Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 40 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Cấu trúc
PHẦN I: MỞ ĐẦU
PHẦN II: NỘI DUNG
I. CÁC ENZYME CẮT GIỚI HẠN
1. Enzyme cắt giới hạn
2. Vai trò của các enzyme cắt giới hạn
3. Tính chất của enzyme giới hạn
3.1 Trình tự nhận biết của RE
3.2 Các kiểu cắt của RE
4. Danh pháp
5. Phân loại enzyme giới hạn
5.1. Enzyme loại I
5.2. Enzyme loại III
5.3. Enzyme loại II
6. Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả cắt của RE
6.1. Độ tinh sạch của DNA
6.2. Mức độ methyl hóa của DNA
6.3. Đặc tính methyl hóa của RE
7. Ứng dụng của RE
II. CÁC ENZYME BIẾN ĐỔI
1. Enzyme polymerase
1.1 DNA polymerase
1.1.1. Khái niệm
1.1.2. Đặc tính của DNA polymerase
1.1.3. Enzyme polymerase
1.2. RNA polymerase
1.2.1 .Khái niệm
1.2.2. Đặc tính của RNA polymerase
1.2.3. Một số RNA polymerase
2. Enzyme gây biến đổi đầu cuối DNA
2.1. T4 polynucleotide kinase
2.2. Alkaline phosphatase
3. Nuclease
3.1. DNase I (Deoxyribonuclease I)
3.2. Exo III (Exonuclease III ):
3.3. RNase A ( Enzyme Ribonuclease A):
3.4. RNase H:
3.5. RNase T1 (Enzyme ribonuclease T1)
3.6. Enzyme nuclease S1
III. CÁC ENZYME NỐI (LIGASE)
1. DNA ligase
1.1. T4 DNA ligase
1.2. E.coli DNA ligase
2.
8.11 1976.o Hollyday, 1964,n protein WRN l¹i bäc lÊy 2 protein trªn, t¹o thµnh cÊu tróc che dÊu ®Çu telomere.404040404040404040404040404040404033T4 RNA ligase
PHẦN III: KẾT LUẬN
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Nội dung
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
MỤC LỤC
PHẦN I: MỞ ĐẦU 3
PHẦN II: NỘI DUNG 4
I. CÁCENZYME CẮT GIỚI HẠN 4
1. Enzyme cắt giới hạn 4
2. Vai trò của cácenzyme cắt giới hạn 4
3. Tính chất của enzyme giới hạn 5
3.1 Trình tự nhận biết của RE 5
3.2 Các kiểu cắt của RE 7
4. Danh pháp 10
5. Phân loại enzyme giới hạn 11
5.1. Enzyme loại I 12
5.2. Enzyme loại III 13
5.3. Enzyme loại II 14
6. Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả cắt của RE 16
6.1. Độ tinh sạch của DNA 16
6.2. Mức độ methyl hóa của DNA 16
6.3. Đặc tính methyl hóa của RE 18
7. Ứng dụng của RE 18
II. CÁCENZYME BIẾN ĐỔI 19
1. Enzyme polymerase 19
1.1 DNA polymerase 19
1.2. RNA polymerase 26
2. Enzyme gây biến đổi đầu cuối DNA 29
2.1. T4 polynucleotide kinase 29
2.2. Alkaline phosphatase 30
3. Nuclease 31
3.1. DNase I (Deoxyribonuclease I) 31
3.2. Exo III (Exonuclease III ): 32
3.3. RNase A ( Enzyme Ribonuclease A): 32
3.4. RNase H: 33
3.5. RNase T1 (Enzyme ribonuclease T1) 33
3.6. Enzyme nuclease S1 34
III. CÁCENZYME NỐI (LIGASE) 35
1. DNA ligase 35
1.1. T4 DNA ligase 36
1.2. E.coli DNA ligase 36
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
1
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
2. 37
3939393939393939393939393939393939T4 RNA ligase 37
PHẦN III: KẾT LUẬN 38
TÀI LIỆU THAM KHẢO 39
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
2
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
PHẦN I: MỞ ĐẦU
Sinh học phântử không chỉ là một lĩnh vực mới mà còn trở nên cần
thiết trong bất cứ chuyên ngành nào của sinh vật học. Quá trình nghiên cứu
Sinh học phântử đã diễn ra trong một thời gian dài và người ta đã ứng dụng
được những thành tựu của chúng vào các lĩnh vực khác nhau để mang lại
những lợi ích nhất định trong đời sống cũng như trong sản xuất.
