BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐINH THỊ KHÁNH LY XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOBETASOL PROPIONAT TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHI.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐINH THỊ KHÁNH LY XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOBETASOL PROPIONAT TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC HÀ NỘI – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐINH THỊ KHÁNH LY XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOBETASOL PROPIONAT TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn: TS Trần Quang Trung HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Em xin cảm ơn chân thành đến TS Trần Quang Trung, người thầy trực tiếp hướng dẫn, quan tâm bảo, giúp đỡ em để hoàn thành tốt khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám đốc Học viện Quân y, Phòng Đào tạo đại học tồn thể thầy giáo hoạt động, giảng dạy Học Viện Quân Y, đặc biệt thầy cô Viện Đào tạo Dược Cảm ơn thầy cô kiến thức kĩ mà thầy cô trang bị, truyền đạt cho chúng em suất trình học tập ngơi trường Với lịng biết ơn vơ hạn em xin gửi tới ông bà, bố mẹ, anh chị em, bạn bè người thân yêu bên cạnh em ủng hộ em hết lòng đường học tập suốt trình làm khóa luận Mặc dù cố gắng hồn thành khóa luận phạm vi khả cho phép chắn khơng tránh khỏi thiếu sót Cuối cùng, em xin kính chúc thầy ln mạnh khỏe, hạnh phúc, công tác tốt gặt hái nhiều thành công công việc sống Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2022 Sinh viên Đinh Thị Khánh Ly MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CLOBETASOL PROPIONAT 1.1.1 Đặc điểm chung 1.1.2 Dược lý chế tác dụng 1.1.3 Chỉ định – Liều dùng 1.1.4 Độc tính Clobetasol propionat 1.1.5 Một số chế phẩm dầu gội đầu chứa Clobetasol propionat thị trường 1.2 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ ĐỊNH LƯỢNG CLOBETASOL PROPIONAT 1.3 SƠ LƯỢC VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC 1.3.1 Phương pháp HPLC 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 1.3.3 Các thông số đặc trưng HPLC 1.3.4 Ứng dụng HPLC 12 CHƯƠNG - NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU14 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 14 2.1.1 Nguyên vật liệu, hóa chất nghiên cứu 14 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 14 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 15 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn Error! Bookmark not defined 2.2.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 16 2.2.3 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 18 2.2.4 Thẩm định phương pháp định lượng Clobetasol propionat dầu gội đầu19 2.2.5 Định lượng Clobetasol propionat dầu gội đầu 23 CHƯƠNG - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24 3.1.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký 24 3.1.2 Kết khảo sát điều kiện xử lý mẫu 30 3.1.3 Kết thẩm định phương pháp 31 3.1.4 Định lượng chế phẩm Dầu gội đầu chứa CLP thị trường 38 3.2 BÀN LUẬN 41 3.2.1 Về xây dựng quy trình phân tích 41 3.2.2 Về phương pháp xử lý mẫu 41 3.2.3 Về thẩm định phương pháp 42 3.2.4 Về kiểm tra mẫu dầu gội đầu lưu hành thị trường 42 KẾT LUẬN 45 KIẾN NGHỊ 47 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Một số tính chất CLP 1.2 Một số chế phẩm dầu gội