Khóa luận nghiên cứu tác động ức chế tế bào ung thư in vitro của cao chiết vỏ quả xuyên tiêu (zanthoxylum simulans hance)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ĐẶNG THỦY TIÊN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ IN VITRO CỦA CAO CHIẾT VỎ QUẢ XUYÊN TIÊU (Zanthoxylum simulans Hance.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Người thực hiện: ĐẶNG THỦY TIÊN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ IN VITRO CỦA CAO CHIẾT VỎ QUẢ XUYÊN TIÊU (Zanthoxylum simulans Hance.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2018.Y Người hướng dẫn: PGS.TS BÙI THANH TÙNG ThS NGUYỄN THỊ THÚY HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Được cho phép tiến hành hồn thành Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học niềm vinh dự em Trong suốt q trình thực hiện, em vơ biết ơn giúp đỡ nhiệt tình tới từ quý thầy cô giáo, bạn bè, người thân cán Nhà trường Đầu tiên, em xin phép bày tỏ lời cảm ơn chân thành, lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Thành Tùng – Chủ nhiệm Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, ThS Nguyễn Thị Thúy – Giảng viên Bộ môn Bào chế Công nghệ Dược phẩm, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội PGS.TS Đỗ Thị Thảo – Trưởng phòng Thử nghiệm sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam hết lịng hướng dẫn, tận tâm bảo, tạo điều kiện thuận lợi nhất, giúp em hồn thành Khóa luận Thầy cô không truyền đạt cho em kiến thức học thuật sâu rộng mà cịn giúp em có thêm nhiều kỹ cần thiết khác suốt q trình thực Khóa luận sống Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới quý thầy cô Ban Chủ nhiệm Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên trực thuộc Trường Đại học Y Dược thầy cô giáo sở liên kết đào tạo dạy nhiệt tình cho em, từ học tới tri thức to lớn, thú vị nhân loại quãng thời gian năm ngồi ghế Nhà trường Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, em cảm ơn anh Vũ Mạnh Hà, chị cảm ơn em Trịnh Phương Thảo em Nguyễn Thu Hằng, xin cảm ơn người bạn sát cánh, đồng hành, bên cạnh ủng hộ, động viên góp ý cho tơi từ lúc bắt đầu đến Khóa luận hồn thành Xin kính chúc tất người ln có thật nhiều sức khỏe hạnh phúc! Hà Nội, ngày 25 tháng 05 năm 2023 Sinh viên Đặng Thủy Tiên DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt EGFR Epidermal Growth Factor Receptors PI3K Phosphatidylinositol-3kinase WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới GLOBOCAN The Global Cancer Observatory Tổ chức Ung thư Toàn cầu CT Computerized Tomography Chụp cắt lớp vi tính IC50 Half maximal inhibitory Nồng độ ức chế tối đa concentration 50% ZSEO Zanthoxylum simulans essential oil Tinh dầu Zanthoxylum simulans LDA Larval development assay Xét nghiệm phát triển ấu trùng LMIA Larval migration inhibition assay Xét nghiệm ức chế di cư ấu trùng 10 LC50 Lethal concentration Nồng độ gây chết 50% 11 ED50 Effective dose Liều hiệu 50% 12 JAK Janus kinase Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì Light chromatography quadrupole time of flight mass spectrometry Sắc ký lỏng khối phổ Tế bào ung thư dày 13 LC-Q-TOFMS 14 AGS Gastric cells 15 PKC Protein kinase C 16 ATP Adenosine triphosphate 17 ADP Adenosine diphosphate 18 PAF platelet activating factor 19 EtOH Ethanol 20 EtOAc Ethyl acetat 21 BuOH Butanol 22 DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium 23 MEME Minimum Esental Medium with Eagle salt 24 FBS Fetal Bovine Serum 25 DMSO Dimethyl sulfoxide 26 TCA Trichloroacetic acid 27 PBS Phosphate Buffered Saline 28 SRB Sulforhodamine B 29 ELISA 30 OD 31 TBUT Tế bào ung thư 32 %ƯC % ức chế 33 SD 34 VK 35 MTT Yếu tố hoạt hóa tiểu cầu Enzyme-linked Immunosorbent assay Optical Density Standard Deviation Mật độ quang học Độ lệch chuẩn Vật kính 3-(4,5- dimethylthiazol2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Biểu đồ thống kê số ca mắc ung thư giới năm 2020 Hình 1.2 Biểu đồ thống kê số ca tử vong ung thư giới năm 2020 Hình 1.3 Biểu đồ thống kê số ca mắc ung thư năm 2020 Việt Nam Hình 1.4 Biểu đồ thống kê số ca mắc ung thư năm 2020 nam giới Việt Nam Hình 1.5 Biểu đồ thống kê số ca mắc ung thư năm 2020 nữ giới Việt Nam Hình 1.6 Cây Xuyên tiêu (Zanthoxylum simulans Hance.) 