Phân lập các chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ và xuất huyết trên cá tra ở đồng bằng sông cửu long

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP PHÂN LẬP CÁC CHỦNG VI KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ VÀ XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ TRA Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Lê Lưu Phương Hạnh Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ PHÂN LẬP CÁC CHỦNG VI KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ VÀ XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ TRA Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày ) Chủ nhiệm nhiệm vụ: (ký tên) ThS Lê Lưu Phương Hạnh Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) TS Nguyễn Đăng Quân Thành phố Hồ Chí Minh- 2021 TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP HCM, ngày tháng năm 2021 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Phân lập chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ xuất huyết cá tra Đồng Sông Cửu Long Thuộc lĩnh vực: Nông, Lâm, Ngư nghiệp Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Lê Lưu Phương Hạnh Ngày, tháng, năm sinh: 02/09/1984 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Thạc sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ Điện thoại: Tổ chức: 028.37153792 Nhà riêng: Mobile: 0912002984 Fax: 028.38916997 E-mail: phuonghanh.le29@gmail.com Tên tổ chức công tác: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM Địa tổ chức: 2374 quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, quận 12, TP HCM Địa nhà riêng: 219 đường số 5, phường Bình Hưng Hịa, quận Bình Tân, TP HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM Điện thoại: 028.37153792 Fax: 028.38916997 E-mail: ttcnsh.snn@tphcm.gov.vn Website: www.hcmbiotech.com.vn Địa chỉ: 2374 quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, quận 12, TP HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: TS Nguyễn Đăng Quân Số tài khoản: 9527.2.1007645 Kho bạc: Kho bạc Nhà nước TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Công nghệ TP HCM i II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: 24 tháng từ tháng 11 năm 2018 đến tháng 11 năm 2020 - Thực tế thực hiện: từ tháng 11 năm 2018 đến tháng 05 năm 2021 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng 12 năm 2020 đến tháng 05 năm 2021 Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 1.430.400.000 đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 1.430.400.000 đ + Kinh phí từ nguồn khác: 0đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) 11/2019 715.200.000 11/2020 572.160.000 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) 11/2019 715.200.000 4/2021 572.160.000 Ghi (Số đề nghị tốn) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Theo kế hoạch Tổng NSKH 513.43 5.000 513.435 000 765.97 8.000 150.98 7.000 Tổng NSKH 765.978 000 765.97 8.000 765.978 000 150.987 000 150.98 7.000 150.987 000 Tổng cộng - Lý thay đổi (nếu có): Đối với dự án: ii Nguồn khác Thực tế đạt Nguồn khác Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Nguyên vật liệu, lượng Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ cơng đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban hành Tên văn Ghi TT văn Quyết định việc thành lập hội đồng tư vấn, giao trực tiếp tổ chức cá