HOÀNG MẠNH CƯỜNG NGHIÊN cứu ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG và THIẾT lập CHUẨN làm VIỆC của FLUTAMID TỔNG hợp tại bộ môn hóa hữu cơ TRƯỜNG đại học dược hà nội KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH CƯỜNG NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG VÀ THIẾT LẬP CHUẨN LÀM VIỆC CỦA FLUTAMID TỔNG HỢP TẠI BỘ MƠN HĨA HỮU CƠ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH CƯỜNG 1701067 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG VÀ THIẾT LẬP CHUẨN LÀM VIỆC CỦA FLUTAMID TỔNG HỢP TẠI BỘ MƠN HĨA HỮU CƠ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Đinh Thị Thanh Hải PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa Phân tích & Độc chất Bộ mơn Hóa Hữu HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Lời em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Đinh Thị Thanh Hải, PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, cô hướng dẫn bảo em tận tình suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ nhiệt tình anh chị Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia trực thuộc trường Đại học Dược Hà Nội, đặc biệt Ths Bùi Thị Thanh Phương thầy cô môn Hóa Hữu cơ, thầy mơn Hóa Phân tích – Độc chất thầy mơn Cơng nghiệp dược suốt q trình em thực đề tài Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Đoàn Minh Sang chia sẻ kiến thức, hỗ trợ giải đáp thắc mắc cho em q trình thực khóa luận Và cuối em xin dành lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ em suốt q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2022 Sinh viên Hoàng Mạnh Cường MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Flutamid 1.1.1 Flutamid 1.1.2 Một số dạng bào chế biệt dược 1.1.3 Tác dụng 1.1.4 Chỉ định liều dùng 1.1.5 Tiêu chuẩn chất lượng nghiên cứu định lượng nguyên liệu flutamid 1.2 Phương pháp tổng hợp flutamid Bộ môn Hóa Hữu cơ, Trường Đại học Dược Hà Nội 1.3 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Cấu tạo hệ thống 1.3.3 Ứng dụng HPLC kiểm nghiệm thuốc 1.4 Tổng quan chất đối chiếu 10 1.4.1 Khái niệm 10 1.4.2 Phân loại chất đối chiếu 10 1.4.3 Vai trò chất đối chiếu 11 1.4.4 Quy trình thiết lập 11 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên liệu 12 2.1.1 Hóa chất, chất chuẩn 12 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ phân tích 12 2.2 Đối tượng nghiên cứu 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1 Phương pháp đánh giá chất lượng 13 2.3.2 Phương pháp thiết lập chuẩn làm việc nghiên cứu 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 3.1 Đánh giá chất lượng lô nguyên liệu flutamid 20 3.1.1 Đánh giá chất lượng lô FLU 22.04.2021 20 3.1.2 Đánh giá chất lượng lô nguyên liệu flutamid thu từ trình tổng hợp quy mô nghiên cứu 26 3.2 Thiết lập chuẩn làm việc flutamid 28 3.2.1 Xây dựng liệu phổ 28 3.2.2 Đánh giá chất lượng mẫu nguyên liệu thiết lập chuẩn 33 3.2.3 Đóng lọ chuẩn làm việc flutamid 34 3.2.4 Kiểm tra độ đồng q trình đóng gói 34 3.2.5 Tập hợp xử lý số liệu 35 3.2.6 Dán nhãn, bảo quản 36 Chương BÀN LUẬN 37 4.1 Về chất lượng nguyên liệu tổng hợp 37 4.2 Về thiết lập chuẩn làm việc flutamid 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ARS ASEAN Reference Standards (Chuẩn ASEAN) ASEAN