Công nghệ DNA tái tổ hợp được ra đời trên cơ sở các thành tựu của
sinh học phântử và hiện nay đang đóng vai trò cách mạng đối với sự phát
triển của sinh học cũng như cải tạo sinh giới. Cáckỹthuật tái tổ hợp DNA đã
cho phép các nhà công nghệ sinh học phân lập và khuếch đại một gen đơn từ
genome của một sinh vật để có thể nghiên cứu, biến đổi và chuyển nó vào
trong một cơ thể sinh vật khác. Cáckỹthuật này còn được gọi là tạodòng gen
do nó có thể sản xuất ra một số lượng lớn các gen xác định. Enzyme là công
cụ cơ bản trongkỹthuậttạodòngphân tử. Sinh học phântử đã phát hiện và
hiểu rõ cơ chế tác động của hàng loạt enzyme, nhờ đó đã sửdụng chúng như
những công cụ hữu hiệu trong việc cắt nối và ghép các gen.
Trong tạodòngphântử có sự tham gia của các enzyme: enzyme
nuclease, DNA-polymerase, ligase và restriction endonuclease. Để hiểu thêm
về cácenzymetạodòng nên tôi đã chọn đề tài "CÁC ENZYMEĐƯỢCSỬ
DỤNG TRONGKỸTHUẬTTẠODÒNGPHÂNTỬ "
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
3
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
PHẦN II: NỘI DUNG
I. CÁCENZYME CẮT GIỚI HẠN
1. Enzyme cắt giới hạn
Enzyme cắt giới hạn (restriction endonuclease) hay gọi tắt là enzyme
giới hạn (restrictase) là loại enzyme có khả năng nhận biết đoạn trình tự
nucleotide đặc hiệu trên cácphântử DNA và cắt cả hai sợi DNA bổ sung tại
các vị trí đặc thù.
Thông thường tế bào vi khuẩn bị nhiễm phagơ (thể thực khuẩn) thì vi
khuẩn đó bị phagơ phá huỷ. Một số chủng vi khuẩn sau khi bị nhiễm phagơ lại
không bị phá huỷ, do trong tế bào vi khuẩn này có loại enzyme có khả năng
cắt DNA phagơ thành những đoạn nhỏ. Năm 1970, Hamilton Smith là người
đầu tiên tách được loại enzyme này từ loại vi khuẩn Haemiphilus influenzae
được gọi tên là HinII. Ngay sau đó, các nhà khoa học đã nhận thấy rằng, phần
lớn các loài vi khuẩn mang loại enzyme có chức năng cắt DNA lạ xâm nhập
để bảo vệ tế bào khỏi bị xâm nhập của các DNA lạ. Những enzyme đó được
gọi là enzyme giới hạn.
2. Vai trò của cácenzyme cắt giới hạn
Từ 1953 người ta đã phát hiện thấy rằng, khi đưa DNA của một nòi vi
khuẩn E. coli này vào tế bào thuộc một nòi khác thường thì DNA được đưa
vào, gọi là DNA ngoại lai hay DNA lạ, mất hẳn hoạt tính di truyền và hầu như
bao giờ cũng bị phân cắt thành các đoạn ngắn. Chỉ trong một số ít trường hợp
DNA lạ đó mới không bị phân cắt và do đó nó có thể tái bản trong tế bào chủ.
Điều đó chứng tỏ DNA lạ được sửa đổi bằng cách nào đó dưới sự kiếm soát
của tế bào chủ. Các hiện tượng nói trên xảy ra chủ yếu khi các thể thực khuẩn
(phage) xâm nhiễm các tế bào vi khuẩn.