12 Hình 1.7 Cơng thức cấu tạo số hợp chất hóa học có lồi Zanthoxylum simulans Hance Hình 2.1 Vỏ Xun tiêu khơ thu mua Hà Nội 21 Hình 3.1 Quy trình chiết xuất dược liệu kết thu 25 Hình 3.2 Bã dược liệu sau ngâm 25 Hình 3.3 Sự thay đổi mật độ tế bào HepG2 tác dụng mẫu nghiên cứu sau 72 nồng độ khác (VK 10X, zoom 5.6) 30 Hình 3.4 Sự thay đổi mật độ tế bào MKN-7 tác dụng mẫu nghiên cứu sau 72 nồng độ khác (VK 10X, zoom 5.6) 30, 31 Hình 3.5 Sự thay đổi mật độ tế bào HepG2 MKN-7 tác dụng chứng âm sau 72 (VK 10X, zoom 5.6) 31 15, 16 DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Khối lượng hiệu suất cao chiết toàn phần phân đoạn vỏ Xuyên tiêu 26 Bảng 3.2 Khả gây độc cao chiết toàn phần vỏ Xuyên tiêu bốn dòng tế bào ung thư gan, cổ tử cung, dày phổi người 27 Bảng 3.3 Tác dụng gây độc phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu dòng tế bào ung thư gan HepG2 người 28 Bảng 3.4 Tác dụng gây độc phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu dòng tế bào ung thư dày MKN-7 người 29 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ung thư 1.1.1 Khái niệm ung thư 1.1.2 Dịch tễ học bệnh ung thư 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh ung thư 1.1.4 Nguyên nhân gây ung thư 1.1.5 Phương pháp phổ biến sử dụng điều trị ung thư 1.2 Tổng quan chi Zanthoxylum 10 1.2.1 Vị trí phân loại chi Zanthoxylum 10 1.2.2 Đặc điểm thực vật chi Zanthoxylum 10 1.2.3 Đặc điểm phân bố chi Zanthoxylum 11 1.3 Tổng quan loài Zanthoxylum simulans 11 1.3.1 Đặc điểm thực vật 11 1.3.2 Phân bố thu hái 12 1.3.3 Thành phần hóa học 13 1.3.4 Công dụng theo Y học cổ truyền 16 1.3.5 Tác dụng dược lý 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Nguyên vật liệu 21 2.1.2 Hóa chất, thiết bị 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp chiết xuất dược liệu 23 2.2.2 Phương pháp đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư dịch chiết vỏ Xuyên tiêu 23 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 3.1 Kết chiết xuất dược liệu 25 3.2 Kết đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư 26 3.2.1 Tác dụng độc tính dịng tế bào ung thư cao chiết toàn phần vỏ Xuyên tiêu 26 3.2.2 Tác dụng độc tính dịng tế bào ung thư phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu 28 CHƯƠNG BÀN LUẬN 32 4.1 Về kết chiết xuất dược liệu 32 4.2 Về kết đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Với tiến vượt bậc y học đại, nhiều bệnh chữa khỏi giới nói chung Việt Nam nói riêng bệnh tồn câu hỏi tương đối khó ngành Y, khơng thể khơng nhắc tới ung thư Ung thư bệnh phức tạp biến đổi mặt di truyền đột biến gene thay đổi mặt biểu sinh gene, vùng nhiễm sắc thể liên quan tới gene sinh ung thư gene ức chế ung thư [1] Các chế phát sinh ung thư nghiên cứu kỹ kiểm soát chu kỳ phân chia tế bào hay thay đổi đường tín hiệu apoptosis đường tín hiệu khác Notch, EGFR PI3K [2] Trong đa số trường hợp ung thư, điều trị hóa chất hay xạ trị lựa chọn [3] Tuy nhiên, phương pháp điều trị xạ trị thường gây nhiều tác dụng phụ, chi phí hóa chất tốn tỉ lệ bệnh nhân sống sót sau năm cịn hạn chế Một cách tiếp cận đặc biệt quan tâm sử dụng cao chiết toàn phần hợp chất chiết xuất từ dược liệu để điều trị ung thư [4] Các sản phẩm từ thiên nhiên từ lâu coi ứng cử viên thuốc tiềm để phòng ngừa điều trị ung thư [5] Bởi dược liệu nguồn nguyên