Phân tích định tính thành phần hoá học và tác dụng bảo vệ tế bào của cao chiết cây xấu hổ (mimosa pudica linn) do methyl glyoxal gây ra

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ NGỌC HUYỀN PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO CỦA CAO CHIẾT CÂY XẤU HỔ (Mimosa pudica Linn.) DO METHYL GLYOXAL GÂY RA KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ NGỌC HUYỀN PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HỐ HỌC VÀ TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO CỦA CAO CHIẾT CÂY XẤU HỔ (Mimosa pudica Linn.) DO METHYL GLYOXAL GÂY RA KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHOÁ: QH.2016.Y Người hướng dẫn 1: ThS PHẠM THỊ LAN Người hướng dẫn 2: PGS.TS BÙI THANH TÙNG Hà Nội – 2021 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi tới Ban Giám hiệu toàn thể giảng viên Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội lời cảm ơn chân thành tâm huyết, trách nhiệm lòng nhiệt thành thiết kế xây dựng chương trình đào tạo thực hiệu quả, bao gồm Khố luận hồn thành tốt nghiệp Là sinh viên ngành Dược học Trường Đại học Y Dược khố QH.2016.Y, tơi vơ biết ơn tự hào tham gia nghiên cứu hồn thành Khố luận với đề tài “ Phân tích định tính thành phần hố học tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) methyl glyoxal gây ra” Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Th.S Phạm Thị Lan PGS.TS Bùi Thanh Tùng với định hướng rõ ràng dẫn cụ thể vai trò giảng viên hướng dẫn trực tiếp tơi Cùng với giúp đỡ nhiệt tình giảng viên, cán nhân viên Viện Dược liệu, Khoa Hoá-Đại học Khoa Học Tự Nhiên Trường Đại học Gachon, Hàn Quốc để tạo điều kiện thuận lợi cho tơi thực đề tài Khố luận tốt nghiệp Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người ln đồng hành, động viên khích lệ tơi suốt q trình hồn thành đề tài Khố luận Với tập trung cố gắng hết mình, tơi thực tự tin với Khố luận hồn thành, khó tránh khỏi hạn chế thiếu sót cần bổ sung Do đó, tơi mong nhận nhận xét, đánh giá góp ý q thầy để Khố luận hồn thiện Hà Nội tháng năm 2021 Tác giả khoá luận Nguyễn Thị Ngọc Huyền DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT AG Aminoguanidine AGEs Advanced glycation end products AMPK 5' adenosine monophosphate-activated protein kinase BSA Bovine serum albumin ĐTĐ Đái tháo đường EtOH Ethanol GLO1 Glyoxalase HUVECs IC50 LC/MS Tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người (Human umbilical vein endothelial cells) Nồng độ ức chế 50% (Inhibitory concentration 50%) Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography-mass spectrometry) MGO Methyl glyoxal MGO-Hs Methyl glyoxal-derived hydroimidazolone MTT 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide PTP1B Protein tyrosine phosphatase 1B RAGE Thụ thể AGEs (Receptor for AGEs) α-glucosidase Alpha-glucosidase DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình Tên Trang 1.1 Sự hình thành MGO AGEs đái tháo đường type 12 2.1 Cây Xấu hổ 17 2.2 Sơ đồ cấu tạo đơn giản hệ thống sắc ký lỏng khối phổ 19 2.3 Nguyên lý phương pháp MTT 21 3.1 Cấu trúc hoá học hợp chất Xấu hổ 26 3.2 Khả sống sót tế bào xử lý với cao chiết Xấu hổ nồng độ khác trước tiếp xúc với MGO 27 3.3 Khả ức chế hình thành AGEs MGO nồng độ khác cao chiết Xấu hổ 28 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng Tên Trang 1.1 Nguyên nhân ĐTĐ nguyên