NGHIÊN CỨU NUÔI DƯỠNG 4pirulina platensis QUANG TỰ DƯỠNG BẰNG MÔI TRƯỜNG KHOÁNG CHỨA DỊCH TƯƠNG ĐẬU NÀNH

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NUÔI DƯỠNG Spirulina platensis QUANG TỰ DƯỠNG BẰNG MƠI TRƯỜNG KHỐNG CHỨA DỊCH TƯƠNG ĐẬU NÀNH Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: NGUYỄN ĐÌNH THẢO Niên khóa: 2005 – 2010 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 -i- TỔNG LIÊN ĐỒN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGHIÊN CỨU NUÔI DƯỠNG Spirulina platensis QUANG TỰ DƯỠNG BẰNG MƠI TRƯỜNG KHỐNG CHỨA DỊCH TƯƠNG ĐẬU NÀNH Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS LÊ CHIẾN PHƯƠNG NGUYỄN ĐÌNH THẢO Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 MỤC LỤC Danh mục bảng - ii - Danh mục sơ đồ, đồ thị Danh mục hình ảnh PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Ý nghĩa thực tiễn đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Spirulina platensis: 2.1.1 Lịch sử phát 2.1.2 Vị trí phân loại 2.1.3 Phân bố 2.1.4 Đặc điểm sinh học Spirulina platensis 2.1.5 Giá trị dinh dưỡng 2.1.5.1 Protein 2.1.5.2 Amino acid 2.1.5.3 Acid nucleic 2.1.5.4 Glucid 2.1.5.5 Lipid 2.1.5.6 Sắc tố 2.1.6 Carbohydrat sinh khối Spirulina platensis 2.1.6.1 Vitamin 2.1.6.2 Khoáng chất 2.1.6.3 Enzyme 2.1.7 Một số ứng dụng Spirulina platensis 2.1.7.1 Spirulina _ nguồn để chiết xuất chất có hoạt rính sinh học chất có giá trị dinh dưỡng 2.1.7.2 Spirulina _ nguồn thức ăn bổ sung cho người động vật 2.1.7.3 Spirulina _ nguồn phân bón sinh học 2.1.7.4 Sử dụng Spirulina để xứ lý môi trường 2.1.8 Một số kết nghiên cứu nuôi trồng Spirulina platensis Việt Nam 2.1.9 Triển vọng nuôi Spirulina với qui mô lớn - iii - 2.2 Tổng quan dịch tương đậu nành: 2.2.1 Giới thiệu đậu nành 2.2.1.1 Đặc điểm phân loại thực vật 2.2.1.2 Thành phần dinh dưỡng 2.2.1.3 Công dụng y học đậu nành 2.2.1.4 Một sản phẩm truyền thống đậu nành 2.2.1.5 Ứng dụng đậu nành 2.2.2 Giới thiệu dịch tương đậu nành 2.2.2.1 Quy trình thu nhận dịch tương đậu nành 2.2.2.2 Thành phần dinh dưỡng dịch tương đậu nành 2.2.2.3 Hiện trạng sử dụng dịch tương đậu nành PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 3.2 Nội dung nghiên cứu 3.3 Vật liệu thí nghiệm 3.4 Phương pháp thí nghiệm 3.4.1- Phân tích thành phần dinh dưỡng dịch tương đậu nành 3.4.1.1- Phương pháp xác định nitơ tổng 3.4.1.2- Phương pháp xác định nitơ formol 3.4.1.3- Phương pháp xác định nitơ ammoniac 3.4.1.4- Phương pháp xác định đường tổng 3.4.1.5- Phương pháp xác định đường khử 3.4.2 Phương pháp ni Spirulina platensis Thí nghiệm 1: Nuôi Spirulina platensis quang tự dưỡng môi trường khống Zarrouck Thí nghiệm 2: Ni Spirulina platensis quang tạp dưỡng môi trường Zarrouck (-) ( không chứa NaHCO3) có bổ sung dịch tương đậu nành PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC - iv - ĐẶT VẤN ĐỀ Vi khuẩn lam Spirulina platensis phát từ lâu Cho đến nhiều nước giới sản xuất sử dụng Spirulina platensis