Số 193/QĐ-SKHCN ngày nhân chủ trì thực nhiệm vụ khoa 22/03/2018 học công nghệ Biên họp hội đồng tư vấn tuyển chọn, giao trực tiếp tổ chức, cá nhân Ngày 28/03/2018 chủ trì thực nhiệm vụ khoa học công nghệ Quyết định việc phê duyệt nhiệm Số 1126/QĐ-SKHCN vụ nghiên cứu khoa học công ngày 19/10/2018 nghệ Số 20/2018/HĐ-QKHCN Hợp đồng thực nhiệm vụ nghiên ngày 28/11/2018 cứu khoa học công nghệ Quyết định việc phê duyệt kế hoạch lựa chọn nhà thầu nhiệm vụ “phân lập chủng vi khuẩn có Số 136/QĐ-SKHCN ngày hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây 07/03/2019 bệnh gan thận mủ xuất huyết cá tra Đồng sông Cửu Long” Số 24/2020/PLHĐPhụ lục hợp đồng thực nhiệm vụ iii QPTKHCN ngày 13/08/2020 Số 2030/SKHCN-QLKH ngày 13/08/2020 Số 855/QĐ-SKHCN ngày 13/08/2020 Số 946/QĐ-SKHCN ngày 11/09/2020 nghiên cứu khoa học công nghệ Công văn việc gia hạn thời gian thực nhiệm vụ “Phân lập chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ xuất huyết cá tra Đồng sông Cửu Long” Quyết định việc điều chỉnh định số 1126/QĐ-SKHCN ngày 19/10/2018 Sở Khoa học Công nghệ Quyết định việc điều chỉnh kế hoạch lựa chọn nhà thầu Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Tên cá nhân tham gia thực Nội dung tham gia + Viết thuyết minh nhiệm vụ, báo báo ThS Lê ThS Lê theo tiến độ Lưu Lưu nghiệm Phương Phương thu Hạnh Hạnh + Nội dung 1, 2, 3, 4, 5, iv Sản phẩm chủ yếu đạt + Hoàn thành thuyết minh đề tài, báo cáo tiến độ giám định, báo cáo nghiệm thu + Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus spp có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ xuất huyết an toàn với cá thử nghiệm + Xác định mức độ da dạng xây dựng phân loại dựa kết Rep-PCR Ghi chú* + Định danh chủng Bacillus spp sử dụng làm chế phẩm căp mồi Ba.seq + Xác định chế hoạt động chủng vi khuẩn sử dụng làm chế phẩm sinh học + Xác định mốc tăng trưởng để vi khuẩn có hoạt tính đối kháng mạnh + Xác định nồng độ vi khuẩn E ictaluri A hydrophila bị ức chế sử khuẩn chủng vi khuẩn làm probiotic + Lựa chọn chủng vi khuẩn nhạy với kháng sinh, an toàn ứng dụng vào thực tế + Đánh giá hiệu bảo vệ chủng vi khuẩn sử dụng làm probiotic + Tạo mẫu demo chế phẩm sinh học có mật độ ≥108 CFU/mL + Cố vấn khoa học TS Nguyễn TS Nguyễn + Định Cố vấn định hướng nghiên Đăng Quân Đăng Quân hướng cứu cho đề tài nghiên cứu + Hoàn thành thuyết minh nhiệm vụ báo cáo nghiệm thu + Xác định mức độ da dạng xây dựng phân loại dựa kết Rep-PCR + Định danh chủng Bacillus spp sử dụng làm chế phẩm căp mồi Ba.seq + Xác định chế hoạt động chủng vi khuẩn sử dụng làm chế phẩm sinh học + Xác định mốc tăng trưởng để ThS Bùi ThS Bùi Nội dung vi khuẩn có hoạt tính đối kháng Thị Thanh Thị Thanh 3,6 mạnh Tịnh Tịnh + Xác định nồng độ vi khuẩn E ictaluri A hydrophila bị ức chế sử khuẩn chủng vi khuẩn làm probiotic + Hỗ trợ viết TS Ngô TS Ngô thuyết minh Huỳnh Huỳnh báo cáo Phương Phương nghiệm thu Thảo Thảo + Nội dung v ThS Lê ThS Lê Nội dung 1, Văn Hậu Văn Hậu 6 CN Nguyễn Hoàng Thụy Vy CN Nguyễn Hoàng Thụy Vy + Nội dung + Các thủ tục giải ngân kinh phí + Đánh giá hiệu bảo vệ chủng vi khuẩn sử dụng làm probiotic + Tạo mẫu demo chế phẩm sinh học có mật độ ≥108 CFU/g + Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus spp có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ xuất huyết an toàn với cá thử nghiệm + Đánh giá hiệu bảo vệ chủng vi khuẩn sử dụng làm probiotic + Lựa chọn chủng vi khuẩn nhạy với kháng sinh, an toàn ứng dụng vào thực tế + Hoàn thành thủ tục lựa chọn nhà thầu giải ngân kinh phí đề tài theo tiến độ thực - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số TT đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa TT điểm ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) vi Người, quan thực Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với E ictaluri A hydrophila Đơn vị đo Chủng Chế phẩm sinh học (dạng bột), phối trộn ≥ chủng vi khuẩn Yêu cầu khoa học Theo kế hoạch + Có hoạt tính chủng kháng khuẩn + Quy trình phân lập, nhân giữ giống + Xác định chế hoạt động tính đa dạng mặt di truyền + An toàn với đối tượng thử nghiệm + Mật độ vi sản phẩm khuẩn ≥ 108 (10kg) CFU/g/ loại vk + Có hoạt tính đối kháng với E ictaluri A hydrophila Thực tế đạt chủng sản phẩm (10kg) - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Báo cáo nghiệm thu Quy trình phân lập, nhân giống giữ giống chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với E ictaluri A hydrophila Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế hoạch Thực tế đạt 1 - Lý thay đổi (nếu có): vii Ghi Das B.K.T., Samal, S.K., Samantaray, B.R., Sethi, S., Pattnaik, P and Mishra, B.K (2006) Antagonistic activity of cellular components of Pseudomonas species against Aeromonas hydrophila Aquaculture 253, 1724 Dhanasekaran D., Saha S., Thajuddin N and Panneerselvam A (2008) Probiotic effect of Lactobacillus isolates against bacterial pathogens in Clarias orientalis Med Biol 15, 97-102 Dobson, A., Cotter, P.D., Ross, P.R and Hill, C (2012) Bacteriocin production: a probiotic trait? Appl Environ Microbiol 78, 1-6 Doukas V., Athanassopoulou F., Karagouni E and Dotsika E (1998) Aeromonas hydrophila infection in cultured sea bass, Dicentrarchus labrax L., and Puntazzo puntazzo Cuvier from the Aegean Sea Journal of Fish Diseases 21, 317-320 Esteve C., Biosca E.G and Amaro C (1993) Virulence of Aeromonas hydrophila and some other bacteria isolated from European eels Anguilla anguilla reared in fresh water Diseases of Aquatic Organisms 16, 15-20 Fan Ben, Cong Wang, Xiafeng Song, Xiaolei Ding, Liming Wu, Huijun Wu, Xuewen Gao, Rainer Boriss (2018) Bacillus velezensis FZB42 in 2018: The gram positive model strain for Plant Growth Promotion and Biocontrol Frontiers in Microbiology, Fijan, S (2016) Antimicrobial effect of probiotics against common pathogens Probiotics and Prebiotics in Human Nutrition and Health, InTech, DOI: 10.5772/63141 Farzana, T., Rahman, S., Naser, M.N and Karim, M.M (2013) A molercular insight of some probiotic bacteria to addres their antagonistic activity against pathogenic vibrios causing shrimp mortality., Journal of Bangladesh Academy of Sciences 37, 115-120 92 Ghosh, S., Ringo, E., Selvam, A.D.G., Rahiman, K.MM., Sathyan, N., John, N and Hatha, A.A.M (2014) Gut associated lactic acid bacteria isolated from the Estuarine fish Mugil cephalus: Molercular diversity and antibacterial activities against pathogens International journal of aquaculture 4, 1-11 Gueimonde, M., Sánchez, B., de Los Reyes-Gavilán, C.G and Margolles, A (2013) Antibiotic resistance in probiotic bacteria Frontiers in microbiology 4, DOI: 10.3389/fmicb.2013.00202 Hawke, J.P., McWhorter, A.C., Steigerwalt, A.G