Nghiên cứu tạo cây đậu tương (glycine max l ) biến đổi gen có khả năng tổng hợp astaxanthin chuyên biệt ở hạt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGHIÊN CỨU TẠO CÂY ĐẬU TƢƠNG (Glycine max L ) BIẾN ĐỔI GEN CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP ASTAXANTHIN CHUYÊN BIỆT Ở HẠT LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGHIÊN CỨU TẠO CÂY ĐẬU TƢƠNG (Glycine max L ) BIẾN ĐỔI GEN CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP ASTAXANTHIN CHUYÊN BIỆT Ở HẠT Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TP HỒ CHÍ MINH - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu dƣới hƣớng dẫn khoa học TS Nội dung nghiên cứu kết đề tài hoàn toàn trung thực Toàn số liệu kết nghiên cứu chƣa đƣợc sử dụng để cơng bố cơng trình nghiên cứu để nhận học vị, thơng tin trích dẫn luận án đƣợc trích dẫn nguồn gốc rõ ràng Một phần kết nghiên cứu đề tài đƣợc cơng bố tạp chí khoa học chun ngành nƣớc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm cam đoan ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành Luận Án này, tơi nhận đƣợc nhiều động viên, giúp đỡ từ Thầy Cơ, Gia Đình Bạn Bè Xin bày tỏ gửi lòng biết ơn chân thành, sâu sắc đến: - Thầy - TS tận tình hƣớng dẫn, động viên tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian làm luận án - TS - Anh vừa ngƣời Thầy ln theo sát, tận tình bảo, hƣớng dẫn, động viên, giúp đỡ suốt trình làm luận án - Thầy ln bên cạnh ủng hộ, động viên, giúp đỡ tơi hồn thành luận án - Các quý Thầy Cô Học Viện Khoa Học Công Nghệ truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tơi hồn thành luận án - Ban Lãnh đạo Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài - Các bạn đồng nghiệp phịng Cơng Nghệ Gen bạn sinh viên giúp đỡ thời gian qua - Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Gia Đình ln sát cánh, ủng hộ, giúp đỡ năm học vừa qua nhƣ bƣớc đƣờng trƣởng thành sống iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ viii TÓM TẮT MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1 Chuyển hóa tạo carotenoid thực vật 1 Sinh tổng hợp tích trữ carotenoid 1 Thay đổi chuyển hóa sinh tổng hợp carotenoid 10 1 Tổng quan astaxanthin 11 Biến đổi gen thực vật 19 Chuyển gen vào thực vật sử dụng Agrobacterium tumefaciens 19 2 Sử dụng promoter công nghệ chuyển gen thực vật 22 Sự di truyền gen biến nạp chuyển gen 26 Nghiên cứu phát sinh hình thái biến đổi gen đậu tƣơng 27 Giới thiệu chung đậu tƣơng 27 Nghiên cứu phát sinh hình thái đậu tƣơng 29 3 Nghiên cứu biến đổi gen đậu tƣơng 35 Cách tiếp cận đề tài 43 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 46 Vật liệu 46 1 Giống đậu tƣơng 46 2 Chủng vi khuẩn, plasmid 46 Kim châm để tạo vết thƣơng cho mẫu chuyển gen 47 Mơi trƣờng ni cấy mơ 47 Hóa chất thí nghiệm khác 48 Thiết bị sử dụng 49 2 Nội dung Phƣơng pháp 50 Nội dung 1: Xây dựng hệ thống tạo hoàn chỉnh in vitro từ đốt mầm nửa hạt 50 2 Tuyển chọn giống đậu tƣơng 50 2 Khử trùng hạt 50 iv 2 Ảnh hƣởng BA lên tái sinh chồi đốt mầm nửa hạt 51 2 Ảnh hƣởng IBA lên tạo rễ chồi in vitro 52 Nội dung 2: Khảo sát điều kiện thích hợp để ứng dụng qui trình chuyển gen tạo astaxanthin vào đậu tƣơng 53 2 Ảnh hƣởng PPT lên khả tái sinh