BÁO cáo THÍ NGHIỆM hóa SINH định tính và khảo sát protein

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH Tên sinh viên Mã số sinh viên Phan Trần Đăng Khoa 62000993 Nguyễn Ngọc Như Linh 62000424 Nguyễn Kim Tuyết Như 62001025 Phan Thiện Như 62000490 Mã số nhóm: S5 – 02 Điểm Bài số: Tên bài: Định tính khảo sát Protein Ngày thí nghiệm: 23/06/2022 I Phản ứng biure Nguyên tắc: Các hợp chất có hay nhiều liên kết –CO-NH– liên kết với Cu2+ môi trường kiềm tạo phức có màu đỏ tím đỏ đặc trưng (phản ứng Biure) Các protein mạch peptide có chứa nhóm –CO-NH– (liên kết peptide) nên chúng có phản ứng Biure Cường độ màu phức hợp phụ thuộc vào số lượng liên kết peptide mạch Tiến hành: Ống nghiệm Biure Tạo từ ure tinh thể Protein NAOH CuSO4 trứng 10% 2% 1ml giọt Màu hồng 1ml 1ml giọt Màu tím Nhận xét giải thích Kết thí nghiệm:  Nhận xét:  Ở ống nghiệm 1: dung dịch có màu tím phản ứng biure Cu2+ liên kết CO - NH Protein trứng 2NaOH + CuSO4 → Na2SO4 + Cu(OH)2  Ở ống nghiệm 2: dung dịch có màu hồng biure Cu(OH)2 kết hợp với II Các phản ứng kết tủa protein Kết tủa protein muối trung tính 1.1 Nguyên tắc: Các muối trung tính phổ biến thường gây kết tủa protein muối kim loại kiềm, kiềm thổ NaCl, (NH4)2SO4, MgSO4 ….Cùng muối trung tính nồng độ khác lại có khả kết tủa protein khác Trong lòng trắng trứng có loại protein chủ yếu albumin globulin, albumin kết tủa nồng độ (NH4)2SO4 bão hịa, cịn globulin kết tủa nồng độ (NH4)2SO4 bán bão hòa 1.2 Tiến hành: lấy ống nghiệm thực sau: 1.3 Kết thí nghiệm  Nhận xét: Khi thêm (NH4)2SO4 bão hòa vào dung dịch nồng độ (NH4)2SO4 giảm trở thành (NH4)2SO4 bán bão hòa => Tủa globulin  Nhận xét: Khi thêm (NH4)2SO4 tinh thể vào tức làm cho dung dịch trở nên bão hịa từ gây kết tủa albumin Protein trứng => Tủa albumin Kết tủa protein acid hữu cơ: 2.1 Tiến hành: lấy hai ống nghiệm - Ống 1: cho vào ml protein trứng + giọt TCA 10%, lắc nhẹ - Ống 2: cho vào ml protein trứng + giọt acid sunfolsalisilic 10%, lắc nhẹ 2.2 Kết thí nghiệm TCA Acid sunfolsalisilic  Nhận xét:  Cả hai ống xuất kết tủa trắng  Ống kết tủa xuất chậm ống Kết tủa protein muối kim loại nặng 3.1 Tiến hành: Cho vào ống nghiệm ml dung dịch protein nhỏ từ từ dung dịch muối sau Ống nghiệm Dung dịch nhỏ vào Pb(CH3COO)2 2% AgNO3 2% FeCl3 0,5% CuSO4 % Lần Nhỏ giọt theo thành ống xuất kết tủa Lần Cho lượng thừa để xem tủa tan 3.2 Kết thí nghiệm:  Ống 1:  Nhận xét: Khi nhỏ Pb(CH3COO)2 vào lần 1, xuất kết tủa Khi nhỏ lần kết tủa tan => Pb(CH3COO)2 tác nhân gây tủa thuận nghịch  Ống 2:  Nhận xét: Khi nhỏ AgNO3 vào hai lần kết tủa trắng đục => AgNO3 tác nhân