and Brenners, D.J (1981) Edwardsiella ictaluri sp Nov., the causative agent of enteric septicemia of catfish International Journal of systematic bacteriology 31, 396-400 Hazen T.C., Raker M.L., Esch G.W and Fliermans C.B (1978) Ultrastructure of red-sore lesions on largemouth bass (Micropterus salmoides): Association of the ciliate Epistylis sp and the bacterium Aeromonas hydrophila Journal of Protozoology 25, 351-355 Huizinga H.W., Esch G.W and Hazen T.C (1979) Histopathology of red-sore disease (Aeromonas hydrophila) in naturally and experimentally infected largemouth bass Micropterus salmoides (Lacepede) Journal of Fish Diseases 2, 263-277 Jiun-Yan, L (2017) The role of probiotics and their mechanisms of action: An aquaculture perspective, World Aquaculture, 19-23 Jeney Z and Jeney G (1995) Recent achievements in studies on diseases of common carp (Cyprinus carpio L.) Aquaculture 129, 397-420 Klaenhammer, T.R (1988) Bacteriocins of lactic acid bacteria Biochimie 70, 337–349 Korkea-aho, T.L., Heikkinen, J., Thompson, K.D., von Wright, A and Austin, B (2011) Pseudomonas sp M174 inhibits the fish pathogen 93 Flavobacterium psychrophilum Journal of Applied Microbiology 111, 266277 Krizova, J., Španova, A and Rittich, B (2008) RAPD and rep-PCR fingerprinting for characterization of Bifidobacterium species Folia Microbiol 53, 99–104 Khalil A.H and Mansour E.H (1997) Toxicity of crude extracellular products of Aeromonas hydrophila in tilapia, Tilapia nilotica Letters in Applied Microbiology 25, 269-273 Lazado CC, Caipang CM, (2014), Bacterial viability differen-tially influences the immunomodulatory capabilities of potential host-derived probiotics in the intestinal epithe-lial cells of Atlantic cod Gadus morhua, J Appl Microbiol 116(4):990 998 Leite, A.M.O., Miguel, M.A.L., Peixoto, R.S., Ruas-Madiedo, P., Paschoalin, V.M.F., Mayo, B and Delgado, S (2015) Probiotic potential of selected lactic acid bacteria strains isolated from Brazilian kefir grains J Dairy Sci 98, 3622-3632 Liu J, Fang C., Jiang Y., Yan J (2009), Characterization of Hemolysin gene ytjA from Bacillus subtilis ,CurrMicrobiol, 642-647 Lio-Po G.D., Albright L.J and Leano E.M (1996) Experiments on virulence dose and portals of entry for Aeromonas hydrophila in walking catfish Journal of Aquatic Animal Health 8, 340-343 Mukry, S.N, Ahmad, and Khan, S.A (2010), Screening and partial characterization of hemolysins from Bacillus sp Strains S128&S144 are hemolysin b (hbl) producers, Pak.J.Bot., 42(1): 463-472 Patzer, S.I., Baquero, M.R., Bravo, D., Moreno, F and Hantke, K (2003) The colicin G, H and X determinants encode microcins M and H47, which might utilize the catecholate siderophore receptors FepA, Cir, Fiu and IroN Microbiol 149, 2557–2570 94 Pathiratne A., Widanapathirana G.S and Chandrakanthi W.H.S (1994) Association of Aeromonas hydrophila with epizootic ulcerative syndrome (EUS) of freshwater fish in Sri Lanka Journal of Applied Ichthyology 10, 204-208 Prado, S., Montes, J., Romalde, J.L and Barja, J.L (2009) Inhibitory activity of Phaeobacter strains against aquaculture pathogenic bacteris International microbiology 12, 107-114 Pucci, M.J, E.R Vedamuthu, R.S and Vandenbergh Kunka P.A (1988) Inhibition of listeria monocytogenes by using bacteriocin PA-1 produced by