Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora Hemsl.) tt

A BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU Nguyễn Thị Hồng Anh NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA LOÀI TỎA DƯƠNG (BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL ) Chuyên ngành Dược liệu Dược học cổ truyền Mã số 972 02 06 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2022 Công trình hoàn thành tại Viện Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội Người hướng dẫn khoa học 1 PGS TS Đỗ Thị Hà 2 PGS TS Nguyễn Thùy Dương Phản biện 1 PGS TS Phương Thiện Thương Phản biện 2 PGS TS Nguyễ.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU Nguyễn Thị Hồng Anh NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA LOÀI TỎA DƯƠNG (BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL.) Chuyên ngành: Dược liệu - Dược học cổ truyền Mã số: 972.02.06 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2022 Cơng trình hồn thành tại: - Viện Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đỗ Thị Hà PGS TS Nguyễn Thùy Dương Phản biện 1: PGS TS Phương Thiện Thương Phản biện 2: PGS TS Nguyễn Thu Hằng Phản biện 3: PGS TS Bùi Thanh Tùng Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện tổ chức Viện Dược liệu Vào hồi……….giờ, ngày…… tháng……….năm …… Có thể tìm đọc Luận án tại: - Thư viện Quốc gia Hà Nội - Thư viện Viện Dược liệu A GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết luận án Ở Việt Nam, có nhiều lồi thuộc chi Dó đất (Balanophora) họ Dó đất (Balanophoraceae) sử dụng nhiều dân gian dùng làm thuốc bổ, kích thích tiêu hóa tăng cường khả sinh dục …, loài Tỏa dương B laxiflora dùng phổ biến Loài Tỏa dương B laxiflora sử dụng làm thuốc chữa đau đầu, đau lưng, đinh nhọt, tăng cường khả sinh dục thuốc kích thích tiêu hóa phục hồi sức khỏe cho phụ nữ sau sinh Các nghiên cứu thành phần hóa học loài B laxiflora cho thấy loài chứa đa dạng nhóm hợp chất như: tannin, lignan, flavonoid, terpenoid, steroid … Tổng quan tài liệu nghiên cứu tác dụng sinh học loài Tỏa dương cho thấy cao toàn phần, cao phân đoạn số hợp chất phân lập từ lồi Tỏa dương B laxiflora có tác dụng chống viêm rõ rệt Cho đến nay, nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi B laxiflora ở Việt Nam cịn hạn chế, có vài cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Tỏa dương tăng cường sinh dục chưa có cơng bố hoạt tính chống viêm lồi Chính vậy, nhằm làm rõ thành phần hóa học hoạt tính chống viêm loài loài B laxiflora ở Việt Nam tạo sở khoa học việc sử dụng bền vững tài nguyên thuốc này, đồng thời tạo tiền đề cho nghiên cứu việc tạo chế phẩm có hoạt tính sinh học cao phục vụ cơng tác bảo vệ, chăm sóc sức khỏe cộng đồng, lựa chọn thực đề tài luận án: “Nghiên cứu thực vật, thành phần hoá học tác dụng chống viêm loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora Hemsl.)” Mục tiêu nội dung Luận án 2.1 Mục tiêu Luận án Mục tiêu Xác định tên khoa học, mơ tả đặc điểm hình thái đặc điểm vi học Tỏa dương Mục tiêu Nghiên cứu thành phần hóa học Tỏa dương Mục tiêu Đánh giá tác dụng chống viêm cao toàn phần, cao phân đoạn số hợp chất phân lập từ Tỏa dương 2.2 Nội dung Luận án ➢ Về thực vật - Mô tả đặc điểm hình thái, giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu - Xác định đặc điểm giải phẫu số phận đặc điểm bột dược liệu Tỏa dương ➢ Về thành phần hóa học - Định tính có mặt nhóm hợp chất chủ yếu có Tỏa dương - Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất tinh khiết từ Tỏa dương ➢ Về tác dụng chống viêm - Đánh giá tác dụng chống viêm chống oxy hóa in vitro cao chiết hợp chất phân lập từ Tỏa dương - Đánh giá tác dụng chống viêm in vivo (chống viêm cấp viêm mạn) cao chiết số hợp chất phân lập từ Tỏa dương Những đóng góp Luận án 3.1 Về thực vật học Luận án tài liệu mô tả chi tiết đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi phẫu thân, rễ bột thân loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora Hemsl.) 3.2 Về hóa học Từ phần mặt đất lồi Tỏa dương Balanophora laxiflora Hemsl phân lập xác định cấu trúc hóa học 27 hợp chất, có hợp chất (8S,8ʹS)secoisolariciresinol-9ʹ-O-β-ᴅ-glucopyranosid, balanophorosid B, balanophoron, balanophoroside A, balanolaxin; 10 hợp chất lần phân lập từ chi Dó đất Balanophora: salicifoliol, (8S,7ʹR,8ʹS)-isolariciresinol 9-O-βᴅ-glucopyranosid, p-hydroxybenzaldehyd, piceol (p-hydroxy acetophenon), trans–p–coumaryl aldehyd, 6-O-galloyl-1-O-E-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose, (21β)-22-hydroxyhopan-3-on, (21α)-22-hydroxyhopan-3-on, deacetyl asperulosidic acid, 1-O-(3-methylbutyl)-6-O-β-ᴅ-xylopyranosyl- (1→6)-β-ᴅ2 glucopyranose; hợp chất lần phân lập từ loài Balanophora laxiflora Hemsl bao gồm : (8R,8ʹR)-secoisolariciresinol-4-O-β-ᴅglucopyranosid, (8R,7′S,8′R)-lariciresinol-4ʹ-O-β-ᴅ-glucopyranosid, coniferyl aldehyd β-ᴅ-glucopyranosid 4-O-galloyl-1-O-E-caffeoyl-β-ᴅglucopyranose; hợp chất biết khác là: (8S,7ʹR,8ʹS)-isolariciresinol 4-Oβ-ᴅ-glucopyranosid, ferulic aldehyd, ethyl caffeat, coniferin, 1-O-E-caffeoylβ-ᴅ-glucopyranose, lupeol, β-amyrin, 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyd 3.3 Về tác dụng chống viêm Luận án công bố tác dụng chống viêm loài Balanophora laxiflora Hemsl Luận án công bố về: - Tác dụng chế chống viêm in vitro hợp chất (21α)-22hydroxyhopan-3-on (BL23): ức chế mức độ biểu gen COX-2, TNFα, IL1β, INFβ iNOS tế bào RAW 264.7 gây kích thích viêm bởi LPS - Tác dụng chống viêm in vivo hợp chất BL23, cao toàn phần ethanol cao phân đoạn ethyl acetat từ lồi Tỏa dương mơ hình viêm cấp mạn tính - Tác dụng dọn gốc tự DPPH superoxide hợp chất BL23, cao toàn phần ethanol cao phân đoạn ethyl acetat từ loài Tỏa dương Ý nghĩa luận án -Ý nghĩa khoa học : kết nghiên cứu thực vật xác định giúp cho kết nghiên cứu hóa học tác dụng sinh học khẳng định rõ nguồn gốc Kết nghiên cứu thành phần hóa học giúp bổ sung tư liệu cho ngành hóa học hợp chất thiên nhiên nói chung chi Balanophora lồi Balanophora laxiflora nói riêng Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm Tỏa dương Balanophora laxiflora góp phần giải thích kinh nghiệm sử dụng dân gian làm sở cho việc sử dụng Tỏa dương đồng thời sở khoa học mở triển vọng nghiên cứu đầy đủ để sử dụng rộng rãi dược liệu theo hướng điều trị bệnh liên quan đến viêm - Ý nghĩa thực tiễn : Làm sở khoa học để phát triển nguồn nguyên liệu Tỏa dương làm thuốc quý góp phần bảo tồn tài nguyên dược liệu Bố cục luận án Luận án có 143 trang, gồm chương, 39 bảng, 48 hình, 233 tài liệu tham khảo 28 phụ lục Các phần luận án: Đặt vấn đề (2 trang), Tổng quan (39 trang), Đối tượng phương pháp nghiên cứu (15 trang), Kết nghiên cứu (61 trang), Bàn luận (23 