liệu dễ kiếm, chi phí rẻ, có tác dụng tốt tác dụng khơng mong muốn Giữa vơ vàn dược liệu nghiên cứu tác dụng chống ung thư, chi Zanthoxylum nhiều nhà khoa học đánh giá nguồn tiềm để tìm chất chống ung thư mới, hoạt tính gây độc mạnh dòng tế bào khối u khác đa dạng chất thu từ số loài thuộc chi Trong năm gần đây, Xuyên tiêu, loài thuộc chi Zanthoxylum ngày thu hút nhiều quan tâm từ phía nhà khoa học ngành Y Dược tác dụng dược lý bật Cây Xuyên tiêu cịn có tên khác Hồng lực, Hoa tiêu, , có tên khoa học Zanthoxylum simulans Hance Cây Xun tiêu thường mọc hoang vùng có khí hậu nhiệt đới Nó tìm thấy nhiều phía đơng Trung Quốc, Đài Loan, Triều Tiên, Campuchia Lào Ở Việt Nam, chủ yếu tìm thấy Xuyên tiêu thể thông qua giá trị IC50 (g/mL) Bảng 3.2 Bảng 3.2 Khả gây độc cao chiết toàn phần vỏ Xuyên tiêu bốn dòng tế bào ung thư gan, cổ tử cung, dày phổi người Nồng độ (g/mL) Cao chiết toàn phần Xuyên tiêu (EtOH Xuyên tiêu) HepG2 Hela MKN-7 SK-LU-1 %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD 100 64,40 1,63 27,84 1,02 63,92 3,05 22,13 1,42 20 23,46 1,36 7,46 0,34 33,61 1,21 10,80 0,99 19,77 1,05 2,25 0,24 6,41 0,69 9,55 0,46 0,8 2,78 0,25 1,31 0,14 2,61 0,23 2,01 0,23 IC50 63,68  3,97 Nồng độ 56,08  3,54 >100 >100 Ellipticine HepG2 (g/mL) %ƯC Hela MKN-7 SK-LU-1 SD %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD 10 102,34 2,91 98,44 1,79 100,76 2,77 101,29 1,29 84,10 2,32 81,12 2,79 75,88 1,54 70,17 2,90 0,4 51,69 1,15 52,11 1,35 50,33 0,94 48,23 1,01 0,08 24,20 1,47 23,23 1,18 22,11 1,37 20,39 0,87 IC50 0,32  0,03 0,32  0,04 0,43  0,03 0,51  0,05 Từ Bảng 3.2, thấy thuốc đối chứng dương Ellipticine hoạt động ổn định thí nghiệm, cho thấy tác dụng gây độc rõ rệt bốn dòng tế bào ung thư gan, cổ tử cung, dày phổi người với giá trị IC50 0,320,03; 0,320,04; 0,430,03 0,510,05 (g/mL) Do có giá trị IC50 > 100 g/mL nên cao chiết toàn phần EtOH 70% chưa thể hoạt tính gây độc hai dịng tế bào ung thư phổi cổ tử cung Với hai dòng tế bào lại ung thư gan dày, cao chiết toàn phần EtOH thể tác dụng độc tính với giá trị IC50 63,68  3,97 g/mL 56,08  3,54 g/mL Do đó, 27 tiếp tục tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng gây độc tế bào phân đoạn vỏ Xuyên tiêu hai dòng tế bào ung thư gan dày 3.2.2 Tác dụng độc tính dịng tế bào ung thư phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu Hoạt tính gây độc hai dòng tế bào ung thư gan dày phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu thể thông qua giá trị IC50 (g/mL) Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.3 Tác dụng gây độc phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu dòng tế bào ung thư gan HepG2 người Nồng độ phân đoạn n-Hexan EtOAc BuOH H2O %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD 100 89,54 1,61 84,14 1,51 40,61 1,65 38,78 2,94 20 63,34 1,17 45,15 3,00 26,52 1,38 12,63 1,15 17,90 1,01 18,80 1,36 13,19 1,33 9,95 0,79 0,8 1,80 0,15 2,77 0,17 5,43 0,56 4,21 0,23 IC50 17,12  0,94 (g/mL) 28,45  2,85 Nồng độ >100 >100 Ellipticine (g/mL) %ƯC SD 10 100,83 0,16 76,01 0,20 0,4 50,23 1,14 0,08 21,59 0,56 IC50 0,43  0,02 28 Bảng 3.4 Tác dụng gây độc phân đoạn cao chiết vỏ Xuyên tiêu dòng tế bào ung thư dày MKN-7 người Nồng độ phân đoạn n-Hexan EtOAc BuOH H2O %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD %ƯC SD 100 96,10 2,28 72,59 2,35 30,58 2,72 36,61 1,49 20 48,43 1,76 41,02 1,63 13,58 1,43 24,19 1,36 22,81 1,18 23,29 0,74 8,93 0,78 6,63 0,45 0,8 12,41 0,11 8,08 0,26 1,40 0,16 2,26 0,13 IC50 23,65  1,75 (g/mL) 35,61  2,90 Nồng độ >100 >100 Ellipticine (g/mL) %ƯC SD 10 99,61 2,37 78,74 1,16 0,4 51,63 0,98 0,08 22,22 0,37 IC50 0,40  0,03 Kết Bảng 3.3 Bảng 3.4 cho thấy phân đoạn BuOH phân đoạn H2O khơng thể hoạt tính gây độc hai dòng tế bào ung thư nghiên cứu Với dòng