Peodiococcus acidilactici PAC 1.0 Apply of environment Microbiology 54, 2349-2353 Prieur, G., Nicolas, I.L., Plusquellec, A and Vigneulle, M (1990) Interactions between bivalves mollusks and bacteria in the marine environment Oceanogr Mar Biol Ann Rev 28, 227-352 Rattanachuay, P., Kantachote, D., Tantirungkij, M., Nitoda, T and Kanzaki H (2010) Inhibition of shrimp pathogenic vibrios by extracellular compounds from a proteolytic bacterium Pseudomonas sp W3 Electronic Journal of Biotechnology 13, DOI: 10.2225/vol13-issue1-fulltext-2 Roberts R.J (1995) Motile Aeromonad Septicaemia In: Bactarial diseases of fish (Ed By Inglis V., Roberts R.J and Bromage N.R.), Blackwell scientific publications, Oxford, 143-155 Sharma, J and Goyal A (2015) A study on the drug resistance of probiotic strains isolated from commercial probotic products available in the local market of Agra European Journal of Experimental Biology 5, 33-36 Son, V.M., Chang, C-C., Wu, M-C., Guu, Y-K., Chiu, C-H and Cheng, W (2009) Dietary administration of the probiotic, Lactobacillus plantarum, enhanced the growth innate immune responses, and disease resistance of the grouper Epinephelus coioides Fish & Shellfish Immunology 26, 681-698 95 Stephenson, D.P., Moore, R.J and Allison, G.E (2009) Comparison and utilization of repetitive-element PCR techniques for typing Lactobacillus isolates from the chicken gastrointestinal tract Applied and Environment Microbiology 75, 6764-6776 Vivas J., Razquin B., Lopez-Fierro P and Villena A.J (2005) Modulation of the immune response to an Aeromonas hydrophila aroA live vaccine in rainbow trout: effect of culture media on the humoral immune response and complement consumption Fish & Shellfish Immunology 18, 223-233 Weisburg WG1, Barns SM, Pelletier DA, Lane DJ., (1991), 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study, J Bacteriol 173(2):697-703.Xi-Yan, G., Liu, Y., Miao, L-L., Li, E-W., Hou T-T and Liu, Z-P (2017) Mechanism of anti-Vibrio activity of marine probiotic strain Bacillus pumilus H2, and characterization of the active substance AMB Express 7, DOI 10.1186/s13568-017-0323-3 Zorriehzahra, M.J, Delshad, S.T., Adel, M., Tiwari, R., Karthik, K., Dhama K and Lazado, C.C (2016) Probiotics as beneficial microbes in aquaculture: an update on their multiple modes of action: a review Veterinary Quarterly 36, 228-241 Zokaeifar, H., Balca´zar, J.L., Kamarudin, M.S., Sijam, K., Arshad, A and Saad, C.R (2012) Selection and identification of non-pathogenic bacteria isolated from fermented pickles with antagonistic properties against two shrimp pathogens The Journal of Antibiotics 65, 289-294 Zhou, X., Wang, Y., Yao, J and Li, W (2010) Inhibition ability of lacticacid bacteria Lactococcus lactis, against A hydrophila and study of its immunostimulatory effect in tilapia (Oreochromis niloticus) Int J Eng Sci Technol 2, 73-80 96 Wattiau P., Renard M.E., Ledent P., Debois., Blackman G., Agathos S.N., (2001) A PCR test to identify Bacillus subtilis and closely related species and its application to the monitoring of wastewater biotreatment Appl Microbiol Biotechnol 56: 816-819 Wong, A., Ngu, D.Y.S., Dan, L.A., Ooi, A and Lim, R.L.H (2015) Detection of antibiotic resistance in probiotics of dietary supplements Nutrition Journal 14, DOI 10.1186/s12937-015-0084-2 