đốt mầm nửa hạt 53 2 Ảnh hƣởng PPT lên sinh trƣởng chồi in vitro 53 2 Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng kim châm lên khả tái sinh đốt mầm 53 2 Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng dao mổ kết hợp sóng siêu âm lên hiệu chuyển gen gus vào đậu tƣơng 54 2 Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng dao mổ kết hợp thấm hút chân không lên hiệu chuyển gen gus vào đậu tƣơng 55 Nội dung 3: Chuyển gen tạo astaxanthin vào đậu tƣơng gián tiếp thông qua vi khuẩn A tumefaciens kiểm tra, đánh giá dòng đậu tƣơng chuyển gen 55 2 10 Tạo dòng Agrobacterium tumefaciens EHA 105 chứa plasmid pITB-AST 55 2 11 Chuyển gen tạo astaxanthin vào đậu tƣơng 57 2 12 Kiểm tra chuyển gen PCR 58 2 13 Kiểm tra chuyển gen Southern blot 60 2 14 Phân tích hàm lƣợng astaxanthin hạt 62 2 15 Đánh giá giai đoạn sinh trƣởng chuyển gen điều kiện ex vitro 62 2 16 Xử lý thống kê 63 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 64 Nội dung 1: Xây dựng hệ thống tạo hoàn chỉnh in vitro từ đốt mầm nửa hạt 64 Tuyển chọn giống đậu tƣơng 64 Hiệu phƣơng pháp khử trùng hạt đậu tƣơng 66 3 Ảnh hƣởng BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt 67 Ảnh hƣởng IBA lên tạo rễ chồi in vitro 73 Nội dung 2: Khảo sát điều kiện thích hợp để ứng dụng qui trình chuyển gen tạo astaxanthin vào đậu tƣơng 75 Ảnh hƣởng PPT lên khả tái sinh đốt mầm nửa hạt 75 Ảnh hƣởng PPT lên sinh trƣởng chồi in vitro 78 Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng kim châm lên khả tái sinh đốt mầm Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng dao mổ kết hợp sóng siêu âm lên 79 v hiệu chuyển gen gus vào đậu tƣơng (giống MTĐ 176) 80 Ảnh hƣởng việc tạo vết thƣơng dao mổ kết hợp thấm hút chân không lên hiệu chuyển gen gus vào đậu tƣơng 83 Nội dung 3: Chuyển gen tạo astaxanthin vào đậu tƣơng gián tiếp thông qua vi khuẩn A tumefaciens kiểm tra, đánh giá dòng đậu tƣơng chuyển gen 10 Tạo dòng Agrobacterium tumefaciens EHA 105 chứa plasmid pITB-AST 85 85 11 Chuyển gen tạo đậu tƣơng có khả sản xuất astaxanthin chuyên biệt hạt 87 11 Chuyển gen vi khuẩn A tumefaciens sử dụng kim châm tạo vết thƣơng mẫu 87 11 Chuyển gen vi khuẩn A tumefaciens sử dụng dao mổ kết hợp sóng siêu âm, thấm chân không tạo vết thƣơng mẫu 93 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 111 DANH MỤC CƠNG TRÌNH 113 TÀI LIỆU THAM KHẢO 114 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BA Benzyl Adenine CBFD Carotenoid β-ring 4-dehydrogenase GGPP Geranylgeranyl Pyrophosphate H Hour HBFD Carotenoid 4-hydroxy-β-ring 4-dehydrogenase HPLC High-performance liquid chromatography IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid KT Kinetin NAA α-naphthylacetic acid NXS Neoxanthin synthase PCR Polymerase Chain Reaction PDS Phytoene desaturase PPT Phosphinothricin PSY Phytoene synthase QC1 Qui cách QC2 Qui cách S Second SAAT Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation TDZ Thidiazuron VDE Violaxanthin deepoxidase ZDS Zeta-carotene desaturase ZEP Zeaxanthin epoxidase β-LCY β Lycopene cyclase ε-LCY ε Lycopene cyclase vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Nguồn gốc số đặc điểm giống đậu tƣơng đƣợc sử dụng 46 Bảng 