Đang tải... (xem toàn văn)
Khoa Công nghệ Sinh học Lê Thị Hà DANH MỤC CHŨ VIẾT TẤT SA Sabouraud Dextrose Agar CAM Coconut Agar Medium ADM Aspergillus Differentiation Medium Base A fumigatus Aspergillus fumigatus A flavus Asperg.
Khoa Công nghệ Sinh học Lê Thị Hà DANH MỤC CHŨ VIẾT TẤT SA Sabouraud Dextrose Agar CAM Coconut Agar Medium ADM Aspergillus Differentiation Medium Base A fumigatus Aspergillus fumigatus A.flavus Aspergillus fla vus A niger Aspergillus niger A aureus Aspergillus aureus A., nidulans Aspergillus nidulans A versicoler Aspergillus versicolor A terreus Aspergillus terreus A keratitis Aspergillus keratitis CFU Colony Forming Unit American conference of gov-ernmental ACGIH hygienists DD Môi trường dinh dưỡng ppb Parts per billion RCS Rich Communication Service SAS Surface air system FS209E Federal Standard 209E ISO International Organization for Standardization CEN/TC 243 Tiêu chuân phòng ODTS Hội chứng độc hại bụi hữu GMP Good Manufacturing Practices WHO World Health Organization TVKHK Tông vi khuân hicu khí industrial Khoa Cơng nghệ Sinh học Lê Thị Hà DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng Tên bảng Trang Bàng Kct lấy mẫu tổng số nấm mốc 25 Báng Nghiên cứu theo dõi hình thái đại thể chúng nấm A5.2 môi trường dinh dưỡng khác 31 SA, CAM, PDA, Czapek Nghiên cứu theo dõi hình thái đại thê chung Bàng nấm A9 môi trường dinh dưỡng khác 33 SA, CAM, PDA, Czapek Nghiên cứu theo dõi hình thái đại thê chủng Bâng nấm A14 môi trường dinh dường khác 35 SA, CAM, PDA, Czapek Nghiên cứu thẽo dổi hinh- thái đại thể chủng Bàng nấm A6 môi trường dinh dường khác 37 SA, CAM, PDA, Czapek Nghiên cứu theo dõi hình thái đại chúng Bàng nam A5 môi trường dinh dường khác 39 SA, CAM, PDA, Czapek Nghiên cứu theo dõi hình thái đại thể chung Báng nấm A5 môi trường dinh dường khác 51 SA, CAM, PDA, Czapek Thống kê số khuân lạc chúng nấm mốc Báng khơng khí mơi trường lao động phân lập 53 Khoa Công nghệ Sinh học Lê Thị Hà DANH MỤC HÌNH Tên hình Hình Trang Hình thiết bị lẩy mẫu khơng khí Spin Air Hình trường lấy mẫu 25 Hình chung A5.2 mơi trường SA 27 Hình chủng A9 mơi trường SA 28 Hình chủng A14 mơi trường SA 28 Hình chúng A5 mơi trường SA 29 Hình chung A6 mơi trường SA 29 Hình chủng Al mơi trường SA Hình chủng A15 mơi trường SA Hình 10 vi A5.2 soi vật kính 4X 41 Hình 11 quan sinh sàn A5.2 soi vật kính 40X 41 Hình 12 vi A9 soi vật kính 4X 42 Hình 13 quan sinh sản cùa A9 soi vật kính 40X 42 Hình 14 vi thể A14 soi vật kính 4X 43 Hình 15 quan sinh sán cùa A14 soi vật kính 40X 43 Hình 16 trình tự gen mẫu A14 45 Hình 17 so sánh trình tự gen mẫu A14 với Genbank 46 Hình 18 trình tự gen mẫu A5.2 47 Hình 19 so sánh trình tự gen mẫu A5.2 với Gcnbank 48 Hình 20 trình tự gen mẫu A9 49 Hình 21 so sánh trình tự gen mẫu A9 với Genbank 50 Thự viện Viên Đai học Mơ Hà Noi Khoa Công nghệ Sinh học Lê Thị Hà MỤC LỤC LỊÌ CẢM ON DANH MỤC CHỮ VIẾT TẤT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐÀU 1.1 Nghiên cứu giói nấm mốc khơng khí mơi trường lao động 1.1.1 nhiễm nấm mốc khơng khí môi trường lao động sớ che biến lương thực 1.1.2 Phương pháp lấy mẫu nấm mốc gây hại khơng khí mơi trường lao động 1.1.3 Nguy gây hại cho người lao động chủng nấm mốc có Thự viện Viện Đại học.MỞ Hà Nội, , khơng khí 1.2 Nghiên cún ỏ' Việt Nam nấm mốc không khí mơi trưịng lao động 12 1.2.1 Ơ nhiễm nấm mốc khơng khí mơi trường lao động 12 1.2.2 Phương pháp lấy mẫu nấm mốc gây hại khơng khí mơi trường lao động Việt Nam 15 1.2.3 Nguy gây hại cho người lao động chủng nấm mốc có khơng khí 17 PHÀN 2: PHUONG PHÁP NGHIÊN cứu 18 2.1 Đối tượng nghiên cún 18 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 18 2.2.1 Hóa chất 18 Khoa Công nghệ Sinh học 2.2.2 2.3 Lê Thị Hà Thiết bị nghiên cứu 19 Phưomg pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu nấm mốc khơng khí mơi trường lao động 20 2.3.3 Phương pháp xác định tính độc hại nấm mốcError! Bookmark not defined PHẦN 3: KÉT QUẢ 25 3.1 Kết lấy mẫu nấm mốc khơng khí mơi trưịng lao động 25 3.1.1 Mật độ nấm mốc có mặt khơng khí mơi trường lao động 25 3.1.2 Phân lập nấm mốc gây hại 28 3.2 Kết định danh số chủng nấm mốc gây hại có mặt khơng khí mơi trường lao động Error! Bookmark not defined 3.2.1 Xác định đặc điếm sinh học đại thề nấm mốc gây hại Error! Bookmark not defined Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 3.2.2 Xác định đặc điểm sinh học vi thê nấm mốc gây hại 42 3.2.3 Xác định phương pháp sinh học phân tứ 47 3.4 Đồ xuất giải pháp phòng chống nấm mốc, giảm thiếu nguy CO' gây hại nấm mốc có mơi trường lao động 55 KẾT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined MỞ ĐÀU Việt Nam nước nơng nghiệp điền hình với 70% dân số nơng dân, xuất khấu gạo đứng thứ giới (sau Thái Lan Án Độ) Sàn xuất nơng nghiệp lình vực sản xuất quan trọng phát triến Việt Nam Theo thống kê nhất, nước có 197 làng nghề chế biến nông sàn thực phàm Các làng nghề yếu tập trung miền Bắc (134 làng), lại 42 làng nghề miền Trung miền Nam có 21 làng nghề Theo kết khảo sát 52 làng nghề điền hình nước, 46% số làng nghề có mơi trường (khơng khí, nước, đất ba dạng trên) bị ô nhiễm nặng 27% ô nhiễm vừa Hiện nay, ô nhiễm môi trường làng nghề tiếp tục có diễn biến phức tạp Với điều kiện khí hậu nhiệt đới thuận lợi cho nấm mốc phát triến, Việt Nam phát nhiều loại nấm mốc khơng khí sinh độc tố gây hại, phổ biến thực phẩm Hiện nay, với phát triển công nghiệp, nhiều sở sàn xuất chế biến lương thực nhở lẻ mọc lên Những sờ thường có trang thiết bị lạc hậu tạo sản phấm khơng hợp vệ sinh an tồn thực phẩm Sự phát triển làng nghề chế biến lương thực, thực phẩm diễn cách tự phát Mở rộng sản xuất tuỳ tiện, khơng có quy hoạch, trình độ cơng nghệ cịn thấp Thêm vào tâm lý thói quen sàn xuất quy mơ nhó, khép kín, nên hạn chế đầu tư trang thiết bị đối công nghệ, dẫn đến hiệu sàn xuất không cao, tiêu tốn nhiều nguyên nhiên liệu, đồng thời thãi môi trường lượng lớn chất thải, đặc