tế bào ung thư gan người, hai phân đoạn n-Hexan phân đoạn EtOAc thể hoạt tính gây độc với giá trị IC50 17,12  0,94 28,45  2,85 g/mL Còn với dòng tế bào ung thư dày người, hai phân đoạn n-Hexan phân đoạn EtOAc cho tác dụng ức chế với giá trị IC50 23,65  1,75 35,61  2,90 g/mL Song song với mẫu thử cao phân đoạn, tiến hành thử nghiệm khả gây độc tế bào gan dày tương tự với chứng dương Ellipticine cho kết IC50 0,43  0,02 0,40  0,03 g/mL Điều cho thấy chứng dương hoạt động ổn định với khả gây độc với tế bào ung thư cao 29 Nồng độ phân đoạn 100 g/mL 20 g/mL g/mL 0,8 g/mL nHexan EtOAc BuOH H2O Hình 3.3 Sự thay đổi mật độ tế bào HepG2 tác dụng mẫu nghiên cứu sau 72 nồng độ khác (VK 10X, zoom 5.6) Nồng độ phân đoạn 100 g/mL 20 g/mL g/mL nHexan EtOAc 30 0,8 g/mL Nồng độ phân đoạn 100 g/mL 20 g/mL g/mL 0,8 g/mL BuOH H2O Hình 3.4 Sự thay đổi mật độ tế bào MKN-7 tác dụng mẫu nghiên cứu sau 72 nồng độ khác (VK 10X, zoom 5.6) Dịng tế bào HepG2 MKN-7 Chứng âm Hình 3.5 Sự thay đổi mật độ tế bào HepG2 MKN-7 tác dụng chứng âm sau 72 (VK 10X, zoom 5.6) Trên Hình 3.3 Hình 3.4, dễ dàng nhận thấy với phân đoạn n-Hexan EtOAc, nồng độ thấp g/mL 0,8 g/mL, mật độ tế bào cịn nhiều, dính thành đám Tuy nhiên, tăng nồng độ lên đến 20 g/mL, mật độ tế bào giảm, tăng đến 100 g/mL mật độ tế bào giảm rõ rệt Trong đó, với hai phân đoạn BuOH H2O, nồng độ mẫu thử 100 g/mL mật độ tế bào cịn dày đặc 31 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Về kết chiết xuất dược liệu Từ 500 g vỏ Xuyên tiêu khô chiết xuất EtOH 70% 23,7 g cao tồn phần khơ, hiệu suất đạt 4,74% Sau chiết lỏng – lỏng với dung môi phân cực thu 1,2 g cao n-Hexan, 7,6 g cao EtOAc, 4,7 g cao BuOH 8,1 g cắn nước, đạt hiệu suất tương ứng 5,06%; 32,07%; 19,83% 34,18% Bên cạnh kết này, tác giả Chao Wang cộng thực chiết xuất 200 g vỏ rễ khô Xuyên tiêu thu hái Trung Quốc cách ngâm với dung môi Methanol nhiệt độ phịng bình nón lít gắn bàn lắc Ngâm lần, lần 0,6 lít dung môi thời gian Thu 18,6 g cao Methanol toàn phần, đạt hiệu suất 9,3% [55] Trong đó, nghiên cứu sàng lọc thuốc Việt Nam hoạt tính gây độc tế bào, nhóm nghiên cứu Nguyen Bich Thu tiến hành chiết xuất hạt Xuyên tiêu khô xay nhỏ thành bột Nguyên liệu ngâm chiết với dung môi Methanol nhiệt độ phòng 25C thời gian 72 Hiệu suất đạt chiết hạt 4,3 % 2,6%, so với kết nghiên cứu tác giả Chao Wang cộng [56] Điều giải thích khác địa điểm thu hái, giống dược liệu, phận sử dụng, điều kiện sinh sống, phương pháp quy trình chiết xuất dẫn đến thành phần hoạt chất thu từ dược liệu khác [57] 4.2 Về kết đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư Xu hướng việc sử dụng chất chống ung thư tự nhiên có thảo dược, rau, trái loại hạt ngày gia tăng [5861] Thảo dược trở thành nguồn tài nguyên tiềm cho việc tìm kiếm loại thuốc với nhiều lồi có chứa thành phần hóa học chứng minh hoạt tính gây độc cho tế bào nguồn tài nguyên lớn [6264] Trong đó, chi Zanthoxylum đánh giá nguồn dược liệu tiềm 32 chứa nhiều loài nghiên cứu chứng minh có tác dụng chống ung thư rõ rệt Trong nghiên cứu này, tiến hành đánh giá tác động gây độc tế bào ung thư cao chiết vỏ Xuyên tiêu, lồi thuộc chi Zanthoxylum Hoạt tính gây độc đánh giá phương pháp xác định hàm lượng protein tế bào tổng số dựa vào mật độ quang học (OD – Optical Density) đo thành phần protein tế bào nhuộm Sulforhodamine B (SRB) để đánh giá khả gây độc tế bào ung thư cao chiết toàn phần phân đoạn cao chiết vỏ Xun tiêu Theo đó, với dịng tế bào ung thư gan HepG2, phân đoạn n-Hexan thể khả gây độc tế bào mạnh với giá trị IC50 17,12  0,94 g/mL Sau cao phân đoạn EtOAc cao toàn phần EtOH 70% với giá trị IC50 28,45  2,85 63,68  3,97 g/mL Cao phân đoạn BuOH cắn nước khơng thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan HepG2 (IC50 > 100) Kết thu tương