0358BƯỚC ĐẦU TÌM HIẾU KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN TRÊN GEN HBB GÂY BỆNH THIỀU MÁU HỎNG CẢU HÌNH LIÊM

B TR GIÁO D C VẨ ẨO T O NG IH CM TP.HCM BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI P Tên đ tài: B C PHÂN T U TỊM HI U K THU T SINH H C TRONG XỄC NH T BI N TRểN GEN HBB GÂY B NH THI U MỄU H NG C U HỊNH LI M KHOA CÔNG NGH SINH H C CHUYÊN NGÀNH: VI SINH ậ SINH H C PHÂN T GVHD: ThS Tr ng Kim Ph SVTH: Nguy n Th Thu Ngân MSSV: 1053012479 Khóa: 2010 - 2014 TP.HCM, tháng 06 n m 2014 ng Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr L IC M Em xin g i lịng tri ơn đ n Tr ng Kim Ph ng i đƣ t n tình h ng N ng Kim Ph ng, ng d n truy n đ t ki n th c cho em trình h c t p giúp em hồn thành t t chuyên đ khóa lu n t t nghi p Em c ng chơn thƠnh c m n QuỦ Th y Cô khoa Công Ngh Sinh H c ậ Tr ng i h c M TP.HCM đƣ t n tình giúp đ truy n đ t ki n th c cho em trình h c t p Xin chân thành c m n cô Lê Huy n Ái Thúy, th y Lao c Thu n đƣ t n tình giúp đ t o u ki n thu n l i cho em su t th i gian th c hi n chuyên đ khóa lu n t t nghi p Xin chân thành c m n Trung tơm ch n đoán y khoa Medic đƣ t o u ki n thu n l i vƠ giúp đ em th i gian th c hi n chuyên đ khóa lu n t t nghi p Em c ng xin g i l i bi t n sơu s c đ n gia đình, ng i thân l i c m n đ n b n bè đƣ đ ng viên em su t th i gian h c t p Sau em xin chân thành c m n QuỦ Th y Cô đƣ dƠnh th i gian đ c xem xét chuyên đ khóa lu n t t nghi p c a em Sinh viên th c hi n Nguy n Th Thu Ngân Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân ậ 1053012479 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr DANH M C CÁC CH ng Kim Ph ng VI T T T ACS Acute chest syndrome ARMS Amplification refractory mutation system ASA Allele specific amplification AS-PCR Allele specific ậ polymerase chain reaction bp Base pair ddNTP Dideoxynucleotide triphosphat dNTP Deoxynucleotide triphosphat EDTA Ethylendiamin Tetraacetic Acid Glu Glutamic Hb Hemoglobin HbA Hemoglobin A HbA2 Hemoglobin A2 HbAS Hemoglobin A ậ hemoglobin S HBB Beta-hemoglobin HbC Hemoglobin C HbD Hemoglobin D HbE Hemoglobin E HbF Hemoglobin F HbS Hemoglobin S HbSbetathal Hemoglobin S ậ beta thalassemia HbSC Hemoglobin S - hemoglobin C Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 i Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph HbSD Hemoglobin S - hemoglobin D HbSS Hemoglobin S - Hemoglobin S IDT Integrated DNA Technologies IQ Intelligence Quotient Lys Lysine NCBI National Center for Biotechnology Information NIH National Institutes of Health NST Nhi m s c th nu Nucleotide OD Optical Density PCR Polymerase chain reaction PMC Pubmed Central RFLP Restriction fragment length polymorphism SCA Sickle cell anemia SCD Sickle cell disease SNP Single nucleotide polymorphism SSCP Single strand conformation polymorphism STT S th t TAE Tris-acetate-EDTA Tm Melting temperature UV Ultraviolet Val Valine WHO World Health Organisation Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 ng ii Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr THU T NG ng DI N GI I Ti ng Vi t Ti ng Anh B nh h ng c u hình li m Sickle cell disease t qu ng Kim Ph Stroke H i ch ng ng c c p tính Acute chest syndrome Thi u máu h ng c u hình li m Sickle cell anemia T n th Chronic organ damage ng c quan m n tính Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 iii Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng DANH M C CÁC B NG B ng I.1 Các đ c m lâm sàng c a b nh h ng c u hình li m B ng I.