2 Thành phần loại môi trƣờng nuôi cấy mô chuyển gen 47 Bảng Kiểm tra thành phần β-carotene giống đậu tƣơng 65 Bảng Tỉ lệ nảy mầm giống đậu tƣơng 65 Bảng 3 Tỉ lệ hạt đậu tƣơng không nhiễm nảy mầm khử trùng dung dịch Javel khí clo 67 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt giống MTĐ 176 68 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt giống HL 07-15 70 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt giống OMĐN 29 71 Bảng Ảnh hƣởng IBA đến khả tạo rễ chồi đậu tƣơng in vitro 75 Bảng Ảnh hƣởng PPT lên tái sinh chồi đốt mầm 76 Bảng Ảnh hƣởng PPT lên khả sống chồi in vitro 78 Bảng 10 Kết khảo sát ảnh hƣởng việc sử dụng kim châm lên khả tái sinh đốt mầm 80 ảng 11 Tỉ lệ mẫu dƣơng tính GUS xử l sóng siêu âm thời gian khác 82 ảng 12 Tỉ lệ đốt mầm dƣơng tính GUS xử l áp lực âm thời gian khác 84 Bảng 13 Kết thu nhận hạt dòng chuyển gen D2 D8 hệ T1 103 Bảng 14 Kết định lƣợng astaxanthin hạt dòng chuyển gen 106 Bảng 15 So sánh số đặc điểm chuyển gen đối chứng 109 viii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1 Sơ đồ đƣờng sinh tổng hợp carotenoid [19] Hình Bột astaxanthin [36] 11 Hình So sánh khả chống gốc oxy tự có hại cho thể số chất chống oxy hóa [43] Hình Vị trí phân tử astaxanthin màng tế bào [40] 12 13 Hình Qui mơ thị trƣờng astaxanthin đến năm 2022 [4] 13 Hình Con đƣờng chuyển hoá tạo astaxanthin Adonis aestivalis [6] 15 Hình Con đƣờng tổng hợp astaxanthin số lồi khác [6][57] 16 Hình Sơ đồ chuyển hóa tạo astaxanthin đậu tƣơng đƣợc biến nạp gen mã hóa phytoene synthase ketolase [63] Hình Vi khuẩn A tumefaciens bám bề mặt tế bào thực vật [71] Hình 10 Vi khuẩn A tumefaciens gây khối u thực vật [72] 18 20 20 Hình 11 Sự ức chế phosphinothricin lên hoạt động enzyme 21 Hình 12 Phản ứng X-Gluc với-glucuronidase [77] 22 Hình 13 Mơ hình cấu trúc điều hịa phiên mã gen mã hóa protein [79] 23 Hình 14 Cây đậu tƣơng 27 Hình 15 Sản lƣợng nƣớc sản xuất đậu tƣơng lớn [94] 28 Hình 16 Cấu trúc plasmid pITB-AST 45 Hình Sơ đồ bƣớc chuẩn bị mẫu đốt mầm 51 Hình 2 Sơ đồ bƣớc chuẩn bị mẫu nửa hạt 52 Hình Minh họa kích thƣớc theo chiều dài, rộng, dày hạt đậu tƣơng 63 Hình Hạt đậu tƣơng nảy mầm sau ngày 65 Hình Hạt đậu tƣơng (HL 07-15) nảy mầm ngày sau khử trùng 67 Hình 3 Sự hình thành chồi đốt mầm giống MTĐ 176 nồng độ BA khác sau tuần ni cấy 69 Hình Sự đáp ứng đốt mầm nửa hạt giống MTĐ 176 nồng độ BA khác sau tuần ni cấy 69 Hình Sự hình thành chồi mẫu nửa hạt giống MTĐ 176 nồng độ BA khác sau tuần nuôi cấy 70 Bảng Kết ảnh hƣởng nồng độ BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt giống HL 07-15 (Tỉ lệ mẫu tạo chồi đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x; Số chồi/mẫu đƣợc chuyển sang dạng log(x+1) trƣớc xử lý thống kê) HLTS1 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 74 6776 mg/l 77 7901 mg/l 77 7901 0974 37 2247 46 9228 61 2197 Sig 000 000 000 000 407 Means for groups in homogeneous subsets are displayed HLSC1 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 7400 mg/l 7700 mg/l 7867 0000 2333 4100 5733 Sig 000 000 000 000 154 Means for groups in homogeneous subsets are displayed HLTS2 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 74 6776 mg/l 77 7901 