Nhật Bản, Hoa Kỳ, Trung Quốc… Ở Việt Nam, Spirulina platensis nuôi trồng với qui mơ bán cơng nghiệp ngồi trời lần năm 1977 với diện tích 5000m2, sản lượng 6000kg/năm ( tính theo trọng lượng khơ) tỉnh Bình Thuận Một số đơn vị tiên phong nuôi sản xuất khuẩn lam Spirulina platensis Cơng ty cổ phần nước khống Vĩnh Hảo Trung tâm Dinh Dưỡng Trẻ Em Tp Hồ Chí Minh Giá trị dinh dưỡng Spirulina platensis cao với hàm lượng protein khoảng 55 – 70% trọng lượng khô với đầy đủ axit amin thiết yếu, giàu vitamin A, vitamin nhóm B, phycocyamin, chlorophyll dồi ( tương đương tiêu chuẩn FAO) Nhờ có hàm lượng dinh dưỡng cao, thành phần dinh dưỡng đa dạng nên sinh khôi Spirulina platensis thu nhận để ứng dụng nhiều lĩnh vực khác y học, làm thức ăn bổ dưỡng, mỹ phẩm… Hiện phương pháp nuôi Spirulina platensis chủ yếu ni bể ngồi trời Chính nhiễm bẩn sinh khối nguyên nhân từ môi trường vi sinh vật tạp nhiễm, bụi bẩn, tạp chất….là khơng thể tránh khỏi Hơn nữa, ni ngồi trời điều kiện mơi trường khơng ổn định khó kiểm sốt Điều ảnh hưởng xấu tới chất lượng sinh khối Spirulina platensis gây phức tạp cho trình chế biến sinh khối sau thu nhận Chất lượng dinh dưỡng Spirulina platensis cải thiện tốt q trình ni loại bỏ điều kiện bất lợi Chính mục tiêu chúng tơi tiến hành thực đề tài: “ Nghiên cứu nuôi Spirulina platensis quang tự dưỡng mơi trường khống có bổ sung dịch tương đậu nành” -1- 1.2- Mục đích: _ Tận dụng nguồn dịch tương đậu nành từ sở sản xuất đậu hũ để ni Spirulina platensis _ Tìm qui trình ni Spirulina platensis sạch, đơn giản, giá thành hạ dễ thực 1.3- Ý nghĩa: Tăng giá trị thương phẩm đậu nành -2- PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ Spirulina platensis: 2.1.1 Lịch sử phát [ 3] Sinh khối Spirulina platensis loại thực phẩm thổ dân Aztecs trước vùng bị đế quốc La Mã xâm lược, người Kanembu Trung Phi dùng làm thực phẩm nhiều kỷ Loại thức ăn thổ dân Aztecs thu vớt từ hồ Texcoco ( Mexico), gọi “ Techuiltal” loại bánh “ Dihé” người dân Kanembu gần hồ Chad Trung Phi làm thực phẩm suốt thời gian dài sinh khối Spirulina platensis, loại thực phẩm tuyệt vời có thành phần dinh dưỡng dồi Từ lâu người ta nghiền sinh khối Spirulina platensis trộn với nước sốt cà chua, tiêu, đậu, cá thịt để ăn Loại thức ăn chiếm 70% bữa ăn người Kanembu hồi Bánh Dihé bánh Techuiltal hồ Texcoco sử dụng làm mát dùng làm thức ăn cho vận động viên chạy marathons, bơi lội Cho đến có nhiều nước giới sản xuất sử dụng sinh khối Spirulina platensis, buôn bán tiêu thụ sản phẩm người phủ, tổ chức sức khỏe, tổ chức xã hội nhiều nước giới công nhận thức ăn bổ dưỡng cịn gọi thực phẩm tương lai ( Food of future) Theo Hills (1980) khuẩn lam Spirulina platensis loại thức ăn cao cấp an toàn bác sĩ Nhật Bản dùng để điều trị số bệnh hiểm nghèo tiểu đường, ung thư, viêm gan Hiện có nhiều cơng ty nhiều nước tổ chức ni trồng, thương mại hóa sinh khối Spirulina platensis 2.1.2 Phân loại học:[4] Lồi