phát 2.1 Thông số chạy mẫu trình sắc ký lỏng 21 2.2 Các điều kiện nguồn ion hoá thiết bị khối phổ 21 3.1 Các hợp chất xác định cao chiết Xấu hổ 26 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh đái tháo đường 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại đái tháo đường 1.1.3 Nguyên nhân chế bệnh sinh đái tháo đường típ 1.1.4 Các biến chứng bệnh 1.2 Một số đích phân tử điều trị đái tháo đường típ 1.2.1 5' adenosine monophosphate-activated protein kinase 1.2.2 Alpha-glucosidase 1.2.3 Protein tyrosine phosphatase 1B 1.2.4 Advanced glycation end products 1.3 Methyl glyoxal gây độc cho tế bào biểu bệnh đái tháo đường 1.3.1 Methyl glyoxal hình thành AGEs 1.3.2 Những hậu MGO biểu đái tháo đường 10 1.3.3 Một số phương pháp ức chế hình thành AGEs liên quan tới MGO 12 1.4 Tổng quan Xấu hổ 13 1.4.1 Vị trí phân loại 13 1.4.2 Đặc điểm thực vật phân bố 14 1.4.3 Tác dụng dược lý 14 1.4.4 Một số nghiên cứu tác dụng điều trị đái tháo đường Xấu hổ 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 17 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 17 2.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 17 2.1.3 Hố chất, dung mơi chất tham gia phản ứng 18 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp định tính thành phần hố học cao chiết Xấu hổ phương pháp LC/MS 19 2.3.2 Phương pháp đánh giá khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ 22 2.3.3 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế hình thành AGEs MGO gây cao chiết Xấu hổ 23 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 24 Chương KẾT QUẢ 25 3.1 Kết định tính thành phần hoá học cao chiết ethanol Xấu hổ 25 3.2 Kết đánh giá khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ 28 3.3 Kết đánh giá tác dụng ức chế MGO hình thành AGEs cao chiết Xấu hổ 29 Chương BÀN LUẬN 30 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 MỞ ĐẦU Đái tháo đường bệnh không lây nhiễm phổ biến tồn cầu Trên tồn giới có 415 triệu người lớn (độ tuổi 20-79) tương đương 11 người lớn sống với bệnh đái tháo đường năm 2015 Dự đoán vào năm 2040, số tăng tới khoảng 642 triệu người, hay nói cách khác người 10 người lớn có bệnh đái tháo đường Nhiều người sống với bệnh ĐTĐ típ thời gian dài mà không nhận biết tình trạng bệnh họ Đến chẩn đoán, thường kèm theo biến chứng bệnh Tại Việt Nam, vào năm 2015 có 3,5 triệu người mắc bệnh theo báo cáo Hiệp hội Đái tháo đường giới IDF Diabetes Atlas số dự báo tăng lên 6,1 triệu vào năm 2040 Trước mức độ phổ biến sức ảnh hưởng đái tháo đường, nhiều nghiên cứu tiến hành với mục tiêu phát triển loại thuốc cho tác dụng điều trị hiệu hạn chế tối đa tác dụng phụ lên người bệnh Tuy nhiên, loại thuốc điều trị đái tháo đường gây tác dụng phụ đáng kể bệnh nhân sử dụng thời gian dài Do đó, việc nghiên cứu tìm hoạt chất tiềm phát triển thuốc hiệu hơn, tác dụng phụ vơ quan trọng cần thiết Song song với trình tìm thuốc từ phản ứng hố học tổng hợp, xu hướng nghiên cứu phát triển thuốc từ nguồn dược liệu tự nhiên phát triển mạnh mẽ có kết vượt trội minh chứng qua dược chất phát minh ứng dụng rộng rãi lâm sàng Cây Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) loại cỏ quen thuộc Việt Nam số nước khu vực biết đến với tác dụng chữa bệnh khác Một số nghiên cứu giới cho thấy Xấu hổ có tác dụng chống viêm, kháng khuẩn, đặc biệt khả làm giảm đường huyết biểu