Nghiên cứu đa hình gen liên quan đến vô sinh ở nam giới thăm khám tại bệnh viện trường đại học y hà nội

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐOÀN THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH GEN LIÊN QUAN ĐẾN VƠ SINH Ở NAM GIỚI THĂM KHÁM TẠI BỆNH VIỆN TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Mã số: 8420114 Ngƣời hƣớng dẫn 1: TS Nguyễn Thùy Dƣơng (Người hướng dẫn thứ nhất) Ngƣời hƣớng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Mộng Điệp (Người hướng dẫn thứ hai) i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, hướng dẫn khoa học TS Nguyễn Thùy Dương PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp Các số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc rõ ràng phép cơng bố Bình Định, tháng 08 năm 2022 Học viên ĐOÀN THỊ HUYỀN TRANG ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn: TS Nguyễn Thùy Dương PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị, bạn bè Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, nơi thực tập tạo nhiều điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập làm việc Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, người ln bên tơi, động viên khích lệ tơi q trình thực đề tài nghiên cứu Mặc dù tơi cố gắng để hồn thành đề tài khơng tránh khỏi thiếu xót định Tơi mong nhận đánh giá, nhận xét đóng góp ý kiến thầy giáo bạn để đề tài hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Bình Định, tháng 08 năm 2022 Học viên ĐOÀN THỊ HUYỀN TRANG iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ ix MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan tình hình vơ sinh vô sinh nam 1.2 Gen TEX15 vô sinh nam 1.3 Tình hình nghiên cứu giới nước 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 10 1.4 Nguyên nhân gây vô sinh nam 11 1.4.1 Môi trường 11 1.4.2 Nguyên nhân nội tiết 11 1.4.3 Độ tuổi sinh sản 12 1.4.4 Bệnh lý ảnh hưởng đến khả sinh sản nam giới 13 1.4.5 Nguyên nhân di truyền 14 1.5 Tổng quan đa hình nucleotide đơn 17 1.5.1 Đặc điểm đa hình nucleotide đơn 17 1.5.2 Các phương pháp xác định đa hình nucleotide đơn 19 iv 1.5.2.1 Phản ứng chuỗi polymerase - đa hình chiều dài đoạn giới hạn (Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism - PCR-RFLP) 19 1.5.2.2 Biến tính sắc ký lỏng hiệu cao (Denaturing HighPerformance Liquid Chromatography - DHPLC) 20 1.5.2.3 Phân tích đa hình cấu trúc sợi đơn (Single-strand conformation polymorphism - SSCP) 20 1.5.2.4 Điện di gel nhạy cảm với cấu trúc (ConformationSensitive Gel Electrophoresis - CSGE) 21 1.5.2.5 Phân tách hóa học nucleotide ghép đơi lệch (Chemical Cleavage of Mismatch - CCM) 21 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 2.3 Trang thiết bị hóa chất 24 2.3.1 Trang thiết bị 24 2.3.2 Hóa chất 24 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.4.1 Tách chiết DNA tổng số 24 2.4.2 Phương pháp thiết kế mồi 25 2.4.3 Khuếch đại vùng DNA có chứa đa hình TEX15 rs142485241 25 2.4.4 Phương pháp PCR - RFLP 27 2.4.5 Phương pháp thống kê so sánh 29 2.5 Vấn đề y đức nghiên cứu y sinh học 29 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1 Kết xác định tần số alen kiểu gen đa hình TEX15 rs142485241 hai nhóm bệnh nhóm chứng 31 3.1.1 Kết tách chiết tinh DNA tổng số từ mẫu máu 31 3.1.2 Khuếch đại vùng DNA có chứa TEX15 rs142485241 47 3.1.3 PCR - RFLP 50 v 3.2 Phân tích liên quan đa hình TEX15 rs142485241 bệnh vô sinh nam 