β Các đ c m sinh h c c a b nh h ng c u hình li m B ng II.1 Thành ph n ph n ng PCR v i c p m i HBB1-F HBB1-R .21 B ng II.2 Chu k nhi t cho ph n ng PCR v i c p m i HBB1-F HBB1-R 22 B ng II.3 Thành ph n ph n ng PCR v i c p m i HBB2-F HBB2-R .22 B ng II.4 Chu k nhi t cho ph n ng PCR v i c p m i HBB2-F HBB2-R 23 B ng III.1 Các d ng đ t bi n gen HBB 26 B ng III.2 T l th đ t bi n gen HBB .27 B ng III.γ Các ph ng pháp đ c s d ng xác đ nh đ t bi n .27 B ng III.4 Thơng tin trình t gen HBB thu th p NCBI 28 B ng III.5 Các h m i thu th p đ c .29 B ng III.6 Các thông s v t lý c a m i 31 B ng III.7 Kh o sát đ đ c hi u c a m i HBB1-F HBB1-R, HBB2-F HBB2R b ng ph n m m Annhyb 32 B ng III.8 đ c hi u c a h m i b ng công c Blast 33 B ng III.9 K t qu đo OD DNA b gen ng i c a m u b nh ph m 35 B ng Thông tin m u b nh ph m s d ng nghiên c u 55 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 iv Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng DANH M C HÌNH NH Hình I.1: Hình nh c a gen HBB[44] Hình I.2: Hình nh mô t b c ph n ng PCR (P1 vƠ Pβ: đo n m i- Primers)[49] 15 Hình III.1: Hình nh mơ t v trí khu ch đ i vùng gen HBB c a b m i HBB1-F HBB1-R, HBB2-F HBB2-R 35 Hình III.2: K t qu n di kh o sát nhi t đ lai c a c p m i HBB1-F HBB1-R 37 Hình III.3: K t qu n di s n ph m PCR m u v i c p m i HBB1-F HBB1-R 38 Hình III.4a: K t qu n di s n ph m PCR m u v i c p m i HBB1-F HBB1R 39 Hình III.4b: K t qu n di s n ph m PCR m u v i c p m i HBBβ-F HBB2R 39 Hình III.5a: K t qu n di s n ph m PCR m u v i c p m i HBB1-F HBB1R Hình III.5b: K t qu n di s n ph m PCR m u v i c p m i HBBβ-F HBB2R Hình III.6: K t qu Blast trình t A3-F NCBI 42 Hình III.7: K t qu phơn tích tính t ng đ ng c a trình t A3-F v i trình t gen HBB v trí b t c p c a m i HBB1-R 43 Hình 1: M c đ t ng đ ng c a trình t (AF007546) trình t (U01317) Seaview .53 Hình 2: K t qu Blast c a trình t (AF007546) NCBI 54 Hình 3: K t qu ki m tra đ đ c hi u c a c p m i HBB1-F HBB1-R b ng ph n m m Annhyb .55 Hình 4: M c đ t ng đ ng c a trình t A3-F trình t gen HBB 56 Hình 5: M c đ t ng đ ng c a trình t A3-R trình t gen HBB .57 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 v Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng M CL C TV N PH N I: T NG QUAN I.1 T NG QUAN V B NH THI U MÁU H NG C U HÌNH LI M I.1.1 T ng quan v gen HBB (beta-hemoglobin)[44] .3 I.1.1.1 I.1.2 B nh h ng c u hình li m (Sickle cell disease, SCD) .4 I.1.2.1 nh ngh a b nh h ng c u hình li m (SCD) I.1.2.2 Các th b nh h ng c u hình li m .5 I.1.2.3 D u hi u c a b nh h ng c u hình li m I.1.3 I.2 Gen HBB[44] B nh h ng c u hình li m th HbSS[24] TÌNH HÌNH B NH THI U MÁU H NG C U HÌNH LI M I.2.1 Tình hình th gi i I.2.2 Tình hình b nh I.3 Vi t Nam 10 BI N CH NG C A B NH THI U MÁU H NG C U HÌNH LI M 10 I.3.1 t qu 10 I.3.2 H i ch ng ng c c p tính (ACS) 10 I.3.3 T n th I.4 TÁC I.5 CÁC PH ng c quan m n tính 11 NG C A B NH THI U MÁU H NG C U HÌNH LI M 11 NG PHÁP CH N OÁN B NH THI U MÁU H NG C U HÌNH LI M 13 I.5.1 Xét nghi m máu 13 I.5.2 Xét nghi m c n lâm sàng .13 I.5.3 i n di hemoglobin 13 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 vi Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng I.5.4 Ph ng pháp PCR (Polymerase chain reaction) 14 I.5.5 Ph ng pháp gi i trình t .15 I.5.6 M t s ph ng pháp khác 16 PH N II: V T LI U VẨ PH NG PHÁP NGHIÊN C U II.1 V T LI U 18 II.2 PH NG PHÁP NGHIÊN C U .18 II.2.1 Khai thác d li u 18 II.2.2 Kh o sát in silico ậ thi t k m i 18 II.2.3 Kh o sát th c nghi m 19 II.2.3.1 Tách chi t DNA .19 II.2.3.2 Ki m tra ch t l ph 20 II.2.3.3 Ph n ng PCR 21 II.2.3.4 Ph ng pháp n di 23 II.2.3.5 Ph ng pháp gi i trình t 24 ng DNA thu nh n b ng ph ng pháp đo quang PH N III: K T QU VÀ BÀN LU N III.1 KHAI