đầu chứa clobetasol propionat thị trường 1.3 Một số nghiên cứu định lượng CLP 2.1 Các nguyên vật liệu hóa chất sử dụng nghiên cứu 14 2.2 Các mẫu dầu gội đầu chứa CLP sử dụng để định lượng 15 2.3 Các thông số cột khảo sát 16 2.4 Dãy dung dịch CLP chuẩn 21 3.1 Kết khảo sát hiệu lực cột 25 3.2 Kết khảo sát thành phần pha động 27 3.3 Kết khảo sát tỷ lệ thành phần pha động ACN:H2O 28 3.4 Kết khảo sát tốc độ dòng 30 3.5 Kết lựa chọn dung môi chiết mẫu 31 3.6 Kết khảo sát thời gian chiết mẫu 32 3.7 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống 33 3.8 Xây dựng đường chuẩn CLP 36 3.9 Kết khảo sát độ 37 3.10 Kết khảo sát độ lặp lại mẫu thử 37 3.11 Kết khảo sát độ xác trung gian mẫu thử 38 3.12 Hàm lượng CLP xác định ngày 38 3.13 Kết khảo sát LOD LOQ 29 3.14 Kết định lượng CLP dầu gội SnowClear 40 3.15 Kết định lượng CLP dầu gội Jassuny 40 3.16 Kết định lượng CLP dầu gội Baroka 41 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cấu trúc hóa học clobetasol propionat 1.2 Cấu tạo máy HPLC 3.1 Phổ UV dung dịch CLP chuẩn 20µg/ml 25 3.2 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP sử dụng cột Phenomenex LUNA 26 3.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP sử dụng cột SunfireTM 26 3.4 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động MeOH: H2O (80/20,v/v) 27 3.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động ACN:H2O (60/40,v/v) 27 3.6 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động ACN:H2O (55/45,v/v) 28 3.7 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động ACN:H2O (60/40,v/v) 28 3.8 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động ACN:H2O (65/35,v/v) 29 3.9 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với hệ pha động ACN:H2O (70/30,v/v) 29 3.10 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với tốc độ dòng 1,2ml/phút 30 3.11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với tốc độ dòng 1,0ml/phút 30 3.12 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP với tốc độ dòng 0,8ml/phút 31 3.13 Sắc ký đồ mẫu trắng MeOH 34 3.14 Sắc ký đồ mẫu chuẩn CLP 20µg/ml 34 3.15 Sắc ký đồ mẫu thử chứa CLP 34 3.16 Sắc ký đồ mẫu không chứa CLP 35 3.17 Sắc ký đồ mẫu thêm CLP chuẩn 35 3.18 Đồ thị quan hệ tuyến tính diện tích peak nồng độ CLP 36 3.19 Sắc ký đồ dầu gội đầu SnowClear 40 3.20 Sắc ký đồ dầu gội đầu Jassuny 41 3.21 Sắc ký đồ dầu gội đầu Baroka 42 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TT Viết tắt Viết đầy đủ ACN Acetonitril CLP Clobetasol Propionat FDA Food and Drug Administration (Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ) HPLC High – performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) H2O Nước ICH International Conference on Harmonization (Hội nghị quốc tế hài hịa hóa thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người) LOD Limit of Detection (Giới hạn phát ) LOQ Limit of Quantifitation (Giới hạn định lượng) MeOH Methanol 10 RSD Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) 11 TKPT Tinh khiết phân tích 12 TLTK Tài liệu tham khảo 13 USP United State Pharmacopoeia (Dược điển Mỹ) ĐẶT VẤN ĐỀ Corticosteroid nhóm thuốc định rộng để điều trị bệnh da liễu có khả làm giảm nhanh triệu chứng bệnh khơng mong muốn Corticosteroid có hiệu tình trạng liên quan đến đặc tính tăng sinh, đặc tính miễn dịch viêm [1] Căn