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Tài liệu tiếng Anh 64 Tài liệu tiếng Việt 73 PHỤ LỤC vi DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT 95% CI 95% Confident interval Khoảng tin cậy 95% AIS Androgen insensitivity Hội chứng không nhạy syndrome cảm androgen AR Androgen Thụ thể androgen Array Microarray-based CGH comparative genomic Lai so sánh hệ gen dựa hybridization microarray AZF Azoospermia factor Vùng yếu tố không tinh trùng bp Base pair Cặp sở (cặp nucleotide) Chemical Cleavage of Phân tách hóa học nucleotide ghép CCM Mismatch đôi lệch CNV Copy number variantion Biến dị số lượng Conformation-Sensitive Điện di gel nhạy cảm với cấu Gel Electrophoresis trúc CSGE Dideoxynucleotide tripho ddNTP sphate Dideoxynucleotide triphosphate Denaturing HighPerformance Liquid DHPLC Chromatography Biến tính sắc ký lỏng hiệu cao DNA Deoxyribonucleic acid deoxyribonucleic acid Deoxyribonucleotide dNTP triphosphate DSB Double-strand break Etylene diamine tetra EDTA acetic acid Tách đôi sợi DNA vii EST Expressed sequence tags Các thẻ trình tự thể Fluorescence in situ Kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh hybridization quang Genome-Wide Nghiên cứu dùng để xác định GWAS Association Study biến thể gen có ý nghĩa thống kê HWE Hardy – Weinberg Trạng thái cân Hardy – equilibrium Weinberg FISH National Center for NCBI Biotechnology Trung tâm Thông tin Công nghệ Information sinh học Quốc gia Next Generation NGS Sequencing Giải trình tự gen hệ NonNOA obstructive Azoospermia Azoospermia không tắc nghẽn OD Optical density Mật độ quang học OR Odd ratio Tỷ suất chênh PCR Polemerase Chain RE Reaction Phản ứng chuỗi polymerase Restriction Enzyme Enzyme giới hạn Restriction Fragment RFLP Length Polymorphism Hạn chế mảnh chiều dài đa hình Sertoli cell only SCOS syndrome Hội chứng tế bào Sertoli đơn Single-strand conformation SSCP polymorphism Phân tích đa hình cấu trúc sợi đơn STSs Sequence-Tagged Site Vị trí gắn thẻ trình tự viii Single-nucleotide Đa hình đơn nucleotide SNP polymorphism TEX15 Testis Expressed 15 WES Whole exome sequencing Giải trình tự hệ gen mã hóa World Health WHO Organization Tổ chức Y tế Thế giới Y-Chromosome YCMD Microdeletion Mất đoạn NST Y 62 định để thay đổi cấu trúc protein tạo protein bị cắt ngắn thiếu hai miền (Pfam PF15326), có khả làm bất hoạt [11] Ngồi đột biến tìm gen TEX15, số đa hình gen (rs323344, rs323345, rs323346, rs323347) nghiên cứu rộng rãi quần thể khác giới Trong nghiên cứu người Hán, TEX15 có liên quan đáng kể đến khả sinh tinh trùng bị suy yếu Bên cạnh đó, đa hình rs323344 rs323345 khơng liên quan đến nguy vô sinh nam quần thể người Macedonia, Albania người Hán (Trung Quốc) chứng minh có liên quan tới NOA, mật độ tinh trùng thấp mật độ tinh trùng tương đối quần thể người gốc Châu Âu [6,43] Ngoài ra, đa hình rs323346 rs323347 TEX15 tìm thấy có ảnh hưởng rõ ràng đến việc tăng nguy bị sai hỏng trình sinh tinh Trong nghiên cứu này, thiết lập mối quan hệ TEX15 rs142485241 bệnh nhân vô sinh nam thăm khám bệnh viện Trường Đại học Y Hà Nội, Việt Nam Sự phân bố kiểu gen đa hình phù hợp với trạng thái cân Hardy-Weinberg (giá trị p > 0,05) Tuy nhiên, nghiên cứu khơng tìm thấy mối tương quan TEX15 rs142485241 vô sinh nam ba mô hình (cộng gộp, trội lặn) (giá trị p > 0,05) Nghiên cứu coi nghiên cứu thí điểm việc đánh giá mối tương quan gen TEX15 với vô sinh