tự với dòng tế bào ung thư dày MKN-7, phân đoạn n-Hexan thể khả gây độc tế bào mạnh với giá trị IC50 23,65  1,75 g/mL Sau cao phân đoạn EtOAc cao toàn phần EtOH 70% với giá trị IC50 35,61  2,90 56,08  3,54 g/mL Cao phân đoạn BuOH cắn nước khơng thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư dày MKN-7 (IC50 > 100) Như vậy, cao toàn phần EtOH 70% hai cao phân đoạn n-Hexan EtOAc Xuyên tiêu có hoạt tính gây độc khác tế bào ung thư gan HepG2 tế bào ung thư dày MKN-7 khác Trong đó, cao phân đoạn n-Hexan cho thấy hoạt tính gây độc tốt Với kết này, nhận định rằng, cao chiết vỏ Xuyên tiêu có khả gây độc với hai dòng tế bào ung thư gan HepG2 ung thư dày MKN-7 Kết tương đồng với kết thu nghiên cứu tiến hành trước hoạt tính sinh học loài chi với Xuyên tiêu (Zanthoxylum simulans) Năm 2016, TS Nguyễn Thị Hồng Vân thực đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Xuyên tiêu (Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.) định hướng tạo chế phẩm 33 phòng chống ung thư”, kết cặn chiết cho hoạt tính gây độc mạnh năm dòng tế bào ung thư, có ung thư gan HepG2 Bên cạnh nghiên cứu này, năm 2010, nhóm nghiên cứu Nguyen Bich Thu tiến hành sàng lọc tác dụng ức chế tế bào ung thư gan HepG2 hạt Xuyên tiêu (Zanthoxylum simulans) với điều kiện chiết xuất dung mơi Methanol nhiệt độ phịng (25C), thời gian chiết 72 Tác dụng ức chế tế bào ung thư đánh giá phương pháp Mosmann Rapid (1983) Tế bào HepG2 nuôi cấy môi trường DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) chứa 10% FBS, 37C máy ấp CO2 có độ ẩm Sau tế bào đưa vào đĩa 96 giếng để thử nghiệm Sau 24 ấp, nồng độ khác từ g/mL đến 100 g/mL chiết xuất thêm vào giếng Sau 48 giờ, sống tế bào đo thử nghiệm MTT (3- (4,5- dimethylthiazol - 2- yl) - 2,5 - diphenyl tetrazolium bromid) Kết cho thấy cao chiết Methanol hạt Xuyên tiêu có tác dụng ức chế dòng tế bào ung thư HepG2 mạnh với giá trị IC50 7,1  0,1 g/mL 28,5  4,3 g/mL [56] Kết nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện chiết xuất, khảo sát mẫu dược liệu khác cần thiết để có thêm chứng việc lựa chọn nguồn dược liệu tốt phục vụ cho việc phát triển sản phẩm thuốc thực phẩm bảo vệ sức khỏe tương lai Ngoài ra, nhóm tác giả cịn rằng, cao chiết hạt Xuyên tiêu có tác dụng ức chế dòng tế bào ung thư khác ung thư phổi A549, ung thư gan Huh-7, ung thư biểu mô liên kết HT 1080, ung thư vú MCF-7 [56] Tác giả Chao Wang chiết hợp chất acridone alkaloid từ vỏ rễ Xuyên tiêu, đánh giá tác dụng ức chế dòng tế bào ung thư tuyến tiền liệt PC-3M, ung thư biểu mô hạch bạch huyết tuyến tiền liệt (LNCaP) tác dụng tiêu diệt ký sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum Kết nghiên cứu cho thấy hợp chất acridone alkaloids bao gồm normelicopidine, normelicopine, melicopine, melicopidine melicopicine thể tác dụng ức chế tế bào ung thư chống ký sinh trùng sốt rét in vitro [55] 34 Trong nghiên cứu gần tác giả Yong-Qiang Tian, cho thấy hợp chất Chelerythrine có Xuyên tiêu mang lại tác dụng ức chế tế bào ung thư dày mạnh so với chứng dương (Cerdulatinib) Chelerythrine thể tác động ức chế rõ rệt bám dính, di cư, xâm lấn kích thích q tình chết theo chương trình tế bào ung thư dày AGS, làm giảm đáng kể biểu thụ thể estrogen (ER-36, ER-66 ER-1) biểu Src, proto-oncogene [48] Như vậy, với kết ghi nhận được, Xuyên tiêu (Zanthoxylum simulans Hance.) nguồn dược liệu tiềm năng, thể hoạt tính gây độc tương đối tốt nhiều dòng tế bào ung thư Điều góp phần khơng nhỏ vào việc cung cấp dẫn liệu khoa học cho ứng dụng y học sau này, việc tìm kiếm hoạt chất phát triển sản phẩm thảo dược có cơng dụng phịng ngừa điều trị ung thư 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN: Xuất phát từ hai mục tiêu đặt ban đầu, sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài thu số