gây tủa không thuận nghịch  Ống 3:  Nhận xét: Khi nhỏ FeCl3 vào hai lần không xuất kết tủa, dung dịch có màu vàng FeCl3 => FeCl3 không tác nhân gây tủa  Ống  Nhận xét: Khi nhỏ CuSO4 vào lần dung dịch xuất kết tủa, lần kết tủa tan dung dịch có màu xanh CuSO4 => CuSO4 tác nhân gây tủa thuận nghịch Kết tủa protein nhiệt 4.1 Tiến hành: Lấy ống nghiệm cho vào ống ml dung dịch protein trứng thực sau: Ống Protein nghiệm trứng 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml CH3COOH CH3COOH NaOH 1% 10% 10% NaCl bão hòa Nhận Gia xét, nhiệt giải thích Đun sơi Đun giọt sơi Tủa Đun Không sôi tủa 5-8 Đun Không giọt sôi tủa - giọt - giọt Tủa 5-6 Đun giọt sơi 4.2 Kết thí nghiệm:  Ống Nhận xét: dung dịch có màu trắng không tủa Tủa  Ống Nhận xét: Dung dịch có kết tủa trắng đục Do cho CH3COOH 1% tạo môi trường acid yếu=> pH môi trường gần đến điểm đẳng điện  Ống Nhận xét: dung dịch suốt , không kết tủa Do cho CH3COOH 10% tạo môi trường acid mạnh => protein bị khử nước, nhóm COO- trung hịa cịn NH3+ khơng trung hịa => protein tích điện dương => khơng kết tủa  Ống Nhận xét: Dung dịch không kết tủa Do thêm NaOH tạo môi trường kiềm, NH3+ trung hịa => protein tích điện âm => không kết tủa  Ống Nhận xét: Xuất kết tủa trắng Do thêm CH3COOH NaOH tạo mơi trường trung hịa điện tích => protein kết tủa Xác định điểm đẳng điện protein 5.1 Nguyên tắc Điểm đẳng điện (pHi hay pI) tiêu đặc trưng cho loại protein Điểm đặc trưng dung dịch protein điểm đẳng điện dễ dàng bị kết tủa thêm vào lượng nhỏ chất gây kết tủa 5.2 Tiến hành  Lấy ống nghiệm (sạch, sấy khô)  Cho vào ống nghiệm dung dịch Na2HPO4 acid citric  Lắc cho albumin vào, thêm cồn, lắc nhẹ  Để yên phút Lượng dd Rượu Albumin 1% ethylic (ml) (ml) 3,2 1 1,32 3,7 1 0,96 1,04 4,7 1 1,32 0,68 5,7 1 Na2HPO4 Acid citric pH tương 0,2 M (ml) 0,1 M (ml) ứng 0.50 1,50 0.68 Ống nghiệm 5.3 Kết thí nghiệm  Nhận xét: Các ống xuất kết tủa, ống kết tủa nhiều =>pH đẳng điện albumin 4,7 Đông tụ sữa protease 6.1 Nguyên tắc Xác định hoạt độ đông tụ sữa dựa vào thời gian cần thiết để làm đông tụ thể tích dung dịch sữa có nồng độ xác định 6.2 Tiến hành Cân 10g dứa nghiền, lọc (vắt lấy nước)  Cho 5ml dung dịch sữa gầy vào ống nghiệm  Cho nhiệt kế vào ống nghiệm, để vào bể điều nhiệt đạt đến 50oC  Cho 0.1-0.5ml dịch enzyme dứa vào  Tiếp tục giữ 50oC, ghi lại thời gian hình thành kết tủa, đơng tụ sữa 1-5 phút Cơng thức tính: E= 𝑉𝑠 𝑇∗𝑉𝐸 𝐾 Trong đó:  E: hoạt lực đông tụ sữa, (ĐV/ml)  VS: thể tích dung dịch sữa, (ml)  T: thời gian đơng tụ sữa, (phút)  VE: thể tích dịch enzyme sử dụng, (ml)  K: độ pha loãng dịch enzyme 