nam dân số Việt Nam 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua nghiên cứu mối quan hệ đa hình gen TEX15 rs142485241 vơ sinh nam chúng tơi đưa số kết luận sau:  Đã xác định thành công tần suất alen kiểu gen đa hình TEX15 rs142485241 hai nhóm bệnh nhóm chứng thơng qua phương pháp: tách chiết tinh DNA tổng số, PCR-RFLP Kết cho thấy tần số alen C lớn nhiều so với tần số alen G, tương ứng với tỉ lệ kiểu gen CC cao nhất, kiểu gen CG kiểu gen GG có tỉ lệ thấp nhất, bên cạnh nhóm bệnh nhóm đối chứng khơng có chênh lệch q nhiều tần số alen tỉ lệ kiểu kiểu gen Sự phân bố kiểu gen đa hình TEX15 rs142485241 tuân theo cân Hardy - Weinberg (HWE) với giá trị p-value > 0,05  Đã phân tích mối tương quan đa hình gen TEX15 rs142485241 tình hình vơ sinh nam 429 đối tượng nghiên cứu, từ số liệu tính tốn cho thấy đa hình TEX15 rs142485241 khơng có mối liên quan đến bệnh vô sinh nam Kiến nghị  Kết nghiên cứu luận văn làm sở cho nghiên cứu mối liên quan đa hình gen bệnh vơ sinh nam  Vì thời gian thực đề tài cịn hạn chế nên việc nghiên cứu giới hạn phạm vi nhỏ, chưa tiến hành nghiên cứu nhiều đối tượng, cần tiếp tục nghiên cứu mối liên quan đa hình TEX15 rs142485241 bệnh vô sinh nam phạm vi nước, với số lượng người lớn để có thêm nhận xét mối liên hệ  Tiếp tục nghiên cứu đa hình khác gen có liên quan đến bệnh vơ sinh nam để có thêm tài liệu khoa học, sở cho q trình chữa trị vơ sinh nam giới 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Anh [[1] Abur, U., Gunes, S., Ascı, R., Altundag, E., Akar, O.S., Ayas, B., et al (2019) Chromosomal and Y-chromosome microdeletion analysis in 1,300 infertile males and the fertility outcome of patients with AZFc microdeletions Andrologia 51 (11) [2] Anguiano, A., Oates, R.D., Amos, J.A., Dean, M., Gerrard, B., Stewart, C., et al (1992) Congenital Bilateral Absence of the Vas Deferens: A Primarily Genital Form of Cystic Fibrosis JAMA: The Journal of the American Medical Association 267 (13) [3] Araujo, T.F., Friedrich, C., Grangeiro, C.H.P., Martelli, L.R., Grzesiuk, J.D., Emich, J., et al (2020) Sequence analysis of 37 candidate genes for male infertility: challenges in variant assessment and validating genes Andrology (2) [4] Assidi, M (2022) Infertility in Men: Advances towards a Comprehensive and Integrative Strategy for Precision Theranostics Cells 11 (10), 1711 [5] Aston, K.I and Carrell, D.T (2009) Genome-wide study of singlenucleotide polymorphisms associated with azoospermia and severe oligozoospermia Journal of Andrology 30 (6) [6] Aston, K.I., Krausz, C., Laface, I., Ruiz-Castané, E., and Carrell, D.T (2010) Evaluation of 172 candidate polymorphisms for association with oligozoospermia or azoospermia in a large cohort of men of European descent Human Reproduction 25 (6) [7] Ben Khelifa, M., Coutton, C., Zouari, R., Karaouzène, T., Rendu, J., Bidart, M., et al (2014) Mutations in DNAH1, which encodes an inner arm heavy chain dynein, lead to male infertility from multiple morphological abnormalities of the sperm flagella American 65 Journal of Human Genetics 94 (1) [8] Brown, T.R., Lubahn, D.B., Wilson, E.M., Joseph, D.R., French, F.S., and Migeon, C.J (1988) Deletion of the steroid-binding domain of the human androgen receptor gene in one family with complete androgen insensitivity syndrome: Evidence for further genetic heterogeneity in this