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
4
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
Cho đến đầu thập niên 1970 người ta mới biết rõ rằng các tế bào vi
khuẩn là những hệ thống chứa cả hai loại enzyme: cácenzyme sửa đổi và các
enzyme cắt giới hạn. Chúng đều có đối tượng nhận biết là các đoạn trình tự
của DNA vật chủ và DNA ngoại lai, nhưng có vai trò khác nhau. Cụ thể, các
enzyme sửa đổi (methylase) đóng vai trò bảo vệ DNA vật chủ 259 bằng cách
gắn thêm nhóm methyl (-CH
3
) ở một số base nhất định trong đoạn nhận biết
(recognition sequence) hay đoạn đích (target sequence). Hiện tượng methyl
hoá (methylation) này thường xảy ra đối với adenine và biến đổi nó thành N-6
methyladenine. Trong khi đó, cácenzyme giới hạn lại đóng vai trò vô hiệu
hoá hoạt tính di truyền của các DNA lạ bằng cách phân cắt ở các vị trí đặc thù
chừng nào nó chưa được sửa đổi cho giống với DNA vật chủ. Như vậy, các
enzyme giới hạn đóng vai trò là hàng rào bảo vệ tự nhiên của các vi khuẩn
nhằm chống lại sự xâm nhập của các phage lạ.
3. Tính chất của enzyme giới hạn
3.1 Trình tự nhận biết của RE
Tính chất quan trọng nhất của cácenzyme giới hạn là tính đặc hiệu vị
trí, nghĩa là chúng có thể nhận biết đoạn trình tự DNA đặc thù để cắt ở vị trí
xác định. Tuỳ theo vị trí cắt so với đoạn nhận biết mà chia ra hai loại: 260 loại
I bao gồm cácenzyme giới hạn cắt bên ngoài phạm vi đoạn nhận biết và loại
II bao gồm cácenzyme cắt đặc hiệu bên trong đoạn nhận biết. Ở đây chúng ta
chỉ xét cácenzyme giới hạn loại II vốn được xem là công cụ hiệu năng (giống
như con dao mổ tinh vi) cho phép thao tác trên các gene trongkỹthuật DNA
tái tổ hợp.
Enzyme giới hạn có khả năng nhận biết những đoạn trình tự DNA nhất
định và cắt DNA ở ngay thời điểm này hay ở điểm kế cận.
Trong tự nhiên cácenzyme hạn chế, hiện diện trong hầu hết các tế bào
vi khuẩn để ngăn cản DNA ngoại lai tiếp quản bộ máy tổng hợp protein của tế
bào. DNA của chính chúng sẽ được bảo vệ khỏi tác dụng của enzyme hạn chế
nhờ sự có mặt của cácenzyme nội bào có thể methyl hóa (methylation) các
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
5
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
nucleotide đặc biệt, vì thế các nucleotide này không được nhận biết bởi các
enzyme hạn chế.
Việc phát hiện ra cácenzyme hạn chế của vi khuẩn cắt DNA ở những
trình tự đặc biệt, đã giúp cho việc thao tác gen dễ dàng hơn, do nó có thể giảm
chiều dài của cácphântử DNA thành một tập hợp bao gồm các đoạn ngắn
hơn. Hiện nay, cácenzyme hạn chế đượcphân lập từcác sinh vật prokaryote.
Mỗi enzyme hạn chế chỉ nhận biết và cắt một trình tự DNA đặc biệt
thường chứa bốn hoặc sáu cặp nucleotide. Ví dụ enzyme EcoRI tách chiết từ
E. coli cắt trình tự GAATTC, enzyme BalI của Brevibacterium albidum cắt
trình tự TGGCCA. Có hơn 900 enzyme hạn chế khác nhau được tinh sạch từ
khoảng 250 chủng vi sinh vật.
Đoạn nhận biết thường dài từ 4-6 cặp nu, thường có cấu trúc cân đối bộ
đôi (có nghĩa là trình tự nu hướng 5’-3’ của sợi đơn này giống với trình tự nu
hướng 5’-3’ của sợi bổ sung kia, một số ít có khả năng cắt lệch trên 2 sợi đơn.
Hai enzyme Not I và SfiI nhận biết một đoạn dài 8 cặp nu, đoạn này ít tìm
thấy trong DNA genome nên thường đượcdùng để cắt DNA nhằm tạo thành
các đoạn lớn DNA.