biệt nước thài giàu chất hừu Mặt khác, phần lớn làng nghề chế biến nông sản thực phấm tận thu phe liệu đe chăn nuôi Nước thài từ nguồn gây ô nhiễm môi trường khơng khí nước đáng kề Kết điều tra y tế làng nghề chế biến nông sàn, thực phẩm cho thấy rõ nhũng ănh hưởng từ sản xuất nghề tới sức khoẻ người dân Các bệnh phố biến mà người dân làng nghề mắc phải bệnh phụ khoa phụ nữ (13 - 38%), bệnh đường tiêu hoá (8 - 30%), bệnh viêm da (4,5 - 23%), bệnh đường hô hấp (6 18%), đau mắt (9 - 15%) Nguyên nhân gây bệnh chủ yếu môi trường sinh hoạt không đàm bào vệ sinh, nguồn nước khan hiếm, ô nhiễm bụi, vi sinh vật nói chung nấm mốc khơng khí nói riêng tăng cao Những nguyên nhân gây bệnh cho người chất lượng nông sản thực phấm không đảm băo quan tâm nghiên cứu tìm giải pháp giâm thiểu Tuy nhiên, đặc điểm khí hậu nhiệt đới nóng ẩm Việt Nam điều kiện tối ưu để vi sinh vật, nấm mốc dề dàng phát triển gây hại đến đối tượng thường xuyên tiếp xúc (người sân xuất, người lao động người tiêu dùng) Ánh hưởng nấm mốc khơng khí làng nghe chế biến lương thực đến người lao động cộng đồng chưa nghiên cứu chuyên sâu Xuất phát từ vấn đề trên, đồng thời tham gia nghiên cứu đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu phân lập định danh bàng phương pháp sinh học phân tử số nấm mốc gây hại khơng khí mơi trường lao động” Trạm Quan trắc Phân tích Mơi trường Lao động - Viện Nghiên cứu Khoa học Kỹ thuật Bão hộ Lao động, đồng ý hướng dẫn Th.s Vũ Duy Thanh, tiến hành đề tài:“jP/ỉổM lập định danh so nấm mốc sinh độc tố không khí mơi trường lao động” Mục tiêu nghiên cứu: - Xác định đặc diem sinh học mức độ nguy hại số chủng nấm mốc có mặt khơng khí mơi trường lao động Nội dung nghiên cứu: Xác định đặc điểm sinh học cùa số chùng nấm mốc sinh độc tố có khơng khí mơi trường lao động Xác định nguy cơ, rủi ro nấm mốc sinh độc tố có khơng khí người lao động cộng đồng Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội PHÀN I: TƠNG QUAN 1.1 Nghiên cứu giói nấm mốc khơng khí mơi trường lao động 1.1.1 Ổ nhiễm nấm mốc khơng khí mơi trường lao động CO’ sỏ’ chế biến lưong thực The giới quan tâm nhiều đến tồn phát tán vi sinh vật khơng khí, mơi trường khơng khí khơng phái mơi trường dinh dưỡng, vi sinh vật sinh trướng được, khơng mà mơi trường khơng khí khơng nhiễm Sự tồn phân tán vi sinh vật khơng khí hiểm họa tiềm tàng gây loại bệnh, có bệnh nghèo, tạo đà bùng phát dịch bệnh Viện Nghiên cứu quốc gia sức khởe an toàn lao động Mỹ (NĨOSH) đưa phương pháp lấy mẫu bioaerosol cho vùng khơng khí nhà (indoor air) từ năm 1998 A ríu V 1Ụ11 V 1VU Lzại Iiyv 1V1V ua OỤ1 (Method NIOSH) Quan trắc vi khuẩn nấm mốc khơng khí khơng chi đánh giá chất lượng mơi trường khơng khí khu vực mà cịn phát sớm nguồn gốc có nguy nhiễm bệnh, nhằm phịng chống gây bệnh vi sinh vật gây nguy ngộ độc thực phẩm phát tán vi khuẩn, nấm nấm mốc khơng khí Ớ Thái Lan, vào năm 1976 nhóm nghiên cứu Shank cho thấy mầu lương thực thực phâm bị mốc 50-60% có