BÀI 6 sắc kí TRAO đổi ION và sắc kí GIẤY đại học y dược TP HCM KHOA dược bộ môn hóa lý mục TIÊU

M M CC H H PP TT D D YY H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB 05/03/2020 ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM KHOA DƯỢC BỘ MƠN HĨA LÝ M M CC H H PP TT D YYD M M CC H H PP TT D Y YYD H H H H -Ð -Ð -Ð -Ð ýý ýý LL LL aa aa óó óó BÀI H H H H M M M M BB BB SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION VÀ SẮC KÍ GIẤY M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB MỤC TIÊU Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC ++ H Tách riêng ion ion Co phương H PP T T D Y Y YD pháp sắc kí trao đổi ion H H H H Ð Ð Ð Ð ýý ýý LL LL aa acid amin hỗn hợp riêng Táchó óaa H H Hó Hó M M M M phương pháp sắc kí giấy BB BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC Ni++ Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð Ð Ð ýý ýý LL LLÝ THUYẾT L aa aa óó óó H H H H Nhà thực vật học người Nga Mikhail Tsvet phát minh kĩM M M BBM BB thuật sắc kí vào năm 1903 ông nghiên cứu M M CC H H PP TT D YYD chlorophyl M M CC Năm 1952, Archer John Porter Martin Richard H H P P giải Nobel Hoá Laurence Millington Synge trao DTT YYD Y H H -Ð Ð ýý ýý LL LL aa aa óó Sắc kýH làó trình tách dựa phân bố liên tục ó H H H M M M M cấu tử chất phân tích hai pha: PHA ĐỘNG (mobile BB BB H Hsắc kí phân bố học cho phát minh củaÐ họ Ðvề phase) – PHA TĨNH (stationary phase) M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC M M CC H H PP TT D D YY PHÂN LOẠI CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð Ð SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION -Ð ýý ýý LL LL aa aa óó óó Sắc kíH trao đổi ion trình cho phép phân tách H H H M M M M ion hay phân tử phân cực dựa lực khác BB BB ion pha tĩnh pha động M M CC H H PP TT D YYD  tượng trao đổi thuận nghịch ion linh động/pha M C CM tĩnh với ion/dung dịch phân tích cho dung dịch H H P P T qua cột nạp đầy pha tĩnh D DT Y YY H H H H Ðion (ionit): cationit anionit Pha tĩnh gọi chấtýtrao -Ð -Ð -Ð -đổi ýý LL LLý aa aa óó óó H H H H M M M M BB BB Cationit M M CC H H PP TT D D YY Anionit M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Cơ chế trao đổi ion Cationit M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION -Ð ýý LL a a ion Anionit óó Cơ chế trao đổi H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D YYD M M CC H H PP TT D YYD H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION M M CC H H PP TT D D YY M H PPH T T GĐ1: kiểm tra nhựa trao đổi ionD D với ion đối  Y YYcân H H H H Ð Ð cột Ð Ð ýý ýý LL LL a hợp ion cần trao đổi tiếp xúc với nhựa trao đổi hỗn GĐ2: cho óaa óa H H Hó Hó ion  đối ion loại khỏi nhựa M M M M BB BB MĐỔI ION CC CÁC GIAI ĐOẠN CƠ BẢN TIẾN HÀNH SẮC KÍ CỘT TRAO M M CC H H PP TT D D YY M CM H HC Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB GĐ3: gia tăng nồng độ dung dịch ly giải để ion ly giải đủ mạnh để tranh giành trao đổi với nhựa  tạo hợp chất chứa M M ion cần tách CC H H PP T T ban đầu GĐ4: tái tạo nhựa, trả lại tình trạng nhựa D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D YYD H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H Ð SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION -Ð ýý LL aa óó H H CÁC M MYẾU TỐ ẢNH HƯỞNG BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB Điện tích ion Kích thước ion M M CC H H PP Bán kính solvat hóa TT D YYD H H Khả phân cực ion -Ð -Ð ý ý LL a a môi rửa giải dung pH ó ó H H M BBM 05/03/2020 Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT Nước D D YY H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M Cột sắc ký M BB Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM M M CC H H PP TT D D YY Nhựa trao đổi ion cationit M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC 10 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H Ð ÐTHÍ NGHIỆM TIẾN HÀNH ýý LL a asắc ký Kiểm tra cột óó H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB 05/03/2020 ml nước cất + giọt cam methyl M M CC H H PP TT D YYD M M CC H H PP TT D D YY ống màu chuẩnCM M H HC P P T D DT Y Y H Nước / cột sắc ký + H Ð Ð ý LLý giọt cam methyl a a ó Nước cột SK cịn acid H Hó M BBM Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB Nước / cột sắc ký + giọt cam methyl M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 11 Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Dùng pipette hút 1,2 ml NiCl2 0,6 ml Co(NO3)2 cho vào ống nghiệm, lắc cho vào cột sắc ký M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB 12 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB H H M M BB H H M M BB 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð Ð ÐTHÍ NGHIỆM TIẾN HÀNH ýý ýý LL LL aa aa óó óó H ChoH nước cất qua cột (khoảng 300 ml) đến H H M M M Mchảy khơng cịn ion H+ nước BB BB M M CC H H PP TT D YYD M M CC H H PP TT D YYD H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY Nước / cột sắc ký + giọt cam methyl M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB 13 Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Cho dung dịch Citrat I qua cột