Spirulina platensis thuộc: • Chi Spirulina • Họ Oscillatoricea • Bộ Oscillatoriales (Nostocales) • Lớp Cyanophyceae (Cyanobacteria : Vi khuẩn lam ) -3- • Ngành Cyanophyta (Cyanochlorophyta) tức ngành tảo lam có chứa chlorophy1l Spirulina chủ yếu có hai lồi Spirulina platensis Spirulina maxima, Spirulina platensis phổ biến 2.1.3 Phân bố Spirulina chiếm 1/3 sinh khối thực vật trái đất, phần lớn sống môi trường nước, số sống cây, hốc đá, hang động… 2.1.4 Đặc điểm sinh học Spirulina platensis.[3] Spirulina platensis có dạng xoắn lị xo 5-7 vịng nhau, chiều dài sợi thay đổi, đạt tới 1/4 mm thuận lợi cho thu hoạch.Tế bào Spirulina platensis khơng có vỏ cứng bao quanh số loài tảo khác nên có tỉ lệ tiêu hóa hấp thụ cao thể người động vật, dễ phơi sấy khơ Spirulina platensis khơng có khả sinh sản hữu tính, sinh sản cách phân cắt thành đoạn riêng ( đoạn bào) Mỗi đoạn bào đoạn bào rộng μ m , dài μ m, khơng có lục lạp mà thay vào thylakoid phân bố toàn tế bào Các hạt polyphosphat có đường kính 0,5 - μ m thường nằm trung tâm tế bào thylakoid bao quanh Tế bào Spirulina platensis loài vi khuẩn lam khác chưa có nhân điển hình, mà có vùng nhân khơng rõ nên xếp vào lớp Cyanobacteria Spirulina tự nhiên thích sống mơi trường kiềm giàu bicacbonat (HCO3-), pH biến động từ 9,5 – 11, nhiệt độ thích hợp từ 28 – 350C , có khả chịu biến động ánh sáng cao tốt khoảng 25-30 Klux Mơi trường nước thích hợp cho Spirulina có đặc tính: Na+ HCO3- giàu, K+ SO4- giàu, Ca++, Mg++ Cl- thấp 2.1.5 Gía trị dinh dưỡng:[11] 2.1.5.1 Protein: Spirulina platensis có hàm lượng protein cao ( 55 – 70% trọng lượng khô) loại thực phẩm khác Nhiều thịt động vật cá tươi ( 15 -25% trọng lượng tươi), đậu phông ( 25% trọng lượng khô), lúa gạo ( 8-14% trọng lượng khô), sữa ( 3% trọng lượng tươi) -4- Protein Spirulina platensis cao hẳn so với loài động thực vật hàm lượng chất lượng 2.1.5.2 Amino acid: Thành phần acid amin cân đối, gồm đủ lượng acid amin không thay acid amin thay Các loại acid amin thay Spirulina platensis vượt định mức FAO có lượng cystein, methyonin có thành phần thấp cao đậu hạt, trái Với 100% nhu cầu amino acid ngày cần dùng 36g Spirulina platensis Thành phần amino acid Spirulina platensis sản xuất nước ta tương đương nước 2.1.5.3 Acid nucleic: Acid nucleic Spirulina platensis nhỏ 5% Điều chứng tỏ an tồn sử dụng Spirulina So với men bia hàm lượng acid nucleic men bia cao nhiều từ 5-10% trọng lượng khơ Vì khơng có nhiễm độc burin dẫn đến tăng acid uric người động vật gây tình trạng bệnh lí bệnh goud sử dụng Spirulina platensis 2.1.5.4 Glucid: Gồm loại glucid dễ đồng hóa tốn lượng insuline tối thiểu mà khơng gây hạ đường huyết 2.1.5.5 Lipid: Các acid béo tự chiếm 60-70% lipid, có giá trị acid linoleic (vitamin F) Acid linoleic có tác dụng chống sơ mỡ động mạch, bảo vệ tế bào thần kinh, gan Với hàm lượng lipd thấp 6-7%, Spirulina platensis trở thành sản phẩm protein phù hợp cho nhiều đối