6.3 Kết thí nghiệm Kết tủa tạo thành phút, độ pha loãng dịch enzyme E= 2∗0,2 = 12,5 Đv/ml Điểm Bài số: Tên bài: Định tính khảo sát Glucid Ngày thí nghiệm: 23/06/2022 Xác định tính khử đường đơn phản ứng Fehling 1.1 Nguyên tắc Trong phân tử monosaccarit có nhóm –CHO, -C=O mang tính khử nên chúng khử ion kim loại: Cu, Fe … Vì ta có ta xác định tính khử đường đơn cách đun cách thủy với dung dịch Fehling cho tủa màu đỏ Cu2O monosaccarit khử Cu(OH)2 thành Cu2O 1.2 Cách tiến hành Dùng ống nghiệm cho chất vào theo thứ tự sau: Ống Glucose Fructose nghiệm 1% 1% 2ml Fehling A Fehling B 1ml 1ml 1ml 1ml Gia nhiệt Đun cách thủy cho xuất 2ml 1.3 Kết Ống nghiệm (1): Kết tủa màu đỏ gạch Ống nghiệm (2): Kết tủa màu đỏ gạch đậm ống nghiệm kết tủa (1) (2) Dung dịch sau đun cách thủy (Ống nghiệm bên trái (1) chứa Glucose, Ống nghiệm bên (2) phải chứa Fructose) Bàn luận Kết tủa đỏ gạch đáy ống nghiệm kết phản ứng nhóm CHO –C=O với Cu2+ dung dịch Fehling cho sản phẩm Cu2O Nhưng ta thấy ống nghiệm có kết tủa đậm tính khử fructose mạnh glucose Xác định tính khử đường đơi phản ứng Fehling 2.1 Nguyên tắc  Disaccarit phân tử đường đôi tạo nên từ phân tử đường monosaccarit  Nếu nhóm OH glucozit monosaccarit thứ kết hợp với nhóm OH ancol monosaccarit thứ hai đường đơi mang tính khử  Nếu nhóm OH glucozit monosaccarit thứ kết hợp với nhóm OH glucozit monosaccarit thứ hai đường đơi khơng mang tính khử Sử dụng dung dịch Fehling để xác định tính khử disaccarit nhờ vào liên kết nhóm OH glucozit monosaccarit thứ với nhóm OH ancol monosaccarit thứ hai 2.2 Tiến hành Dùng ống nghiệm cho chất theo thứ tự sau: Ống Maltose Lactose Saccarose nghiệm 2% 2ml 2% 2% Fehling Fehling Gia Hiện tượng Giải A B nhiệt thích 1ml 1ml Kết tủa đỏ gạch Đun 2ml 1ml 1ml cách thủy 2ml 1ml 1ml Kết tủa đỏ gạch Không kết tủa đỏ gạch 2.3 Kết Ở ống nghiệm (1) ống nghiệm (2) thấy xuất kết tủa sau khoảng thời gian đun cách thủy Sau thấy kết tủa ống nghiệm (1) (2) đun thêm khoảng thời gian ống nghiệm (3) không thấy xuất kết tủa (2) (3) (1) Dung dịch sau đun cách thủy (Từ trái qua phải, ống nghiệm (1) Maltose, ống nghiệm (2) Lactose, ống nghiệm (3) Saccarose) 2.4 Bàn luận - Ống nghiệm (1), (2): Maltose, Lactose đường mang tính khử, tham gia phản ứng Fehling có gia nhiệt xuất kết tủa đỏ gạch Cu2O - Ống (3): Saccarose đường đơi khơng mang tính khử, tham gia phản ứng Fehling có gia nhiệt khơng xuất kết tủa đỏ gạch Chiết xuất glycogen 3.1 Nguyên tắc Glycogen polysaccarit dự trữ người động vật, có nhiều gan, óc, nhộng tằm…có mô Chiết xuất glycogen cách lọc hết chất ngoại trừ glycogen có