VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đe tài NGHIÊN CỨU HIỆU QUẢ CỦA CHÉ PHÁM GEL NANO BẠC TRONG VIỆC ÚC CHÉ MỌT SÔ BỆNH HẠI QUẢ ÓI SAU THU HOẠCH Giáo viên hướng dẫn TS B.
VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đe tài: NGHIÊN CỨU HIỆU QUẢ CỦA CHÉ PHÁM GEL NANO BẠC TRONG VIỆC ÚC CHÉ MỌT SƠ BỆNH HẠI QUẢ ĨI SAU THU HOẠCH Giáo viên hướng dẫn : TS Bùi Kim Thúy Sinh viên thực : Nguyễn Thị Thu Trang Ngày sinh : 11/04/1995 Lóp : 13-01 Hà Nội - 2017 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nêu khóa luận tốt nghiệp trung thực, xuất phát từ tình hình thực tế cùa đơn vị thực tập Tác giá khóa luận tốt nghiệp Sinh viên Nguyễn Thị Thu Trang Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội LÒI CÁM ON Khóa luận tốt nghiệp thực Viện Cơ điện Nông Nghiệp Công nghệ Sau thu hoạch hướng dẫn T.s Bùi Kim Thúy Đe hoàn thành luận văn cố gắng thân, nhận ùng hộ, giúp đờ hướng dần thầy giáo, cô giáo, gia đình bạn bè xung quanh Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới giáo viên hướng dẫn T.s Bùi Kim Thúy tận tình hướng dẫn, chi bão cho tơi q trình thực đề tài Tôi xin chân thành căm ơn Trung tâm Nghiên cứu Kiểm tra chất lượng sản phấm nồng sán - Viện Cơ điện Nông Nghiệp Công nghệ Sau thu hoạch tạo điều kiện sở vật chất trang thiết bị suốt trình thực đề tài đế tơi có thê hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cám ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học Mơ Hà Nội dạy dỗ dần dắt suốt thời gian học tập trường Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè bên cạnh ủng hộ, động viên giúp đờ suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Thu Trang Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội MỤC LỤC MỞ ĐÀU PHÀN 1: TÔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Giới thiệu sơ lược ối thị trường ối Cây ổi 1.1.1 1.1.1.1 Nguồn gốc 1.1.1.2 Đặc điểm cùa ổi 1.1.1.3 Các giống ổi 1.1.1.4 Điều kiện sinh thái 1.1.1.5 Công dụng cùa ổi 1.1.2 Giá trị dinh dường sinh học 1.1.3 Tinh hình phân bố, sản lượng, sàn xuất tiêu thụ 12 1.1.3.1 Phân bố 12 1.1.3.2 1.1.3.3 Sản lượng tình hình săn xuất tiêu thụ ôi 13 Vị trí ứầ^ổi iiiingkn^ồtìlf?áU .14 Bao quả, thu hoạch, bão quản 15 1.1.4 1.1.4.1 Bao .15 1.1.4.2 Thu hoạch 15 1.1.4.3 Bảo quản 15 1.2 Vai trị tính ứng dụng cùa Gel nano bạc bảo quản 16 1.2.1 Giới thiệu Gel nano bạc 16 1.2.2 Vai trị tính ứng dụngcùaGelnanobạc 18 PHẦN PHUONG PHÁP NGHIÊNcúu 25 2.1 Nguyên vật liệu 25 2.1.1 Đối tượng 25 2.1.2 Môi trường sử dụng 25 2.1.2.1 Môi trường phân lập bảo quàn giống 25 2.1.2.2 Môi trường định tên 25 Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Hóa chất trang thiết bị 25 2.1.3 2.2 Viện Đại học Mở Hà Nội Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Phương pháp thu nhận mẫu 26 2.2.2 Phương pháp phân lập chủng vi sinh vật 26 2.2.3 Phương pháp phân loại vi nấm 27 2.2.3.1 Các nguyên tắc chung 27 2.2.3.2 Quy trình định loại chùng vi nam 27 2.2.3.3 Tiến hành định loại 28 2.2.4 Phương pháp nuôi cấy chúng kiểm tra 29 2.2.5 Phương pháp xác định số lượng vi sinh vật 29 2.2.6 Phương pháp xác định khả kháng vi sinhvật 30 2.2.7 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiếu 30 2.2.8 Khá ức chế nấm gây hại trực tiếp cửa che phẩm 31 2.2.8.1 Phương pháp chuẩn bị dung dịch chúng giống 31 2.2.8.2 Phương pháp gây nhiễm hhân tạo qựả Ị.