Bảng 1. Trình tự nhận biết của một số enzyme hạn chế
STT Tên enzyme Vị trí nhận biết Đầu đượctạo ra
1 EcoRI 5’…G↓AATTC…3’
3’…CTTAA↑G…5’
5’…G AATTC…3’
3’…CTTAA G…5’
2 HindIII 5’…A↓AGCTT…3’
3’…TTCGA↑A…5’
5’…A AGCTT…3’
3’…TTCGA A…5’
3 PstI 5’…CTGCA↓G…3’
3’…G↑ACGTC…5’
5’…CTGCA G…3’
3’…G ACGTC…5’
4 HpaI 5’…GTT↓AAC…3’
3’…CAA↑TTG…5’
5’…GTT AAC…3’
3’…CAA TTG…5’
5 HpaII 5’…C↓CGG…3’
3’…GGC↑C…5’
5’…C CGG…3’
3’…GGC C…5’
6 HaeIII 5’…GG↓CC…3’ 5’…GG CC…3’
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
6
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
3’…CC↑GG…5’ 3’…CC GG…5’
7 BamHI 5’…GGATCC…3’
3’…CCAT↑GG…5’
5’…G GATCC…3’
3’…CCAT GG…5’
8 BglII 5’…A↓GATCT…3’
3’…TCTAG↑A…5’
5’…A GATCT…3’
3’…TCTAG A…5’
9 SmaI 5’…CCC↓GGG…3’
3’…GGG↑CCC…5’
5’…CCC GGG…3’
3’…GGG CCC…5’
10 XmaI 5’…C↓CCGGG…3’
3’…GGGCC↑C…5’
5’…C CCGGG…3’
3’…GGGCC C…3’
Một số enzyme có thể cắt tốt ở trình tự này nhưng lại cắt ít hữu hiệu ở
trình tự khác. Thí dụ enzyme EcoRI cắt ở nơi có trình tự AATT không tốt
bằng ở những nơi có trình tự GAATTC.
3.2 Các kiểu cắt của RE
Cắt đầu bằng: Một số RE tạo vết cắt trên phântử DNA ngay chính giữa
palindrom, tạo ra hai đoạn DNA đầu bằng. Sau khi cắt, hai đầu không có khả
năng tự kết hợp trở lại.
Cắt đầu dính (đầu lệch): Cắt bên này và bên kia của tâm đối xứng để tạo
ra hai đầu lệch nhau một vài base. Trong trường hợp này, các đầu dính bổ
sung có thể bị bắt cặp trở lại. Như vậy, khi các DNA khác nguồn nhưng cùng
có chứa trình tự nhận biết đặc hiệu của một RE, sau khi bị cắt sẽ có các đầu
dính bổ sung giống nhau nên các đoạn DNA khác nguồn có thể nối lại để tạo
ra những phântử lai. Đây là cơ sở của phương pháp tạodòng gen, một phương
pháp thúc đẩy sự phát triển của công nghệ di truyền.
Vị trí cắt tại liên kết phosphodiester nối giữa các đường deoxyribose
của các nucleotide tạo thành các đoạn có 2 đầu xác định 5’P, 3’OH và có trình
tự tương ứng với mỗi enzyme RE.
Các enzyme hạn chế cắt cácphântử DNA sợi đôi theo hai cách khác
nhau (Hình 1).
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
7
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
Hình 1. Hai kiểu cắt của enzyme hạn chế.
(a) tạo ra đầu so le, và (b) tạo ra đầu bằng.
Một số enzyme hạn chế khác (ví dụ: BalI) cắt ở trục đối xứng để tạo ra
các đoạn DNA mang đầu bằng (blunt)
Cũng có trường hợp 2 hoặc nhiều enzyme nhận biết trình tự giống nhau,
nhưng khi cắt sinh ra các đoạn DNA không nhất thiết lúc nào trình tự tận cùng
cũng giống nhau.
Nhiều enzyme có trình tự nhận biết khác nhau nhưng khi cắt lại có thể
tạo ra những đầu tương hợp. Các đoạn này kết gắn với nhau bằng enzyme
ligase sẽ tạo ra phântử DNA lai.