vào hiệu lực, corticosteroid chia làm loại [2] Trong đó, clobetasol propionat loại corticosteroid siêu mạnh loại I bào chế nhiều dạng khác để sử dụng da (dầu gội, kem, gel, thuốc mỡ…) Clobetasol propionat FDA chấp thuận vào ngày 27 tháng 12 năm 1985 [3] Tuy nhiên, clobetasol propionat chỗ thường bị lạm dụng để điều trị vấn đề da để lại hậu nghiêm trọng Việc sử dụng kéo dài clobetasol propionat sử dụng không hàm lượng, liều lượng gây nhiều tác dụng phụ phản ứng mẫn cảm da, teo da, ức chế vùng đồi, tuyến yên, tuyến tượng thận… nhiều hệ lụy sau [1, 4] Theo cập nhật Ủy ban Khoa học Mỹ phẩm ASEAN vào năm 2021, corticosteroid liệt kê vào danh mục chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm (số tham chiếu 300, phụ lục II, phần 1) [5] Do vậy, sản phẩm sử dụng da có chứa thành phần clobetasol propionat phải đăng ký dạng thuốc phép lưu hành Giới hạn nồng độ sử dụng an toàn cho phép clobetasol propionat chế phẩm sử dụng da 0,05% [6] Nhưng việc kiểm soát lượng clobetasol propionat sử dụng ngồi da bệnh nhân khó khăn khơng có phân liều cụ thể, sử dụng dạng dầu gội đầu Do yêu cầu quan trọng cần phải kiểm soát nồng độ clobetasol propionat chế phẩm ngồi da nói chung dầu gội nói riêng nằm giới hạn cho phép để đem lại an tồn, hiệu cho người bệnh Để góp phần vào việc quản lý sử dụng clobetasol propionat em tiến hành đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng clobetasol propionat dầu gội đầu kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao” với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng clobetasol propionat dầu gội đầu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Ứng dụng phương pháp xây dựng để định lượng số dầu gội đầu có chứa clobetasol propionat thị trường 3.1.4.3 Kết định lượng dầu gội Baroka Hàm lượng CLP dầu gội Baroka là: 0,25mg/g Kết định lượng CLP dầu gội trình bày bảng 3.16 Bảng 3.16 Kết định lượng CLP dầu gội Baroka STT Khối lượng Khối lượng CLP Diện tích Hàm lượng % so với mẫu cân(g) theo nhãn (µg) peak (µV.s) (mg/g) nhãn 2,0922 530,55 548901 0,2448 97,90 2,0248 511,20 532313 0,2451 98,06 2,0353 508,83 533652 0,2459 98,35 Trung bình 98,10 Hình 3.21 Sắc ký đồ dầu gội đầu Baroka Kết cho thấy hàm lượng CLP dầu gội đầu đạt từ 98,10-100,29% Các sản phẩm đạt yêu cầu theo quy định chun luận Clobetasol propionat cơng thức dùng ngồi Dược điển Mỹ (USP 43) [13] Điều cho thấy, phương pháp phân tích tin cậy, áp dụng để định lượng CLP sản phẩm dầu gội khác 40 3.2 BÀN LUẬN 3.2.1 Về xây dựng quy trình phân tích Lựa chọn pha động: Dựa vào tài liệu, dược điển, thành phần tính chất chất có mẫu phân tích; ta lựa chọn pha động phù hợp trình rửa giải tách hồn tồn chất có mẫu đáp ứng đầy đủ tiêu chuẩn peak trình bày đồng thời phải có thời gian phân tích phù hợp nhằm tiết kiệm dung mơi, hóa chất, thời gian phân tích mẫu, giảm thiểu hoạt động thiết bị.Tỷ lệ thành phần dung môi tạo pha động có ảnh hưởng lớn đến q trình rửa giải chất mẫu khỏi cột Trong phân tích HPLC, lực rửa giải đặc trưng cho trình sắc kí Khi tỷ lệ thành phần pha động thay đổi lực rửa giải dung mơi pha động thay đổi, nghĩa làm thay đổi thời gian lưu chất phân tích qua làm thay đổi hệ số lưu chất phân tích Tốc độ dòng pha động yếu tố quan trọng q trình sắc kí ảnh hưởng đến q trình thiết lập cân chất phân tích pha tĩnh pha động Tốc độ dòng