HOÀNG THỊ DIỆU HẰNG NGHIÊN cứu đa DẠNG đặc điểm THỰC vật, HÀM LƯỢNG và THÀNH PHẦN TINH dầu, HÀM LƯỢNG HESPERIDIN một số mẫu QUÝT ở bắc KẠN KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ DIỆU HẰNG NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU, HÀM LƯỢNG HESPERIDIN MỢT SỐ MẪU QT Ở BẮC KẠN KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỢI HỒNG THỊ DIỆU HẰNG Mã sinh viên: 1701150 NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU, HÀM LƯỢNG HESPERIDIN MỘT SỐ MẪU QUÝT Ở BẮC KẠN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Trần Văn Ơn Nơi thực hiện: Bộ mơn Thực Vật HÀ NỢI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực hồn thành khố luận, em nhận giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia lĩnh vực nghiên cứu bạn bè gia đình Trước hết, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, phòng đào tạo tồn thể thầy giáo Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện, tận tình dạy dỗ bảo cho em suốt năm học qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Trần Văn Ơn - người thầy quan tâm tạo điều kiện thuận lợi cho em trình nghiên cứu thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn ThS Phạm Thị Linh Giang - người ln tận tình hướng dẫn, bảo sát giúp đỡ em suốt thời gian thực khố luận Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến ThS Trần Trọng Biên môn Công nghiệp Dược, người dân xã Dương Phong xã Quang Thuận thuộc tỉnh Bắc Kạn, Khoa xét nghiệm Độc học thuộc Viện pháp y Quân Đội Trung tâm Nghiên cứu trồng chế biến thuốc Hà Nội cung cấp cho em nguồn dược liệu, chất chuẩn hỗ trợ em q trình hồn thiện khóa luận Em xin cảm ơn TS Hồng Quỳnh Hoa thầy cô, chị kỹ thuật viên môn Thực Vật giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình làm thực nghiệm Cuối lời cảm ơn sâu sắc nhất, em muốn gửi tới gia đình, người thân bạn Phạm Thị Nga, Nguyễn Văn Đức, Nguyễn Đức Chuẩn, Lê Thị Diễm, Nguyễn Bình Minh em Mai Thị Nga, Vương Ngân Hà bên cạnh ủng hộ em suốt trình học tập mái Trường Đại học Dược Hà Nội Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 31 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Hoàng Thị Diệu Hằng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Citrus họ Rutaceae .2 1.1.1 Vị trí phân loại chi Citrus khóa phân loại .2 1.1.2 Một số loài cho tinh dầu thuộc chi Citrus .2 1.1.3 Ứng dụng y dược số chất có vỏ thuộc chi Citrus 1.2 Tổng quan Citrus reticulata Blanco 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân loại loài Citrus reticulata Blanco 1.2.2 Phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học .8 1.2.4 Tác dụng dược lý 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .13 2.1 Đối tượng nghiên cứu .13 2.2 Nguyên vật liệu thiết bị 14 2.2.1 Hóa chất, dung mơi 14 2.2.2 Thiết bị, máy móc, dụng cụ 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật: Cơ quan sinh sản Quýt 15 2.3.2 Nghiên cứu hàm lượng thành phần tinh dầu vỏ Quýt 15 2.3.3 Nghiên cứu hàm lượng hesperidin mẫu vỏ Quýt 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đặc điểm thực vật mẫu nghiên cứu 19 3.1.1 Đặc điểm quan dinh dưỡng mẫu nghiên cứu .19 3.1.2 Đặc điểm quan sinh sản mẫu nghiên cứu 19 3.2 Đặc điểm giải phẫu vỏ mẫu nghiên cứu 29 3.3 Kết định lượng tinh dầu mẫu nghiên cứu 29 3.4 Kết phân tích thành phần tinh dầu vỏ mẫu nghiên cứu 31 3.5 Kết định lượng hesperidin vỏ sấy khô