tượng 10g Spirulina platensis cho 36 calo cholesterol, Spirulina platensis hồn tồn thích hộp với phụ nữ có thai nguời béo phì 2.1.5.6 Sắc tố:[8] Sắc tố yếu tố quan trọng giúp tổng hợp loại hóc mơn cần thiết để điều khiển hoạt động thể Hàm lượng sắc tố sinh khối Spirulina platensis cao, đặc biệt carotenoid, chlorophyll, phycocranin -5- Bảng 1.1: Hàm lượng sắc tố tự nhiên sinh khối Spirulina platensis Tên sắc tố Hàm lượng/10g sinh khối Tỉ lệ 10g (%) khô Phycocyamin (blue) 1500 -2000 mg 15 – 20 Chlorophyll (green) 115mg 1,15 Carotenoid (orange) 37mg 0,37 β - caroten 14mg 0,14 Carotenoid sắc tố màu vàng cam, sinh khối Spirulina platensis dạng β -caroten, xanthophylls, cryptoxanthin, echinenone, zeaxanthin lutein Carotenoid chiếm khoảng 0,37% sinh khối khơ Challem (1981) gọi chlorophyll màu xanh giống hemolglobin, khác nhóm kim loại Mg dạng ion (nên có màu xanh) thay Fe hemolglobin (màu đỏ) Có ý kiến cho kim loại chlorophyll thay ion Fe thay hemolglobin mơ bào Trong sinh khối Spirulina platensis có chứa 1,1% chlorophyll, chiếm tỉ lệ cao tự nhiên, cao so với loại thực phẩm tự nhiên khác Phycocyanin sắc tố quan trọng sinh khối Spirulina platensis, tồn dạng protein phức hợp, chiếm đến 20% trọng lượng sinh khối khô Trong Phycocyanin có ngun tố Fe, Mg có ý nghĩa dinh dưỡng người động vật 2.1.6 Carbohydrat sinh khối Spirulina platensis.[9] Trong sinh khối Spirulina platensis có 15_ 20% glucid, rhamnose glycogen dạng glucid chủ yếu, dễ dàng hấp thụ vào máu mà cần lượng nhỏ insuline để chuyển hóa Nhờ giải phóng lượng nhanh mà không cần hoạt động tuyến tụy nên Spirulina platensis loại thức ăn bổ dưỡng phù hợp cho người bị bệnh tiểu đường 2.1.6.1 Vitamin:[4] Sinh khối Spirulina platensis giàu loại vitamin, đặc biệt vitamin A, vitamin B12, vitamin B1, B2 cao hẳn thịt cá, sản phẩm từ trứng , sữa, nấm men…, -6- lắc đều, giữ nồi cách thủy 10 – 20 phút 25 – 300C để xuất màu Màu bền vững vài Xác định cường độ màu quang phổ kế 490 nm ¾ Xây dựng đường chuẩn: Lấy bình định mức 100 ml cho vào theo thứ tự 1, 2, 3, 4, 5, 6, ml dung dịch đường saccharose mẫu 0,1% , cho nước cất tới vạch định mức Từ bình lấy ml cho vào ống nhuộm màu phenol 5% H2SO4 đậm đặc Trong ống nghiệm chứa tương đương 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 μg saccharose So màu bước sóng 490 nm, sau vẽ đồ thị mẫu Làm thêm ống thử với ml nước cất Tính kết : Trị số mật độ quang (OD) ống đối chứng sau trừ trị số ống thử xác định đường cong mẫu.Với dung dịch cần xác định nồng độ, ta trừ ống thử chiếu lên đường cong mẫu để suy nồng độ x ống, từ tính % lượng đường mẫu 3.5.1.5 Phương pháp xác định đường khử ¾ Ngun tắc: Trong mơi trường kiềm, đường khử kali ferixianua thành kali peroxia Với có mặt gelatin, kali ferixianua kết hợp với sắt sulphate tạo thành chất có màu xanh bền Cường độ màu xác định máy so màu Phương pháp cho phép xác định lượng đường thấp dung dịch (0,01 – 0,1 mg/ml) ¾ Dụng cụ hóa chất: - Dung dịch kali ferixianua (K3Fe(CN)6) : hòa tan 1,65 K3Fe(CN)6và 10 g NaNO3 lít nước cất Bảo quản dung dịch lọ thủy tinh màu nâu - Dung dịch sắt sulphate (Fe2(SO4)3) : hòa tan g Fe2(SO4)3trong 10 ml H2SO4 đậm đặc Đổ từ từ dung dịch vào nước cất có sẵn bình định mức, pha lỗng thành 1000 ml - Gelatin 10% - Trộn lẫn dung dịch Fe2(SO4)3và Gelatin 10% theo tỉ lệ 20 : Hỗn hợp dung dịch sử dụng ngày - 35 - ¾ Cách tiến hành: Lấy g nguyên liệu hòa tan 20 ml nước cất, lọc lấy dịch lọc (dịch đường), rửa bã lọc sau hiệu chỉnh đến mức 50 ml Cho vào ống nghiệm (V = 20 ml) ml dịch chiết đường ml dung dịch kali ferixianua, khuấy đều, đun nồi cách thủy sôi 15 phút Sau để nguội, thêm vào ống nghiệm ml dung dịch Fe2(SO4)3khuấy dẫn đến mức 20 ml Đo cường độ màu máy so màu bước sóng 710 nm ¾ Tính kết : Dựa vào mật độ quang học (OD) đối chiếu với độ thị chuẩn, tính khối lượng đường 3.5.2 Phương pháp nuôi Spirulina platensis: Tiến hành nuôi Spirulina platensis mơi trường: mơi trường khống Zarrouck, mơi trường khống Zarrouck(-) mơi trường khống Zarrouk(-) có bổ sung dịch tương đậu nành theo tỉ lệ tăng dần từ 1- 10% 3.5.2.1 Ni Spirulina platensis hệ thống kín: Là hệ thống ống thủy tinh suốt, ống dài 120 cm, đường kính 3.5 cm, nối tiếp tạo thành hệ thống kín khí nước Mục đích: Ni Spirulina platensis hệ thống kín nhằm tránh ảnh hưởng khơng khí bên ngồi ảnh hưởng đến chất lượng sinh khối tảo Hình 3.1: Hệ thống nuôi Spirulina platensis - 36 - 3.5.2.2 Phương pháp xác định độ ẩm: ¾ Ngun tắc: Thơng thường độ ẩm nguyên liệu xác định phương pháp sấy cho kết gần Vì sấy nhiệt độ cao số chất hữu nguyên liệu bị phân hủy bay với nước, có lượng nhỏ nuớc liên kết không bay hết Để hạn chế sai số, người ta sấy 100 _ 105 0C từ – ¾ Dụng cụ: _ Tủ sấy _ Cân phân tích, xác đến 0.0001g _ Bình hút ẩm _ Đĩa petri ¾ Cách tiến hành: Cân đĩa petri sấy 100 _ 1050C với độ xác đến 0.5 mg Cân xác lượng mẫu để đĩa petri với độ xác đến 0.1 mg Sấy đĩa petri có mẫu tủ sấy 105 0C Để nguội bình hút ẩm 15 _ 20 phút, cân mẫu với độ xác đến mg Rồi sấy tiếp 30 phút nhiệt độ trên, sau lấy để nguội bình hút ẩm, cân lại, sai lệch lần cân không mg ¾ Kết quả: Độ ẩm nguyên liệu (%) xác định theo công thức: X= ( G1 – G2) * 100 (G1 – G) Trong đó: G0: trọng lượng đĩa petri sấy (g) G1: Trọng lượng đĩa petri sấy mẫu trước sấy (g) G2: Trọng lượng đĩa petri sấy mẫu sau sấy (g) 3.5.2.3 Phương pháp đo mật độ quang ( OD): ¾ Dụng cụ thiết bị: _ Curvet _ Ống nghiệm - 37 - _ Nước cất _ Máy đo mật độ quang ¾ Cách đo: _ Chiết dịch nuôi ống nghiệm _ Đo mật độ quang bước song 660 nm, đo mẫu nhiều lần, lấy giá trị trung bình _ Ghi nhần kết đo mật độ quang ngày vào khoảng thời gian từ 9h30’ đến 10h30’ 3.5.2.4 Phương pháp xác định suất sinh khối khơ: ¾ Dụng cụ thiết bị: _ Giấy lọc _ Cân phân tích _ Tủ sấy ¾ Cách đo: _ Sấy giấy lọc đến khối lượng không đổi, ghi nhận khối lượng giấy lọc (m1) _ Lọc thể tích ( V lit) dịch sinh