Phân tích gen SLC25A13 trong chẩn đoán bệnh thiếu hụt citrin trên trẻ em

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ THỊ PHƯƠNG PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2018 2022 Hà Nội 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ THỊ PHƯƠNG PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM Ngành đào tạo Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã ngành 7720601 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2018 2022 Người hướng dẫn khoa học TS Tạ Văn Thạo H.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ THỊ PHƯƠNG PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2018-2022 Hà Nội-2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** LÊ THỊ PHƯƠNG PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM Ngành đào tạo : Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã ngành : 7720601 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2018-2022 Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Văn Thạo Hà Nội-2022 LỜI CẢM ƠN Báo cáo tốt nghiệp chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học tên đề tài là:“Phân tích gen SLC25A13 chẩn đoán bệnh thiếu hụt citrin trẻ em” kết q trình khơng ngừng nỗ lực thân giúp đỡ , động viên thầy cô, anh chị, bạn bè người thân Qua trang viết xin gửi lời cảm ơn tới người giúp đỡ suốt thời gian học tập nghiên cứu khoa học vừa qua Tôi xin tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc TS.Tạ Văn Thạo người trực tiếp tận tình hướng dẫn tơi cung cấp tài liệu thông tin khoa học cần thiết cho luận văn Xin chân thành cảm ơn với CN.Bùi Thị Thu Ths.Bùi Thị Bảo người trực tiếp hướng dẫn kỹ thuật hỗ trợ kiến thức chuyên mơn để hồn thiện nghiên cứu Đồng thời, xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể nhân viên trung tâm xét nghiệm Chemedic Việt Nam giúp đỡ , tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực nghiên cứu Cuối xin gửi lời cảm ơn tới Lãnh đạo trường Đại học y Hà Nội, Khoa Kỹ Thuật y học, Bộ mơn Hóa sinh lâm sàng tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt cơng việc nghiên cứu khoa học Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Phương LỜI CAM ĐOAN Tôi Lê Thị Phương, sinh viên khóa 2018-2022, chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS.Tạ Văn Thạo Nghiên cứu không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm cam kết Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Phương DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AGC Aspartate-glutamate carrier aa Acid amin bp Base pair CTLN2 Adult onset type II citrullinemia (Tăng citrulline máu type người lớn) dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate ddNTP Dideoxyribonucleotide triphosphate DNA Deoxyribonucleic Acid FTTDCD Failure to Thrive and Dyslipidemia Caused by Citrin Deficiency (Tăng trưởng chậm rối loạn lipid máu thiếu hụt citrin) NICCD Neonatal Intrahepatic Cholestasis Cause by Citrulline