với vận tốc – ml/ phút Dùng ống đong để hứng 10 ml M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP Citrat TT D D Y YY H H H H Ð Ð Ð Ð ýý ýý LL LL óaa óaa H H Hó Hó Nếu khơng có màu đổ bỏ M M M M BB BB Nếu có màu cho vào ống nghiệm M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D ++Y Ni H HY Ð Ð ýýLL a ó a H Hó M M BB M CM H HC M CM H HC 14 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D YYD 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð Ð Ð ýý ýý L L L L Khi dung dịchachảy hết màu cịn màu nhạt cho aa óó óóa H H tiếp Citrat II vào H H M M M M BB BB Citrat II M M CC H H PP TT D D Y YY H Thực H tương tự với Citrat I H H Ðđược ống nghiệm có màu -Ð -Ð -Ð -thu ýý ýđể ý LL LL aa aa óó óó H H H H M M M M BB BB 15 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Hồi phục cột: cho 20 ml dung dịch HCl 5% chảy qua cột, rửa cột nước cất nước chảy không H+ M M M CC H H PP TT D D YY C H HC P 20 ml dung dịch HCl 5% P T D DT Y Y H H Ð Ð ý ý L aa L ó H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC M Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB 16 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D YYD H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H CƠ CHẾ QUÁ TRÌNH TÁCH Ð -Ð ý ++ ++ ý L ION L Ni VÀ Co aa ó ó H H (1) RH + Ni2+ RNi +2H+ M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB RH + Co2+ RCo + 2H+ (2) Citrat (NH4)2 Citrat2- + 2NH4+ ← Rửa giải M M CC H (3) H RNi + R(NH4)2 + PP TT D YYD 2+ (4) H H RCo + 2NH4+ R(NH ) + Co -Ð -Ð ý ý LL a 2(5) a Ni2+ + Citrat Ni-Citrat ó ó H H M 2+ + Citrat2M Co Co-Citrat BB (6) 2NH4+ 05/03/2020 Ni2+ Phục hồi cột: Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB 17 R(NH4)2 + 2H+ RH2 + 2NH4+ M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D  Pha tĩnh: nước hấp phụ giấy YY H H Ð Ð Partridge môi  Pha động: dung ýý LL aa ó ómang giá  Giấy: H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC M M CC H H PP TT D D YY SẮC KÍ GIẤY  CƠ CHẾ: phân bố 18 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY H H Ð ÐKÍ GIẤY ýSẮC ý LL aa (TÁCH ACID AMIN) óó H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB 05/03/2020 Chấm acid amin lên giấy M M CC H H PP TT D YYD M CM H Vạch tiền HC Ptuyến TTP D D Y H HY Ð Ð ýýVạch xuất phát LL 1cm a a ó H Hó M M BB Vết chấm acid amin 10 cm Y H H -Ð -Ð ýý LL aa óó H H M M BB 19 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB SẮC KÍ GIẤY (TÁCH ACID AMIN) M M CC H H PP TT D D YY M M Triển khai sắc ký: treo giấy sắc ký vàoCbình sắc ký C H H PP TT D D Y YY Nắp bình H H H H Ð Ð Ð Ð ýý ýý LL LL Vạch tiền tuyến aa aa Giấy sắc ký óó óó H H H H 10 cm M M M BBM BB Dung môi Partridge M M CC H H PP TT D D YY M CM H HC Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Vạch xuất phát 1cm M M C acid amin Vết H chấm HC PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC 20 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB 10 H H M M BB H H M M BB 05/03/2020 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð Sắc Ð ký giấy: Ð -ýý ýý L L L L Tách riêng aa a a acid amin hỗn hợp óó óó H H H H M M M Phát acid amin cách phun ninhydrin M BB BB M M CC H H PP TT D YYD M M CC H H PP TT D Y xY =Dx’1 1Y H H x’2 H H Đạt yêu cầu kỹ -Ð -Ð -Ð -Ð ýý ýý L L L L thuật x1 xa aa a x2 = x’2 x’1 óó óó H H H H M M M M BB BB Rf = x/ 10 21 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB BÁO CÁO KẾT QUẢ M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y YY H H H H Ð Ð ống nghiệm dãy  Báo cáo số lượng Ð Ð ýý ýý L L L L màu aa aa óó óó H H H H  Giải thích chế tách ion Ni2+ Co2+ M M M M BB BB  Giải thích chế sắc ký trao đổi ion? M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Sắc ký trao đổi ion 22 Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB 11 H H M M BB H H M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý CÁO KẾT QUẢ LBÁO L aa ó H Hó M M BB Sắc ký giấy Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M M CC H H PP TT D YYD M Nộp kết sắc ký giấy M CC H H PP  Tính Rf So sánh Rf acid amin vết TT D D Y Y Y amin loại đơn chất với Rf acid H H H H Ð -Ð -Ð -Ðluận kết ýý ýý vết hỗn hợp Biện LL LL aa aa óó óó  Trình bày chế sắc ký giấy H H H H M M M M BB BB 05/03/2020  23 M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB Y H H Ð Ð ýý LL óaa H Hó M M BB M M CC H H PP TT D D YY M M CC H H PP TT D D YY H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB Y H H Ð Ð ýý LL aa óó H H M M BB M CM H HC M CM H HC 12 ... KÍ TRAO ĐỔI ION M M CC H H PP TT D D YY M H PPH T T GĐ1: kiểm tra nhựa trao đổi ionD D với ion đối  Y YYcân H H H H Ð Ð cột Ð Ð ýý ýý LL LL a hợp ion cần trao đổi tiếp xúc với nhựa trao đổi. .. H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB SẮC KÍ GI? ?Y (TÁCH ACID AMIN) M M CC H H PP TT D D YY M M Triển khai sắc ký: treo gi? ?y sắc ký vàoCbình sắc ký C H H PP TT D D Y YY Nắp bình H H... M BB BB Cationit M M CC H H PP TT D D YY Anionit M M CC H H PP TT D D Y H HY Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION Y H H Ð Ð -ýý LL óaa H Hó M M BB Cơ chế trao đổi ion Cationit M M CC