Aflatoxin Đồng thời nhóm tác giả tiến hành lấy mầu lương thực thực phấm gia đình thấy 30-50% số mẫu có độc to Aflatoxin Năm 2004, nghiên cứu Ablas K cộng cho thấy nhiễm Aflatoxin ngô nấm A Flavus gây nên vấn đề quan trọng vùng trồng ngô đồng Missisipi Mỹ Trong năm nghiên cứu từ 2000 đến 2002, tác già nghiên cứu mức nhiễm A Flavus đất xác định mức nhiễm A Flavus đất trồng ngô bị ánh hướng bời vụ canh tác trước Mật độ A Flavusl năm 2001 đất trồng ngô 794 CFU/g, năm 2002 đất trồng lúa mì mật độ 457CFU/g Sự nhiễm A Flavus hạt ngô năm 2000 dao động từ 0-100% (trung bình 15% hạt ngơ bị nhiễm), hàm lượng Aflatoxin ngô dao động từ 0-1590ppb (trung bình 57ppb) Với nhiễm cao đất ngô năm 2001, kết quà cho thấy 84% A Flavus phân lập từ hạt ngơ có tạo Aflatoxin.fi] 1.1.2 Phương pháp lấy mẫu nấm mốc gây hại khơng khí mơi trường lao động Hiện nay, phương pháp tốt để định lượng vi khuẩn khơng khí đếm khuấn lạc Đem khuấn lạc khơng khícịn gặp nhiều khó khăn; có nhiều phương pháp khác sử dụng chia thành nhóm chính: (1) Đem khuấn lạc hìĩÌHU^^cYlià} Im’ khơng khí: (CFƯ/m3) (2) Đem số khuấn lạc hình thành (Colony forming unit- CFU) đĩa (3) Khảo sát thành phần hóa học tế bào vi khuẩn m3 khơng khí (4) Đem vi sinh vật kính hiển vi Việc thu mẫu khơng khí để khảo sát vi sinh vật tiến hành theo hai cách: theo phương pháp lấy mẫu động phương pháp lấy mẫu thụ động Cà hai phương pháp sử dụng rộng rãi, nhiên phương pháp có ưu diem nhược diem riêng ❖ Phương pháp lấy mẫu chù động Ơ nhiễm vi sinh khơng khí có thề khảo sát thơng qua việc đếm số khuấn lạc hình thành m3 khơng khí (cfu/m3) Người ta sư dụng phương pháp lấy mầu chủ động cách thu nhận thể tích khơng khí định Hình 11: quan sinh sân A5.2 soi vật kính 40X Đối với mầu A9 kích thước khuẩn lạc lớn dẫn đến có khả kích thước bào từ lớn, dễ quan sát vi the soi trực tiếp kính hiên vi quang học vật kính 4X Nghiêm cứu sử dụng phương pháp cắt thạch 40x Ket quà quan sát cho thấy quan sinh sân A9 có đầu nhiều, mọc từ chất, dạng hình cầu, tỏa tia, sau xé rách, màu đen nâu Cuống nhằn màu nâu, bào tử hình trịn màu đen Theo nhữngklíầtNPẩy A9 có đặc điểm gần trùng khớp với mô tả TS Đặng Vũ Hồng Miên “Hệ nấm mốc Việt Nam”, kết quà định danh sơ mẫu A9 Aspergillusniger Hình 12: vi thể A9 soi vật kính 4X 44 Hình 13: quan sinh sàn A9 soi vật kính 40X Mầu A14 kích thước khuấn lạc nhở, bề mặt khuẩn lạc mịn, dày nên khó quan sát vi thể soi trực tiếp kính hiển vi quang học Lựa chọn phương pháp cắt thạch để quan sát mẫu vật kính 40X Kốt quà thu sợi nấm dinh dưỡng nhẵn, có phân nhánh, màu xanh đen, mọc từ môi trường Cuống phân nhánh tạo nhiều nhánh bên Bào tứ hình cầu, dạng chuỗi Qua kêt quà quan sát vi thê trên, có thê thây A14 có đặc diêm gân trùng , , Viêâ Hà Nôi I _ X , khớp với mô tả cùa TS Đặng Vũ Hông Miên cuôn Hệ nâm môc Việt Nam”, kết quà định danh sơ mẫu A14 có thê Trichodermma Hình 14: vi thể A14 soi vật kính 4X 45 Hình 15: quan sinh sàn cùa A14 soi vật kính 40X Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 46 3.Xác định phương pháp sinh học phân tử Định danh phương pháp quan sát đại quan sát vi thể bán đãđịnh danh chủng nấm mốc có mặt khơng khí mơi trường lao động sở chế biến lương thực Đe khăng định xác chúng nam mốc dùng phương pháp sinh học phân từ có độ xác cao Đế có kết quà xác mang mầu phân tích PHÒNG XÉT NGHIỆM CT.TNHH DV VÀ TM NAM KHOA Trong nghiên cứu thực giải trình tự gen chùng nấm mốc phân lập không khí mơi trường lao động cơng ty liên doanh Việt-Pháp sàn xuất thức ăn gia súc Proconco, nhà máy Đình Vũ Hải Phịng Kct giải trình tự gcn trình bày Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 47 ❖ MâuA14 Kốt quà glái trinh tự gen CGGTGGCCAGCCAGACGGGGCTCTCACCCTCTGTGGCGTCCCGTTCCAGGGAACT CGGGCGGCACCTCACCAAAAGCATCCTCTACAAATTACAACTCGGACCCTAGGGGC CAGATTTCAAATTTGAGCTGTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGT TGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGAT CCGAGGTCAACATTTCAGAAGTTGGGTGTTTTACGGACGTGGACGCGCCGCGCTCC CGGTGCGAGTTGTGCAAACTACTGCGCAGGAGAGGCTGCGGCGAGACCGCCACTG TATTTCGGGGCCGGGATCCCGTCTTAGGGGTTCCCGATCCCCAACGCCGACCCCC CGGAGGGGTTCGAGGGTTGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGAATACT GGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACAT TACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTT GAAAGTTTTGATTCATTTTGAATTTTTGCTCAGAGCTGTAAGAAATAACGTCCGCGAG GGGACTACAGAAAGAGTTTGGTTGGTCCCTCCGGCGGGCGCCTGGTTCCGGGGCT GCGACGCACCCGGGGCGTGACCCCGCCGAGGCAACAGTTTGGTATGGTTCACATT GGGTTTGGGAGTT Giốy phỏp số 0SSO5/ SVT-GPHO s* Y Té TP HCM cáp ng«y 1003/2016 HiáC nhln AM TnÀM Q1MM MTV* r Ad II «A TR/nr'MATQM CÀ Ỳ TÀ TO MCM rin 'XVrurXÌIR Hình 16: trình tự gen mầu A14 Trichoderma koningiopsis strain CCF3813 internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 28S ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: FJ430784.1 Length: 1140Number of Matches: Related Information Range 1:1 to 742GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match Alignment statistics for match #1 Score 1371 bits(742) Query Expect Identities Gaps Strand 0.0 742/742(100%) 0/742(0%) Plus/Minus CGGTGGCCAGCCAGACGGGGCTCTCACCCTCTGTGGCGTCCCGTTCCAGGGAACTCGGGC 60 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 742 CGGTGGCCAGCCAGACGGGGCTCTCACCCTCTGTGGCGTCCCGTTCCAGGGAACTCGGGC 683 48 Query CGGTGGCCAGCCAGACGGGGCTCTCACCCTCTGTGGCGTCCCGTTCCAGGGAACTCGGGC 60 III I I Illi I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I Sbjct 61 742 CGGTGGCCAGCCAGACGGGGCTCTCACCCTCTGTGGCGTCCCGTTCCAGGGAACTCGGGC 683Query GGCACCTCACCAAAAGCATCCTCTACAAATTACAACTCGGACCCTAGGGGCCAGATTTCA 120 III I I III I I Illi I I Illi I I Illi I I III I I Illi I I III I I Illi I I Illi I I III I Sbjct 682 GGCACCTCACCAAAAGCATCCTCTACAAAĨTACAACTCGGACCCTAGGGGCCAGATTTCA 623 Query 121 AATTTGAGCTGTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGTTGGTTTCTTTTC 180 III I I Illi I Illi I I Illi I I Illi I I III I I Illi I I III I I Illi I I Illi I I III I