Deficiency (Vàng da ứ mật gan thiếu hụt citrin trẻ em) NST Nhiễm sắc thể NAD+ Nicotinamide Adenine Dinucleotide PCR Polymerase chain reaction PCR/RFLP PCR Restriction Fragment Length Polymorphism (phương pháp PCR sử dụng enzym giới hạn) SLC25A13 Solute Carrier Family 25, member 13 (Thành viên thứ 13 họ 25 protein vận chuyển hòa tan) MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH TĨM TẮT KHĨA LUẬN ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Dịch tễ học 1.1.3 Nguyên nhân gây bệnh 1.1.4 Triệu chứng 11 1.1.5 Cơ chế bệnh sinh 13 1.1.6 Chẩn đoán 16 1.1.7 Điều trị 17 1.2 Kỹ thuật sinh học phân tử xác định đột biến gen SLC25A13 17 1.2.1 Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) 17 1.2.2 Kỹ thuật giải trình tự gen Sanger 20 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 23 2.2 Đối tượng nghiên cứu 23 2.3 Phương pháp thiết kế nghiên cứu 23 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 23 2.3.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 23 2.3.3 Trang thiết bị, hóa chất sử dụng nghiên cứu 23 2.3.4 Sơ đồ nghiên cứu 26 2.4 Đạo đức nghiên cứu 34 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 35 3.2 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 37 3.2.1 Kết tách chiết DNA 37 3.2.2 Kết điện di sản phẩm PCR 38 3.1.1 Kết giải trình tự gen phát đột biến gen SLC25A13 39 Chương 4: BÀN LUẬN 41 KẾT LUẬN 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 28 Đột biến gen SLC25A13 gây bệnh thiếu Citrin (theo NCBI) Bảng 2.1 Các thiết bị-vật tư tiêu hao 23 Bảng 2.2 Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu để phát 28 đột biến 25 Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi, giới 35 Bảng 3.2 Kết sàng lọc rối loạn chuyển hóa bẩm sinh MSMS 35 Bảng 3.3 Kết xét nghiệm sinh hóa máu 36 Bảng 3.4 Kết xét nghiệm đông máu thời gian Prothrombin 37 Bảng 3.5 Kết kiểm tra nồng độ độ tinh DNA 38 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Vị trí gen SLC25A13 Hình 1.2 Mơ hình cấu trúc miền citrin Hình 1.3 Mơ hình cấu trúc EF-hand Hình 1.4 Cơ chế điều hòa canxi citrin ti thể Hình 1.5 Cấu tạo miền chất mang Hình 1.6 Sự vận chuyển glutamate, aspartate citrin Hình 1.7 Vai trò citrin q trình chuyển hóa chất 10 Hình 1.8 Các giai đoạn phát triển thiếu citrin 11 Hình 1.9 Chu trình Ure 13 Hình 1.10 Con thoi malate-aspartate 14 Hình 1.11 Con thoi malate-citrate 16 Hình 1.12 Thành phần nguyên lý phản ứng PCR 19 Hình 1.13 Sơ đồ khối máy giải trình tự gen tự động 21 Hình 1.14 Sự khác dNTP ddNTP 22 Hình 3.2 Kết điện di DNA mẫu 01 38 Hình 3.2.Hình ảnh giải trình tự đoạn gen chứa đột biến vị trí 132776 39 TĨM TẮT KHĨA LUẬN Phân tích gen SLC25A13 chẩn đốn bệnh thiếu hụt citrin trẻ em Thiếu hụt citrin trẻ em thể bệnh liên quan đến đột biến gen SLC25A13 Ở trẻ em, bệnh biểu kiểu hình phụ thuộc vào độ tuổi là: NICCD trẻ sơ sinh FTTDCD trẻ lớn tuổi, liên quan đến nhiều thay đổi lâm sàng, sinh hóa, hình ảnh mơ gan chuyển