syndrome Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 85 (21) [9] Clevenger, J., Chavarro, C., Pearl, S.A., Ozias-Akins, P., and Jackson, S.A (2015) Single nucleotide polymorphism identification in polyploids: A review, example, and recommendations Molecular Plant (6) [10] Colaco, S and Modi, D (2018) Genetics of the human Y chromosome and its association with male infertility Reproductive Biology and Endocrinology 16 (1) [11] Colombo, R., Pontoglio, A., and Bini, M (2017) Two novel TEX15 mutations in a family with nonobstructive azoospermia Gynecologic and Obstetric Investigation 82 (3), 283–286 [12] Cotton, R.G., Rodrigues, N.R., and Campbell, R.D (1988) Reactivity of cytosine and thymine in single-base-pair mismatches with hydroxylamine and osmium tetroxide and its application to the study of mutations Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 85 (12) [13] Dam, A.H.D.M., Koscinski, I., Kremer, J.A.M., Moutou, C., Jaeger, A.S., Oudakker, A.R., et al (2007) Homozygous mutation in SPATA16 is associated with male infertility in human globozoospermia American Journal of Human Genetics 81 (4) [14] Dieterich, K., Soto Rifo, R., Karen Faure, A., Hennebicq, S., Amar, B Ben, Zahi, M., et al (2007) Homozygous mutation of AURKC 66 yields large-headed polyploid spermatozoa and causes male infertility Nature Genetics 39 (5) [15] Ellis, T.P., Humphrey, K.E., Smith, M.J., and Cotton, R.G.H (1998) Chemical cleavage of mismatch: A new look at an established method Human Mutation 11 (5) [16] Fainberg, J and Kashanian, J.A (2019) Recent advances in understanding and managing male infertility F1000Research [17] Feng, H.L (2003) Molecular biology of male infertility Archives of Andrology 49 (1) [18] Ganguly, A (2002) An update on conformation sensitive gel electrophoresis Human Mutation 19 (4) [19] Gasser, R.B., Hu, M., Chilton, N.B., Campbell, B.E., Jex, A.J., Otranto, D., et al (2007) Single-strand conformation polymorphism (SSCP) for the analysis of genetic variation Nature Protocols (6) [20] Gershoni, M., Hauser, R., Yogev, L., Lehavi, O., Azem, F., Yavetz, H., et al (2017) A familial study of azoospermic men identifies three novel causative mutations in three new human azoospermia genes Genetics in Medicine 19 (9) [21] Graffelman, J (2015) Exploring diallelic genetic markers: The HardyWeinberg package Journal of Statistical Software 64 (3) [22] Hamerton, J.L (1968) Robertsonian translocations in man: evidence for prezygotic selection Cytogenetics (4) [23] Han, L.J., He, X.F., and Ye, X.H (2020) Methylenetetrahydrofolate reductase C677T and A1298C polymorphisms and male infertility risk: An updated meta-analysis Medicine 99 (51) [24] Houston, B.J., Riera-Escamilla, A., Wyrwoll, M.J., Salas-Huetos, A., Xavier, M.J., Nagirnaja, L., et al (2021) A systematic review of the validated monogenic causes of human male infertility: 2020 update 67 and a discussion of emerging gene-disease relationships Human Reproduction Update 28 (1) [25] Hu, Z., Xia, Y., Guo, X., Dai, J., Li, H., Hu, H., et al (2012) A genomewide association study in Chinese men identifies three risk loci for non-obstructive azoospermia Nature Genetics 44 (2) [26] Huu Dinh, T., Thanh Thao, D., Lan Anh, L.T., Minh Duc, B., and Thuy Duong, N (2021) Association of FSIP2 rs4666689 and PON2 rs7493 with male infertility in Vietnamese population Academia Journal of