Sản xuất rhEPO bằng pichia pastoris

Sản xuất rhEPO Pichia pastoris Thực hiện: Lương Trung Nguyên Hướng dẫn: Trần Hà Lạc Đặt vấn đề Bệnh thiếu máu thiếu EPO Nguyên nhân suy thận khiếm khuyết gene epo Bắt buộc tiêm EPO thường xuyên liên tục Giá thị trường cao (thuốc Retacrit thị trường có giá khoảng $50/mL) Làm để hạ giá thành sản xuất thuốc EPO? Sơ lược EPO  Kích thước : 165 amino acids, 30 kDa  Cần trình biến đổi sau dịch mã phức tạp  Các biến đổi sau dịch mã cần cho hoạt tính độ bền EPO Chọn chủng chủ Chi phí ni cấy thấp, khơng u cầu q nghiêm ngặt Tính bền vững di truyền qua hệ cao P pastoris Khả biến dưỡng methanol sử dụng methanol chất cảm ứng Tăng sinh nhanh Tiết EPO dạng có hoạt tính, dễ thu nhận tinh Chọn vector Các tiêu chí để chọn vector Là vector thoi, tồn hai chủng E coli P pastoris Có khả kiểm soát biểu Mức độ biểu protein cao Plasmid pPICZ𝜶A Cấu trúc vector tái tổ hợp Thu nhận gene mục tiêu phương pháp tổng hợp hoá học Kiểm tra kết phản ứng PCR Cắt tạo đầu dính EcoRI XbaI Nối gene mục tiêu epo vào sản phẩm cắt Tạo dòng P pastoris tái tổ hợp LB+Zeocin Gene epo Khuẩn lạc E coli DH5𝜶 Phân tích phản ứng PCR giải trình tự YDB+Zeocin Gene epo Khuẩn lạc Gene epo P pastoris Thu nhận tinh protein Tinh chế protein BMMY BMGY YDB+Zeocin CÁM ƠN QUÝ THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN ... mục tiêu epo vào sản phẩm cắt Tạo dòng P pastoris tái tổ hợp LB+Zeocin Gene epo Khuẩn lạc E coli DH5