hóa Và phân tích di truyền SLC25A13 cơng cụ hữu ích công nhận phương pháp đáng tin cậy giúp chẩn đoán xác định thiếu hụt citrin Nghiên cứu tiến hành nhằm xác định đột biến gen SLC25A13 phương pháp giải trình tự gen Sanger phân tích đặc điểm đột biến Cỡ mẫu gồm mẫu bệnh nhân sàng lọc nghi ngờ thiếu hụt citrin, kết giải trình tự thu phát kiểu đột biến số I (c.851delGTAT (p.Met285ProfsTer2)) dạng đồng hợp tử gen mẫu, đột biến dịch khung dẫn đến làm cắt ngắn protein Với kỹ thuật giải trình tự gen Sanger, nghiên cứu phân tích gen SLC25A13 chẩn đốn bệnh thiếu hụt citrin có ý nghĩa vơ quan trọng điều trị đặc hiệu sớm, hạn chế biến chứng giảm tỷ lệ tử vong đối tượng bệnh nhi vàng da ứ mật thiếu hụt citrin, tiền đề cho tư vấn di truyền Từ khóa: thiếu hụt citrin, NICCD, FTTDCD, SLC25A13 37 Nhận xét: • mẫu M3 M4 sử dụng khoảng tham chiếu khác khác độ tuổi giới tính • Kết từ Bảng 3.3 cho thấy: - Ở mẫu M3 nhận thấy có tăng triglycerid - Mẫu M4, GGT tăng nhẹ ( < lần so với giới hạn trên), tăng lactat máu Bảng 3.4 Kết xét nghiệm đông máu thời gian Prothrombin Xét Mẫu Khoảng tham Mẫu Khoảng tham nghiệm M3 chiếu M4 chiếu PT (%) 112 70-140 99 70-140 PT (s) 10,2 13,1 11,0 11,2 PT (inr) 0,93 0,86-1,22 1,01 0,93-1,10 Nhận xét: - Khoảng tham chiếu sử dụng cho mẫu M3 M4 khác khác độ tuổi giới tính - Kết từ Bảng 3.4 cho thấy khơng có bất thường số đông máu 3.2 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 3.2.1 Kết tách chiết DNA Các mẫu máu thực tách chiết DNA theo quy trình kiểm tra nồng độ độ tinh máy quang phổ Fastgene NanoView Kết thu được thể Bảng 3.5 38 Bảng 3.5 Kết kiểm tra nồng độ độ tinh DNA Mẫu Nồng độ (ng/µl) A260 A260/280 M1 18,5 0,369 1,808 M2 19,1 0,381 1,867 M3 35,9 0,719 1,892 M4 37,6 0,750 1,973 Nhận xét: Kết đo nồng độ DNA mẫu máu có nồng độ đạt >10 ng/µl có độ tinh cao với tỷ số mật độ quang bước sóng 260/280 nm nằm khoảng 1,8-2,0 Sản phẩm tách chiết DNA đủ điều kiện để tiến hành bước 3.2.2 Kết điện di sản phẩm PCR Mẫu DNA sau tách chiết chạy phản ứng PCR theo điều kiện khảo sát, sau chạy điện di thạch Agarose 2% Kết Hình 3.1 Hình 3.1 Kết điện di DNA mẫu 01 Chú thích: 1.1-primer 1, 1.2-primer 2, 1.3-primer 3, 1.4-primer 4, 1.5-primer 5, 1.6-primer 6, 1.7-primer 7, 1.8-primer 8, 1.9-primer 9, 1.10-primer 10, 1.11-primer 11 39 Nhận xét: Hình ảnh kết điện di sản phẩm PCR mẫu bệnh nhân thu vạch sản phẩm sáng rõ, đơn băng, chiều dài sản phẩm phù hợp với lý thuyết với mẫu DNA chứng 3.1.1 Kết giải trình tự gen phát đột biến gen SLC25A13 Sản phẩm PCR sau tinh tiến hành chạy giải trình tự gen theo phương pháp Sanger Kết thu được phân tích kết phần mềm Unipro UGENE, so sánh với gen SLC25A13 tải từ thư viện gen NCBI (Homo sapiens Updated Annotation Release 109.20191205, GRCh38.p13) tương tự thực với mẫu chứng Kết quả: mẫu phát đột biến đồng hợp tử gen thuộc loại đột biến số 11 (rs80338720, I(851.delGTAT)) (A) (B) Hình 3.2.Hình ảnh giải trình tự đoạn gen chứa