Sbjct 622 AATTTGAGCTGTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGTTGGTTTCTTTTC 563 Query 181 CTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGATCCGAGGTCAACATT 240 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 562 CTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGATCCGAGGTCAACATT 503 Query 241 TCAGAAGTTGGGTGTTTTACGGACGTGGACGCGCCGCGCTCCCGGTGCGAGTTGTGCAAA 300 Sbjct 502 TCAGAAGTTGGGTGTTTTACGGACGTGGACGCGCCGCGCTCCCGGTGCGAGTTGTGCAAA 443 Query 301 CTACTGCGCAGGAGAGGCTGCGGCGAGACCGCCACTGTATTTCGGGGCCGGGATCCCGTC 360 Sbjct 442 CTACTGCGCAGGAGAGGCTGCGGCGAGACCGCCACTGTATTTCGGGGCCGGGATCCCGTC 383 Query 361 TTAGGGGTTCCCGATCCCCAACGCCGACCCCCCGGAGGGGTTCGAGGGTTGAAATGACGC 420 III I I Illi I Illi I I Illi I I Illi I Illi I I Illi I I III I I Illi I I Illi I I Illi III I I III I I Illi I I Illi I I Illi I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 382 TTAGGGGTTCCCGATCCCCAACGCCGACCCCCCGGAGGGGTTCGAGGGTTGAAATGACGC 323 Query 421 TCGGACAG^^Cẹ^^A^Yậpịr^ỹ^Gp^C^I^G^P^^A^^ịrCGATGA 480 I I I I I I I I I I I I I I I I ri i'i I I I 111 I I I 111 I I II li I I I I I I I I I I I I I 1’1 I I I I I I I Sbjct 322 TCGGACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGA 263 Query 481 TTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCC 540 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 262 TTCACTGÃATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCC 203 Query 541 AGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTTGÃATTTTTGCTCAGAGCTGT 600 III I I III I I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I I I Illi I Illi I I III I Sbjct 202 AGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTTGAATTTTTGCTCAGAGCTGT 143 Query 601 AAGAAẦTAACGTCCGCGAGGGGACTACAGAAAGAGTTTGGTTGGTCCCTCCGGCGGGCGC 660 Sbjct 142 AÃGAAATÃACGTCCGCGAGGGGACTACAGAAAGAGTTTGGTTGGTCCCTCCGGCGGGCGC 83 Query 661 CTGGTTCCGGGGCTGCGACGCACCCGGGGCGTGACCCCGCCGAGGCAACAGTTTGGTATG 720 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 82 CTGGTTCCGGGGCTGCGACGCACCCGGGGCGTGACCCCGCCGAGGCAACAGTTTGGTATG Query 721 GTTCACATTGGGTTTGGGAGTT Sbjct 22 GTTCACATTGGGTTTGGGAGTT 23 742 III I I Illi I Illi I I Illi I I Hình 17: so sánh trình tự gen mẫu A14 với Genbank 49 Kết định danh phương pháp sinh học phân tử cho thấy mẫu A14 có độ tương đồng 100% so với chúng nấmTrichoderma koningiopsis Kết hợp với so sánh đặc điểm hình thái khẳng định chủng nấm Trichoderma koningiopsis ❖ Mầu A5.2 Kôt giai trinh tự gen GAAGGAGCTTCACACGGGCGCGGCCACCCCATCCCAGACGGGATTCTCACCCTCT ATGACGGCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGGCCGTTCCCGAAGCATCCTCTGC AAATTACAATGCGGACCCCGAGGGGGCCAGCTTTCAAATTTGAGCTCTTGCCGCTT CACTCGCCGTTACTAGGGCAATCCCGGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATG CTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGAGATAATTAAAGGT TGGGGGTCGGCTGGCGCCGGCCGGGCCTACTAGAGCGGGTGACGAAGCCCCATA CGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCCGGC GGGGGGGACGGGGCCCAACACACAAGCCGGGCTTGAGGGCAGCAATGACGCTCG