nhỏ gây tượng doãng peak, thời gian rửa giải lâu làm giảm tính kinh tế phương pháp Tuy nhiên tốc độ dòng lớn làm cho chất hỗn hợp khơng tách khỏi hoàn toàn, nghĩa gây tượng chồng chéo peak lên [26] Vì vậy, cần phải khảo sát để tìm tốc độ dịng phù hợp với điều kiện sắc kí Việc lựa chọn điều kiện sắc ký công việc cần thiết trình xây dựng chương trình sắc ký Chỉ lựa chọn điều kiên sắc ký tốt, phù hợp định tính, định lượng lọai hóa chất cách nhanh chóng hiệu cao 3.2.2 Về phương pháp xử lý mẫu Quy trình xử lý mẫu em dùng phương pháp chiết xuất siêu âm Nhờ vào lượng sóng siêu âm để chiết hợp chất chất phân tích khỏi mẫu thử [27] Do thành phần dầu gội đầu có chứa nhiều chất béo, chất nhũ hóa Đồng thời, CLP mẫu thử hợp chất có độ phân cực yếu (logP=3,5) [7] Vì vậy, hàm lượng chất béo không loại bỏ trình xử lý mẫu chiết đồng thời chất phân tích gây ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi phương pháp Một phương pháp loại bỏ chất béo sau chiết siêu âm, đem mẫu cho vào khu vực có nhiệt độ thấp 41 (khoảng 10oC) để chuyển chất béo thành dạng rắn (đơng tụ) Sau tiến hành lọc để loại bỏ chất béo [28, 29] 3.2.3 Về thẩm định phương pháp Do CLP chất phép sử dụng hàm lượng nhỏ nên nồng độ khảo sát nhỏ, lượng chuẩn thêm vào đến cỡ microgram, với lượng hoạt chất nhỏ thế, cân cho mẫu nên hoạt chất thêm vào cách thêm thể tích tính tốn dung dịch chuẩn CLP Mặc dù tiến hành nồng độ thấp kết thu cho thấy phương pháp đáp ứng yêu cầu định tính, định lượng, cụ thể: - Độ thích hợp hệ thống: Độ lặp lại tốt với RSD thời gian lưu diện tích peak nhỏ 2,0%; số đĩa lý thuyết 5000; hệ số bất đối nhỏ 1,5 - Độ đặc hiệu: Trên sắc ký đổ mẫu trắng mẫu không xuất pic thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu CLP Trên sắc ký đồ dung dịch mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn cho peak có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu peak thu từ sắc ký đồ dung dịch chuẩn - Độ tuyến tính: Hệ số tương quan nồng độ diện tích pic CLP có r> 0,997 (hay R2 > 0,995) - Độ đúng: Tỷ lệ thu hồi tất mẫu nằm khoảng 98,0 – 102,0% (98,21-100,76%) - Độ lặp lại: RSD tất mẫu không 2,0% - Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng: Vì mẫu phức tạp nên em xác định LOD, LOQ theo phương pháp pha loãng Kết cho thấy LOD, LOQ phù hợp 3.2.4 Về kiểm tra mẫu dầu gội đầu lưu hành thị trường Đề tài tiến hành định lượng mẫu dầu gội đầu thị trường phương pháp xây dựng Kết cho thấy mẫu dầu gội đầu chứa hàm lượng CLP 0,05%, đạt yêu cầu theo quy định Các mẫu dầu gội đầu công bố thành phần CLP hàm lượng đầy đủ theo quy định Và mẫu đăng ký dạng thuốc thể bao bì phù hợp với quy định ASEAN [5] 42 43 44 KẾT LUẬN Qua triển khai nghiên cứu đề tài, đưa kết luận sau: Đã xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Clobetasol Propionat dầu gội đầu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - Xử lý mẫu đơn giản Methanol kết hợp làm lạnh ly tâm - Điều kiện sắc ký: Cột sắc ký lỏng: SunFireTM C18 5µm (4,6 x 250mm), 100A0 Nhiệt độ cột: 25oC Pha động: ACN : H2O với tỷ lệ 60:40 (v/v) Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Bước sóng phân tích: 237 nm Thể tích tiêm: 10𝜇𝑙 - Thẩm định phương pháp: - Tính tương thích hệ thống: Độ lặp lại tốt với RSD giá trị nhỏ 2,0%; số đĩa lý thuyết 5000; hệ số bất đối nhỏ 1,5 - Độ đặc hiệu: Tại vị trí