đột biến vị trí 132776 (A)Mẫu chứng (B)Mẫu bệnh chứa đột biến I - c.851delGTAT (p.Met285ProfsTer2)ở dạng đồng hợp tử 40 Kết hình cho thấy sản phẩm giải trình tự rõ nét, đỉnh màu tương ứng với nucleotide rõ ràng khơng có tín hiệu nhiễu Tại điểm không phát đột biến, vị trí nucleotide tương ứng gen xuất peak đơn lẻ, kết tương tự với mẫu chứng (Hình 3.2A) trình tự gen so sánh Tại vị trí phát đột biến số 11 (I(851.delGTAT) dạng đồng hợp tử (Hình 3.2B), hình ảnh cho thấy đoạn gen giải trình tự bị nucleotide GTAT 41 Chương BÀN LUẬN Đột biến gen SLC25A13 lần Keiko Kobayashi cộng phát Nhật Bản vào năm 1999, cách phân tích lập đồ đồng hợp tử bệnh nhân Sử dụng nhân vị trí phát đột biến [I], [II], [III], [IV], [V] Cho tới có 50 kiểu đột biến gen SLC25A13 phát công bố toàn giới với đặc trưng theo vùng địa lý Nhờ phát triển sinh học phân tử mà nhiều kỹ thuật được áp dụng để xác định đột biến gen SLC25A13 PCR/RFLP, giải trình tự gen Sanger, giải trình tự gen hệ Next generation sequencing – NGS Trong nghiên cứu chúng tơi sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen Sanger để xác định đột biến gen SLC25A13 gây bệnh thiếu hụt citrin trẻ em Việt Nam Sau tiến hành giải trình tự mẫu thu được, kết phát đột biến I - c.851delGTAT (p.Met285ProfsTer2) xuất dạng đồng hợp tử mẫu bệnh nhân Đột biến làm đoạn chứa nucleotide GTAT tương ứng với codon 851-854 exon số 9, đột biến dịch khung acid amin Methionin thứ 285 Sự thay đổi trình tự dẫn đến tạo tín hiệu kết thúc dịch mã sớm gen SLC25A13 làm gián đoạn tổng hợp protein Hậu phân tử protein Citrin hình thành ngắn bình thường Do phân loại vào đột biến gây bệnh làm chức gen Về mặt tần suất phát hiện, đột biến phổ biến gây thiếu hụt citrin Trung quốc (chiếm 58.3 - 70%) phổ biến thứ hai gây bệnh Nhật Bản (20%), kết tần suất phụ thuộc nghiên cứu Tại Việt Nam, nghiên cứu Nguyễn Phạm Anh Hoa (2012), Bùi Đình Dương (2021), tần suất phát loại đột biến báo cáo 95,3% (41/43) 93,3% (14/15) so với tổng số alen mang đột biến, đột biến dạng đồng hợp tử chiếm 82,9% (34/41) 42 85,7% (12/14) 1,20Trong khn khổ khóa luận tốt nghiệp, nghiên cứu tiến hành cỡ mẫu nhỏ (4 bệnh nhân) nên chưa thể khẳng định tỷ lệ phát đột biến gen SLC25A13 Nghiên cứu nên mở rộng cỡ mẫu lớn hơn, có so sánh với mẫu người bình thường để có nhìn tổng quan tỷ lệ đột biến đa hình quần thể người Việt Nam Khi nhìn lại kết cận lâm sàng bệnh nhân, ta thấy rằng: với kết sàng lọc rối loạn chuyển hóa bẩm sinh MSMS bệnh nhân M1 M2, cho thấy nồng độ citrulline tăng cao bệnh nhân; kết sinh hóa máu bệnh nhân M3 M4, cho thấy M3 có tăng triglyceride, M4 có GGT tăng nhẹ; kết xét nghiệm đông máu bệnh nhân M3, M4 cho thấy khơng có bất thường số (Bảng 3.2, Bảng 3.3, Bảng 3.4) Thiếu citrin bệnh nhân NICCD gây nên bất thường q trình chuyển hóa acid amin khiến nồng độ số acid amin tăng máu, đặc biệt nồng độ citrulline Trong nghiên cứu Fu Hai-yan cộng (2013) khảo sát đặc điểm phổ acid