Biology 43 (3), 77–85 [27] Huu Dinh, T., Xuan Canh, N., Huong Thao, D., Lan Anh, L.T., Minh Duc, B., and Thuy Duong, N (2021) Association of AhRR rs2292596 with male infertility in 422 Vietnamese individuals Vietnam Journal of Biotechnology 18 (4) [28] Inagaki, A., Schoenmakers, S., and Baarends, W.M (2010) DNA double strand break repair, chromosome synapsis and transcriptional silencing in meiosis Epigenetics (4) [29] Inhorn, M.C and Patrizio, P (2014) Infertility around the globe: New thinking on gender, reproductive technologies and global movements in the 21st century Human Reproduction Update 21 (4) [30] Jacobs, P.A and Strong, J.A (1959) A case of human intersexuality having a possible XXY sex-determining mechanism Nature 183 (4657) [31] Kerem, B.S., Rommens, J.M., Buchanan, J.A., Markiewicz, D., Cox, T.K., Chakravarti, A., et al (1989) Identification of the cystic fibrosis gene: Genetic analysis Science 245 (4922) [32] Körkkö, J., Annunen, S., Pihlajamaa, T., Prockop, D.J., and Ala-Kokko, L (1998) Conformation sensitive gel electrophoresis for simple and 68 accurate detection of mutations: Comparison with denaturing gradient gel electrophoresis and nucleotide sequencing Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 95 (4) [33] Kosova, G., Scott, N.M., Niederberger, C., Prins, G.S., and Ober, C (2012) Genome-wide association study identifies candidate genes for male fertility traits in humans American Journal of Human Genetics 90 (6) [34] Kostiner, D.R., Turek, P.J., and Reijo, R.A (1998) Male infertility: Analysis of the markers and genes on the human Y chromosome Human Reproduction 13 (11) [35] Krausz, C., Hoefsloot, L., Simoni, M., and Tüttelmann, F (2014) EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Ychromosomal microdeletions: State-of-the-art 2013 Andrology (1) [36] Krausz, C., Escamilla, A.R., and Chianese, C (2015) Genetics of male infertility: From research to clinic Reproduction 150 (5) [37] Kwok, P.Y and Chen, X (2003) Detection of single nucleotide polymorphisms Current Issues in Molecular Biology (2), 43–60 [38] Kyrgiafini, M.A., Markantoni, M., Sarafidou, T., Chatziparasidou, A., Christoforidis, N., and Mamuris, Z (2020) Genome-wide association study identifies candidate markers related to lincRNAs associated with male infertility in the Greek population Journal of Assisted Reproduction and Genetics 37 (11) [39] Leaver, R.B (2016) Male infertility: An overview of causes and treatment options British Journal of Nursing 25 (18) [40] Lencz, T and Darvasi, A (2013) Single Nucleotyde Polymorphisms [41] Lopes, A.M., Aston, K.I., Thompson, E., Carvalho, F., Gonỗalves, J., 69 Huang, N., et al (2013) Human Spermatogenic Failure Purges Deleterious Mutation Load from the Autosomes and Both Sex Chromosomes, including the Gene DMRT1 PLoS Genetics (3) [42] Magalhães, J.A., Ribeiro, L.S., Rego, J.P.A., and de Andrade, C.R (2021) Current markers for infertility in men Jornal Brasileiro de Reproducao Assistida 25 (4) [43] Noveski, P., Madjunkova, S., Maleva, I., Sotiroska, V., Petanovski, Z., and Plaseska-Karanfilska, D (2013) A homozygous deletion of the DPY19L2 gene is a cause of globozoospermia in men from the Republic of Macedonia Balkan Journal of Medical Genetics 16 (1) [44] Nuti, F and Krausz, C (2008) Gene polymorphisms/mutations relevant to abnormal spermatogenesis Reproductive