khác bệnh đái tháo đường Tại Việt Nam, kết nghiên cứu Xấu hổ cho mục đích điều trị đái tháo đường chưa có nhiều dù loại phổ biến, dễ bắt gặp đâu Vì vậy, đề tài nghiên cứu khoa học: “ Phân tích định tính thành phần hoá học tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) methyl glyoxal gây ra” thực với mục tiêu sau: Định tính hợp chất có cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) thông qua: - Khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ - Tác dụng ức chế MGO hình thành AGEs cao chiết Xấu hổ Cách xác định kết Kết dựa kiểu thu tín hiệu tồn phổ, tồn tín hiệu thu dải khối ghi lại Phổ trình bày phụ thuộc cường độ tương đối ion khác vào tỷ số m/z ion Kết thu chủ yếu có ý nghĩa định tính Các hợp chất điển hình thí nghiệm phát dựa liệu thu thập từ phân mảnh theo kiểu tín hiệu tồn phổ kết hợp với liệu công bố tài liệu trước 2.3.2 Phương pháp đánh giá khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ Thí nghiệm đánh giá khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ thực theo mơ hình Khoa Dược, Đại học Gachon, Hàn Quốc Nguyên lý Phương pháp MTT dựa nguyên tắc MTT [3- (4,5dimethylthiazol - 2- yl) - 2,5 - diphenyl tetrazolium bromid] tham gia phản ứng oxy hoá khử với ty thể tế bào tạo thành formazan dạng tinh thể Sau dùng số dung dịch khác để phá huỷ màng tế bào đồng thời hoà tan tinh thể formazan đo độ hấp thụ quang học dung dịch [9] Hình 2.3 Nguyên lý phương pháp MTT 22 Cách tiến hành Thí nghiệm thực dựa thông số nồng độ AG MGO mô tả công bố Figarola cộng với số thay đổi nhỏ [35] Cụ thể sau: + Các dòng tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người (human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) ni cấy đĩa 96 giếng có mật độ 1,0x104 tế bào/ giếng, với môi trường nuôi cấy EGM-2, 4% FBS, ủ nhiệt độ 37 °C, 5% CO2 + Sau 24 nuôi cấy, tế bào xử lý trước với AG (1mM) dịch chiết Xấu hổ nồng độ 1, 10, 100 µg/mL + Các tế bào tiếp tục xử lý với MGO (400µM) 24 + Dung dịch MTT bổ sung vào giếng với nồng độ 0,1mg/mL tiếp tục ủ + DMSO thêm vào giếng với nồng độ 100µL/ giếng đo độ hấp thụ quang bước sóng 570nm thiết bị Microplate Reader Cách đánh giá kết Tác dụng bảo vệ tế bào đánh giá thông qua thành phần phần trăm tế bào sống sót xác định cách so độ hấp thụ giếng thử nghiệm với độ hấp thụ giếng đối chứng Mỗi thử nghiệm có độ lặp lại lần % tế bào sống sót = (At/Ac) x100 Trong At: Độ hấp thụ mẫu thử Ac: Độ hấp thụ mẫu trắng (chỉ có tế bào môi trường nuôi cấy) Tác dụng bảo vệ tế bào dịch chiết so sánh với chất chuẩn dương AG (1mM) 2.3.3 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế hình thành AGEs MGO gây cao chiết Xấu hổ 23 Thí nghiệm đánh giá tác dụng ức chế hình thành AGEs cao chiết Xấu hổ thực theo mơ hình Khoa Dược, Đại học Gachon, Hàn Quốc Cách tiến hành Hoạt tính ức chế hình thành AGEs đánh giá theo phương pháp Kiho cộng [36] bao gồm bước: + MGO (2mM) thêm vào ống chứa BSA (5mg/ml) dung dịch đệm PBS, pH 7.4 chứa 0.02% sodium azide + Thêm vào ống dịch chiết cao Xấu hổ với nồng độ 1,5,10 mg/mL ủ ngày 37°C tránh ánh sáng + Sự hình thành AGEs xác định phân tích huỳnh quang bước sóng kích thích/phát 370 nm/440nm máy multilabel plate reader Cách đánh giá kết Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Kết biểu thị thông qua phần trăm ức chế tính cơng thức: % ức chế = ( Ac – At)/Ac x 100 Trong