Association of South East Asian Nations (Hiệp hội Quốc gia Đông Nam Á) BP British pharmacopoeia (Dược điển Anh) C Concentration (Nồng độ) 13 Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy (Phổ cộng hưởng C-NMR từ hạt nhân carbon 13) DĐVN V Dược điển Việt Nam DNA Deoxyribonucleic acid EPCRS European Pharmacopoeia Chemical Reference Substances (Chuẩn Dược diển châu Âu) GnRH Gonadotrophin releasing hormone Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ H-NMR hạt nhân proton) HPLC High-performance liquyd chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HPTLC High Perfromance Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng hiệu cao) ICRS International Chemical Reference Subtances (Chuẩn Quốc tế) IP India pharmacopoeia (Dược điển Ấn Độ) IR Infrared spectroscopy (Phổ hồng ngoại) JP Japanese pharmacopoeia (Dược điển Nhật Bản) LC-MS Liquyd chromatography–mass spectrometry (Sắc ký lỏng - khối phổ) MS Mass spectrometry (Phổ khối lượng) NIST National Institute of Standards and Technology (Viện tiêu chuẩn công nghệ quốc gia Mỹ) Ph Eur European Pharmacopoeia (Dược điển Châu Âu) PTFE Polytetrafluoroetylen RCA Related Compound A (Tạp chất liên quan A) RCB Related Compound B (Tạp chất liên quan B) RRT Thời gian lưu tương đối RRF Hệ số đáp ứng tương đối RSD Relative Standard Deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) RT Thời gian lưu USP United states pharmacopeia (Dược điển Mỹ) USPRS USP Reference Standards (Chuẩn Dược điển Mỹ) WHO World Health Organization (Tổ chức y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Một số chế phẩm thị trường flutamid Bảng 1.2 Một số tiêu đánh giá chất lượng flutamid dược điển quốc gia phát triển giới Bảng 2.1 Các tạp chất flutamid giới hạn cho phép theo USP 42 17 Bảng 2.2 Một số thông số thống kê sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 3.1 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống sắc ký đánh giá mẫu nguyên liệu FLU 22.04.2021 21 Bảng 3.2 Kết định lượng mẫu nguyên liệu FLU 22.04.2021 23 Bảng 3.3 Kết xác định tro sulfat mẫu nguyên liệu FLU 22.04.2021 24 Bảng 3.4 Kết xác định độ phù hợp hệ thống đánh giá tiêu tạp chất hữu mẫu nguyên liệu FLU 22.04.2021 25 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ nhạy phương pháp 25 Bảng 3.6 Kết xác định Tạp chất hữu mẫu nguyên liệu flutamid FLU 22.04.2021 25 Bảng 3.7 Kết xác định khối lượng làm khô mẫu nguyên liệu flutamid FLU 22.04.2021 26 Bảng 3.8 Kết đánh giá chất lượng lô Flutamid 27 Bảng 3.9 Kết phân tích phổ IR nguyên liệu flutamid thiết lập chuẩn 29 Bảng 3.10 Bảng kết phẩn tích phổ khối lượng (MS) nguyên liệu flutamid thiết lập chuẩn 30 Bảng 3.11 Kết phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, 13C-NMR) nguyên liệu flutamid thiết lập chuẩn 32 Bảng 3.12 Kết đánh giá chất lượng nguyên liệu flutamid thiết lập chuẩn 33 Bảng 3.13 Kết đánh giá đồng hàm lượng chuẩn làm flutamid thiết lập 35 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỜ Hình 1.1 Các tạp chất sử dụng để đánh giá chất lượng flutamid Hình 1.2 Sơ đờ máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Hình 3.1 Sắc ký đờ mẫu thử FLU 22.04.2021 20 Hình 3.2 Sắc ký đờ mẫu chuẩn flutamid 21 Hình 3.3a, 