Website VASEP (2017) Giá cá tra cao 5.000-6.500 đồng/kg so với năm trước Hiệp hội chế biến xuất thủy sản Việt Nam, trang web: http://vasep.com.vn/Tin-Tuc/1039_50062/Gia-ca-tra-cao-hon-5000-6500dongkg-so-voi-nam-truoc.htm (truy cập ngày 22/11/17) Vietstock (2017) Xuất cá tra năm 2017 dự báo đạt 1.7 tỷ USD Vietstock, trang web: https://vietstock.vn/2017/01/xuat-khau-ca-tra-nam- 2017-du-bao-dat-tren-17-ty-usd-768-514798.htm (truy cập ngày 22/11/17) VOV (2017) Muốn phát triển bền vững ngành cá tra, cần nguồn giống chất lượng cao, trang web: http://vov.vn/kinh-te/muon-phat-trien-ben-vungnganh-ca-tra-can-nguon-giong-chat-luong-cao-684824.vov (truy cập ngày 22/11/17) 97 PHỤ LỤC Phụ lục Kết sàng lọc hoạt tính đối kháng dòng vi khuẩn phân lập với E ictaluri A hydrophila STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 Kí hiệu BCT.021 BCT.024 BCT.025 BCT.043 BCT.046 BCT.051 BCT.052 BCT.055 BCT.063 BCT.067 BCT.069 BCT.073 BCT.080 BCT.083 BCT.087 BCT.088 BCT.089 BCT.099 BCT.101 BCT.105 BCT.109 BCT.117 BCT.119 BCT.120 BCT.121 BCT.127 BCT.130 BCT.133 BCT.146 BCT.151 BCT.156 BCT.163 BCT.168 BCT.170 Tỉnh Địa phương Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) E.ictaluri A.hydrophila 14 16 30 16 22 18 15 12 15 17 20 14 23 16 17 12 19 20 22 18 20 20 22 15 17 17 15 19 17 13 18 15 18 14 16 15 16 19 15 13 21 15 21 18 19 17 18 15 18 16 19 14 17 17 15 14 16 17 18 15 19 16 17 18 16 15 22 22 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 BCT.172 BCT.175 BCT.180 BCT.200 BCT.204 BCT.206 BCT.210 BCT.211 BCT.230 BCT.277 BMHH.284 BMHH.285 BMHH.296 BMHH.306 BMHH.344 BMHH.347 BMHH.360 BMHH.365 BMHH.373 BMHH.383 BMHH.389 BMHH.392 BMHH.395 BMHH.397 BMHH.401 BMHH.403 BMHH.408 BMHH 409 BMHH 410 BMHH 411 BMHH 418 BMHH 421 BMHH 425 BMHH 435 BMHH 437 BMHH 443 BMHH 444 BMHH 448 BMHH 449 BMHH 450 BMHH 458 Mỹ Hòa Hưng 17 21 18 19 22 17 20 21 32 20 20 20 20 27 20 15 20 20 25 21 21 22 25 19 21 25 19 27 23 20 20 18 22 30 27 20 20 34 25 20 20 20 21 22 17 18 16 16 16 19 20 20 18 17 21 20 20 20 15 19 19 23 23 20 22 23 20 19 20 20 21 21 21 23 21 15 19 18 23 23 18 20 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 107 108 109 110 11 112 113 114 115 116 117 BMHH 459 BMHH 460 BMHH 463 BMHH 464 BMHH 466 BMHH 467 BMHH 470 BMHH 473 BMHH 474 BMHH 476 BMHH 477 BMHH 478 BMHH 479 BMHH 489 BMHH 495 BMHH 499 BMHH 509 BMHH 532 BMHH 546 BMHH 555 BCP 560 BCP 564 BCP 571 BCP 573 BCP 574 BCP 576 BCP 578 BCP 590 BCP 609 BCP 610 BCP 619 BCP 620 BCP 627 BCP 640 BCP 642 BCP 646 BCP 726 BCP 728 BCP 734 BCP 735 BCP 736 25 20 30 25 25 25 23 23 19 20 20 30 30 21 20 23 19 25 28 31 28 32 33 31 29 25 30 16 18 19 20 18 25 22 18 17 15 28 30 20 20 25 17 18 19 18 21 19 21 21 20 19 20 19 16 17 15 15 21 16 17 14 14 16 16 15 16 16 16 18 14 13 15 16 18 18 16 17 17 17 18 15 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 BCP 740 BOM 881 BPT 883 BPT 894 BCS 895 BCS 896 BCS 898 BCS 899 BCS 900 BCS 902 BCS 908 BCS 909 BCS 910 BCS 912 BCS 915 BCS 916 BCS 918 BCS 919 BCS 920 BCS 921 BCS 924 BCS 925 BCS 927 BCS 929 BCS 931 BCS 934 BCS 935 BCS 939 BCS 945 BCS 946 BCS 949 BCS 950 BOM 964 BOM 965 BCS 979 BCS 983 BCS 987 BCS 990 BCS 992 BOM 994 BOM 995 25 25 27 29 24 25 27 30 25 24 27 25 25 25 15 16 19 20 20 26 25 26 20 29 28 20 28 18 28 29 28 25 22 25 30 30 24 25 28 15 18 13 15 14 15 15 13 18 15 15 18 