|.^ \Ỳ)ị 31 2.2.8.3 Phương pháp kiểm soát nấm mốc chế phẩm nồng độ khác 32 2.2.9 Phương pháp xử lý số liệu 32 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Phân lập chung vi sinh vật gây hại ối 33 3.2 Định tên chủng nấm gây hại ối 34 3.3 Khá kháng nấm cúa chế phẩm Gel nano bạc 35 3.4 Khả ức chế trực tiếp cùa chế phâm Gel nano bạc nấm gây hại quà ổi Đài Loan 37 PHẦN KẾT LUẬN 39 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC 43 Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Viện Đại học Mở Hà Nội Khóa Luận Tốt Nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẤT Từ viết tẳt Tên đầy đũ A phoenicis Aspergillus phoenicis ĐC Đối chứng CT Công thức Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng cùa ối (xét với 100g phần ăn được) Bâng 3.1 Ket phân lập vi sinh vật gây hại ôi Đài Loan 33 Bâng 3.2 Khá kháng mốc cùa che phám Gel nano bạc 35 Bâng 3.3 Khà ức che cùa che phẩm chủng nam A phoenicis 36 Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Hình thái khuân lạc phân lập 34 Hình 3.2 Hình thái khuân lạc phân lập 35 Hình 3.3 Cơ quan sinh hào tứ hào tử Aspergillus phoenicis (xlOOO) 35 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 Khóa Luận Tốt Nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC ĐÒ THỊ Đồ thị Khá ức chế phát triên chùng A phoenicis 37 Đồ thị Tý lệ vet thương hị thối hóng trình hão quán 38 Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội Nguyễn Thị Thu Trang Lóp: CNTP13-01 MỎ ĐẤU Đặt vấn đề Rau quà thức ăn thiết yếu khấu phần dinh dưỡng người Thành phần rau chủ yếu nước (80-90%), hàm lượng lipid thấp chứa nhiều chất xơ, khoáng, acid hữu cơ, chất thơm, đặc biệt vitamin c A, E Những thành phần góp phần làm tăng khã chuyển hóa thức ăn thế, làm tăng cân độ acid - kiềm máu dịch bào, nhờ độ pH thể ồn định Là nước nông nghiệp với nguồn thực vật phong phú chùng loại, nước ta có đù loại rau suốt mùa năm, ưu ngành công nghiệp che biến phát triến Trong năm gần đây, kinh tế nước tăng trướng nhanh, đời sống nhân dân cãi thiện, nhu cầu rau tăng lên nên sản xuất rau quà tăng trướng nhiều Trong loại trái Việt Nam, trái ối loại phố biến triển ổi điều khiên nước Với phát triển kinh tế vườn, ối chiếm diện tích đáng kể trái ối sử dụng dừng lại dạng tươi, chưa có giá trị kinh tế cao, đặc biệt thời gian thu hoạch, ổi tiêu thụ không hết làm thiệt hại kinh tế nhà làm vườn trái ổi dề bị hư hóng sau thu hoạch khơng tiêu thụ kịp thời Trên the giới Việt Nam, có phương pháp bão quản ổi Việc nghiên cứu phương pháp bảo quàn an toàn cho người tiêu dùng có hiệu chi phí bão qn thấp van đề