mẫu nghiên cứu 33 CHƯƠNG BÀN LUẬN 35 4.1 Về đặc điểm thực vật mẫu nghiên cứu 35 4.1.1 Về quan dinh dưỡng đặc điểm hoa mẫu nghiên cứu 35 4.1.2 Về quan sinh sản mẫu nghiên cứu .35 4.2 Về đặc điểm giải phẫu vỏ mẫu nghiên cứu .35 4.3 Về thành phần tinh dầu mẫu nghiên cứu 36 4.3.1 Về hàm lượng tinh dầu 36 4.3.2 Về thành phần tinh dầu 37 4.4 Về kết định lượng hesperidin mẫu nghiên cứu 38 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .40 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Tên bảng Trang Bảng 2.1 Danh sách mẫu nghiên cứu .13 Bảng 2.2 Điều kiện chạy sắc ký khí .16 Bảng 2.3 Chương trình chạy gradient pha động 17 Bảng 3.1 Bảng so sánh đặc điểm hình thái mẫu 25 Bảng 3.2 Hàm lượng tinh dầu vỏ mẫu Quýt 29 Bảng 3.3 Hàm lượng tinh dầu toàn mẫu Quýt 30 Bảng 3.4 Thành phần tinh dầu vỏ mẫu nghiên cứu .31 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống phương pháp định lượng hàm lượng hesperidin mẫu vỏ Quýt 33 Bảng 3.6 Hàm lượng hesperidin mẫu vỏ Quýt .33 Bảng 4.1 Bảng đánh giá hàm lượng tinh dầu vỏ toàn mẫu Quýt Bắc Kạn 37 DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ Tên hình Trang Hình 2.1 Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu nhẹ nước theo Dược điển Việt Nam 16 Hình 3.1 Đặc điểm quan dinh dưỡng Quýt Bắc Kạn 19 Hình 3.2 Đặc điểm quan sinh sản hoa Quýt Bắc Kạn 20 Hình 3.3 Đặc điểm hình thái giai đoạn chín mẫu BK2 21 Hình 3.4 Đặc điểm hình thái giai đoạn chín mẫu BK3 21 Hình 3.5 Đặc điểm hình thái giai đoạn chín mẫu BK5.1 .22 Hình 3.6 Đặc điểm hình thái giai đoạn chín mẫu BK5.2 .22 Hình 3.7 Màu sắc vỏ theo giai đoạn trưởng thành mẫu BK2 23 Hình 3.8 Màu sắc vỏ theo giai đoạn trưởng thành mẫu BK3 23 Hình 3.9 Màu sắc vỏ theo giai đoạn trưởng thành mẫu BK5.1 .24 Hình 3.10 Màu sắc vỏ theo giai đoạn trưởng thành mẫu BK5.2 24 Hình 3.11 Đặc điểm giải phẫu vỏ mẫu Quýt BK3-12 29 Hình 4.1 Độ dày vỏ mẫu BK5.2 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Quýt, Citrus reticulata Blanco loại trái có múi thuộc chi Citrus, nhóm ăn có vai trị quan trọng với sản lượng nơng nghiệp đạt 150 triệu tồn giới vào năm 2020 [113] Quýt tiêu thụ chủ yếu dạng trái tươi sản phẩm thông qua chế biến nước uống, mứt, thạch,… Cũng tiện lợi sử dụng, vỏ dễ loại bỏ, có hương thơm dễ chịu vị ngon miệng nên Quýt trở thành loài trái phổ biến Tại Việt Nam, tính đến năm 2021 nhóm ăn trồng với diện tích khoảng 263,8 nghìn số tăng khoảng 2,6% so với kỳ năm 2020 [1] Quýt nông sản tiêu biểu mang lại giá trị kinh tế cao cho người dân tỉnh Bắc Kạn, đồng thời tỉnh đẩy mạnh sản xuất loại theo hướng VietGap để đảm bảo an toàn tới người tiêu dùng [7] Hiện với xu hướng mở rộng thị trường tiêu thụ Quýt, đẩy mạnh việc cung cấp mặt hàng tiêu dùng nước tiến tới xuất việc quản lý chất thải từ Quýt cần quan tâm Trong nhiều thập kỷ qua, với gia tăng nhu cầu tiêu dùng Quýt giới tạo lượng lớn chất thải, chất thải chủ yếu vỏ hạt Vỏ Quýt chứa khoảng 80% độ ẩm, loại chất thải dễ hỏng thối rữa, chúng thu hút ruồi, tạo nấm mốc độc tố từ nấm mốc gây ảnh hưởng tới người mơi trường [107] Vì việc hiểu biết sử dụng hợp lý vỏ Quýt điều cần thiết để quản lý loại chất thải Trên thực tế, vỏ Quýt nguồn cung cấp hợp chất hoạt tính sinh học có lợi cho người, điển hình chất có khả chống oxy hóa, kháng khuẩn, dịch chiết vỏ cịn có tác dụng tế bào ung thư, giải lo âu,… [64] Mặt khác, chất chuyển hóa thứ cấp