gan, óc, protein, lipit, Ta sử dụng dung dịch kiềm, nước cồn để chiết xuất glycogen 3.2 Cách tiến hành - Cân 5g gan tươi, sau nghiền nát - Cho 20ml KOH 30% đun nóng vào - Cho hỗn hợp vào cốc thủy tinh Đun khuấy liên tục đến gan tan hết - Để nguội, thêm 2ml Na2SO4 10% 50ml cồn 96o Ta thấy tủa hình thành - Để lắng Gạn bỏ phần nước - Thu tủa, hòa vào – 2ml H2O cồn 96o - Để lắng, gạn bỏ phần dịch bên (lặp lại lần) - Thu tủa Dồn vào lọ Sấy khô 3.3 Kết Thu khối lượng kết tủa màu vàng sau sấy khơ glycogen chiết xuất Glycogen sau chiết xuất 3.4 Bàn luận  Chúng ta sử dụng KOH đun nóng để tạo môi trường kiềm mạnh nhằm phá hủy mô gan  Thêm Na2SO4 có vai trị làm tăng hiệu suất q trình hình thành tủa glycogen  Thêm cồn 96o nhằm tạo điều kiện hình thành tủa  Sau thu tủa dùng nước cồn để rủa tủa Thủy phân tinh bột 4.1 Nguyên tắc Khi đun nóng tinh bột mơi trường acid acid phân giải tinh bột Sự phân giải lúc đầu qua sản phẩm trung gian sau tạo maltose glucose Các sản phẩm dextrin trung gian có phân tử lượng khác tác dụng với iod cho màu khác nhau:  Tinh bột + Iod dung dịch có màu xanh  Amylodextrin + Iod dung dịch có màu tím  Eritodextrin + Iod dung dịch có màu đỏ nâu  Achrodextrin + Iod dung dịch có màu vàng nâu  Maltose glucose + Iod dung dịch có màu vàng Iod 4.2 Cách tiến hành  Thủy phân tinh bột: cho vào cốc thủy tinh 10ml tinh bột 1% + 5ml HCl 10% đun cách thủy khoảng 7-10 phút (đậy nắp miệng cốc mặt kính đồng hồ)  Kiểm tra dịch thủy phân: sau kết thúc phản ứng thủy phân, làm nguội tiến hành sau: Ống nghiệm Dịch thủy phân 1ml 1ml Dung dịch I2/KI Kết Fehling Fehling Gia A B nhiệt giải thích Màu vàng giọt iod 0,5ml 1,5ml Đun Kết tủa màu đỏ gạch 4.3 Kết Sau đun thử với dung dịch Iod Fehling lần ống nghiệm có màu vàng Iot ống nghiệm có kết tủa màu đỏ nâu Sau thử dung dịch thủy phân với Iot( bên trái) Fehling( bên phải) 4.4 Bàn luận  Do sau thủy phân với acid, tinh bột thủy phân hoàn toàn thành maltose glucose nên tác dụng với iod có màu vàng  Cả hai loại đường mang tính khử nên khử Cu2+ thành Cu2O (màu đỏ nâu) ... enzyme 6.3 Kết thí nghiệm Kết tủa tạo thành phút, độ pha loãng dịch enzyme E= 2∗0,2 = 12,5 Đv/ml Điểm Bài số: Tên bài: Định tính khảo sát Glucid Ngày thí nghiệm: 23/06/2022 Xác định tính khử đường...Điểm Bài số: Tên bài: Định tính khảo sát Protein Ngày thí nghiệm: 23/06/2022 I Phản ứng biure Nguyên tắc: Các hợp chất có hay nhiều liên... thí nghiệm TCA Acid sunfolsalisilic  Nhận xét:  Cả hai ống xuất kết tủa trắng  Ống kết tủa xuất chậm ống Kết tủa protein muối kim loại nặng 3.1 Tiến hành: Cho vào ống nghiệm ml dung dịch protein