mg/l 77 7901 Sig 0974 39 2315 48 8457 59 0044 000 000 000 000 383 Duncan HLTS1 Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 74 6776 mg/l 77 7901 mg/l 77 7901 0974 37 2247 46 9228 61 2197 Sig 000 000 000 000 407 Means for groups in homogeneous subsets are displayed HLSC2 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 7633 mg/l 7633 mg/l 7967 0000 2467 4233 5733 Sig 000 000 000 000 323 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Bảng Kết ảnh hƣởng nồng độ BA lên tái sinh đốt mầm nửa hạt giống OMĐN 29 (Tỉ lệ mẫu tạo chồi đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x; Số chồi/mẫu đƣợc chuyển sang dạng log(x+1) trƣớc xử lý thống kê) OMTS1 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l 0974 mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 74 6776 mg/l 77 7901 mg/l 77 7901 Sig 37 2247 46 9228 61 2197 000 000 000 000 407 Means for groups in homogeneous subsets are displayed OMSC1 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l 0000 mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 7167 mg/l 7533 mg/l 7800 Sig 1933 3833 5833 000 000 000 000 066 Means for groups in homogeneous subsets are displayed OMTS2 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l 0974 mg/l mg/l mg/l mg/l 74 6776 mg/l 77 7901 mg/l 77 7901 Sig 39 2315 52 7753 61 2197 000 000 000 000 385 Means for groups in homogeneous subsets are displayed OMSC2 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoBA N mg/l 0000 mg/l mg/l mg/l 3 mg/l 7533 mg/l 7633 mg/l 7867 Sig 2200 4233 5933 000 000 000 000 295 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Bảng Kết ảnh hƣởng IBA đến khả tạo rễ chồi đậu tƣơng in vitro (Tỉ lệ mẫu tạo rễ đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x; Số rễ/chồi đƣợc chuyển sang dạng log(x+1) trƣớc xử lý thống kê) Multiple Comparisons LSD Depende (I) (J) nt Nongdo Nongdo Variable IBA IBA HLTR mg/l -15 8563 -3 5400 -28 48788 * 76381 000 -34 6460 -22 3297 mg/l -23 06781 * 76381 000 -29 2260 -16 9097 mg/l -11 70505 * 76381 002 -17 8632 -5 5469 69818 * 76381 006 5400 15 8563 mg/l -18 78970 * 76381 000 -24 9479 -12 6316 mg/l -13 36963 * 76381 001 -19 5278 -7 2115 -2 00687 76381 484 -8 1650 1513 mg/l 28 48788 * 76381 000 22 3297 34 6460 mg/l 18 78970 * 76381 000 12 6316 24 9479 42007 76381 078 - 7381 11 5782 16 78283 * 76381 000 10 6247 22 9410 23 06781 * 76381 000 16 9097 29 2260 13 36963 * 76381 001 2115 19 5278 -5 42007 76381 078 -11 5782 7381 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 11 36276 * 76381 002 2046 17 5209 mg/l 11 70505 * 76381 002 5469 17 8632 00687 76381 484 -4 1513 1650 mg/l mg/l -16 78283 * 76381 000 -22 9410 -10 6247 mg/l -11 36276 * 76381 002 -17 5209 -5 2046 - 19667 * 03113 000 - 2660 - 1273 mg/l - 48000 * 03113 000 - 5494 - 4106 mg/l - 38000 * 03113 000 - 4494 - 3106 - 27667 * 03113 000 - 3460 - 2073 19667 * 03113 000 1273 2660 - 28333 * 03113 000 - 3527 - 2140 mg/l - 18333 * 03113 000 - 2527 - 1140 mg/l - 08000 * 03113 028 - 1494 - 0106 mg/l 48000 * 03113 000 4106 5494 28333 * 03113 000 2140 3527 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l Upper Bound 006 mg/l mg/l Lower Bound 76381 mg/l HLSR Sig -9 69818 mg/l