xuất đáp ứng peak CLP sắc ký đồ mẫu chuẩn, xuất peak tương ứng sắc ký đồ mẫu thử đồng thời không xuất sắc ký đồ dung môi pha mẫu, mẫu Trên sắc ký đồ mẫu thử, peak tách hoàn toàn tạp - Độ tuyến tính: Hệ số tương quan nồng độ diện tích peak CLP có r> 0,997 (hay R2 > 0,995) - Độ đúng: Tỷ lệ thu hồi tất mẫu nằm khoảng 98,0 – 102,0% (98,21-100,76%) - Độ lặp lại độ xác trung gian: RSD tất mẫu không 2,0% - Giới hạn phát 0,34µg/ml, giới hạn định lượng 1,32µg/ml Kết thẩm định cho thấy với điều kiện phân tích phương pháp có độ lặp lại cao, độ tốt, khoảng tuyến tính rộng có giới hạn phát tốt Đã áp dụng phương pháp để định lượng mẫu dầu gội đầu thị trường có chứa CLP với hàm lượng so với nhãn 98,10-100,29%, sản phẩm đạt yêu cầu theo quy định chun luận Clobetasol cơng thức dùng ngồi Dược điển Mỹ (USP 43) 45 46 KIẾN NGHỊ Cần nghiên cứu hồn thiện phương pháp để ứng dụng định lượng CLP nhiều chế phẩm khác Cần triển khai rộng việc kiểm tra, định lượng CLP mẫu dầu gội đầu lưu hành thị trường để có kết luận xác việc lạm dụng chất hay khơng có biện pháp quản lý chất lượng hợp lý 47 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Trung tâm Thông tin Công nghệ sinh học Quốc gia (2021) NCBI, Topical Corticosteroids https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK532940/#, truy cập ngày 06/02/2022 Jacob SE, Steele T (2006) Corticosteroid classes: a quick reference guide including patch test substances and cross-reactivity J Am Acad Dermatol 54(4):723-7 Cục quản lý Dược (2019) Drug Bank, Clobetasol propionat https://go.drugbank.com/drugs/DB01013, truy cập ngày 06/02/2022 Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2006), Dược lý học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr 255-258 FDA (2021) Annexes to the ASEAN Cosmetics Agreement on Substances Used in Cosmetics, List of substances which must not form part of the composition of cosmetic products, 15/01/2021 Philip O Anderson, James E Knoben, William G Troutman (2008), Handbook of clinical drug data (10th edition) MCGraw-Hill Medical Publishing Division, 642 National Center for Biotechnology Information (2022) PubChem Compound Summary for CID 32798, Clobetasol propionate https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Clobetasol-propionate, truy cập ngày 12/01/2022 Drug.com (2022), Clobetasol propionat https://www.drugs.com/pro/clobetasol-ointment.html, truy cập ngày 06/02/2021 M.C Fontana, M.O Bastos and R.C.R Beck (2006) Development and Validation of a Fast RP-HPLC Method for the Determination of Clobetasol Propionatein Topical Nanocapsule Suspensions Journal of Chromatographic Science, 48: 637-640 10 Patel, H K., Barot et al (2013) Topical delivery of clobetasol propionate loaded microemulsion based gel for effective treatment of vitiligo: Ex vivo permeation and skin irritation studies Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 102: 86–94 11 British Pharmacopoeia Commission Office (2019), British Pharmacopoeia 2020, The Stationery Office on behalf of the Medicines and Healthcare products Regulatory Agency (MHRA) 12 Bộ Y Tế (2018), Dược Thư Quốc Gia Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội 13 The United States Pharmacopeial Convention (2020) USP 43: Monographs: CLobetasol, p.1079-1082 14 Bhuyian, M H., Rashid, et al (2015) Development