amin huyết tương trẻ sơ sinh bị ứ mật gan thiếu citrin nhằm xác định dấu hiệu sàng lọc NICCD Nghiên cứu thực 182 trẻ sơ sinh chia làm nhóm: 24 trẻ chẩn đốn mắc NICCD, 20 trẻ chẩn đoán thiểu sản đường mật (biliary atresia-BA), cịn lại nhóm chẩn đốn viêm gan sơ sinh vô (idiopathic neonatal intrahepatic hepatitis-INH) Kết so sánh nhóm với nhau, thấy nhóm NICCD có mức citrulline tăng đáng kể so với nhóm cịn lại (97,42 µmol/l so với 15,09 15,65) giá trị tỉ lệ Cit/Ala 0,14 để chẩn đoán NICCD thì độ nhạy độ đặc hiệu 75% 95% Kết luận sử dụng nồng độ citrulline tỷ lệ Cit/Ala làm dấu ấn sàng lọc NICCD.21 43 Theo kết nghiên cứu khác CF Tang cộng (2019), định lượng acid amin máu trẻ em thiếu hụt citrin cho thấy mức độ gia tăng nhiều axit amin bao gồm citrulline, tyrosine, methionine phenylalanine, giảm tỷ lệ Ala/Cit Sử dụng citrulline tỷ lệ Ala/Cit làm chất đánh dấu sàng lọc cải thiện giá trị tiên đốn dương tính với NICCD Bệnh nhân sàng lọc dương tính với NICCD Cit tăng ngưỡng bình thường tỷ lệ Ala/Cit ≤ 7,5.22 Đối chiếu với nghiên cứu này, cho thấy kết sàng lọc bệnh nhân M1, M2 phù hợp với trường hợp thiếu hụt citrin Chỉ số nồng độ citrulline máu tăng dấu ấn điểm quan trọng chẩn đoán bước đầu nghĩ đến bệnh lý thiếu hụt citrin Tuy nhiên, tăng số bệnh khác, điển Citrullinemia type (CTLN1), kết thiếu hụt enzyme argininosuccinate nguyên phát gây đột biến di truyền lặn NST thường Bệnh nhân M4 mang đột biến loại I đồng hợp tử, thuộc nhóm tuổi, dựa vào độ tuổi xếp bệnh nhân vào giai đoạn FTTDCD Với giai đoạn bệnh FTTDCD, số sinh hóa nồng độ citrulline, amoniac nằm khoảng bình thường tăng Sự rối loạn lipid máu giai đoạn bệnh biểu tăng nồng độ triglyceride, cholesterol máu.23 Đối chiếu với kết cận lâm sàng cho thấy, bệnh nhân hoạt độ enzym GGT tăng nhẹ (< lần so với giới hạn trên), nhiên định lượng triglyceride cholesterol cho thấy nồng độ nằm khoảng giá trị bình thường, xét nghiệm khác bình thường, không cho thấy đặc điểm rối loạn lipid máu Thông thường, bệnh nhân FTTDCD có đặc điểm kiểu hình rối loạn mỡ máu, nhiên khơng phải trường hợp bệnh có đặc điểm 44 Với xét nghiệm đông máu, kết cho thấy khơng có bất thường số rối loạn đơng máu thường xảy với giai đoạn bệnh tiến triển nặng Như vậy, kết cận lâm sàng mang tính chất sàng lọc, dựa vào kết thì chưa thể chẩn đoán bệnh thiếu hụt citrin Mà thay vào cần phải có phân tích di truyền gen xác định bệnh Do phân tích gen SLC25A13 coi tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán bệnh thiếu hụt citrin 45 KẾT LUẬN Căn vào kết trên, xin rút kết luận sau: Nghiên cứu phát kiểu đột biến đồng hợp tử rs80338720 (I(851delGTAT)) tất 04 mẫu phương pháp giải trình tự Sanger TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Phạm Anh Hoa Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng theo dõi sau điều trị bệnh thiếu citrin trẻ em Luận Án Tiến Sĩ Học Chuyên Ngành Nhi Khoa 2012 Yasuda T, Yamaguchi N, Kobayashi K, et al