đó: At: Kết đo mẫu thử Ac: Kết đo mẫu đối chứng âm (chỉ chứa MGO) Khả ức chế dịch chiết đối chứng với AG nồng độ 1mM 2.4 Phương pháp xử lý số liệu - Các số liệu từ thí nghiệm định tính thành phần hố học thống kê tính tốn phần mềm Microsoft Excel 2016 - Số liệu thí nghiệm đánh giá invitro lưu trữ phân tích thống kê test one-way ANOVA test Bonferroni Kết biểu diễn phần mềm GraphPad Prism với giá trị trung bình cộng/trừ độ lệch chuẩn SD Sự khác biệt nhóm coi có ý nghĩa p < 0.05 24 Chương KẾT QUẢ 3.1 Kết định tính thành phần hố học cao chiết ethanol Xấu hổ Cao chiết Xấu hổ phân tích để xác định thành phần hợp chất phương pháp LC/MS đối chiếu với liệu công bố trước Những hợp chất cụ thể dự đốn liệt kê bảng 3.1 cấu trúc biểu diễn hình 3.1 Các hợp chất dự đốn bao gồm 2-hydroxy-benzeneethanol, 3-Fluorop-anisidine myoinositol, quercetin, apigenin, luteolin, fisetin, naringenin and acid gallic, acid p-hydroxy benzoic, acid caffeic, acid monoamidomalonic, acid ferulic Trong đó, 4-phenylbutan-2-ol phát với cường độ tín hiệu ion cao 104.0 m/z ứng với ion mẹ 141.09 m/z [M+H+NH4] Ion mẹ ferulic acid với 194.14 m.z hình thành mảnh ion với tín hiệu 233.1 m/z [M+K] tương ứng với cộng hợp nguyên tử kali Ion 347.2 m/z dự đoán xuất phát từ hợp chất apigenin với m/z 270.28 [M+2K+H] Kết phân mảnh ion mẹ với m/z 320.2 thành ion tín hiệu 302.17 m/z [M+NH4] thêm vào nhóm amoni quercetin Một hợp chất khác acid gallic m/z 170.38 tìm dựa xuất ion [M+2K+H] 247.3 m/z Các hợp chất cịn lại tính toán dự đoán tương tự dựa xuất ion phổ khối 25 Bảng 3.1 Các hợp chất xác định cao chiết Xấu hổ STT Ion (m/z) 104.0 233.1 219.2 Kiểu ion Ion mẹ (m/z) Cường độ (cps) Hợp chất dự đốn Cơng thức phân tử Trọng lượng phân tử (g/mol) M+H+N H4 198.48 1.8e7 4-(2phenylethyl)phenol C14H14O 198.26 194.14 9.0e6 Acid ferulic C10H10O4 194.18 Myoinositol C6H12O6 180.16 Acid caffeic C9H8O4 180.16 2-hydroxybenzeneethanol C8H10O2 138.16 C7H6O3 138.12 C15H10O6 286.24 M+K M+K 180.24 6.9e6 M+K 180.24 6.9e6 156.1 M+NH4 138.07 6.9e6 156.1 M+NH4 108.07 6.4e6 286.13 6.0e6 347.2 M+IsoPr -op+H M+IsoPr -op+H 286.13 6.0e6 Fisetin C15H10O6 286.24 270.28 6.0e6 Apigenin C15H10O5 270.24 6.0e6 Acid gallic C7H6O5 170.12 Quercetin C15H10O7 302.23 C12H29NO3 Si3 319.62 C7H8FNO 141.14 C15H12O5 272.25 347.2 247.3 320.2 M+2K+H M+2K+H 170.38 M+NH4 302.17 3.9e6 10 320.2 M+H 319.19 3.9e6 11 142.1 M +H 141.09 1.6e6 12 142.1 M+H+Na 272.2 1.6e6 Acid p-hydroxy benzoic Luteolin Acid monoamidomalo -nic 3-Fluoro-panisidine Naringenin 26 Hình 3.1 Cấu trúc hoá học hợp chất Xấu hổ 27 3.2 Kết đánh giá khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ Tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ theo phương pháp MTT nồng độ 1; 10 100 µg/mL thể hình 3.2 Hình 3.2 Khả sống sót tế bào xử lý với cao chiết Xấu hổ nồng độ khác trước tiếp xúc với MGO (### p < 001, ***p < 001) Các tế bào HUVECs giảm khả sống sót cách đáng kể xử lý với MGO so sánh nhóm mẫu trắng (C) chứa tế bào nhóm mẫu cho thêm MGO (N) Phần trăm tế bào sống sót nhóm xử lý với cao chiết Xấu hổ nồng độ khác trước ủ với MGO tăng lên rõ rệt Tuy nhiên, tác dụng bảo vệ tế bào nhóm chứng dương AG (P) cho giá trị cao so với nhóm tế bào xử lý với cao chiết Song song với nhóm tế bào bị gây độc tính MGO, thí nghiệm tiến hành tương tự với nhóm tế bào khơng xử lý với MGO cho thấy cao chiết