mg/l mg/l mg/l Std Error * mg/l mg/l 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) mg/l mg/l * 20333 * mg/l 038000 mg/l * mg/l 18333 mg/l mg/l - 10000 10000 mg/l 10333 * * * 03113 03113 000 1340 2727 03113 000 3106 4494 03113 000 1140 2527 03113 009 009 03113 mg/l 03113 000 2073 3460 08000 * 03113 028 0106 1494 - 20333 * 03113 000 - 2727 - 1340 - 10333 * 03113 008 - 1727 - 0340 -7 69131 * 42543 049 -15 3236 - 0590 -17 85003 * 42543 000 -25 4824 -10 2177 mg/l -36 63571 * 42543 000 -44 2681 -29 0034 mg/l -27 70067 * 42543 000 -35 3330 -20 0683 69131 * 42543 049 0590 15 3236 mg/l -10 15872 * 42543 014 -17 7911 -2 5264 mg/l -28 94441 * 42543 000 -36 5767 -21 3121 mg/l -20 00936 * 42543 000 -27 6417 -12 3770 mg/l 17 85003 * 42543 000 10 2177 25 4824 mg/l 10 15872 * 42543 014 5264 17 7911 mg/l -18 78568 * 42543 000 -26 4180 -11 1533 -9 85064 * 42543 017 -17 4830 -2 2183 36 63571 * 42543 000 29 0034 44 2681 28 94441 * 42543 000 21 3121 36 5767 mg/l 18 78568 * 42543 000 11 1533 26 4180 mg/l 93504 * 42543 026 3027 16 5674 mg/l 27 70067 * 42543 000 20 0683 35 3330 mg/l 20 00936 * 42543 000 12 3770 27 6417 85064 * 42543 017 2183 17 4830 -8 93504 * 42543 026 -16 5674 -1 3027 mg/l - 17000 * 03026 000 - 2374 - 1026 mg/l - 32667 * 03026 000 - 3941 - 2592 mg/l - 54000 * 03026 000 - 6074 - 4726 mg/l - 40667 * 03026 000 - 4741 - 3392 17000 * 03026 000 1026 2374 mg/l - 15667 * 03026 000 - 2241 - 0892 mg/l - 37000 * 03026 000 - 4374 - 3026 mg/l - 23667 * 03026 000 - 3041 - 1692 mg/l 32667 * 03026 000 2592 3941 mg/l 15667 * 03026 000 0892 2241 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l OMSR mg/l mg/l mg/l mg/l 1727 * mg/l mg/l 0340 - 0306 1694 27667 mg/l mg/l OMTR 008 - 1694 0306 mg/l 13333 03026 - 21333 * 03026 - 08000 * 03026 54000 * 03026 mg/l 37000 * 03026 mg/l 21333 * 03026 mg/l mg/l mg/l mg/l * 025 - 1474 - 0126 000 4726 6074 000 3026 4374 000 000 001 mg/l mg/l 03026 000 3392 4741 mg/l 23667 * 03026 000 1692 3041 mg/l 08000 * 03026 025 0126 1474 - 13333 * 03026 001 - 2008 - 0659 mg/l -10 07468 * 76141 023 -18 4556 -1 6937 mg/l -27 75473 * 76141 000 -36 1357 -19 3738 -14 29684 * 76141 003 -22 6778 -5 9159 -1 92283 76141 620 -10 3038 4581 10 07468 * 76141 023 6937 18 4556 -17 68005 * 76141 001 -26 0610 -9 2991 -4 22216 76141 288 -12 6031 1588 mg/l 15185 76141 055 - 2291 16 5328 mg/l 27 75473 * 76141 000 19 3738 36 1357 mg/l 17 68005 * 76141 001 2991 26 0610 mg/l 13 45789 * 76141 005 0769 21 8388 25 83190 * 76141 000 17 4510 34 2128 14 29684 * 76141 003 9159 22 6778 22216 76141 288 -4 1588 12 6031 76141 005 -21 8388 -5 0769 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l -13 45789 * mg/l 12 37401 * 76141 008 9931 20 7550 92283 76141 620 -6 4581 10 3038 -8 15185 76141 055 -16 5328 2291 -25 83190 * 76141 000 -34 2128 -17 4510 -12 37401 * 76141 008 -20 7550 -3 9931 mg/l - 26000 * 03553 000 - 3392 - 1808 mg/l - 47000 * 03553 000 - 5492 - 3908 mg/l - 33333 * 03553 000 - 4125 - 2542 mg/l - 18667 * 03553 000 - 2658 - 1075 26000 * 03553 000 1808 3392 mg/l - 21000 * 03553 000 - 2892 - 1308 mg/l - 07333 03553 066 - 1525 0058 mg/l 07333 03553 066 - 0058 1525 mg/l 47000 * 03553 000 3908 5492 mg/l 21000 * 03553 