Identification of two novel mutations in the SLC25A13 gene and detection of seven mutations in 102 patients with adult-onset type II citrullinemia Hum Genet 2000;107(6):537-545 Lu YB, Kobayashi K, Ushikai M, et al Frequency and distribution in East Asia of 12 mutations identified in the SLC25A13 gene of Japanese patients with citrin deficiency J Hum Genet 2005;50(7):338-346 Thangaratnarajah C, Ruprecht JJ, Kunji ERS Calcium-induced conformational changes of the regulatory domain of human mitochondrial aspartate/glutamate carriers Nat Commun 2014;5(1):5491 Grisar T, Lakaye B, Nijs L de, LoTurco JJ, Daga A, Delgado-Escueta AV Myoclonin1/EFHC1 in Cell Division, Neuroblast Migration, and Synapse/Dendrite Formation in Juvenile Myoclonic Epilepsy Oxford University Press; 2012 Ruprecht JJ, Kunji ERS The SLC25 Mitochondrial Carrier Family: Structure and Mechanism Trends in Biochemical Sciences 2020;45(3):244-258 Saheki T, Kobayashi K, Iijima M, et al Pathogenesis and pathophysiology of citrin (a mitochondrial aspartate glutamate carrier) deficiency Metab Brain Dis 2002;17(4):335-346 Saheki T, Kobayashi K, Terashi M, et al Reduced carbohydrate intake in citrin-deficient subjects J Inherit Metab Dis 2008;31(3):386-394 Nakamura M, Yazaki M, Kobayashi Y, et al The characteristics of food intake in patients with type II citrullinemia J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo) 2011;57(3):239-245 10 Ohura T, Kobayashi K, Tazawa Y, et al Clinical pictures of 75 patients with neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency (NICCD) Journal of Inherited Metabolic Disease 2007;30(2):139-144 11 Okamoto M, Okano Y, Okano M, et al Food Preferences of Patients with Citrin Deficiency Nutrients 2021;13(9):3123 12 Ben-Shalom E, Kobayashi K, Shaag A, et al Infantile citrullinemia caused by citrin deficiency with increased dibasic amino acids Mol Genet Metab 2002;77(3):202-208 13 Saheki T, Kobayashi K Mitochondrial aspartate glutamate carrier (citrin) deficiency as the cause of adult-onset type II citrullinemia (CTLN2) and idiopathic neonatal hepatitis (NICCD) J Hum Genet 2002;47(7):333-341 14 Wang LY, Chen NI, Chen PW, et al Newborn screening for citrin deficiency and carnitine uptake defect using second-tier molecular tests BMC Medical Genetics 2013;14(1):24 15 Hayasaka K Metabolic basis and treatment of citrin deficiency J Inherit Metab Dis 2021;44(1):110-117 16 Hayasaka K, Numakura C, Watanabe H Treatment and Pathomechanism of Citrin Deficiency Brain Nerve 2015;67(6):739-747 17 Tạ Thành Văn PCR Một Số Kỹ Thuật y Sinh Học Phân Tử Nhà xuất y học Hà Nội; 2010 18 Mullis KB, Faloona FA Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction Methods Enzymol 1987;155:335350 19 Sanger F, Nicklen S, Coulson AR DNA sequencing with chainterminating inhibitors Proc Natl Acad Sci U S A 1977;74(12):5463-5467 20 Bùi Đình Dương Xác Định Đột Biến Gen SLC25A13 Gây Bệnh