and Validation of Method for Determination of Clobetasol Propionate and Salicylic Acid from Pharmaceutical Dosage Form by HPLC, Journal of Pharmaceutical Research International, 7(5), 375-385 15 Wenling Yang, Xiaomei Yang, Fanghua Shi et al (2019), Qualitative and quantitative assessment of related substances in the Compound Ketoconazole and Clobetasol Propionate Cream by HPLC-TOF-MS and HPLC, Journal of Pharmaceutical Analysis, (3): 156-162 16 Badilli U., Amasya G., Ozkan S et al (2012) Simultaneous Determination of Clobetasol Propionate and Calcipotriol in a Novel Fixed Dose Emulgel Formulation by LC-UV Chromatographia, 76(34), 133–140 17 Lê Thị Hường Hoa (2013) Nghiên cứu xây dựng quy trình phát xác định hàm lượng số chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm Luận án tiến sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội 18 Gagliardi , D De Orsi, F Manna et al (2000), HPLC determination of Clobetasol Propionate in cosmetic products, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologie, 23(3), 355-362 19 Trần Tử An (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm (sách dùng đào tạo dược sĩ đại học), Nxb Y học, Hà Nội 20 Trần Tử An (2007), Hóa phân tích tập 2., Nxb Y học, Hà Nội 21 Bộ Y tế (2018) Quy định việc đăng ký lưu hành thuốc, nguyên liệu làm thuốc Thông tư 32/2018/TT-BYT, ngày 12/11/2018 22 ICH Harmonised Tripartite Guideline (2005) Guidelines for validation of analytical procedures: Q2 (R1) Text and Methodology 23 Bộ Y tế (2013), Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc Phụ lục 24 Trần Cao Sơn (2010) Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật Nxb Khoa học kỹ thuật 25 Bộ Y Tế (2012), Kiểm nghiêm thuốc (dùng cho đào tạo dược sĩ đại học), Nxb Giáo dục Việt Nam 26 Bộ Y tế (2012), Hóa phân tích, phân tích cơng cụ tập 2, NXB Y học, tr 126-129 27 Z Mester, R Sturgeon (2003), Comprehensive Analytical Chemistry, Sample preparation for trace element analysis, pp 353-357 28 Mitchell D Erickson, Lewis (2015), Analytical Chemistry of PCBs 29 Pesticide Analytical Manual: Methods for individual residues (2015), United States Food and Drug Administration, pp 377-378 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Ký hiệu Tên phụ lục PL1 Các sắc ký đồ biểu thị độ tương thích hệ thống PL2 Các sắc ký đồ biểu thị khoảng tuyến tính đường chuẩn PL3 Các sắc ký đồ biểu thị độ PL4 Các sắc ký đồ mẫu thử PL1 CÁC SẮC KÝ ĐỒ BIỂU THỊ ĐỘ TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG PL2 CÁC SẮC KÝ ĐỒ BIỂU THỊ KHOẢNG TUYẾN TÍNH VÀ ĐƯỜNG CHUẨN PL3 CÁC SẮC KÝ ĐỒ BIỂU THỊ ĐỘ ĐÚNG PL4 CÁC SẮC KÝ ĐỒ MẪU THỬ ... dụng clobetasol propionat em tiến hành đề tài: ? ?Xây dựng phương pháp định lượng clobetasol propionat dầu gội đầu kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao? ?? với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định. .. định phương pháp định lượng clobetasol propionat dầu gội đầu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Ứng dụng phương pháp xây dựng để định lượng số dầu gội đầu có chứa clobetasol propionat thị trường... QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐINH THỊ KHÁNH LY XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOBETASOL PROPIONAT TRONG DẦU GỘI ĐẦU BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC Cán