ethanol Xấu hổ làm giảm khả sống sót tế bào nồng độ cao 100 µg/mL 28 3.3 Kết đánh giá tác dụng ức chế MGO hình thành AGEs cao chiết Xấu hổ Thí nghiệm đánh giá hình thành AGEs thể hình 3.3 dựa kết phương pháp phân tích huỳnh quang Các nồng độ cao chiết Xấu hổ thêm vào 1; 10mg/mL Hình 3.3 Khả ức chế hình thành AGEs MGO nồng độ khác cao chiết Xấu hổ (### p < 001, ***p < 001) Sự xuất AGEs nhóm trắng chứa BSA dung dịch đệm (C) thấp so với nhóm đối chứng âm xử lý với MGO (N) Các nhóm xử lý sau với nồng độ khác cao chiết Xấu hổ thể giảm dần hình thành AGEs đáng kể tương ứng với tăng dần nồng độ cao chiết Hơn nữa, khả ngăn cản AGEs tạo MGO nhóm thêm vào 10mg/mL cao chiết mạnh rõ rệt so với nhóm sử dụng chứng dương AG (P) 29 Chương BÀN LUẬN Cây Xấu hổ từ lâu biết đến Y học cổ truyền với tác dụng điều trị giảm đau, tiêu viêm, hạ huyết áp, lợi tiểu, chống ho, long đờm,…, có vị ngọt, tính hàn, quy kinh phế [10,11] Rễ có vị chát, đắng dùng phịng ngừa điều trị bệnh phong thấp, viêm dày, hen suyễn [6,11,12] Cành có vị ngọt, tính bình, có tác dụng an thần dùng điều trị ngủ, giảm sưng tấy, mưng mủ [12] Dựa số tác dụng dược lý hiệu Xấu hổ, nhiều nghiên cứu tiến hành để xác định thành phần hợp chất Các nhóm hợp chất có Xấu hổ bao gồm alkaloids, flavonoids, terpenoids, crocetin dimethyl ester, tannins, phytosterol, glycosides hợp chất phenolic [37] Một số hợp chất phân lập từ dịch chiết acid chlorogenic, acid p-coumaric, acid jasmonic, acid p-hydroxy benzoic, Lmimosine, acid caffeic, catechin, acid gallic, acid ferulic, hyperoside, luteolin, fisetin, apigenin-7-o-glucoside, naringenin, benzene-triol, apigenin… [38-41] Các chất cao chiết ethanol Xấu dự đoán từ kết phương pháp sắc ký lỏng khối phổ trùng khớp với nghiên cứu trước Tình trạng tăng đường huyết mạn tính đái tháo đường gây độc tính nghiêm trọng tế bào, kích hoạt chết theo chu trình tế bào nguyên nhân dẫn đến biến chứng nguy hiểm bệnh Thông qua phương pháp MTT, việc sử dụng cao chiết Xấu hổ nồng độ khác cho thấy hiệu đáng kể cải thiện tình trạng gây độc cho tế bào MGO, tác nhân xuất trình sản sinh AGEs đường huyết tăng thời gian dài Tương tác AGEs thụ thể dẫn tới stress oxy hoá nhiều loại tế bào thể, với kích hoạt phản ứng viêm, q trình tạo cục máu đơng hoạt hố tiểu cầu, nguyên nhân làm xuất biến chưng tim mạch, thận, mắt,… mắc đái tháo đường [18] 30 Kết nghiên cứu khả ức chế hình thành AGEs MGO gây ra tác dụng rõ rệt cao chiết Xấu hổ mơ hình Hơn nữa, lượng sản phẩm AGEs giảm đáng kể tăng nồng độ cao chiết, nồng độ 10mg/mL cho tác dụng ức chế cao chứng dương AG Các thí nghiệm mơ hình dùng MGO để gây độc giảm khả sống sót tế bào HUVECs sản sinh AGEs với kết tích cực đóng góp minh chứng dựa chế phân tử cho hiệu làm giảm đường huyết biến chứng liên quan Xấu hổ nghiên cứu in vivo Những hiệu đáng ý dịch chiết Xấu hổ để bảo vệ tế bào thông qua ngăn chặn độc tính MGO xuất hợp chất có hoạt tính sinh học apigenin, catechin, quercetin, naringenin, acid ferulic acid caffeic Acid ferulic, dẫn xuất từ acid cinamic, biết đến với tác dụng chống viêm chất ức chế AGEs Khả ức chế acid ferulic có liên quan đến nồng độ CML, lượng protein liên kết với cacbonyl fructosamine với vai trò yếu tố tiềm chống lại stress oxy hố q trình đường hố (glycation) protein [42,43] Catechin, apigenin quercetin xuất cao chiết Xấu hổ chứng minh có khả