khốim khuẩn lam qua giấy lọc sấy Để nước, đem sấy 60 0C Sau đem cân, ghi nhận khối lượng (m2) ¾ Cách tính: Năng suất sinh khối khô (g/l) = (m2 – m1) / V - 38 - Chương 4: Kết thảo luận 4.1 Kết phân tích thành phần dinh dưỡng dịch tương đậu nành: 4.1.1 Kết xác định hàm lượng Nito tổng: Mẫu VHCl(ml) Nitơ tổng(%) 2.35 0.082 Nito tồng(g/l) 0.82 4.1.2 Kết xác định hàm lượng nito formol: VNaOH Mẫu 0.1N định VNaOH 0.1N định VNaOH 0.1N định VNaOH phân lần phân lần phân lần (ml) (ml) (ml) 0.2 0.15 0.2 Mẫu thử 0.1N trung bình đạm(g/l) 0.13 0.18 0.05 4.1.3 Kết xác định hàm lượng nito amoniac: Mẫu VNaOH Nitơ amoniac(g/l) 0.2 0.027 - 39 - Hàm lượng 4.1.4 Kết xác định hàm lượng đường tổng Đồ thị 4.1: Đồ thị đường chuẩn đường tổng Mẫu OD Đường tổng (g/ml) 0.049 0.135 - 40 - 4.1.5- Kết xác định hàm lượng đường khử Đồ thị 4.2: Đồ thị đường chuẩn đường khử Mẫu OD Đường khử (g/ml) 0.468 0.083 4.2 Kết nuôi Spirulina platensis : 4.2.1 Kết khảo sát tăng trưởng Spirulina platensis môi trường dịch tương đậu nành: Thí nghiệm 1: Ni Spirulina platensis mơi trường khoáng Zarrouck: quan sát thấy Spirulina platensis phát triển tốt, cho suất sinh khối cao sau 16 ngày ni, sau sinh khối bắt đầu giảm dần Thí nghiệm 2: Ni Spirulina platensis mơi trường khoáng Zarrouck(-): Spirulina phát triển chậm bắt đầu chết sau ngày ni - 41 - Thí nghiệm3: Dịch tương đậu nành pha lỗng mơi trường Zarrouck(-) với nồng độ dịch tương 10%, 20%, 30%, 40%, 50% - Ở nồng độ dịch tương đậu nành 50% Spirulina platensis chết hết sau ngày - Ở nồng độ dịch tương đậu nành 30%, 40% Spirulina platensis chết hết sau ngày - Ở nồng độ dịch tương đậu nành 10%, 20% Spirulina platensis sống phát triển yếu Thí nghiệm4: Dịch tương đậu nành pha lỗng mơi trường Zarrouck(-) với nồng độ dịch tương 1%, 2%, 4%, 6%, 8% Chúng nhận thấy nồng độ Spirulina platensis sống phát triển với tốc độ khác Kết thí nghiệm thể bảng sau: Bảng 4.1: Khảo sát phát triển Spirulina platensis môi trường thí nghiệm Ngày thí nghiệm 10 12 14 16 Nồng độ dịch tương đậu nành môi trường Zarrouck(-) 1% 2% 4% 6% 8% 0,300 0,379 0,541 0,758 0,893 1,057 0,936 0,905 0,831 0,300 0,381 0,545 0,767 0,906 1,103 1,158 1,140 1,082 0,300 0,385 0,547 0,780 0,953 1,129 1,385 1,537 1,525 - 42 - 0,300 0,397 0,558 0,783 1,009 1,251 1,477 1,591 1,675 0,300 0,409 0,570 0,827 1,120 1,379 1,583 1,736 1,850 Môi trường đối chứng Zarrouck Zarrouck (-) 0,300 0,300 0,371 0,457 0,426 0,730 0,512 0,940 0,600 1,200 0,502 1,527 0,476 1,612 0,403 1,754 0,387 1,887 Giá trị OD 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 1% 2% 4% 6% 8% Zarrouk(-) Zarrouk Ngày thí nghiệm Đồ thị 4.3: Sự phát triển Spirulina platensis mơi trường ¾ Quan sát – Nhận xét: Kết bảng đồ thị cho thấy tốc độ phát triển giới hạn tăng trưởng Spirulina platensis phụ thuộc tỉ lệ với nồng độ dịch tương đậu nành Tức với chai có nồng độ dịch tương đậu nành mơi trường Zarouck(-) cao tốc độ phát triển nhanh giới hạn