Đánh giá tác dụng hạ glucose máu thực nghiệm của cao chiết cây xấu hổ ( mimosa pudica l , fabaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ HUYỀN TRANG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU THỰC NGHIỆM CỦA CAO CHIẾT CÂY XẤU HỔ (Mimosa pudica L., Fabaceae ) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC Hà Nội 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ HUYỀN TRANG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU THỰC NGHIỆM CỦA CAO CHIẾT CÂY XẤU HỔ (Mimosa pudica L., Fabaceae ) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LÝ –DƢỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Bùi Thanh Tùng PGS.TS Đào Thị Vui HÀ NỘI 2022 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Thanh Tùng, PGS.TS Đào Thị Vui trao cho hội làm nghiên cứu thực nghiệm, tạo điều kiện, hỗ trợ, động viên đưa nhận xét nghiêm khắc, hữu ích suốt q trình nghiên cứu, hướng dẫn nhiệt tình giúp tơi hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới ThS Phạm Thị Lan tạo điều kiện, dẫn tận tình ủng hộ tơi suốt q trình nghiên cứu thực nghiệm Đề tài kết q trình tơi tham gia nghiên cứu đề tài : “Nghiên cứu khả cải thiện chế tác dụng cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) mô hình bệnh đái tháo đường Streptozotocin gây chuột” Nghiên cứu sinh : ThS Phạm Thị Lan Tơi cam kết khơng có xung đột lợi ích quyền với nhóm nghiên cứu Cảm ơn cán môn Dược lý – Dược lâm sàng- Trường đại học dược Y Dược – Đại học quốc gia Hà Nội đồng hành, hỗ trợ, chia sẻ cơng việc giúp tơi suốt q trình làm nghiên cứu Những giúp đỡ người động lực lớn giúp tơi hồn thành nghiên cứu ngày tháng nghiên cứu môn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô môn dược lực, dược lâm sàng nơi theo học chuyên ngành dược lý - dược lâm sàng thầy giáo, cô giáo trường đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tụy truyền tải tri thức giảng đường gần suốt gần hai năm học tập Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln động viên tinh thần ủng hộ để tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Học viên Trần Thị Huyền Trang MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Bệnh đái tháo đƣờng 1.1.1 Định nghĩa, phân loại, tiêu chẩn đoán ĐTĐ 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh bệnh ĐTĐ 1.1.3 Biến chứng Đái tháo đường 1.1.4 Các thuốc sử dụng điều trị ĐTĐ 1.1.5.Các mơ hình gây ĐTĐ thực nghiệm động vật 13 1.2 Tổng quan Xấu hổ 15 1.2.1.Đặc điểm hình thái 15 1.2.2.Thành phần hóa học 15 1.3 Các nghiên cứu liên quan đến tác dụng hạ glucose máu Xấu hổ 16 1.3.1.Nghiên cứu giới liên quan đến tác dụng hạ glucose máu Xấu hổ 16 1.3.2.Nghiên cứu nước liên quan đến tác dụng hạ glucose máu Xấu hổ 18 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 19 2.1.2 Động vật thí nghiệm 20 2.1.3 Hóa chất thuốc thử 21 2.1.4 Thiết bị thí nghiệm 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng hạ glucose máu cao toàn phần phân đoạn Xấu hổ theo phương pháp dung nạp glucose đường uống (OGTT) chuột bình thường 22 2.2.2 Phương pháp đánh giá tác dụng phân đoạn có tác dụng tốt mơ hình chuột bị gây ĐTĐ kiểu typ streptozotocin 24 2.2.3 Phương pháp xác định thông số đánh giá thí nghiệm 26 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Kết đánh giá tác dụng hạ glucose máu cao toàn phần phân đoạn Xấu hổ theo phƣơng pháp dung nạp glucose đƣờng uống (OGTT) chuột bình thƣờng 33 3.1.1 Nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống với cao toàn phần phân đoạn Xấu hổ 33 3.1.2 Nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống với phân đoạn EtOAc Xấu hổ 34 3.2 Kết đánh giá tác dụng phân đoạn EtOAc Xấu hổ mơ hình chuột bị gây ĐTĐ typ chế độ ăn giàu chất béo streptozotocin 34 3.2.1 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên glucose huyết tương 34 3.2.2 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ lipid máu 36 3.2.3 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên microalbumin niệu 37 3.2.4 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ creatinin máu 38 3.2.5 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ creatinin nước tiểu………………… 39 3.2.6 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên hệ số thải creatinin 40 3.2.7 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên tình trạng viêm mơ thận chuột 41 3.2.8 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên trình stress oxy hóa chuột ……………………………………………………………………………43 3.2.9 