Giống như EcoRI, nhiều enzyme hạn chế đã tạo ra các đoạn DNA với
đầu 5’ dính (protruding). Một số enzyme hạn chế (ví dụ: PstI) đã tạo ra các
đoạn DNA có đầu 3’ lồi.Ví dụ:
* Restriction endonuclease EcoRI (từ E.coli) có trình tự
Eco RI cắt
5' G-A-A-T-T-C 3' 5' G 5' A-A-T-T-C 3'
3' C-T-T-A-A-G 5' 3' G-T-T-A-A 5' G 5'
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
8
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
Bảng 2: Cácenzyme endonuclease hạn chế và những đoạn cắt của chúng
Enzyme hạn chế Các đoạn cắt Có nguồn gốc từ vi khuẩn
Bam III G G A T C C
C C T A G G
Bacillus amylolique faciens H
Bgl II A G A T C T
T C T A G A
Bacillus globigi
Hind III A A G C T T
T T C G A A
Haemophilus influenzeae R
d
Eco RII C C T G G
G G A C C
Escherichia coli R245
Hpa I G T T A A C
C A A T T G
Haemophilus parainfluenzea
Hha I G C G C
C G C G
Haemophilus haemolyticus
Taq I T C G A
A G C T
Thermus aquaticus YTI
Vì một enzyme hạn chế chỉ nhận biết một trình tự duy nhất, cho nên số
vị trí cắt trên một phântử DNA đặc biệt thường là nhỏ. Các đoạn DNA được
cắt bởi enzyme hạn chế có thể đượcphân tách theo kích thước bằng điện di
agarose gel để nghiên cứu. Do sự tương tự của tổ chức phântửtrong tất cả các
cơ thể, cho nên DNA vi khuẩn, DNA thực vật và DNA động vật có vú tương
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
9
Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS.
Nguyễn Bá Lộc
hợp nhau về cấu trúc. Vì thế, một đoạn DNA từ một dạng sống này có thể dễ
dàng được pha trộn với DNA của một dạng sống khác. Sự tương tự này cũng
phù hợp đối với plasmid, nhân tố di truyền ngoài nhân được tìm thấy trong
nhiều loài vi khuẩn khác nhau. Chúng là những phântử DNA mạch vòng đóng
sợi đôi đượcdùng làm vector mang các đoạn DNA ngoại lai dùngtrongkỹ
thuật tái tổ hợp DNA.
4. Danh pháp
Nguồn gốc enzyme là từ vi khuẩn vì vậy tên enzyme sẽ dựa trên tên của
chủng vi khuẩn chứa nó. Theo quy tắc, cácenzyme có tên gọi gồm có 3 chữ
thuộc tên chủng vi khuẩn gốc; Chữ cái đầu (viết hoa) là chữ đầu của tên giống
của vi khuẩn từ đó enzymeđược trích li và 2 chữ tiếp theo là thuộc tên loài. 3
chữ này có thể thêm vài ký hiệu chỉ định để phân biệt 2 chủng cùng loài. Có
số la mã tiếp theo để phân biệt cácenzyme giới hạn khác nhau mà có nguồn
gốc cùng một chủng vi khuẩn.
Ví dụ
1. EcoRI:
5' GAATTC 3'
3' CTTAAG 5'
- E: Giống Escherichia
- Co: Loài Coli
- R: Chủng RY13
- I: Enzymeđược tách lần đầu tiên
Một số ví dụ tương tự: PstI là enzyme giới hạn được tách từ
Providencia stuartii; Fnu DI, Fnu Dn và Fnu DHI, là 3 enzyme xuất phát từ
Fusobacterium nucleatum chủng D; Bst DI021 thuộc vi khuẩn Bacillus
stearothermophilus chủng D102; Một số loại khác như E.coRV, BamHI,
HaeIII, Smal, …
Học viên: Trần Thị Hải Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh
Học K22
10
[...]... không được lai trên phântử này - Ứng dụng: + Định vị các đầu 5’ và 3’ của các mRNA bằng cách phân tích tính kháng lại enzyme S1 của phântử DNA :mRNA lai kết hợp sử lý enzyme nuclease S1 rồi chạy điện di và phân tích chiều vệt băng + Định vị vị trí các intron bằng cách phân rã phântử lai giữa mRNA chín với DNA của genome đã được đánh dấu bằng P32 phóng xạ S1 sẽ cắt tại những vị trí thòng lọng không được. .. hoặc dòng thực khuẩn thể Bản đồ cắt giới hạn là vị trí cắt của mỗi RE trên phântử DNA, nhóm liên kết hay cả bộ genome - Phân cắt tạo ra các đoạn nhỏ từ DNA genome trước khi phân tách bằng điện di và tiến hành lai DNA, dùngtrong