000 1308 2892 mg/l 13667 * 03553 003 0575 2158 28333 * 03553 000 2042 3625 33333 * 03553 000 2542 4125 07333 03553 066 - 0058 1525 03553 03553 mg/l mg/l mg/l mg/l MTSR mg/l mg/l mg/l mg/l 2008 * mg/l mg/l 0659 2808 - 1459 40667 mg/l mg/l MTTR 1459 - 2808 mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 2- 13667 mg/l 14667 * * 002 003 mg/l - 0575 2258 03553 000 1075 2658 - 07333 03553 066 - 1525 0058 03553 000 - 3625 - 2042 03553 002 - 2258 - 0675 - 2158 mg/l 18667 * mg/l mg/l - 28333 * mg/l - 14667 * 0675 * The mean difference is significant at the 05 level Bảng Ảnh hƣởng PPT lên tái sinh chồi đốt mầm (Số liệu đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x trƣớc xử lý thống kê) MTD176 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoPPT N mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 21 1450 21 1450 mg/l mg/l 48 8457 mg/l 55 0447 mg/l 59 0044 59 0044 mg/l 71 5651 Sig 30 9956 105 148 156 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 070 HL0715 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoPPT N mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 21 1450 mg/l 43 0772 mg/l 51 1150 mg/l 54 7822 mg/l 74 6776 Sig 161 153 000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed OMDN29 Duncan Subset for alpha = 05 NongdoPPT N mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l 0974 mg/l mg/l 54 7822 mg/l 56 9675 mg/l 59 0044 mg/l Sig 30 9956 74 6776 000 000 521 000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Bảng 10 Ảnh hƣởng PPT lên sinh trƣởng đoạn thân (Số liệu đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x trƣớc xử lý thống kê) Multiple Comparisons 95% Confidence (I) Interval (J) Nongdo Nongdo Mean Difference Dependent Variable PPT PPT HL0715 mg/l mg/l 82254 mg/l 31 60038 mg/l 39 45977 mg/l 59 35511 LSD mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 65 58012 * * * * -5 82254 * Sig Bound Bound 38843 111 -1 5602 13 2053 38843 000 24 2176 38 9831 38843 000 32 0770 46 8425 38843 000 51 9723 66 7379 38843 000 58 1974 72 9629 38843 111 -13 2053 38843 000 18 3951 33 1606 5602 25 77784 mg/l 33 63724 * 38843 000 26 2545 41 0200 mg/l 53 53257 * 38843 000 46 1498 60 9153 mg/l 59 75758 * 38843 000 52 3748 67 1403 mg/l -31 60038 38843 000 -38 9831 -24 2176 mg/l -25 77784 38843 000 -33 1606 -18 3951 38843 039 4766 15 2422 38843 000 20 3720 35 1375 38843 000 26 5970 41 3625 38843 000 -46 8425 -32 0770 38843 000 -41 0200 -26 2545 38843 039 -15 2422 - 4766 38843 000 12 5126 27 2781 38843 000 18 7376 33 5031 38843 000 -66 7379 -51 9723 85939 mg/l 27 75473 mg/l 33 97974 mg/l -39 45977 mg/l -33 63724 * * * * * * * * mg/l -7 85939 mg/l 19 89534 mg/l 26 12034 mg/l -59 35511 mg/l -53 53257 * 38843 000 -60 9153 -46 1498 mg/l -27 75473 * 38843 000 -35 1375 -20 3720 mg/l -19 89534 * 38843 000 -27 2781 -12 5126 22501 38843 091 38843 75758 000 -72 9629 mg/l mg/l Std Error Upper mg/l mg/l mg/l (I-J) Lower mg/l -65 58012 * * * * mg/l mg/l mg/l -59 -1 1578 13 6078 -58 1974 * -33 97974 * -26 12034 * mg/l OMDN29 LSD mg/l mg/l mg/l mg/l MTD176 LSD mg/l 38843 000 -41 3625 -26 5970 38843 000 -33 5031 -18 7376 -6 22501 11 24261 * * 38843 091 -13 6078 1578 07194 003 5494 17 