bắt giữ MGO để tạo thành phức hợp với MGO Các kết từ nghiên cứu Zhu,D cộng thu điều trị catechin chuột bị đái tháo đường cho thấy cải thiện đáng kể suy giảm chức thận tác dụng ức chế hình thành AGEs cytokines [44] Zhou,Q cộng khả bắt giữ trực tiếp MGO apigenin để tạo thành phức hệ apigenin-MGO Apigenin làm giảm sản sinh chất oxy hoá, phân tử bám dính cytokines, có tác dụng ngăn chặn tình trạng viêm stress oxy hố tế bào HUVECs [45].Sự hình thành AGEs bị ức chế sử dụng hỗn hợp chất có acid caffeic naringenin [46,47] Quercetin cho thấy tác dụng ngăn cản sản sinh AGEs nhờ khả bắt giữ MGO phá huỷ phân tử AGEs hình thành Tác dụng quercetin có mặt nhóm polyphenol vị trí số số vòng A phân tử [46-48] 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Nghiên cứu dự đoán sơ có mặt hợp chất cao chiết Xấu hổ phương pháp sắc ký lỏng khối phổ Nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết từ Xấu hổ thơng qua khả sống sót tế bào ức chế hình thành AGEs MGO gây ĐỀ XUẤT Kết thu nghiên cứu có ý nghĩa định hướng tiềm việc sử dụng thảo dược từ thiên nhiên cụ thể Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) phòng ngừa hỗ trợ điều trị đái tháo đường Thí nghiệm dừng lại mức định tính, cần kết hợp thêm thí nghiệm có độ xác cao để phân tách, tách chiết tinh xác định cụ thể cấu trúc hợp chất phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC, phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR Khi tách chiết phân lập hợp chất có hoạt tính sinh học, thí nghiệm đánh giá tác dụng xác định rõ chế tác dụng chất cần tiếp tục thực 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Bộ Y Tế (2017), “Hướng dẫn chẩn đoán điều trị đái tháo đường típ 2” Bệnh viện Bạch Mai (2017), “Đái tháo đường”, Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh nội khoa, NXB Y học, tr.411-416 Bộ Y Tế (2009), “Bệnh học”, Đái tháo đường, NXB Giáo Dục, tr 179-191 Bộ Y Tế (2011), “Hướng dẫn chẩn đoán điều trị đái tháo đường típ 2” Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, tr:794-796 Viện Dược Liệu (2006), Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, tr:10991101 Đồng, T N (2019) Nghiên cứu tác dụng điều trị đái tháo đường cao chiết nước xấu hổ (mimosa pudica linn.) Khóa luận, Đại học Quốc gia Hà Nội, Việt Nam Bộ Y Tế (2009), “Dược điển Việt Nam IV” Trần Vân Hiền, Chu Quốc Trường, Trần Thanh Loan, Nguyễn Đặng Dũng (2005), “ Áp dụng kỹ thuật MTT để đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào lách chuột chịu stress oxy hoá dịch chiết hà thủ ô, cúc hoa vàng”, Tạp chí dược liệu, 5(1), tr.23-25 Võ Văn Chi (1991), Cây thuốc An Giang, tr:38 Phạm Hoàng Hộ (2006), Cây cỏ vị thuốc Việt Nam, tập 1, tr 119-218 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tập 1, tr 819 10 11 12 Tài liệu tham khảo Tiếng Anh 13 14 15 16 Mottillo, Emilio P., et al "FGF21 does not require adipocyte AMP-activated protein kinase (AMPK) or the phosphorylation of acetyl-CoA carboxylase (ACC) to mediate improvements in whole-body glucose homeostasis." Molecular metabolism 6.6 (2017): 471-481 Rena, Graham, D Grahame Hardie, and Ewan R Pearson "The mechanisms of action of metformin." Diabetologia 60.9 (2017): 1577-1585 Dhameja, Manoj, and Preeti Gupta "Synthetic heterocyclic candidates as promising αglucosidase inhibitors: An overview." European journal of medicinal chemistry 