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên mô bệnh học thận chuột 47 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 49 4.1 Về tác dụng hạ glucose máu cao toàn phần phân đoạn Xấu hổ theo phƣơng pháp dung nạp glucose đƣờng uống (OGTT) chuột bình thƣờng 49 4.1.1 Về việc lựa chọn thử nghiệm OGTT 49 4.1.2 Về việc lựa chọn liều thử nghiệm 49 4.1.3 Về kết thử nghiệm OGTT 49 4.2 Về tác dụng phân đoạn ethylacetat mô hình chuột bị gây ĐTĐ kiểu typ chế độ ăn giàu chất béo streptozotocin 50 4.2.1 Về việc lựa chọn mơ hình nghiên cứu 50 4.2.2 Về ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên mơ hình chuột bị gây ĐTĐ typ STZ 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Nghĩa tiếng Việt Diễn giải ADA American Diabetes Association Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kì AMPK Adenosine protein monophosphate Protein kinase phụ thuộc AMP protein kinase CAT Catalase Catalase DPP-4i Dipeptidyl peptidase -4 inhibitors Thuốc ức chế Dipeptidyl peptidase - DTT Dithiothreitol Dithiothreitol ĐTĐ Đái tháo đường Đái tháo đường EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Acid Ethylenediaminetetraacetic ESRD End-Stage Renal Disease Bệnh thận giai đoạn cuối EtOAc Ethylacetate Ethylacetat FPG Fasting plasma glucose Glucose lúc đói GEF Guanine exchange factor Yếu tố trao đổi guanine GHSR Growth hormone secretagogue Receptor receptor Thuốc đồng vận thụ thể GLP-1 GLP- Glucagon like peptide-1 receptor 1Gas agonists GLUT-1 Glucose transporter type Chất vận chuyển glucose typ GPx Glutathion peroxydase Glutathion peroxydase GSH Glutathione Glutathione HbA1c Hemoglobin A1c Hemoglobin A1c HDL High Density Lipoprotein Lipoprotein trọng lượng phân tử Cholesterol cao Human Leukocyte Antigent Hệ thống kháng nguyên bạch cầu HLA người HPLC High-performance liquid Sắc kí lớp mỏng hiệu cao chromatography IDF International Diabetes Federation Liên đoàn đái tháo đường giới IL-1 Interleukine -1 Interleukin -1 IRS Insulin receptor substrates Chất thụ thể insulin LDL Low Density Lipoprotein Cholesterol Lipoprotein trọng lượng phân tử thấp MDA Malonyl dialdehyde Malonyl dialdehyd MHC Major Histocompatibility Complex Phức hợp hòa hợp mô chủ yếu NDAPH Nicotinamide adenine dinucleotide Nicotinamide adenine phosphate dinucleotide phosphate Oral glucose tolerance test Nghiệm pháp dung nạp glucose OGTT đường uống PI3K Phosphoinositide –Kinase Phosphoinositide –Kinase PIP3 Phosphatidylinositol triphosphate Phosphatidylinositol triphosphate PKB, Protein Kinase B/ C Protein Kinase B/ C PNP-G p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid pNPP p-nitrophenyl phosphate p-nitrophenyl phosphate PPARγ Peroxysome proliferator-activated Thụ thể hoạt hóa peroxysome γ PKC receptor γ PTP1B Protein Tyrosine Phosphatase 1B Protein Tyrosine Phosphatase 1B ROS Reactive oxygen spieces Các gốc oxy hóa có nguồn gốc oxy SGLT-2 Sodium glucose transporter -2 Hệ thống đồng vận Na, glucose -2 SOD Superoxyde dismutase Superoxyde dismutase STZ Streptozotocin Streptozotocin SU Sulfonylureas Các Sulfonylurea TGF-β Transforming Growth Factor β Yếu tố tăng trưởng chuyển dạng β TLC Thin layer chromatography Sắc kí mỏng TNF-α Tumor Necrosis Factors– α Factors Yếu tố hoại tử khối u – α DANH MỤC HÌNH Hình 1 Các yếu tố ảnh hưởng lên tiết insulin số thuốc sử dụng ĐTĐ Hình Cây Xấu hổ 15 Hình Hình ảnh mẫu Xấu hổ thu hái 19 Hình 2 Sơ đồ chiết phân đoạn 20 Hình Sơ đồ thiết kế thí nghiệm 22 Hình Sơ đồ thí nghiệm dung nạp glucose đường uống 23 Hình Thiết kế thí nghiệm đánh giá tác dụng mẫu nghiên cứu chuột 26 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ glucose máu …… .35 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên microalbulin niệu 37 Hình 3 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc lên nồng độ creatinin máu 38 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc lên nồng độ creatinin niệu 39 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc lên hệ số thải creatinin 40 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc lên nồng độ TNF –α mơ thận chuột41 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc lên nồng độ IL-1β mơ thận chuột 42 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên trình peroxy hóa lipid 43 Hình Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ SOD 44 Hình 10 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ CAT 45 Hình 11 Ảnh hưởng phân đoạn EtOAc Xấu hổ lên nồng độ GPx 46 (p