18 15 15 15 14 18 13 16 11 17 17 17 17 17 18 14 14 18 17 17 14 15 14 15 14 15 12 14 15 15 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 173 177 178 179 180 181 182 183 184 BOM 996 BOM 997 BPT 1002 BPT 1004 BPT 1008 BPT 1010 BPT 1012 BPT 1015 BPT 1016 BPT 1017 BCS 1019 BCS 1021 BCS 1022 BCS 1023 BCS 1030 BCS 1031 BCS 1032 BCS 1034 BCS 1035 BCS 1045 BCS 1046 BCS 1047 BCS 1060 BCS 1063 BCS 1068 BCS 1069 30 30 30 15 15 20 28 26 25 28 25 26 20 27 25 16 16 17 16 20 20 30 17 30 25 30 19 15 15 17 15 15 18 17 15 17 15 15 15 15 18 14 15 14 15 15 20 17 14 15 11 15 Phụ lục Hình điện di sản phẩm rep-PCR 118 khuẩn lạc chọn lọc group thành nhóm để làm data phân tích phân loại phần mềm Gel compar II Phụ lục Tỷ lệ chết cá tra tháng tuổi cảm nhiễm với dịch vi khuẩn E ictaluri (A), A hydrophila (B) A hydrophila+E ictaluri (C) xử lý vi khuẩn B subtilis BMHH-421 B A C Ghi chú: BE24, BE48: Dịch vi khuẩn E ictaluri xử lý với B subtilis BMHH-421 48 24 trước cảm nhiễm cá tra; ĐCE: Dịch vi khuẩn E ictaluri không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm cá tra; BA48, BA72: Dịch vi khuẩn A hydrophila xử lý với B subtilis BMHH-421 48 72 trước cảm nhiễm cá tra; ĐCA: Dịch vi khuẩn A hydrophila không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm cá tra; BAE48, BAE72: Dịch vi khuẩn A hydrophila + E ictaluri xử lý với B subtilis BMHH-421 48 72 trước cảm nhiễm cá tra; ĐCAE: Dịch vi khuẩn A hydrophila + E ictaluri không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm cá tra; ĐC(-): cá không xử lý với vi khuẩn Phụ lục Hiệu bảo vệ (RPS) cá tra nghiệm thức sử dụng vi khuẩn B subtilis BMHH-421 để xử lý dịch A hydrophila (BA48, BA72), E ictaluri (BE24, BE48) A hydrophila+E ictaluri (BAE48 BAE72) Phụ lục Tỷ lệ chết cá tra tháng tuổi xử lý vi khuẩn B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm với E ictaluri (A), A hydrophila (B), A hydrophila+E ictaluri (C) A B C Ghi chú: NTA1, NTA2, NTA3: cá tra xử lý với B subtilis BMHH-421 24, 48 72 trước cảm nhiễm với A hydrophila; ĐCA: cá tra không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm với A hydrophila; NTE1, NTE2, NTE3: cá tra xử lý với B subtilis BMHH-421 24, 48 72 trước cảm nhiễm với E ictaluri; ĐCE: cá tra không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm với E ictaluri; NTAE1, NTAE2, NTAE: cá tra xử lý với B subtilis BMHH-421 24, 48 72 trước cảm nhiễm với A hydrophila + E ictaluri; ĐCAE: cá tra không xử lý với B subtilis BMHH-421 trước cảm nhiễm với A hydrophila+E ictalrui; ĐC(-): cá không xử lý với vi khuẩn Phụ lục Hiệu bảo vệ (RPS) vi khuẩn B amyloliquefaciens BPT894 cá tra A hydrophila (NTA), E ictaluri (NTE) A hydrophila+E ictaluri (NTAE) mốc thời gian ... VÀ CƠNG NGHỆ PHÂN LẬP CÁC CHỦNG VI KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ VÀ XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ TRA Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm... nghệ Công văn vi? ??c gia hạn thời gian thực nhiệm vụ ? ?Phân lập chủng vi khuẩn có hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ xuất huyết cá tra Đồng sông Cửu Long? ?? Quyết định vi? ??c điều chỉnh... nhiệm vụ ? ?phân lập chủng vi khuẩn có Số 136/QĐ-SKHCN ngày hoạt tính đối kháng với vi khuẩn gây 07/03/2019 bệnh gan thận mủ xuất huyết cá tra Đồng sông Cửu Long? ?? Số 24/2020/PLHĐPhụ lục hợp đồng thực