9358 07194 000 32 7666 46 1529 mg/l 43 68193 * 07194 000 36 9888 50 3751 mg/l 59 35511 * 07194 000 52 6619 66 0483 mg/l 65 58012 * 07194 000 58 8869 72 2733 mg/l -11 24261 * 07194 003 -17 9358 -4 5494 mg/l 28 21717 07194 000 21 5240 34 9103 mg/l 32 43932 * 07194 000 25 7461 39 1325 mg/l 48 11250 * 07194 000 41 4193 54 8057 mg/l 54 33751 * 07194 000 47 6443 61 0307 07194 000 -46 1529 -32 7666 * 07194 000 -34 9103 -21 5240 22216 07194 194 -2 4710 10 9153 07194 000 13 2022 26 5885 07194 000 19 4272 32 8135 07194 000 -50 3751 -36 9888 * 07194 000 -39 1325 -25 7461 -4 22216 07194 194 -10 9153 4710 07194 000 9800 22 3664 15 2050 28 5914 mg/l -39 45977 mg/l -28 21717 mg/l 19 89534 mg/l 26 12034 mg/l -43 68193 mg/l -32 43932 * * * * * * mg/l 15 67318 mg/l 21 89819 * 07194 000 mg/l -59 35511 * 07194 000 -66 0483 -52 6619 mg/l -48 11250 * 07194 000 -54 8057 -41 4193 mg/l -19 89534 * 07194 000 -26 5885 -13 2022 mg/l -15 67318 * 07194 000 -22 3664 -8 9800 22501 07194 066 12 9182 07194 000 -72 2733 -58 8869 mg/l mg/l -52 3748 39 45977 mg/l mg/l 000 -67 1403 mg/l mg/l mg/l 38843 * - 4682 mg/l -65 58012 mg/l -54 33751 * 07194 000 -61 0307 -47 6443 mg/l -26 12034 * 07194 000 -32 8135 -19 4272 mg/l -21 89819 * 07194 000 -28 5914 -15 2050 mg/l -6 22501 07194 066 -12 9182 4682 mg/l 93504 18418 016 * mg/l * 9973 15 8728 62 46762 68 69262 mg/l mg/l mg/l 36 63571 44 57915 * 18418 * 18418 * 18418 18418 000 37 6414 000 mg/l mg/l mg/l 61 7549 43 5734 18418 016 -15 8728 -1 9973 18418 000 20 7629 34 6384 27 70067 mg/l 35 64411 * 18418 000 28 7064 42 5818 mg/l 53 53257 * 18418 000 46 5949 60 4703 mg/l 59 75758 * 18418 000 52 8199 66 6953 mg/l -36 63571 * 18418 000 -43 5734 -29 6980 -27 70067 * 18418 000 -34 6384 -20 7629 mg/l 94344 * 18418 028 0057 14 8812 mg/l 25 83190 * 18418 000 18 8942 32 7696 32 05691 * 18418 000 25 1192 38 9946 mg/l -44 57915 * 18418 000 -51 5169 -37 6414 mg/l -35 64411 * 18418 000 -42 5818 -28 7064 mg/l -7 94344 18418 028 -14 8812 -1 0057 mg/l 17 88847 * 18418 000 10 9507 24 8262 mg/l 24 11347 * 18418 000 17 1758 31 0512 mg/l -62 46762 18418 000 -69 4053 -55 5299 mg/l -53 53257 * 18418 000 -60 4703 -46 5949 mg/l -25 83190 * 18418 000 -32 7696 -18 8942 mg/l -17 88847 * 18418 000 -24 8262 -10 9507 22501 18418 074 18418 000 -75 6303 -61 7549 mg/l mg/l 29 6980 mg/l mg/l mg/l * 75 6303 5299 * mg/l mg/l -8 93504 69 4053 55 000 000 51 5169 * * * - 7127 13 1627 mg/l -68 69262 mg/l -59 75758 * 18418 000 -66 6953 -52 8199 mg/l -32 05691 * 18418 000 -38 9946 -25 1192 mg/l -24 11347 * 18418 000 -31 0512 -17 1758 -6 22501 18418 074 -13 1627 7127 mg/l * The mean difference is significant at the 05 level Bảng 11 Kết khảo sát ảnh hƣởng việc sử dụng kim châm lên khả tái sinh đốt mầm (Số liệu đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x trƣớc xử lý thống kê) MTD176 Duncan Subset for alpha = 05 Solancham N lan lan 3 lan 71 5651 lan 74 6776 lan 74 6776 lan 77 7901 Sig 41 1543 54 7822 000 000 125 Means for groups in homogeneous subsets are displayed HL0715 Duncan Subset for alpha = 05 Solancham N lan lan lan 71 5651 lan 71 9675 lan 74 6776 lan 77 7901 Sig 37 2247 52 7753 000 000 194 Means for groups in homogeneous subsets