch chiết lên sự tăng sinh tế bào AGS…………… 34 3.3.2 Tác động của dịch chiết cây Đìa đụm lên sự tăng sinh tế bào MKN45…………………………………………………………………… 36 3.4 Đánh giá tác động của cao chiết ethanol từ cây Đìa đụm lên kiểu 37 nhân tế bào ung thư dạ dày dòng AGS và MKN45…………………… 3.4.1 Đánh giá tác động của cao chiết ethanol từ cây Đìa đụm lên kiểu nhân tế bào ung thư dạ dày dòng AGS…………………………………… 37 3.4.2 Đánh giá tác động của cao chiết ethanol từ cây Đìa đụm lên kiểu 39 nhân tế bào ung thư dạ dày dòng MKN45…………………… ………… 3.5 Tác động của dịch chiết cây Đìa đụm lên chu kỳ tế bào………… 41 3.5.1 Tác động của dịch chiết lên chu kỳ tế bào của dòng tế bào AGS… 41 3.5.2 Tác động của dịch chiết lên chu kỳ tế bào của dòng tế bào MKN45 42 3.6 Tác động của dịch chiết cây Đìa đụm lên apoptosis của tế bào… 43 3.6.1 Tác động của dịch chiết lên tỷ lệ apoptosis của dòng tế bào AGS… 43 3.6.2 Tác động của dịch chiết lên tỷ lệ apoptosis của dòng tế bào 44 MKN45…………………………………………………………………… KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………………… 48 1 Kết luận………………………………………………………… …… 48 2 Kiến nghị………………………………………………………… … 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO ……………………………………………… 49 PHỤ LỤC………………………………………………………………… 57 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ AJCC : American Joint Committee on Cancer (Hiệp hội Ung thư Mỹ) UICC : Union for International Cancer Control (Hiệp hội Phòng chống Ung thư Quốc tế) TNM : Tumor - Node - Metastasis (Khối u - Hạch - Di căn) GSC : Gastric stem cells (Tế bào gốc ung thư dạ dày) DNA : Deoxyribonucleic acid CDK : Cyclin dependent kinase TNF : Tumor Necrosis Factor (Yếu tố hoại tử khối u) DAPI : 4′,6-diamidino-2-phenylindole (Thuốc nhuộm nhân chuyên biệt cho DNA) WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới) DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Một số hợp chất thực vật được sử dụng trong điều trị 20 nhắm đích apoptosis ung thư DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Số lượng mắc mới ung thư năm 2020 3 Hình 1.2 Số lượng tử vong do ung thư năm 2020 3 Hình 1.3 Tỉ lệ mắc ung thư của Việt Nam và thế giới năm 2020 4 Hình 1.4 Phân loại ung thư biểu mô dạ dày theo Lauren 6 Hình 1.5 Cấu tạo tuyến dạ dày 7 Hình 1.6 Chu kỳ tế bào ở động vật có vú 10 Hình 1.7 Các tế bào apoptotic thu nhỏ với tế bào chất ngưng tụ 14 Hình 1.8 Con đường nội sinh và ngoại sinh của apoptosis 15 Hình 1.9 Các cơ chế ức chế apoptosis của tế bào ung thư 19 Hình 1.10A Myricetin 23 Hình 1.10B Hydroquinone và D-1-O-methyl-Myo-inositol 23 Hình 1.10C Myrincitrin và syringetin-3-O-beta-D-glucopyranoside 23 Hình 1.10D Beta-sitosterol và medioresinol 23 Hình 3.1A Cây Đìa đụm (Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum) 29 Lá cây Đìa đụm (hay Bàn tay ma) được sấy khô và Hình 3.1B nghiền trong cối chày sứ, được chiết bằng ethanol và 29 cao chiết được thu vào các ống eppendoff Hình 3.2A Hình ảnh tế bào AGS chụp dưới kính hiển vi soi 30 ngược ở các nồng độ xử lý với dịch chiết khác nhau Hình Tên hình Trang Hình 3.2B Hình 3.3A Hình ảnh tế bào MKN45 chụp dưới kính hiển vi soi 33 Hình 3.3B ngược ở các nồng độ xử lý với dịch chiết khác nhau Hình 3.4A Hình 3.4B Tỷ lệ phần trăm sự tăng sinh tế bào AGS khi xử lý ở 35 Hình 3.5A các nồng độ khác nhau so với đối chứng Hình 3.5B Tỷ lệ phần trăm sự tăng sinh tế bào MKN45 khi xử lý 37 Hình 3.6A ở các nồng độ khác nhau so với đối chứng Hình 3.6B Hình 3.6C Ảnh chụp tế bào AGS nhuộm dưới kính hiển vi huỳnh 38 Hình 3.6D quang khi xử lý với các nồng độ dịch chiết khác nhau Ảnh chụp tế bào MKN45 nhuộm dưới kính hiển vi huỳnh quang khi xử lý với các nồng độ dịch chiết khác 40 nhau Sự thay đổi tỷ lệ tế bào của dòng AGS ở các pha trong của kỳ tế bào giữa mẫu đối chứng (0 mg/ml) và mẫu 41 xử lý với cao chiết (IC50) Sự thay đổi tỷ lệ tế bào của dòng MKN45 ở các pha trong của kỳ tế bào giữa mẫu đối chứng (0 mg/ml) và 42 mẫu xử lý với cao chiết (IC50) Tỷ lệ phần trăm tế bào AGS có kiểu nhân apoptosis khi xử lý với các nồng độ dịch chiết khác nhau so với 43 đối chứng Phổ phân tích Flow cytometry về tỷ lệ phần trăm tế 44 bào apoptosis trên dòng tế bào AGS Tỷ lệ phần trăm tế bào MKN45 có kiểu nhân apoptosis khi xử lý với các nồng độ dịch chiết khác nhau so với 45 đối chứng Phổ phân tích Flow cytometry về tỷ lệ phần trăm tế 46 bào apoptosis trên dòng tế bào MKN45