phận lại thay đổi tùy theo điều kiện khí hậu, địa hình, giống trồng, giai đoạn trưởng thành, tập quán canh tác vùng [22], [38], [52] Do đó, việc tiến hành nghiên cứu đặc điểm thực vật Qt phân tích thành phần hóa học vỏ trở thành nguồn tham khảo tốt để đánh giá lại sản phẩm phụ từ giúp tận dụng lợi ích từ đưa biện pháp quản lý phù hợp Với mong muốn góp phần vào hoạt động đánh giá sản phẩm phụ từ Quýt, nhóm nghiên cứu tiến hành thu hái mẫu Quýt hai xã Dương Phong Quang Thuận thuộc tỉnh Bắc Kạn thực đề tài: “Nghiên cứu đa dạng đặc điểm thực vật, hàm lượng thành phần tinh dầu, hàm lượng hesperidin số mẫu Quýt Bắc Kạn” với hai mục tiêu: Mô tả đặc điểm hình thái số mẫu Quýt thu hái Bắc Kạn So sánh hàm lượng, thành phần tinh dầu; sơ đánh giá hàm lượng hesperidin vỏ mẫu Quýt theo giai đoạn trưởng thành CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Citrus họ Rutaceae 1.1.1 Vị trí phân loại chi Citrus khóa phân loại Theo Takhtajan [89], chi Citrus bao gồm nhiều loài xác định vị trí hệ thống phân loại sau: Giới Plantae Ngành Magnoliophyta Magnoliopsida Rosidae Lớp Phân lớp Bộ Rutales Họ Rutaceae Phân họ Chi Aurantioideae Citrus 1.1.2 Một số loài cho tinh dầu thuộc chi Citrus Chi Citrus chi quan trọng họ Cam (Rutaceae), chi Citrus biết đến nguồn thực phẩm đa dạng, bao gồm nhiều loại trái có múi khác như: lồi cam Citrus sinensis (sweet oranges), Citrus aurantium (sour oranges, bitter oranges); Quýt Citrus reticulata (mandarins); loài bưởi Citrus paradise (grapefruit), Citrus grandis (pomelo); loài chanh Citrus limon (lemons), Citrus latifolia, Citrus aurantifolia (limes); yên Citrus medica (citrons) [4], [106] Những trái có múi sử dụng phần thịt để đáp ứng nhu cầu nguồn thực phẩm ngày lớn số lượng phế phẩm ngày gia tăng Một phế phẩm lớn nguồn thực phẩm vỏ sau bóc tách phần thịt bên trong, nhiên phần vỏ lại mang đến nhiều lợi ích cho người khai thác triệt để, đặc biệt thành phần tinh dầu nằm vỏ Một số lồi thuộc chi Citrus đem lại lợi ích chiết lấy tinh dầu như: Chanh, tên khoa học Citrus limon (Linnaeus) Osbeck hay tiếng anh limon sour limon [39], [48], [108] Kết thu từ nghiên cứu cho thấy vỏ chanh sau chiết xuất thu khoảng từ 0,46-4,4% tinh dầu [48], [62] Trong chiếm phần lớn hợp chất hữu monoterpen, sesquiterpen hợp chất oxy hóa chúng [39] Khi phân tích GC-MS, kết phân tích cho thấy limonen thường thành phần tinh dầu chanh (chiếm từ 46,93 đến 83,03% [39], [48], [62]) thành phần khác thường xác định tinh dầu là: β-pinen, γ-terpinen, myrcen,… [39], [62] Sự chênh lệch hàm lượng tinh dầu thành phần tinh dầu giải thích khác biệt thời gian thu hái thể cho thay đổi sinh trưởng quả, vùng trồng, thao tác yếu tố kỹ thuật trình chiết xuất, kỹ thuật thiết bị sử dụng phân tích thành phần tinh dầu nghiên cứu Tinh dầu chanh cho thấy tác dụng có lợi chống oxy hóa, kháng khuẩn xem xét chất kháng mầm bệnh tiềm việc bảo quản thực phẩm [62] Bưởi, tên khoa học Citrus grandis (Linnaeus) Osbeck hay tiếng anh pomelo, shaddock [91], [108] Bưởi lồi có phần vỏ coi lớn loài Citrus chúng đồng thời chứa nhiều chất có hoạt tính sinh học có lợi cho người tinh dầu, flavonoid, coumarin, acid phenolic, carotenoid, polysaccharid,… [91] Tinh dầu bưởi chiết khơng màu màu vàng suốt, tùy thuộc vào phương pháp chiết [73], phần lớn hợp chất tinh dầu phân tích thuộc dẫn chất monoterpen, điển hình limonen (có thể chiếm