sinh trưởng lớn Chúng nhận thấy với nồng độ dịch tương đậu nành 8% tốc độ giới hạn tăng trưởng Spirulina platensis gần với môi trường đối chứng Zarrouck Còn nồng độ dịch tương khác khuẩn lam phát triển chậm Qua thí nghiệm chúng tơi kết luận rằng: Spirulina platensis khơng thể sống mơi trường có nồng độ dịch tương cao 10% Ở nồng độ dịch tương đậu nành 8% Spirulina platensis phát triển tốt tương đương với môi trường Zarrouck Vậy 8% dịch tương đậu nành thay NaHCO3 cần dùng môi trường Zarrouck - 43 - 4.2.2 Hàm lượng đạm tổng số ( Ntổng số) protein tổng số (Prtổng số) sinh khối Spirulina platensis môi trường dịch tương đậu nành: Bảng 4.2: Hàm lượng đạm tổng số protein tổng số sinh khối khuẩn lam Môi trường NTổng số (%) Prtổng số(%) Zarrouck 10,51 65,67 Dịch tương đậu nành 10,40 65 8%/Zarouck(-) % 70 60 50 Zarrouk 40 Dịch tương đậu nành 30 20 10 Nitơ tổng Protein tổng Đồ thị 4.4: Hàm lượng đạm protein tổng số khuẩn lam ¾ Quan sát - Nhận xét: Kết phân tích đạm cho thấy khác biệt không đáng kể hàm lượng protein Spirulina platensis nuôi môi trường dịch tương đậu nành Spirulina platensis nuôi môi trường đối chứng Zarrouck Điều cho phép chúng tơi có ghi nhận bước đầu khả quan, rõ ràng dịch tương đậu nành không gây ảnh hưởng xấu lên thành phần protein khuẩn lam Chúng hy vọng có hội đánh giá tiêu khác Lipid, hydratcarbon, sắc tố… Spirulina platensis môi trường dịch tương đậu nành với kết kiểm định vi sinh sinh khối khuẩn lam thu để đưa kết luận đầy đủ - 44 - 4.2.3 Kết đánh giá cảm quan sinh khối Spirulina platensis: Hình 4.1: Lọc thu sinh khối Spirulina platensis Hình 4.2: Sinh khối Spirulina platensis tươi - 45 - Hình 4.3: Sinh khối Spirulina platensis khơ Bảng 4.3: Bảng kết đánh giá cảm quan sinh khối Spirulina platensis Tên Điểm từ 0-5 tiêu Mẫu tươi Trạng thái Màu sắc Mùi vị 5 Yêu cầu Mẫu khô Mẫu tươi Mẫu khô Dạng keo, có hàm ẩm Dạng bột sấy khơ nên cao hàm ẩm thấp Khơng có vật thể lạ Khơng có vật thể lạ Xanh lam, màu đặc Xanh lam thẫm trưng Spirulina màu so với mẫu platensis tươi Mùi đặc trưng Mùi đặc trưng Spirulina platensis Spirulina platensis 4.7 Nhận xét: hai loại sản phẩm xếp vào loại tốt 4.2.4 Kết xác định độ ẩm: Bảng 4.4: Kết xác định độ ẩm tỉ lệ chất khô Thành phần Spirulina platensis Độ ẩm (%) Chất khô (%) 91,8 8,2 - 46 - 4.5.2 Kết xác định suất sinh khối khô khuẩn lam: Bảng 4.5: Năng suất sinh khối khô khuẩn lam Môi trường Zarrouck(-) Zarrouck Dịch tương đậu nành/Zarouck(-) tỉ lệ 8% Năng suất sinh khối 3.12 5.04 khô (g/l) - 47 - 4.98 PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN: _ Spirulina platensis vừa có khả quang tự dưỡng: sinh trưởng phát triển tốt môi trường khống Zarrouck, vừa có khả quang tạp dưỡng: sinh trưởng phát triển bình thường mơi trường khống Zarrouck(-) có bổ sung dịch tương đậu nành tỉ lệ 8% _ Kết phân tích đạm cho thấy khác biệt không đáng kể hàm lượng protein Spirulina platensis ni mơi trường khống Zarrouck mơi