cần thiết Trong năm gần đây, nhiều nghiên cứu ứng dụng tập trung khai thác tính ức chế vi sinh vật vượt trội Gel nano bạc nông nghiệp Gel nano bạc sử dụng thuốc phòng trừ dịch hại cho trồng an toàn thân thiện với môi trường Safaa cộng (2015) nghiên cứu cơng bố khả phịng trừ hữu hiệu ốc sên số nấm bệnh hại trồng Nguyễn Thị Thu Trang Lớp: CNTP 13-01 đĩa ủ 25°c 48 Công thức đối chứng không bổ sung chế phấm thực giống cơng thức thí nghiệm Kiếm tra số khuẩn lạc công thức sau 48 Đánh giá ức chế quần thê vsv chế phàm sử dụng công thức đây: % ức chế (%) = (C-T)/ c * 100 Trong đó: c số bào tứ/khuân lạc công thức đối chứng (không sử dụng chế phẩm) T số bào tứ/khuẩn lạc cơng thức thí nghiệm (có sử dụng chế phấm) 2.2.8 Khả ức chế nấm gây hại trực tiếp chế phẩm 2.2.8.1 Phương pháp chuẩn bị dung dịch chúng giống Chủng Aspergillus phoenicis phân lập từ thối hòng quà ổi Đài Loan dùng đế nghiên cứu Chúng phân lập nhân nuôi môi trường PDA 25°c ngày Bạo tư thu ỵề cách tráng nước tinh khiết bề mặt đĩa cấy Dung dịch cho thêm Tween 80 (0,05% khối lượng tích) đế tạo nhũ Dịch ni cấy dùng để nghiên cứu có nồng độ 105 - 106 bào tử /ml Nồng độ xác định máy đem bào từ 2.2.8 Phương pháp gây nhiễm nhân tạo Ỏi đù tiêu chuấn thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên thành cơng thức, moi cồng thức gồm 10 quá, lặp lại lần Rửa qủa vòi nước chảy, đế dùng sát trùng cồn 70° thời gian 10 phút, tráng lại bàng nước cất vô trùng Sau khô bề mặt, võ làm tốn thương nhân tạo bang cách sử dụng kim nhỏ vô trùng tạo đường rạch dài lem sâu 2mm Trên quà, có số lượng vết thương, mồi vết có đường rạch, cấy dịch bào từ nấm vào vết thương Dịch huyền phù bào tử nấm với mật số 1,75 xio6 bào từ/ml Sau cấy bào tử, qúa xếp lớp vào rổ nhựa Từng rồ lại đặt vào túi ủ nhiệt độ phòng 6h trước phũ Nguyễn Thị Thu Trang 31 Lớp: CNTP 13-01 vết với cơng thức có nồng độ chế phâm Gel nano bạc khác 2.2.8 Phương pháp kiêm soát nấm mốc chế phẩm nồng độ khác Mục đích cùa phương pháp xác định nồng độ tối ưu cùa chế phẩm để kiếm sốt nấm mốc Aspergillus phoenicìs Xừ lý 10 cho mồi cơng thức thí nghiệm Quá sau 24 gây nhiễm nấm mốc lô xử lý cách nhúng vào chế phấm Gel nano bạc nồng độ khác (6%, 8%, 10%, 12%) Quả sau xứ lý đem bảo quản điều kiện thường (25l,C) Mỗi nồng độ tương ứng với cơng thức thí nghiệm Các công thức khác tý lệ chế phấm Gel nano bạc gồm: Công thức Nồng độ chế phẩm ĐC CT1 CT2 Thòi gian (phút) 6% Thl viện ViệA^Đại học Mơ H ì Nội CT3 10% CT4 12% Kiếm tra phát triển nấm mốc công thức 10 ngày Chi tiêu đánh giá tính chất kháng nấm cùa Gel nano bạc tỳ lệ vết thương bị mốc tồng số vết gây nhiễm nhân tạo quà 2.2.9 Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu phân tích sử dụng Hệ thống Phân tích Thống kê SAS version 610 Phân tích già thiết thống kê theo ANOVA thực đế xác định hiệu quà xử lý phụ thuộc vào biến sổ hầu hết thí nghiệm có the áp dụng Các giá trị trung bình so sánh bang LSD (sự khác biệt có ý nghĩa nhó nhất) mức P