kết sau: Đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư dịch chết toàn phần vỏ Xuyên tiêu: Cao chiết toàn phần EtOH 70% cho thấy hoạt tính gây độc hai dịng tế bào ung thư gan HepG2 tế bào ung thư dày MKN-7 với giá trị IC50 63,68  3,97 g/mL 56,08  3,54 g/mL Đánh giá tác động ức chế tế bào ung thư phân đoạn dịch chiết vỏ Xuyên tiêu: Hai phân đoạn n-Hexan EtOAc cho thấy hoạt tính gây độc mạnh dịng tế bào ung thư gan HepG2 với giá trị IC50 17,12  0,94 28,45  2,85 g/mL, với dòng tế bào ung thư dày MKN-7 với giá trị IC50 23,65  1,75 35,61  2,90 g/mL Các phân đoạn cịn lại khơng cho thấy hoạt tính gây độc tế bào ung thư thử nghiệm KIẾN NGHỊ: Đề tài đánh giá khả gây độc tế bào ung thư vỏ Xuyên tiêu Tuy nhiên, để khai thác hợp lý sử dụng nguồn dược liệu cách hiệu việc phòng ngừa điều trị số bệnh ung thư, xin đề xuất số nội dung nghiên cứu tiếp theo: Tiếp tục đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư gan dày in vivo chiết xuất vỏ Xuyên tiêu Phân lập xác định hợp chất cho tác dụng gây độc tế bào ung thư gan dày có phân đoạn cao chiết Xuyên tiêu nghiên cứu chế gây độc chúng Thử nghiệm đánh giá hoạt tính gây độc dịng tế bào khác ngồi bốn dịng tế bào thực nghiên cứu 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Meng X, Zhong J, Liu S, Murray M, Gonzalez-Angulo AM A new hypothesis for the cancer mechanism Cancer Metastasis Reviews 2012;31:247-268 Hassler MR, Egger G Epigenomics of cancer–emerging new concepts Biochimie 2012;94(11):2219-2230 Nikolaou M, Pavlopoulou A, Georgakilas AG, Kyrodimos E The challenge of drug resistance in cancer treatment: a current overview Clinical & Experimental Metastasis 2018;35:309-318 Jain S, Dwivedi J, Jain PK, Satpathy S, Patra A Medicinal plants for treatment of cancer: A brief review Pharmacognosy Journal 2016;8(2) Chou ST, Chan HH, Peng HY, Liou MJ, Wu TS Isolation of substances with antiproliferative and apoptosis-inducing activities against leukemia cells from the leaves of Zanthoxylum ailanthoides Sieb & Zucc Phytomedicine 2011;18(5):344-348 Ombito JO Phytochemistry and pharmacology of the genus Zanthoxylum (Rutaceae): a review The Natural Products Journal 2021;11(1):21-43 Chen IS, Wu SJ, Leu YL, Tsai IW, Wu TS Alkaloids from root bark of Zanthoxylum simulans Phytochemistry 1996;42(1):217-219 Lim T Zanthoxylum simulans Edible Medicinal and NonMedicinal Plants 2012:904-911 vol 4, Fruits WHO Cancer Accessed https://www.who.int/health-topics/cancer#tab=tab_1 19/12/2022, 10 GLOBOCAN All Cancers Updated 2020 Accessed 25/12/2022, https://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/cancers/39-All-cancers-fact-sheet.pdf 11 GLOBOCAN Cancer in VietNam Updated 2020 Accessed 25/12/2022, https://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/populations/704-vietnam-fact-sheets.pdf 12 WHO Cancer Accessed 19/12/2022, https://www.who.int/newsroom/fact-sheets/detail/cancer 13 National Cancer Institute Obesity and Cancer Updated 05/04/2022 Accessed 30/12/2022, https://www.cancer.gov/aboutcancer/causes-prevention/risk/obesity/obesity-fact-sheet#q3 14 Jayasekara H, MacInnis RJ, Room R, English DR Long-Term Alcohol Consumption and Breast, Upper Aero-Digestive Tract and Colorectal Cancer Risk: A Systematic Review and Meta-Analysis Alcohol and alcoholism (Oxford, Oxfordshire) May 2016;51(3):315-30 15 Anand P, Kunnumakkara AB, Sundaram C, et al Cancer is a preventable disease that requires major lifestyle changes Pharmaceutical research Sep 2008;25(9):2097-116 16 American Cancer Society Heredity and Cancer Updated 28/03/2013 Accessed 30/12/2022, https://web.archive.org/web/20130805065458/http://www.cancer.org/cancer/c ancercauses/geneticsandcancer/heredity-and-cancer 17 Sudhakar A History of cancer, ancient and modern