BioMedicine Online 16 (4) [45] O’Flynn O’Brien, K.L., Varghese, A.C., and Agarwal, A (2010) The genetic causes of male factor infertility: A review Fertility and Sterility 93 (1) [46] Okutman, O., Muller, J., Baert, Y., Serdarogullari, M., Gultomruk, M., Piton, A., et al (2015) Exome sequencing reveals a nonsense mutation in TEX15 causing spermatogenic failure in a Turkish family Human Molecular Genetics 24 (19), 5581–5588 [47] Rao, M V, Shah, N.P., Raval, R.J., Solanki, P.P., Shah, P.S., and Shah, S.C (2021) Current Status of Y Chromosome Microdeletions: Prevalence, Distribution, Implication and Association with Male Infertility in Indian Men- A Review JOURNAL OF CLINICAL AND DIAGNOSTIC RESEARCH [48] Robay, A., Abbasi, S., Akil, A., El-Bardisi, H., Arafa, M., Crystal, R.G., et al (2018) A systematic review on the genetics of male infertility 70 in the era of next-generation sequencing Arab Journal of Urology 16 (1) [49] Saleeba, J.A and Cotton, R.G.H (1993) [19] Chemical Cleavage of Mismatch to Detect Mutations Methods in Enzymology 217 (C) [50] Sato, Y., Tajima, A., Tsunematsu, K., Nozawa, S., Yoshiike, M., Koh, E., et al (2015) An association study of four candidate loci for human male fertility traits with male infertility Human Reproduction 30 (6) [51] Sha, Y., Zheng, L., Ji, Z., Mei, L., Ding, L., Lin, S., et al (2018) A novel TEX11 mutation induces azoospermia: A case report of infertile brothers and literature review BMC Medical Genetics 19 (1) [52] Sharma, A (2017) Male Infertility; Evidences, Risk Factors, Causes, Diagnosis and Management in Human Annals of Clinical and Laboratory Research 05 (03) [53] Sun, H., Gong, T.T., Jiang, Y.T., Zhang, S., Zhao, Y.H., and Wu, Q.J (2019) Global, Regional, and National Prevalence and DisabilityAdjusted Life-Years for Infertility in 195 Countries and Territories, 1990-2017: Results from a Global Burden of Disease Study, 2017 Aging 11 (23) [54] Tai Nguyen, C.T., Trung Kien, N., Nhuan, V.T., Dac Khoa, N., Chung Vieng, N., Bich Ngoc, N.T., et al (2017) An Infertility SRYNegative 46, XX Male Detected by Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction Journal of Clinical Case Reports 07 (08) [55] Tarach, P (2021) Application of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) in the analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs) Acta Universitatis 71 Lodziensis Folia Biologica et Oecologica 17 [56] Team, R.C (2021) R: A Language and Environment for Statistical Computing R Foundation for Statistical Computing [57] Tiepolo, L and Zuffardi, O (1976) Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human y chromosome long arm Human Genetics 34 (2) [58] Therkelsen, A.J (1964) Sterile Male with the Chromosome Constitution 46 XX Cytogenetic and Genome Research (4) [59] Trang, N.T., Huyen, V.T., Tuan, N.T., and Phan, T.D (2018) Association of N-acetyltransferase-2 and glutathione S-transferase polymorphisms with idiopathic male infertility in Vietnam male subjects Chemico-Biological Interactions 286 11–16 [60] Traven, E., Ogrinc, A., and Kunej, T (2017) Initiative for standardization of reporting genetics of male infertility Systems Biology in Reproductive Medicine 63 (1) [61] van Rumste, M.M.E., Evers, J.L.H., and Farquhar, C.M (2004) ICSI versus conventional techniques for oocyte insemination during IVF in patients with non-male