từ 32,63 đến 95,4% hàm lượng tinh dầu), ngồi cịn chứa số dẫn chất monoterpen có chứa oxy linalool, verbenon,… số sesquiterpen khác [42], [73] Tinh dầu bưởi nghiên cứu cho thấy có khả loại bỏ gốc tự do, có hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu chiết phương pháp ép lạnh cịn có tác dụng cải thiện tâm trạng, đem lại cảm giác dễ chịu tăng hiệu giấc ngủ [73] Ngoài ra, theo tác giả Chen GuanWen [27], việc kết hợp tinh dầu bưởi chitosan dạng nhũ tương làm tăng tác dụng ức chế Staphylococcus aureus Escherichia coli làm giảm nồng độ ức chế vi khuẩn tối thiểu so với việc sử dụng tinh dầu thông thường Cam, tên khoa học Citrus sinensis (L.) Osbeck hay tiếng anh sweet orange [4] Nước ép cam biết đến nguồn thực phẩm quan trọng cung cấp vitamin C có tác dụng chống oxy hóa [68], [81], [92] Tuy nhiên, sản phẩm phụ cam vỏ cho thấy khả chống oxy hóa kháng khuẩn chứa thành phần acid phenolic, acid lactic, flavonoid, tanin [54], [72] Ngoài ra, vỏ cam cung cấp từ 0,05-0,21% tinh dầu [69], [71] chiết phương pháp khác hàm lượng tinh dầu cam lên tới 0,85% làm khơ trước chiết [59], tinh dầu vỏ mang mùi thơm đặc trưng cam chứa phần lớn dẫn chất monoterpen, điển hình limonen (hàm lượng từ 80,5-94,6%), myrcen, sabinen, α-pinen,…và số dẫn chất sesquiterpen β-caryophyllen [59], [69], [71], [77] Bên cạnh tác dụng chống oxy hóa, tinh dầu chiết từ vỏ cam cịn có tác dụng kháng nấm thể khả chống viêm đáng kể mơ hình gây phù chân chuột [59], [77] Cam chua hay Cam đắng, tên khoa học Citrus aurantium Linnaeus hay tiếng anh sour orange hay bitter orange [13], [42], [108] Giống số lồi Citrus khác, Citrus aurantium có khả chiết xuất tinh dầu từ vỏ, hoa nhiên hàm lượng, số lượng thành phần chất tinh dầu chiết lại thay đổi tùy theo phận [13], [43] Đối với phần tinh dầu chiết từ vỏ hàm lượng chúng thường dao động khoảng 0,66 đến 1,24% tính theo khối lượng vỏ Hình 1.2.9 Đặc điểm hình thái mẫu Quýt BK5.2-10 Chú thích: Biểu bì; Mơ mềm vỏ quả; Túi tiết tinh dầu; Tinh thể calci oxalat; Đám libe-gỗ Hình 1.2.10 Đặc điểm hình thái mẫu Qt BK5.2-12 Chú thích: Biểu bì; Mơ mềm vỏ quả; Tinh thể calci oxalat; Túi tiết tinh dầu; Đám libe-gỗ PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ THÀNH PHẦN TINH DẦU PHÂN TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC-MS PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ THÀNH PHẦN TINH DẦU PHÂN TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC-MS BK2-10 BK3-10 BK5.1-10 BK5.1-12 BK5.2-10 BK5.2-12 PHỤ LỤC GIẤY CHỨNG NHẬN PHÂN TÍCH CHẤT CHUẨN HESPERIDIN PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG HESPERIDIN BẰNG HPLC PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG HESPERIDIN BẰNG HPLC Mẫu chuẩn BK2-10 BK2-11 BK2-12 BK3-10 BK3-11 BK3-12 BK5.1-10 BK5.1-12 BK5.2-10 BK5.2-12 ... ĐA? ?I HỌC DƯỢC HÀ NỢI HỒNG THỊ DIỆU HẰNG Mã sinh viên: 1701150 NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU, HÀM LƯỢNG HESPERIDIN MỘT SỐ MẪU QUÝT Ở BẮC KẠN. .. vỏ Quýt 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đặc điểm thực vật mẫu nghiên cứu 19 3.1.1 Đặc điểm quan dinh dưỡng mẫu nghiên cứu .19 3.1.2 Đặc điểm quan sinh sản mẫu nghiên cứu. .. gian nghiên cứu, thực nghiệm, đề tài thu số kết sau: Về đặc điểm thực vật số mẫu Quýt thu hái Bắc Kạn - Đã mô tả chi tiết đặc điểm thực vật loài nghiên cứu - Đã xác định đặc điểm vi phẫu vỏ lồi nghiên