treatment methods Journal of cancer science therapy 2009;1(2):1-4 18 Đồng Lưu Ba, Huỳnh Quang Khánh Phối hợp phẫu thuật – hóa trị liệu điều trị ung thư phối nguyên phát 2004:122-124 19 Lê Phi Long, Nguyễn Hồi Nam Phẫu - hóa trị ung thư phổi bệnh viện đại học Y Dược Y học TP Hồ Chí Minh, Chuyên đề: Ung bướu học 2008;12(4):164 20 Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 Ung thư phổi - Những điều cần biết Updated 04/01/2023 Accessed 18/03/2023, https://www.benhvien108.vn/ung-thu-phoi-%E2%80%93-nhung-dieu-canbiet.htm 21 Jaffray DA, Gospodarowicz MK Radiation therapy for cancer Cancer: disease control priorities 2015:239-248 vol 22 America Cancer Society Radiation Therapy Side Effects Updated 10/10/2020 Accessed 22/12/2022, https://www.cancer.org/cancer/managing-cancer/treatmenttypes/radiation/effects-on-different-parts-of-body.html 23 Sourati A, Ameri A, Malekzadeh M Acute side effects of radiation therapy 2017 24 Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 Các tác dụng không mong muốn điều trị hóa chất cách xử trí Updated 30/08/2022 Accessed 20/05/2023, https://www.benhvien108.vn/cac-tac-dung-khong-mong-muondo-dieu-tri-hoa-chat-va-cach-xu-tri.htm 25 Takhtajan Armen Flowering plants 2009 26 Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam vol NXB trẻ; 2002:407- 410 27 Lã Đình Mỡi cộng Tài nguyên thực vật có tinh dầu Việt Nam vol NXB Nông nghiệp; 2002:141-157 28 Zhang Dianxiang, Thomas G Hartley, David J Mabberley Flora of China, Rutaceae vol 11 2008:51-97 29 Bộ Y tế Dược điển Việt Nam V NXB Y học; 2018 30 Cheng MJ, Lee KH, Tsai IL, Chen IS Two new sesquiterpenoids and anti-HIV principles from the root bark of Zanthoxylum ailanthoides Bioorganic & medicinal chemistry Nov 2005;13(21):5915-20 31 Chyau CC, Mau JL, Wu CM Characteristics of the steam-distilled oil and carbon dioxide extract of Zanthoxylum simulans fruits Journal of Agricultural Food Chemistry 1996;44(4):1096-1099 32 Chang Z, Liu F, Wang S, Zhao T, Wang MJYxxbApS Studies on the chemical constituents of Zanthoxylum simulans Hance (author's transl) 1981;16(5):394-396 33 Gray A, O'Sullivan J Alkaloid, lignan and sterol constituents of Zanthoxylum simulans Natural products of higher plants, Planta Medica 1980; 34 Chen IS, Wu SJ, Tsai IL, et al Chemical and bioactive constituents from Zanthoxylum simulans Journal of natural products 1994;57(9):1206-1211 35 Wu SJ, Chen IS Alkaloids from Zanthoxylum simulans Phytochemistry 1993;34(6):1659-1661 doi:10.1016/S0031-9422(00)90870-7 36 Chen IS, Wu SJ, Lin YC, et al Dimeric 2-quinolone alkaloid and antiplatelet aggregation constituents of Zanthoxylum simulans Phytochemistry 1994;36(1):237-239 37 Chen IS, Tsai IW, Teng CM, et al Pyranoquinoline alkaloids from Zanthoxylum simulans Phytochemistry 1997;46(3):525-529 38 Yang YP, Cheng MJ, Teng CM, Chang YL, Tsai IL, Chen IS Chemical and anti-platelet constituents from Formosan Zanthoxylum simulans Phytochemistry 2002;61(5):567-572 39 Yang SH, Liu YQ, Wang JF, et al Isoquinoline alkaloids from Zanthoxylum simulans and their biological evaluation The Journal of Antibiotics 2015;68(4):289-292 40 Peng CY, Liu YQ, Deng YH, Wang YH, Zhou XJ Lignans from the bark of Zanthoxylum simulans Journal of Asian natural products research 2015;17(3):232-238 41 Duke JA, Ayensu ES Medicinal plants of China vol Reference publications; 1985 42 Võ Văn Chi Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học; 2012 43 Wang JF, Deng YH, Yang SH, et al Characterization and biological evaluation of six new dimeric lignans with an unusual α, βunsaturated ketone motif from Zanthoxylum simulans Bioorganic Medicinal Chemistry Letters 2014;24(19):4667-4671 44 Kuo J, Chang CF, Chi WC Isolation of endophytic fungi with