THÁC D LI U 26 III.1.1 Thu th p báo 26 III.1.2 Thu th p trình t gen HBB 27 III.1.3 Thu th p b m i xác đ nh đ t bi n gen HBB .29 III.2 KH O SÁT IN SILICO 30 III.2.1 Trình t gen HBB 30 III.2.2 Trình t m i 30 III.3 KH O SÁT TH C NGHI M 35 III.3.1 K t qu đo OD 35 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 vii Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng III.3.2 K t qu ph n ng PCR vƠ n di 36 III.3.3 K t qu gi i trình t 41 PH N IV: K T LU N VẨ NGH IV.1 K T LU N 45 IV.1.1 Khai thác d li u 45 IV.1.2 Kh o sát in silico 45 IV.1.3 Kh o sát th c nghi m 45 IV.2 NGH .46 TÀI LI U THAM KH O 47 PH L C 53 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 viii Chuyên đ khóa lu n t t nghi p Hình III.7: K t qu phơn tích tính t GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng ng đ ng c a trình t A3-F v i trình t gen HBB v trí b t c p c a m i HBB1-R Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 43 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr PH N IV: K T LU N VẨ Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 ng Kim Ph NGH ng Chuyên đ khóa lu n t t nghi p IV.1 GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng K T LU N Sau th i gian th c hi n chuyên đ khóa lu n t t nghi p, đƣ thu nh n đ c m t s k t qu : IV.1.1 Khai thác d li u Thi u máu h ng c u hình li m th HbSS (Sickle Hemoglobin) m t d ng b nh lý di truy n v máu, có tính ch t gia đình, th đ ng h p, đ t bi n m (GAG GTG) exon c a gen thành valine (Glu6Val) – globin d n đ n s thay th c a acid glutamic v trí acid amin th sáu c a chu i polypeptide ậ globin làm bi n đ i HbA thành HbS, d n đ n thi u máu, có th làm gi m tu i th gây t vong cho ng i b nh T l đ t bi n th HbSS báo tham kh o n m kho ng 75 ậ 85%, n i tr i cơng trình nghiên c u c a Parent F c ng s (2011) t l đ t bi n th HbSS 98% [36], đơy lƠ th đ t bi n n i tr i c a lo i b nh thi u máu h ng c u hình li m th S Vi t Nam cho đ n n m β014, v n ch a có s li u th ng kê c th v tình hình b nh thi u máu h ng c u hình li m IV.1.2 Kh o sát in silico Thu th p đ h p v i ph c c p m i (HBB1-F HBB1-R, HBB2-F HBB2-R) phù ng pháp AS-PCR dùng đ kh o sát s đ t bi n gen HBB gây b nh thi u máu h ng c u hình li m IV.1.3 Kh o sát th c nghi m Ti n hƠnh s d ng ph γ m u b nh ph m ng pháp phenol/chloroform đ thu nh n DNA b gen ng th i, ghi nh n m t s b c x lỦ đ t ng hi u qu thu h i DNA b gen: pha loƣng m u,ầ Ti n hƠnh ph n ng PCR γ m u b nh ph m (1, 2, 3) v i b m i: c p m i HBB1-F HBB1-R đ c hi u v i alen hoang d i gen HBB v i s n ph m khu ch đ i 517 bp, c p m i HBB2-F HBB2-R đ c hi u v i alen đ t bi n (A  T) gen HBB v i s n ph m khu ch đ i 267 bp: Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 45 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng M u 1: gen HBB th hoang d i v i s n ph m khu ch đ i 517 bp (c p m i HBB1-F HBB1-R) M u 2: gen HBB th hoang d i v i s n ph m khu ch đ i 517 bp (c p m i HBB1-F HBB1-R) s n ph m khu ch đ i 267 bp (c p m i HBBβ-F HBB2R) M u 3: gen HBB th hoang d i v i s n ph m khu ch đ i 517 bp (c p m i HBB1-F HBB1-R) vƠ s n ph m khu ch đ i β67 bp (c p m i HBBβ-F HBB2R) ng th i, chúng tơi thu đ c k t qu gi i trình t c a m u b nh ph m s γ v i c p m i HBB1-F HBB1-R (alen hoang d i) IV.2 NGH Trong trình th c nghi m, th c hi n thƠnh công ph n ng PCR khu ch đ i gen HBB v i c p m i HBB1-F HBB1-R v i DNA c a γ m u b nh ph m Tuy nhiên, ph n ng PCR khu ch đ i gen HBB v i c p m i HBB2-F HBB2-R khơng n đ nh, khơng th g i gi i trình t trình t gen HBB th đ t bi n Do v y, n u có u ki n, chúng tơi ti p t c th m dò nh m hoƠn thi n quy trình PCR phù h p nh m xác đ nh th đ t bi n gen HBB gơy thi u máu h ng c u hình li m ng i Vi t Nam v i b m u ch ng d ng vƠ b b nh ph m b nh thi u máu h ng c u hình li m c a b nh nhơn Vi t Nam Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 46 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng TÀI LI U THAM KH O Tài li u ti ng Vi t Hà Th Anh, Huy t h c – Truy n máu, B Y T , trang 107 ậ 116 Tr n V n Bé, Lâm sàng huy t h c, NXB Y H c, trang 75 ậ 83 Hu nh Thùy D ng (β008), Sinh h c phân t , NXB Giáo D c, trang 196 ậ 201 Thái Quý (2006), Máu, truy n máu, b nh máu th ng g p, NXB Y H c, trang 113, 121 Quy n ình Thi, Nơng v n H i, Nh ng k thu t PCR ng d ng phân tích DNA, t p II, Hà N i, trang 28 ậ 37 Tài li u ti ng Anh Alanazi M., Abduljaleel Z, Khan W, Warsy AS, Elrobh M., Khan Z, Amri AA, Bazzi MD (2011), In Silico Analysis of Single Nucleotide Polymorphism (SNPs) in Human -Globin Gene, Plos One 6(10) Ballas SK, Kesen MR, Goldberg MF, Lutty GA, Dampler C, Osunkwo I, Wang WC, Hoppe C, Hagar W, Darbari DS, Malik P (2012), Beyond the Definitions of the Phenotypic Complications of Sickle Cell Disease: An Update on Management, The Scientific World Journal, 2012:949535 Breda L, Casu C, Gardenghi S, Bianchi N, Carteqni L, Narla M, Yazdanbakhsh K, Musso M, Manwani D, Little J, Gardner LB, Kleinert DA, Prus E, Fibach E, Grady RW, Giardina PJ, Gambari R, Rivella S (2012), Therapeutic Hemoglobin Levels after Gene Transfer in and in Hematopoietic Cell of -Thalassemia Mice -Thalassemia and Sickle Cells Disease Patients, Plos One 7(3) Claudino MA, Fertrin KY (2012); Sickling Cells, Cyclic Nucleotides, and Protein Kinases: The Pathophysiology of Urogenital Disorders in Sickle Cell Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 47 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Anemia, Hindawi Publishing Corporation Anemia, Vol 2012 (2012) 10 Côbo VA, Chapadeiro CA, Ribeiro JB, Moraes-Souza H, Martins PRJ (2013), Sexuality and sickle cell anemia, Rev Bras Hematol Hemoter, 35(2):89-93 11 Chan OT, Westover KD, Dietz L, Zehnder JL, Schrijver I (2010), Comprehensive and Efficient HBB Mutation Analysis for Detection of Hemoglobinopathies in a Pan-Ethnic Population, American Society for Clinical Pathology, 133(5):700-707 12 Desai AA, Zhou T, Ahmad H, Zhang W, Mu W, Trevino S, Wale MS, Raghavachari N, Kato GJ, Peters-Lawrence MH, Thiruvoipati T, Turner K, Artz N, Huang Y, Patel AR, Yuan J, Gordeuk VR, Lang RM, Garcia JGN, Machado RF (2012), A novel molecular singature for elavated tricuspid regurgitation velocity in sickle cell disease, American Journal of Respiratory and Critical care Medicine Vol 186 13 Driss A, Asare KO, Hibbert JM, Gee BE, Adamkiewicz TV, Stiles JK (2009), Sickle Cell Disease in the Post Genomic Era: A Monogenic Disease with a Polygenic Phenotype, NIH Public Access Author Manuscript, 2009(2):23-48 14 Edwin AK, Edwin F, Etwire V (2011), Controlling sickle cell disease in Ghana ậ ethics and options, The Pan African medical Journal 10:14 15 Epstein FH (1997), Pathogenesis and treatment of sickle cell disease, The New England of medicine 337:762-769 16 Ezenwosu OU, Emodi IJ, Ikefuna AN, Chukwu BF, Osuorah CD (2013), Determinants of academic performance in children with sickle cell anaemia, BioMed Central, 13:189 17 Fei Z, Ono T Smith LM (1998), MALDI-TOF mass spectrometric typing of single nucleotide polymorphisms with mass-tagged ddNTPs, Oxford University Press, 26(11): 2827-2828 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 48 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng 18 Frenette PS, Atweh GF (2007), Sickle