176 (2019): 343-377 Hussain, Hidayat, et al "Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitors as potential anti-diabetes agents: patent review (2015-2018)." Expert opinion on therapeutic patents 29.9 (2019): 689-702 17 Yamamoto, Masahiro, and Toshitsugu Sugimoto "Advanced glycation end products, diabetes, and bone strength." Current osteoporosis reports 14.6 (2016): 320-326 18 Yamagishi, Sho-ichi "Role of advanced glycation end products (AGEs) and receptor for AGEs (RAGE) in vascular damage in diabetes." Experimental gerontology 46.4 (2011): 217-224 Nowotny, Kerstin, et al "Advanced glycation end products and oxidative stress in type diabetes mellitus." Biomolecules 5.1 (2015): 194-222 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Vlassara, Helen, and Jaime Uribarri "Advanced glycation end products (AGE) and diabetes: cause, effect, or both?." Current diabetes reports 14.1 (2014): 1-10 Schalkwijk, C G., and C D A Stehouwer "Methylglyoxal, a highly reactive dicarbonyl compound, in diabetes, its vascular complications, and other age-related diseases." Physiological reviews 100.1 (2020): 407-461 Groener, Jan Benedikt, et al "Methylglyoxal and advanced glycation end products in patients with diabetes–what we know so far and the missing links." Experimental and Clinical Endocrinology & Diabetes 127.08 (2019): 497-504 Bellier, Justine, et al "Methylglyoxal, a potent inducer of AGEs, connects between diabetes and cancer." Diabetes research and clinical practice 148 (2019): 200-211 Brings, Sebastian, et al "Dicarbonyls and advanced glycation end-products in the development of diabetic complications and targets for intervention." International journal of molecular sciences 18.5 (2017): 984 Yupparach, Piyapong, and Ampa Konsue "Hypoglycemic and hypolipidemic activities of ethanolic extract from Mimosa pudica L in normal and streptozotocin-induced diabetic rats." Pharmacognosy Journal 9.6 (2017) Patro, Ganesh, Subrat Kumar Bhattamisra, and Bijay Kumar Mohanty "Effects of Mimosa pudica L leaves extract on anxiety, depression and memory." Avicenna journal of phytomedicine 6.6 (2016): 696 Gandhiraja, N., et al "Phytochemical screening and antimicrobial activity of the plant extracts of Mimosa pudica L against selected microbes." Ethnobotanical leaflets 2009.5 (2009): Kannan, S., et al "Wound healing activity of Mimosa pudica Linn formulation." Int J Chem Tech Res 11.4 (2009): 1554-8 Paul, Jejo, Syed Mohammed Saifulla Khan, and Basheeruddin Asdaq "Wound healing evaluation of chloroform and methanolic extracts of Mimosa pudica roots in rats." Int J Biol Med Res 1.4 (2010): 223-227 Mitra, Robin, et al "Medicinal plants of Thailand." Asia-Pacific Biotech News 11.08 (2007): 508-518 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 Umamaheswari, Selvaraj, and Ponnaian Stanely Mainzen Prince "Antihyperglycaemic effect of ëilogen-excelí, an ayurvedic herbal formulation in streptozotocin-induced diabetes mellitus." (2007) Sutar, N G., U N Sutar, and B C Behera "Antidiabetic activity of the leaves of Mimosa pudica Linn in albino rats." Journal of herbal medicine and toxicology 3.1 (2009): 123-126 Tasnuva, S T., et al "α-glucosidase inhibitors isolated from Mimosa pudica L." Natural product research 33.10 (2019): 1495-1499 Antony, Poovathumkal James, et al "Myoinositol ameliorates high-fat diet and streptozotocin-induced diabetes in rats through promoting insulin receptor signaling." Biomedicine & Pharmacotherapy 88 (2017): 1098-1113 Figarola, James L., et al "LR-90 prevents methylglyoxal-induced oxidative stress and apoptosis in human endothelial cells." Apoptosis 19.5 (2014): 776-788 Kiho, Tadashi, et al "Effect of buformin and metformin on formation of advanced glycation end products by methylglyoxal." Clinica Chimica Acta 358.1-2 (2005): 139145 Tunna, Tasnuva Sarwar, et al "Weeds as alternative useful medicinal source: Mimosa pudica Linn on diabetes mellitus and its complications." Advanced Materials Research Vol 995 Trans Tech Publications Ltd, 2014 Ahmad, Bashir "Antioxidant activity and phenolic compounds from Colchicum luteum Baker (Liliaceae)." African Journal of Biotechnology 9.35 (2010) Nokihara, Kiyoshi, et al "Preparative scale isolation, purification and derivatization of mimosine, a non-proteinogenic amino acid." Amino acids 43.1 (2012): 475-482 Patel, Neeraj K., and Kamlesh K Bhutani "Suppressive effects of Mimosa pudica (L.) constituents on the production of LPS-induced pro-inflammatory mediators." EXCLI journal 13 (2014): 1011 Ijaz, Shakeel, et al "HPLC profiling of Mimosa pudica polyphenols and their noninvasive biophysical investigations for anti-dermatoheliotic and skin reinstating potential." Biomedicine & Pharmacotherapy 109 (2019): 865-875 Dariya, Begum, and Ganji Purnachandra Nagaraju "Advanced glycation end products in diabetes, cancer and phytochemical therapy." Drug Discovery Today (2020) Sompong, W., et al., A comparative study of ferulic acid on different monosaccharidemediated protein glycation and oxidative damage in bovine serum albumin Molecules, 2013 18(11): p 13886-13903 44 Zhu, D., et al., (+)‐Catechin ameliorates diabetic nephropathy by trapping methylglyoxal in type diabetic mice Molecular nutrition & food research, 2014.58(12): p 2249-2260 45 Zhou, Q., et al., Apigenin and its methylglyoxal-adduct inhibit advanced glycation end products-induced oxidative stress and inflammation in endothelial cells Biochemical pharmacology, 2019 166: p 231-241 Do, M.H., et al., Lespedeza bicolor ameliorates endothelial dysfunction induced by methylglyoxal glucotoxicity Phytomedicine, 2017 36: p 26-36 Gugliucci, A., et al., Caffeic and chlorogenic acids in Ilex paraguariensis extracts are the main inhibitors of AGE generation by methylglyoxal in model proteins Fitoterapia, 2009 80(6): p 339-344 Li, X., et al., Quercetin inhibits advanced glycation end product formation by trapping methylglyoxal and glyoxal Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014 62(50): p 12152-12158 46 47 48 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ NGỌC HUYỀN PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO CỦA CAO CHIẾT CÂY XẤU HỔ (Mimosa pudica Linn.) DO METHYL GLYOXAL. .. tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ (Mimosa pudica Linn.) thông qua: - Khả sống sót tế bào với độc tính MGO sau xử lý với cao chiết Xấu hổ - Tác dụng ức chế MGO hình thành AGEs cao chiết Xấu. .. học Trường Đại học Y Dược khoá QH.2016.Y, vô biết ơn tự hào tham gia nghiên cứu hồn thành Khố luận với đề tài “ Phân tích định tính thành phần hố học tác dụng bảo vệ tế bào cao chiết Xấu hổ (Mimosa