antimicrobial activity from medicinal plant Zanthoxylum simulans Hance Folia Microbiologica 2021;66:385-397 45 Lyu ZZ, Liu NZ, Qian QG, Zhou XJ Isolation of endophytic fungi from Zanthoxylum simulans and screening of its active strain China Journal of Chinese Materia Medica 2018;43(7):1434-1440 46 Qi H, Wang W, Dai J, Zhu L In vitro anthelmintic activity of Zanthoxylum simulans essential oil against Haemonchus contortus Veterinary parasitology 2015;211(3-4):223-227 47 Marie-Magdeleine C, Hoste H, Mahieu M, Varo H, Archimède H In vitro effects of Cucurbita moschata seed extracts on Haemonchus contortus Veterinary Parasitology 2009;161(1-2):99-105 48 Tian YQ, Hu D, Zhang YL, Zou J, Chen GL, Guo MQ Inhibitors Targeting Multiple Janus Kinases From Zanthoxylum simulans Mediate Inhibition and Apoptosis Against Gastric Cancer Cells via the Estrogen Pathway Frontiers in Chemistry 2022;10 49 Chao MD, Chen IS, Cheng JT Inhibition of protein kinase C translocation from cytosol to membrane by chelerythrine Planta medica 1998;64(07):662-663 50 Funakoshi T, Aki T, Nakayama H, Watanuki Y, Imori S, Uemura K Reactive oxygen species-independent rapid initiation of mitochondrial apoptotic pathway by chelerythrine Toxicology in Vitro 2011;25(8):15811587 51 Kang K, Jiang H, Zhang S, Cheng B Antitumor Effects of Chelerythrine: A Literature Review Natural Product Communications 2022;17(6):1-9 52 Ko FN, Chen IS, Wu SJ, Lee LG, Haung TF, Teng CM Antiplatelet effects of chelerythrine chloride isolated from Zanthoxylum simulans Biochimica et Biophysica Acta -Molecular Cell Research 1990;1052(3):360-365 53 Orellana EA, Kasinski AL Sulforhodamine B (SRB) assay in cell culture to investigate cell proliferation Bio Protocol 2016;6(21):e1984-e1984 54 Skehan P, Storeng R, Scudiero D, et al New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening Journal of the National Cancer Institute Jul 1990;82(13):1107-12 55 Wang C, Wan J, Mei Z, Yang X Acridone alkaloids with cytotoxic and antimalarial activities from Zanthoxylum simullans Hance Pharmacognosy Magazine 2014;10(37):73 56 Nguyen Bich Thu, Trinh Nam Trung, Do Thi Ha, et al Screening of Vietnamese Medicinal Plants for Cytotoxic Activity Natural Product Sciences 2010;16(1):43-49 57 Nguyễn Thị Thu Hường Bài giảng Tài nguyên thuốc 2018 58 Walgren RA, Karnaky KJ, Jr., Lindenmayer GE, Walle T Efflux of dietary flavonoid quercetin 4'-beta-glucoside across human intestinal Caco2 cell monolayers by apical multidrug resistance-associated protein-2 The Journal of Pharmacology Experimental Therapeutics Sep 2000;294(3):830836 59 Mann J Natural products in cancer chemotherapy: past, present and future Nature reviews Cancer Feb 2002;2(2):143-8 60 Yan LP, Chan SW, Chan ASC, Chen SL, Ma XJ, Xu HX Puerarin decreases serum total cholesterol and enhances thoracic aorta endothelial nitric oxide synthase expression in diet-induced hypercholesterolemic rats Life sciences Jun 20 2006;79(4):324-330 61 Frederiksen H, Mortensen A, Schrøder M, et al Effects of red grape skin and seed extract supplementation on atherosclerosis in Watanabe heritable hyperlipidemic rabbits Molecular nutrition & food research May 2007;51(5):564-71 62 Cragg GM, Newman DJ, Snader KM Natural products in drug discovery and development Journal of natural products Jan 2007;60(1):5260 63 de Mesquita ML, de Paula JE, Pessoa C, et al Cytotoxic activity of Brazilian Cerrado plants used in traditional medicine against cancer cell lines Journal of ethnopharmacology Jun 25 2009;123(3):439-45 64 Kaileh M, Vanden Berghe W, Boone E, Essawi T, Haegeman G Screening of indigenous Palestinian medicinal plants for potential antiinflammatory and cytotoxic activity Journal of ethnopharmacology Sep 25 2007;113(3):510-6