cell disease: old discoveries, new concepts, and future promise, The Journal of Clinical Investigation, 117(4):850-858 19 Gee BE (2013), Biologic Complexity in Sickle Cell Disease: Implications for Developing Targeted Therapeutics, The Scientific World Journal, Hindawi Publishing Corporation Vol 2013 20 Glassberg JE, Wang J, Cohen R, Richardson LD, Debaun MR (2012), Risk Factors for Increased ED Utilization in a Multinational Cohort of Chirdren with Sickle Cell Disease, Acad Emerg Med 19(6): 664ậ672 21 Gomes LMX, Vieira MM, Reis TC, Barbosa TLA, Caldeira AP (2011), Knowledge of family health program practitioners in Brazil about sickle cell disease: a descriptive, cross-sectional study, BioMed Central 12:89 22 Gupta RB, Sickle Cell Disease in Central India ậ Need for Micro Level Planning, Proceeding of National Symposium on Tribal Health 23 Hyacinth HI, Gee BE, Adamkiewicz TV, Adams RJ, Kutlar A, Stiles JK, Hibbert JM (2012), Plasma BDNF and PDGF-AA levels are associate with high TCD velocity and stroke in children with sickle cell anemia, NIH Public Access Author Manuscript 60(1): 302-308 24 Ilesanmi OO (2010), Pathological basis of symptoms and crises in sickle cell disorder: implications for counseling and psychotherapy, Hematology Reports, 2(1) 25 Imaga NA (2013), Phytomedicines and Nutraceuticals: Alternative Therapeutics for Sickle Cell Anemia, The Scientific World Journal, Hindawi Publishing Corporation, Vol 2013 (2013) 26 Kato GJ, Hebbel RP, Steinberg MH, Gladwin MT (2009), Vasculopathy in Sickle Cell Disease: Biology, Pathophysiology, Genetics, Translational Medicine and New Research Directions, NIH Public Access Author Manuscript 84(9):618-625 Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 49 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng 27 Koonin EV, Galperin MY (2003), Sequence ậ Evolution ậ Function: Computational Approaches in Comparative Genomics, Nature, 2001, vol.410, p.1091 28 Lucarelli G, Isqro A, Sodani P, Gaziev J (2012), Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Thalassemia and Sickle Cell Anemia, Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine 2(5) 29 Maggio A, Giambona A, Cai SP, Wall J, Kan YW, Chehab FF (1993), Rapid and simultaneous typing of hemoglobin S, hemoglobin C, and seven Mediterranean beta-thalassemia mutations by cova lent reverse dot-blot anaysis: application to prenatal diagnosis in Sicily, The American Society of Hematology 81:239-242 30 Makani J, Cox SE, Soka D, Komba AN, Oruo J, Mwamtemi H, Magesa P, Rwezaula S, Meda E, Mgaya J, Lowe B, Muturi D, Roberts DJ, Williams TN, Pallangyo K, Kitudu J, Fegan G, Kirkham FJ, Marsh K, Newton CR (2011), Mortality in Sickle Cell Anemia in Africa: A Prospective Cohort Study in Tanzania, Plos One, Vol 6(2) 31 Martins PRJ, Souza HM., Souza HM, Silveira TB (2010), Morbidity- mortality in sickle cell disease, Rev Bras Hematol Hemoter 32(5):378-383 32 National Institutes of Health (2010), Fact sheet – Sickle Cell Disease 301- 496-6331 33 Newton CR, Graham A, Heptinstall LE, Powell SJ, Summers C, Kalsheker N, Smith JC, Markham AF (1989), Analysis of any point mutation in DNA The amplification refractory mutation system (ARMS), Nucleic Acids Research 17(7):2503-2516 34 Nikiforov TT, Rendle RB, Goelet P, Rogers Y, Kotewicz ML, Anderson S, Trainor GL, Knapp MR (1994), Genetic Bit Analysis: a solid phase method for typing single nucleotide polymorphisms, Nucleic Acids Res, 22(20):4167-4175 35 Niu X, Nouraie M, Campbell A, Rana S, Minniti CP, Sable C, Darbari D, Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 