GACAGGCATGCCCTCCGGAATACCAGAGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGAT GATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTAGTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGA TGCCGGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACTAATTTCGTTATAGGTCTCA GACTGCAACTTCAGACAGCGTTCAGGGGGGCCGTCGGCGGGCGCGGGGCCCGCC GAGGCAACATAGGTTCGGGCAACACGGGTGGGAGGTTGGGCCCCGAGGGGCCCG CACTCGGTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTACGACTTTTAC TTCCTCTAAATGACCGAGTTTGACCAACTTTCCGGCGCTGGGGGGTCGTTGCCAAC CCTCCGGCGCCAGTCCGAAGGCCTCACTGAGCCATTCAATCGGT Giáy pnep SÔ 05505/ SYT-GPHĐ sờ Y Té TP HCM càp ngày 10/03/2016 Gliý chưng nhặn AN TOẰN sinh học cắp II ló 17WGCNATSH Sớ Y Tê TP HCM cếp ngly 20/04/2016 Hình 18: trình tự gen mẫu A5.2 Penicillium citrinuni genomic DNA sequence contains ITS1, 5.8S rRNA gene,ITS2, 28S rRNA gene, strain Dll6-75.ITS2, 28S rRNA gene, strain DI 16- 75 Alignment statistics for match #1 Score Expect Identities Gaps Strand 1443 bits(781) 0.0 781/781(100%) 0/781(0%) Plus/Minus 50 Query GAAGGAGCTTCACACGGGCGCGGCCACCCCATCCCAGACGGGATTCTCACCCTCTATGAC 60 II I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I I I III I I III I I I III I I Illi I I III I I Sbjct 782 GAAGGAGCTTCACACGGGCGCGGCCACCCCATCCCAGACGGGATTCTCACCCTCTATGAC 723 Query 61 GGCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGGCCGTTCCCGAAGCATCCTCTGCAAÃTTACÃAT 120 II I I Illi I I III I I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I I Illi I Illi I I Illi I Sbjct 722 GGCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGGCCGTTCCCGAAGCATCCTCTGCAAATTACAAT 663 Query 121 GCGGACCCCGAGGGGGCCAGCTTTCAAATTTGAGCTCTTGCCGCITCACTCGCCGTTACT 180 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 662 GCGGACCCCGAGGGGGCCAGCTTTCAAATTTGAGCTCTTGCCGCTĨCACTCGCCGTTACT 603 Query 181 AGGGCAATCCCGGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTA 240 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 602 AGGGCAATCCCGGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTA 543 Query 241 TCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGAGATAATTAAAGGTTGGGGGTCGGCTGGCGCCGG 300 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Sbjct 542 TCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGAGATAATTAAAGGTTGGGGGTCGGCTGGCGCCGG 483 Query 301 CCGGGCCTACTAGAGCGGGTGACGAAGCCCCATACGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGC 360 II I I Illi I I Illi I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I I III I I Illi I I Illi I Sbjct 482 CCGGGCCTACTAGAGCGGGTGACGAAGCCCCATACGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGC 423 Query 361 CGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCCGGCgggggggACGGGGCCCAACACACAAGCCGGGC 420 II I I Illi I I Illi I Illi I I Illi I I III I I I III I I Illi I mil I Illi I I Illi I Sbjct 422 CGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCCGGCGGGGGGGACGGGGCCCAACACACAAGCCGGGC 363 Query 421 TTGAGGGCAGCA|IVjỸ^^G'fgĩ!ìAi^