3.3b, 3.3c Sắc ký đờ định lượng flutamid mẫu FLU 22.04.2021 23 Hình 3.4 Sắc ký đồ định lượng flutamid mẫu chuẩn 23 Hình 3.5 Sắc ký đờ đánh giá độ phù hợp hệ thống đánh giá tiêu tạp chất hữu 24 Hình 3.6 Phổ IR mẫu nguyên liệu flutamid 28 Hình 3.7 Phổ MS mẫu nguyên liệu flutamid 29 Hình 3.8a, 3.8b, 3.8c Phổ NMR mẫu nguyên liệu flutamid 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư tiền liệt tuyến bệnh ung thư thường gặp, đứng thứ tỷ lệ mắc thứ tỷ lệ tử vong bệnh ung thư nam giới Ước tính có 1,3 triệu ca mắc 359 000 ca chết liên quan đến ung thư tiền liệt tuyến giới vào năm 2018 Tại Việt Nam năm 2012, theo số liệu quan nghiên cứu ung thư giới, tỷ lệ mắc tử vong 3,4 2,5/ 100 000 dân [30] Bên cạnh phương pháp điều trị ung thư truyền thống phẫu thuật, xạ trị, hóa chất hay liệu pháp ức chế androgen cắt tinh hoàn ngoại khoa hay thuốc, nhóm thuốc nội tiết sử dụng rộng rãi cho bệnh nhân Theo báo cáo bệnh viện K bệnh viện u bướu, việc sử dụng thuốc flutamid (Eulexin) mang lại hiệu đáng kể cho bệnh nhân ung thư tiền liệt tuyến Hiện nay, flutamid sử dụng bệnh viện hồn tồn từ ng̀n nhập với giá thành cao, gây khó khăn cho nhiều bệnh nhân Cho đến nay, nghiên cứu tổng hợp flutamid Việt Nam hạn chế Nguyên liệu sản xuất thuốc Việt Nam chủ yếu nhập từ nước bị phụ thuộc vào nhà cung cấp q trình logistic, đặc biệt giá thành khơng kiểm sốt Ngồi ngun liệu sản xuất giá thành chất chuẩn để sử dụng đánh giá chất lượng nguyên liệu hay thành phẩm phải nhập với giá thành cao lên đến khoảng triệu đờng cho 200 mg chất chuẩn USP tính đến ngày 25/5/2022 Do đó, ngành Dược nước ta cần triển khai nghiên cứu sản xuất nguyên liệu để bước chủ động nguyên liệu làm thuốc, chủ động việc sản xuất thuốc, đặc biệt thuốc thiết yếu Để góp phần vào phát triển chung Ngành, nhóm nghiên cứu mơn Hóa Hữu Trường Đại học Dược Hà Nội thực đề tài cấp thành phố Hà Nội “Nghiên cứu quy trình tổng hợp bào chế dạng thuốc viên flutamid điều trị ung thư tiền liệt tuyến” Từ năm 2021 nhóm phát triển nghiên cứu tổng hợp nguyên liệu flutamid Quá trình nghiên cứu tiến hành qua quy mô từ nhỏ 10 g/mẻ, đến 50 g/mẻ nâng cấp quy mô 500 g/mẻ Với mục tiêu tạo sản phẩm nguyên liệu flutamid đưa vào điều trị bệnh chất lượng sản phẩm phải đạt tiêu chuẩn dược dụng Chính vậy, đờng hành 49 50 51 Phụ lục Sắc ký đồ định tính, định lượng và xác định tạp chất hữu mẫu thử mẫu FLU 22.04.2021 52 53 54 Phụ lục Sắc ký đồ đánh giá độ phù hợp hệ thống sắc ký phép thử tạp chất hữu mẫu FLU 22.04.2021 55 56 57 58 59 60 Phụ lục Chuyên luận flutamid USP 42 61 62 63 ...BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH CƯỜNG 1701067 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG VÀ THIẾT LẬP CHUẨN LÀM VIỆC CỦA FLUTAMID TỔNG HỢP TẠI BỘ MƠN HĨA HỮU CƠ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KHÓA... tiêu chuẩn đăng ký, đồng thời thiết lập chuẩn làm việc để giảm chi phí cho q trình nghiên cứu Đề tài ? ?Nghiên cứu đánh giá chất lượng thiết lập chuẩn làm việc Flutamid tổng hợp mơn Hóa Hữu Trường. .. Trường Đại học Dược Hà Nội? ?? thực với mục tiêu: - Đánh giá tiêu chất lượng flutamid tổng hợp quy mô khác theo tiêu chuẩn Dược điển Mỹ (USP 42) phục vụ nghiên cứu tổng hợp nguyên liệu - Thiết lập chuẩn