factor subfertility: A cochrane review Human Reproduction 19 (2) [62] Vander Borght, M and Wyns, C (2018) Fertility and infertility: Definition and epidemiology Clinical Biochemistry 62 [63] Venables, J.P and Cooke, H.J (2000) Lessons from knockout and transgenic mice for infertility in men Journal of Endocrinological Investigation 23 (9) [64] Vera, M., Peinado, V., Al-Asmar, N., Gruhn, J., Rodrigo, L., Hassold, T., et al (2012) Human Male Meiosis and Sperm Aneuploidies in: Aneuploidy Heal Dis [65] Vogt, P.H., Edelmann, A., Kirsch, S., Henegariu, O., Hirschmann, P., 72 Kiesewetter, F., et al (1996) Human Y chromosome azoospermia factors (AZF) mapped to different subregions in Yq11 Human Molecular Genetics (7) [66] Wang, H., Zhou, Z., Xu, M., Li, J., Xiao, J., Xu, Z.Y., et al (2004) A spermatogenesis-related gene expression profile in human spermatozoa and its potential clinical applications Journal of Molecular Medicine 82 (5) [67] White, M.B., Carvalho, M., Derse, D., O’Brien, S.J., and Dean, M (1992) Detecting single base substitutions as heteroduplex polymorphisms Genomics 12 (2) [68] Xavier, M.J., Salas-Huetos, A., Oud, M.S., Aston, K.I., and Veltman, J.A (2021) Disease gene discovery in male infertility: past, present and future Human Genetics 140 (1) [69] Yang, F., Eckardt, S., Leu, N.A., McLaughlin, K.J., and Wang, P.J (2008) Mouse TEX15 is essential for DNA double-strand break repair and chromosomal synapsis during male meiosis Journal of Cell Biology 180 (4), 673–679 [70] Yatsenko, A.N., Georgiadis, A.P., Röpke, A., Berman, A.J., Jaffe, T., Olszewska, M., et al (2015) X-Linked TEX11 Mutations, Meiotic Arrest, and Azoospermia in Infertile Men New England Journal of Medicine 372 (22), [71] Zegers-Hochschild, F., Adamson, G.D., Dyer, S., Racowsky, C., de Mouzon, J., Sokol, R., et al (2017) The International Glossary on Infertility and Fertility Care, 2017 Fertility and Sterility 108 (3) [72] Zhang, X., Ding, M., Ding, X., Li, T., and Chen, H (2015) Six polymorphisms in genes involved in DNA double-strand break repair and chromosome synapsis: Association with male infertility Systems Biology in Reproductive Medicine 61 (4) 73 Tài liệu tiếng Việt [73] Nga, N and Quỳnh, N (2021) Kiến thức thái độ vấn đề đạo đức nghiên cứu y sinh học số yếu tố liên quan sinh viên trường Đại học Y Dược - Đại học Huế năm 2019 Tạp Chí Y Học Dự Phịng 30 9–15 [74] Thị, L., Anh, L., and Lan, H.T (2019) Ứng dụng kỹ thuật Real-time PCR phát đoạn AZF bệnh nhân vơ sinh nam khơng có tinh trùng Application of Real-time PCR 61 (2), 8–12 [75] Trang, N.T., Thị, T., Nhung, H., Mai, B.B., and Giang, T.L (2018) Thẩm định độ xác xét nghiệm tự pha để định lượng fructose tinh dịch phục vụ chẩn đốn vơ sinh nam 60 (12), 1– [76] https://laodong.vn/suc-khoe/77-cap-vo-chong-o-viet-nam-vo-sinh-hiemmuon-822568.ldo, 26/07/2020 [77] https://suckhoedoisong.vn/vo-sinh-nam-do-nguyen-nhan-di-truyen-vande-can-duoc-giai-dap-169220526173014599.htm#img-lightbox-1, 27/05/2022 PHỤ LỤC Phụ lục Mẫu điều tra thu mẫu (IFCs) ĐƠN TÌNH NGUYỆN THAM GIA NGHIÊN CỨU (Áp dụng cho đối tượng tình nguyện tham gia nghiên cứu cần phải bí mật vơ danh) Tôi, - - - Xác nhận Tôi đọc thông tin đưa cho nghiên cứu thực địa lâm sàng………………………………………………………………………… ………………………………………………………… Phiên ICF ………., ngày ……/……/………, …… Trang), cán nghiên cứu giải thích nghiên cứu thủ tục đăng ký