Thiếu Hụt Citrin Trẻ Em Đại học y Hà Nội; 2021 21 Fu H yan, Wang X hong, Lu Y, et al Characteristics of the plasma amino acid spectrum of neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi 2013;21(12):934-939 22 Tang CF, Liu SC, Feng Y, et al Newborn screening program and blood amino acid profiling in early neonates with citrin deficiency Zhonghua Er Ke Za Zhi 2019;57(10):797-801 23 Song YZ, Yazaki M, Saheki T Citrin Deficiency In: Oohashi T, Tsukahara H, Ramirez F, Barber CL, Otsuka F, eds Human Pathobiochemistry: From Clinical Studies to Molecular Mechanisms Springer; 2019:3-14 doi:10.1007/978-981-13-2977-7_1 Phụ lục CÁC KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM CẬN LÂM SÀNG Đặc điểm tuổi, giới STT M1 Tên Tuổi Giới NTL tháng tuổi Nữ M2 HTH tháng tuổi M3 NVT tháng tuổi Nam M4 NNM 12 tuổi Nữ Nữ Kết xét nghiệm sinh hóa Chỉ số Mẫu M1 Mẫu M2 Mẫu M3 Mẫu M4 Alanine 108,96 219,97 N/A N/A Aspartic 44,19 41,67 N/A N/A Citrulline 160,58 462,68 N/A N/A Glutamic acid 227,91 326,2 N/A N/A Glycine 213,18 109,16 N/A N/A Leucine 70,57 136,54 N/A N/A Lysine 180,68 379,81 N/A N/A Methionine 17,44 68,3 N/A N/A Ornithine 70,97 223,11 N/A N/A Phenylalanine 193,53 57,8 N/A N/A Proline 97,77 205,91 N/A N/A Serine 114,29 216,5 N/A N/A Tyrosine 220,85 221,49 N/A N/A Valine 124,29 145,44 N/A N/A Protein toàn phần N/A N/A 65,8 72 Albumin N/A N/A 40,4 40,1 Cholesterol N/A N/A 4,85 5.03 GOT N/A N/A 42,0 30,7 GPT N/A N/A 19,9 20,3 Gama GT N/A N/A 59,2 24,2 Triglyceride N/A N/A 7,57 0,91 Amoniac N/A N/A 28 31 Lactat N/A N/A 1,70 1,40 *N/A: khơng tìm thấy Kết xét nghiệm đông máu thời gian prothrombin Xét nghiệm Mẫu M1 Mẫu M2 Mẫu M3 Mẫu M4 PT (%) N/A N/A 112 70-140 PT (s) N/A N/A 10,2 11,2 PT (inr) N/A N/A 0,93 0,93-1,10 Kết tổng phân tích tế bào máu ngoại vi Chỉ số Mẫu M1 Mẫu M2 Mẫu M3 Mẫu M4 WBC N/A N/A 9,99 6,78 %NEU N/A N/A 17,0 47,2 %LYM N/A N/A 71,7 41,6 %MO N/A N/A 7,5 8,2 %EO N/A N/A 1,2 2,6 %BA N/A N/A 2,6 0,4 NEUT N/A N/A 1,70 3,2 LYM N/A N/A 7,17 2,82 MO N/A N/A 0,75 0,56 EO N/A N/A 0,12 0,18 BA N/A N/A 0,26 0,03 RBC N/A N/A 3,88 4,62 HGB N/A N/A 116 135 HCT N/A N/A 34,2 40,3 MCV N/A N/A 88,1 87,2 MCH N/A N/A 30,0 29,2 MCHC N/A N/A 341 335 RDW-CV N/A N/A 13,5 13,8 PLT N/A N/A 233 212 MPV N/A N/A 8,2 8,8 PDW N/A N/A 17,22 17,59 PCT N/A N/A 0,1902 0,1865 ... tốt công việc nghiên cứu khoa học Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Phương LỜI CAM ĐOAN Tôi Lê Thị Phương, sinh viên khóa 2018-2022, chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học, xin... cấp tài liệu thông tin khoa học cần thiết cho luận văn Xin chân thành cảm ơn với CN.Bùi Thị Thu Ths.Bùi Thị Bảo người trực tiếp hướng dẫn kỹ thuật hỗ trợ kiến thức chun mơn để hoàn thiện nghiên...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** LÊ THỊ PHƯƠNG PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐỐN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM Ngành đào tạo