phương pháp RFLP - Tạo ra các đoạn để nhân dòngtrong vector thích hợp - Tạo ra các đoạn DNA mẫu dò để đánh dấu, sửdụngtrong phương pháp lai DNA II CÁCENZYME BIẾN ĐỔI 1 Enzyme. .. phức tạp của enzymeEnzyme loại I là đa khả năng, mang cả hai chức năng giới hạn và sửa đổi trong khi enzyme lọai II chỉ mang một trong hai khả năng giới hạn hoặc sửa đổi Sau này, cácenzyme phức tạp được chia ra thêm loại III Đặc điểm của 3 loại enzyme này được tóm tắt trên Bảng 3 Cácenzyme giới hạn đượcphân thành 3 kiểu I, II và III tuy nhiên cácenzyme giới hạn thường dùng phổ biến trong công nghệ... vector xẩy ra Trong kỹthuật tạo dòng, khi vector được mở ra bằng một RE rồi được loại ngay nhóm 5’ phosphate thì sẽ không thể tự nối lại được Chỉ khi có DNA khác có mang các đầu 5’ phosphate cần thiết được nhân dòng vào thì phản ứng gắn nối giữa DNA đó với vector mới xảy ra 3 Nuclease Cácenzyme nuclease phân hủy các axit nucleic bằng cách làm đứt các liên kết phosphodieste là liên kết nối các nucleotit... RNA ligase là 2 enzyme chủ yếu được sửdụng rộng rãi Có một số loại enzyme nối khác nhau, nhưng enzyme T4 DNA ligase là enzyme chủ yếu được sửdụng rộng rãi nhất trong kỹthuật tạo dòng 1 DNA ligase Là enzyme xúc tác việc hình thành liên kết phosphodiester giữa nhóm 3’OH đầu này với đầu 5’-P của nu đầu kia của 2 chuỗi DNA kép DNA ligase còn có chức năng sửa chữa những khía cắt một mạch trong sợi kép... Enzyme này thường đượcdùng để loại bỏ các đoạn RNA sau phản ứng phiên mã ngược, để tiếp tục tổng hợp mạch thứ 2 cho cDNA thành một DNA mạch đôi, hoặc dùng để loại bỏ một cách có chọn lọc những phần của một phântử RNA lai được với trình tự đặc thù của DNA genome - Ứng dụng + Dùng để loại bỏ RNA trong phântử lai DNA: RNA để tổng hợp sợi cDNA + Tạo ra vết cắt đặc thù trên phântử RNA bằng cách sử dụng. .. phântử DNA thứ nhất, đó là enzyme terminal transferase Enzyme này sau đó lại sửdụng để đính poly T vào phântử DNA thứ 2 Sau đó 2 phântử DNA được kết gắn với nhau qua 2 đầu bổ sung sẽ đính kết lại (ligation) rồi được nhân dòng Học viên: Trần Thị Hải Học K22 Lớp: LL&PPDH Bộ Môn Sinh 19 Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS Nguyễn Bá Lộc lên, quá trình này sửdụngtrongtạo vector tái tổ hợp từ... là các nuclease cắt ở một vị trí đặc hiệu nằm bên trong sợi DNA (chứ không phân hủy DNA từ hai đầu), nên còn được gọi là enzyme endonuclease Vì enzyme loại I và III chiếm tỷ lệ ít và không đượcsửdụng nhiều, các nét chính enzyme này sẽ được giới thiệu trước tiên Enzyme loại II sẽ được trình bày sau cùng một cách chi tiết hơn Bảng 3: Những đặc điểm của enzyme giới hạn của ba loại hệ thống giới hạn-sửa...Tiểu luận Sinh học phântử GVHD: PGS -TS Nguyễn Bá Lộc 5 Phân loại enzyme giới hạn Enzyme giới hạn nằm trong một hệ thống bao gồm cả enzyme sửa đổi, nó không thể nào tồn tại một mình được Những chủng vi khuẩn, nếu hệ thống giới hạn sửa đổi có một enzyme sửa đổi không hoạt độngđược vì lý do nào đấy, thì chủng đó không thể nào sống nổi Lý do chỉ vì DNA không được sửa đổi sẽ bị enzyme giới hạn tương... Từ khi hệ thống enzyme giới hạn-sửa đổi B và K của Escherichia coli được xác định tới nay đã có hơn 2500 hệ thống khác được phát hiện .Trong đó có gần 200 trình tự đặc hiệu hoàn toàn khác nhau đượcenzyme nhận ra Tất cả enzyme này đượcphân loại khác nhau tuỳ theo thành phầnphân tử, điều kiện cần thiết để hoạt động, kiểu trình tự nucleotit nhận ra và vị trí cắt Lúc ban đầu, enzymeđượcphân chia ra loại