tình nguyện tham gia vào nghiên cứu Tơi có thời gian hội cân nhắc tham gia vào nghiên cứu Tôi hiểu tơi có quyền tiếp cận với liệu mà người có trách nhiệm mơ tả tờ thơng tin Tơi hiểu tơi có quyền rút khỏi nghiên cứu vào thời điểm lý Tơi đồng ý bác sỹ chăm sóc sức khỏe thơng báo việc tham gia nghiên cứu Đánh dấu vào thích hợp (quyết định không ảnh hưởng khả bạn tham gia vào nghiên cứu ) : Có Khơng Tơi đồng ý tham gia nghiên cứu Ký tên người tham gia Ngày / tháng / năm …………………………………………………… ……………………… Nếu cần, * Ghi rõ họ tên chữ ký người làm chứng …………………………………………… Ngày / tháng / năm ……………………… Ghi rõ họ tên chữ ký người hướng dẫn …………………………………………… Ngày / tháng / năm ……………………… Phụ lục Số liệu thống kê tần số alen tỉ lệ kiểu gen đa hình TEX15 rs142485241 số quần thể ngƣời châu lục Mã dân số Mô tả Tần số số lƣợng alen Tỉ lệ số kiểu gen C|C: 1.000 (661) C|C: 1.000 (96) C|C: 1.000 (61) C|C: 1.000 (99) C|C: 1.000 (113) C|C: 1.000 (99) C|C: 1.000 (85) C|C: 1.000 (108) C|C: 0.942 (475) C|G: 0.056 (28) G|G: 0.002 (1) C|C: 0.892 (83) C|G: 0.108 (10) C|C: 0.971 (100) C|G: 0.029 (3) C|C: 0.962 (101) C|G: 0.038 (4) AFR ACB ASW ESN GWD LWK MSL YRI Châu Phi NgườiCarribean châu Phi Barbados Tổ tiên người Mỹ gốc Phi SW USA Người Esan Niger Người Gambian Western Division Người Luhya Webuye, Kenya Người Mende Sierra Leone Người Yoruba Ibadan, Nigera C: 1.000 (1322) C: 1.000 (192) C: 1.000 (122) C: 1.000 (198) C: 1.000 (226) C: 1.000 (198) C: 1.000 (170) C: 1.000 (216) EAS Đông Á C: 0.970 (978) G: 0.030 (30) CDX Người Thái Xishuanagbanna, Trung Quốc CHB Người Hán Bắc Kinh, Trung Quốc CHS Người Nam Hán, Trung Quốc C: 0.946 (176) G: 0.054 (10) C: 0.985 (203) G: 0.015 (3) C: 0.981 (206) G: 0.019 (4) JPT Người Nhật Tokyo, Nhật Bản C: 1.000 (208) KHV Người Kinh thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam C: 0.934 (185) G: 0.066 (13) EUR CEU FIN GBR IBS TSI Châu Âu Cư dân Utah (CEPH) với tổ tiên Bắc Tây  Người Phần Lan Phần Lan Người anh Anh Scotland Người Iberia Tây Ban Nha Người Tuscan Ý SAS Nam Á BEB Người Bengali từ Bangladesh GIH ITU PJL STU Người Gujarati Indian từ Houston, Texas Người Telugu Ấn Độ từ Vương quốc Anh Người Punjabi từ Lahore, Pakistan Người Tamil Sri Lanka từ Vương quốc Anh C: 1.000 (1006) C: 1.000 (198) C: 1.000 (198) C: 1.000 (182) C: 1.000 (214) C: 1.000 (214) C: 0.998 (976) G: 0.002 (2) C: 0.988 (170) G: 0.012 (2) C: 1.000 (206) C: 1.000 (204) C: 1.000 (192) C: 1.000 (204) C|C: 1.000 (104) C|C: 0.879 (87) C|G: 0.111 (11) G|G: 0.010 (1) C|C: 1.000 (503) C|C: 1.000 (99) C|C: 1.000 (99) C|C: 1.000 (91) C|C: 1.000 (107) C|C: 1.000 (107) C|C: 0.996 (487) C|G: 0.004 (2) C|C: 0.977 (84) C|G: 0.023 (2) C|C: 1.000 (103) C|C: 1.000 (102) C|C: 1.000 (96) C|C: 1.000 (102) ... ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐỒN THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH GEN LIÊN QUAN ĐẾN VÔ SINH Ở NAM GIỚI THĂM KHÁM TẠI BỆNH VIỆN TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM... nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu Mẫu nghiên cứu thu thập Bệnh viện Trường Đại học Y, Hà Nội Đề tài thực Phòng Hệ gen học người, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam. .. hình gen tiềm liên quan đến vô sinh quần thể xuất với số lượng hạn chế Xuất phát từ lí trên, chọn đề tài: "Nghiên cứu đa hình gen liên quan đến vơ sinh nam giới thăm khám bệnh viện trƣờng Đại học