are displayed OMDN29 Duncan Subset for alpha = 05 Solancham N lan lan 3 lan 71 9675 lan 74 6776 lan lan 39 2315 48 8457 3 74 6776 77 7901 Sig 000 000 244 Means for groups in homogeneous subsets are displayed ảng 12 Tỉ lệ mẫu dƣơng tính GUS xử l sóng siêu âm thời gian khác (Số liệu đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x trƣớc xử lý thống kê) Multiple Comparisons Dependent Variable:GUSsieuam (I) (J) 95% Confidence Interval Thoigia Thoigia Mean Difference LSD n n (I-J) 0s 15s -19 97912 30s -32 02667 45s 15s 30s 45s 60s Std Error * Sig Lower Bound Upper Bound 78926 000 -26 1940 -13 7643 * 78926 000 -38 2415 -25 8118 -32 02667 * 78926 000 -38 2415 -25 8118 60s -32 02667 * 78926 000 -38 2415 -25 8118 0s 19 97912 * 78926 000 13 7643 26 1940 30s -12 04755 * 78926 002 -18 2624 -5 8327 45s -12 04755 * 78926 002 -18 2624 -5 8327 60s -12 04755 * 78926 002 -18 2624 -5 8327 0s 32 02667 * 78926 000 25 8118 38 2415 15s 12 04755 * 78926 002 8327 18 2624 45s 00000 78926 000 -6 2149 2149 60s 00000 78926 000 -6 2149 2149 78926 000 25 8118 38 2415 * 78926 002 8327 18 2624 30s 00000 78926 000 -6 2149 2149 60s 00000 78926 000 -6 2149 2149 78926 000 25 8118 38 2415 * 78926 002 8327 18 2624 30s 00000 78926 000 -6 2149 2149 45s 00000 78926 000 -6 2149 2149 0s 32 02667 15s 12 04755 0s 32 02667 15s 12 04755 * * * The mean difference is significant at the 05 level ảng 13 Tỉ lệ đốt mầm dƣơng tính GUS xử l áp lực âm thời gian khác (Số liệu đƣợc chuyển đổi sang dạng arcsin√x trƣớc xử lý thống kê) Multiple Comparisons Dependent Variable:GUSaplucam (I) (J) 95% Confidence Interval Thoigia Thoigia Mean Difference LSD n n 0s 15s 15s 30s -3 92970 4326 30424 003 -20 0593 -5 3347 30424 001 -22 6548 -7 9302 30424 000 -37 4123 -22 6877 30424 262 -3 4326 11 2920 30424 024 -16 1296 -1 4050 30424 006 -18 7251 -4 0005 30424 000 -33 4826 -18 7580 30424 003 3347 20 0593 30424 024 4050 16 1296 30424 450 -9 9578 7668 30424 000 -24 7154 -9 9908 30424 001 9302 22 6548 * 30424 006 0005 18 7251 59550 30424 450 -4 7668 9578 30424 001 -22 1199 -7 3953 30424 000 22 6877 37 4123 60s -30 05004 * * * 92970 -8 76726 45s -11 36276 60s -26 12034 * 30s 12 69696 * * * * 15s 76726 45s -2 59550 -17 35308 0s 15 29246 15s 11 36276 60s Upper Bound -11 2920 -15 29246 0s Lower Bound 262 45s 0s Sig 30424 -12 69696 30s 60s Std Error 30s 60s 45s (I-J) -14 75758 * * * * 0s 30 05004 15s 26 12034 * 30424 000 18 7580 33 4826 30s 17 35308 * 30424 000 9908 24 7154 45s 14 75758 * 30424 001 3953 22 1199 * The mean difference is significant at the 05 level ... - NGHIÊN CỨU TẠO CÂY ĐẬU TƢƠNG (Glycine max L ) BIẾN ĐỔI GEN CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP ASTAXANTHIN CHUYÊN BIỆT Ở HẠT Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ... chuyển gen từ hoa Adonis aestivalis vào đậu tƣơng giúp có khả sản xuất astaxanthin chuyên biệt hạt, từ tạo sản phẩm đƣợc ứng dụng Mục tiêu đề tài Tạo đƣợc dòng đậu tƣơng biến đổi gen có khả tổng hợp. .. l? ?y với l? ?ợng l? ??n l? ??c l? ??p sắc l? ??p Trong l? ??c l? ??p, hầu hết 10 carotenoid đƣợc tích l? ?y dạng phức protein-chlorophill-chlorophyll màng thylakoid Carotenoid hạt đƣợc giữ ngăn elaioplasts (các l? ??p thể