trường khống Zarouck(-) có bổ sung dịch tương đậu nành tỉ lệ 8% _ Dịch tương đậu nành thay lượng NaHCO3 cần dùng môi trường Zarrouck với tỉ lệ 8% _ Khi nuôi hệ thống kín có sục khí liên tục, Spirulina platensis phát triển tối ưu so với phương pháp nuôi tĩnh, đồng thời sinh khối Spirulina platensis thu có phẩm chất tốt ĐỀ NGHỊ: Vì thời gian cịn hạn chế nên chưa giải vấn đề sau: _ Phân tích thêm số tiêu vi sinh sinh khối Spirulina platensis E.coli, Coliform Samonella _ Nuôi Spirulina platensis với qui mô lớn để thấy rõ khả tăng trưởng _ Nghiên cứu qui trình chế biến sử dụng sinh khối khuẩn lam cho thực hiệu quả, tận dụng tối đa dưỡng chất dược chất có sinh khối _ Mở thêm hướng nghiên cứu có liên quan đến nội dung đề tài ví dụ khả chuyển hóa chất gây nhiễm chất thải _ Tìm hiểu nghiên cứu trình tách chiết sắc tố phycocyanin sinh khối Spirulina platensis - 48 - TÀI LIỆU THAM KHẢO A TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Ngạc Văn Giậu Chế biến đậu nành lạc thành thức ăn giàu protein.NXB Nông Nghiệp, 1983, 213 tr Đặng Đình kim, Đặng Hồng Phước Hiền Vi tảo ứng dụng chúng Tạp chí sinh học, 9/1994, tr.9-12 Hoàng Nghĩa Sơn Nghiên cứu sản xuất sử dụng tảo Spirulina platensis làm thức ăn bổ sung chăn nuôi gà qui mô gia đình Luận văn tiến sĩ nơng nghiệp, 1996, 122 tr Nguyễn Hữu Thước Tảo Spirulina platensis – nguồn dinh dưỡng dược liệu quí NXB Khoa học Kỹ Thuật Hà Nội, 1998 Bùi Thị Như Thuần, Nguyễn Phùng Tiến, Bùi Minh Đức.Kiểm nghiệm chất lượng tra vệ sinh an toàn thực phẩm NXB Y Học, 1991, tr 16- 18 Nguyễn Ngọc Nhân Ái, Tận dụng bã Đinh Lăng (Spirulina platensis)sau côn nghiệp dược để ni trồng nấm linh chi ( Ganoderma lucidum), khóa luận cử nhân khoa học, ngành sinh học, chuyên ngành vi sinh , khoa sinh học trường Đại học Khoa học tự nhiên Tp.HCM, 2008 Nguyễn Đình Huyên cộng Giáo trình thực tập lớn sinh hóa Trường Đại Học Tổng Hợp TpHCM, 1985, tr.43-46 B TÀI LIỆU TIẾNG ANH Henrikson R, The nutritional composition of Spirulina – Earth food Spirulina, Book 1980, p 28- 29 Challem, J.J, Spirulina: a good health giud, Keat publishing, NewCanaan CT, 1981, p.13-15 10 Jassby Alan, Spirulina: Amodel for microalgae as a Human food, Algae and Human affair, Cambridge Universisy Press, 1988, p.141 – 179 11 Henrikson R, Earth food Spirulina, Book 1980, p.38-40 - 49 - ... màu tím đỏ BO 2- + H+ Ỉ HBO2 ¾ Hóa chất thiết bị : - Máy Kjeldahl bán tự động hãng Prolabo - Burret 25 ml - 29 - - Bếp nung - Bình chưng cất - H2SO4 đậm đặc - NaOH 32% - HCl 0,25N - Chất xúc tác... khác chia làm loại: - 20 - - Loại mềm - Loại cứng - Loại đậu phụ lụa Thành phần dinh dưỡng đậu hủ: - Tên chung đậu hủ: soybean curd - Tên địa phương: đậu hủ, đậu phụ (Việt Nam) - Nguyên liệu: đậu... H2SO4 ặ (NH4)2SO4 ắ Húa chất thiết bị : - 32 - - Máy Kjeldahl bán tự động hãng Prolabo - Burret 25 ml - MgO khan - Dung dịch H2SO4 0,1N - Dung dịch NaOH 0,1N - Phenoltalein 1% ¾ Cách tiến hành: Cân