50 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Dham N, Reading NS, Prchal JT, Kato GJ, Gladwin MT, Castro OL, Gordeuk VR (2009), Angiogenic and Inflammatory Markers of Cardiopulmonary Changes in Children and Adolescents with Sickle Cell Disease, Plos One, Vol 36 Parent F, Bachir D, Inamo J, Lionnet F, Driss F, Loko G, Habibi A, Bennani S, Savale L, Adnot S, Maitre B, Yaici A, Hajji L, O'Callaghan DS, Clerson P, Girot R, Galacteros F, Simonneau G (2011), A Hemodynamic Study of Pulmonary Hypertension in Sickle Cell Disease, The New England Journal of Medicine, 365(1):44-53 37 Raghavachari N, Barb J, Yang Y, Liu P, Woodhouse K, Levy D, O’Donnell CJ, Munson PJ, Kato GJ (2012), A system comparison and evaluation of high density exon arrays and RNA-seq technology used to unravel the peripheral blood transciptome of sickle cell disease, BioMed Central 5:28 38 Signorelli AA, Ribeiro SB, Moraes-Souza H, de Oliveira LF, Ribeiro JB, da Silva SH, de Oliveira DF, Ribeiro MF (2013), Pain measurement as part of primary healthcare of adult patient with sickle cell disease, Rev Bras Hematol Hemoter 35(4):272-277 39 Waterfall CM, Cobb BD (2001), Single tube genotyping of sickle cell anaemia using PCR-based SNP analysis, Nucleic Acids Res 29(23) 40 Weatherall D, Akinyanju O, Fucharoen S, Olivieri N, Musgrove P, Inherited Disorders of Hemoglobin, Disease Control Priorities in Developing Countries 41 WHO (2006), Management of birth defects and Haemoglobin disorders, Report of a Joint WHO-March of Dimes Meeting 42 Wilkie DJ, Johnson B, Mack AK, Labotka R (2010), Sickle Cell Disease: An Opportunity for Palliative Care across the Life Span, NIH Public Access Author Manuscript 45(3):375-397 43 Wood DH (1978), Current Concepts of Cerebrovascular Disease ậ Stroke, Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 51 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Cerebrovascular complications of sickle cell anemia, American Heart Association 9(1):73-75 Internet 44 http://ghr.nlm.nih.gov/gene=HBB 45 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/magazine/issues/winter11/articles/wint er11pg17.html 46 http://www.gujhealth.gov.in/Images/SickleCellAnemia.pdf 47 http://idoc.vn/tai-lieu/chuong-4-mot-so-phuong-phap-phat-hien-cac-bien-di- di-truyen-o-muc-phan-tu.html 48 http://www.dieutri.vn/benhmau/8-1-2012/S1931/Thieu-mau-te-bao-hinh- liem.htm 49 http://zhangzhiyi.weibin.me/2012/10/12/pcr-polymerase-chain-reaction Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 52 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng PH L C Ph l c Hình 1: M c đ t ng đ ng c a trình t (AF007546) trình t (U01317) Seaview Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 53 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Ph l c Hình 2: K t qu Blast c a trình t (AF007546) NCBI Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 54 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Ph l c Hình 3: K t qu ki m tra đ đ c hi u c a c p m i HBB1-F HBB1-R b ng ph n m m Annhyb Ph l c B ng Thông tin m u b nh ph m s d ng nghiên c u STT Tên m u 1 2 3 Tên b nh nhân Phái Tu i N 52 Lê Thanh B Nam X X X X Tr ng Th H Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 55 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Ph l c Hình 4: M c đ t ng đ ng c a trình t A3-F trình t gen HBB Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 56 Chuyên đ khóa lu n t t nghi p GVHD: ThS Tr ng Kim Ph ng Ph l c Hình 5: M c đ t ng đ ng c a trình t A3-R trình t gen HBB Sinh viên th c hi n: Nguy n Th Thu Ngân - 1053012479 Trang 57