trang), Kết luận kiến nghị (3 trang) B NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Đã tổng hợp trình bày cách hệ thống kết nghiên cứu từ trước đến thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học chi dó đất Balanophora lồi Balanophora laxiflora Hemsl giới ở Việt Nam; đồng thời tổng hợp thông tin tổng quan viêm CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu Mẫu nghiên cứu phần mặt đất Tỏa dương thu hái Khoang, thị xã Sapa, tỉnh Lào Cai vào tháng 11/2015 tháng 10/2017 Các Tiêu mẫu lưu Khoa Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược liệu (Số tiêu TB-16409) Phòng Thực vật học – Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật (Số tiêu BSp2) 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Thẩm định tên khoa học loài nghiên cứu sở phân tích đặc điểm hình thái thực vật, so sánh với tài liệu công bố lồi khóa phân loại thực vật - Xác định đặc điểm vi phẫu phần mặt đất, phần rễ đặc điểm bột dược liệu phương pháp hiển vi - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa thông số vật lý phương pháp phổ, ESI-MS, HR-EI-MS, NMR chiều chiều, CD kết hợp đối chiếu với tài liệu công bố - Đánh giá tác dụng chống viêm in vitro Tỏa dương mơ hình kích thích đại thực bào RAW 264.7 ức chế mức độ biểu gen COX-2, TNFα, IL-1β, INFβ iNOS - Đánh giá chế chống viêm in vitro Tỏa dương mơ hình kích thích đại thực bào RAW 264.7 ức chế hoạt động enzym NOX, ức chế giải phóng ROS, ức chế q trình phosphoryl hóa MAPK ức chế q trình mã AP-1 - Đánh giá tác dụng chống oxy hóa Tỏa dương mơ hình dọn gốc tự DPPH superoxid - Đánh giá tác dụng chống viêm in vivo Tỏa dương mơ hình: gây phù chân chuột carrageenan, mơ hình gây u hạt viên - Phương pháp xử lý số liệu : Sử dụng phần mềm thống kê SPSS 20 để xử lý số liệu Kết biểu diễn dạng M ± SE (M: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn) CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết nghiên cứu thực vật 3.1.1 Thẩm định tên khoa học Đã giám định tên khoa học loài Tỏa dương thu hái thị xã Sa pa, tỉnh Lào Cai Balanophora laxiflora Hemsl., thuộc họ dó đất Balanophoraceae 3.1.2 Đặc điểm hình thái Cây đơn tính khác gốc, sống ký sinh rễ số loài khác, khơng có diệp lục, màu đỏ tới đỏ đậm nâu vàng, đơi đỏ tía Thân rễ nạc, phân nhánh, dạng gần cầu, 1-4 x 1-3,5 cm, bề mặt sần sùi màu nâu vàng, bao phủ bởi nhiều đốm thơ ráp, vàng nhạt, hình Lá 8-14, mọc so le, ôm lấy gốc, dạng thuôn dài 1,5-2,5 x 1-1,5 cm, đầu nhọn Cuống hoa 5-10 cm Cụm hoa đực hình trụ, kích thước 3-18 x 0,5 – cm, chóp nhọn Hoa đực gần khơng cuống, đối xứng hai bên, hoa nhỏ, xếp thành vòng đặn trục hoa; bao hoa màu đỏ đỏ cam, chia (4) thùy, 2-3 mm; thùy (đối diện nhau) lớn cụt đầu, mảnh bên hình trứng tam giác; khối phấn bị ép ngang Hoa dạng đĩa mở rộng theo chiều ngang, đường kính 4,5-7 mm; Bao phấn vỡ thành nhiều ô, mở bởi đường rạch/ kẽ hở ngắn Cụm hoa hình cầu – trứng trứng thn, 2-6 x 0,8-2 cm, đỉnh nhọn Hoa hình gần chùy, dạng trứng ngược bầu dục thuôn, dài đến 1,5 mm; hoa khơng có bao hoa, mọc ở quanh chân vảy bảo vệ; vảy hình trứng lõm ở đỉnh, kích thước 0,1-0,2 x 0,2 mm; vòi nhụy dài 0,3-0,5 mm; 3.1.3 Đặc điểm vi học * Vi phẫu thân khí sinh: Thiết diện ngang thân hình trịn gần trịn Cấu tạo vi phẫu thân gồm chủ yếu mô mềm, mô mạch mơ nâng đỡ phát triển Biểu bì gồm hàng tế bào nhỏ xếp sát Mô mềm ở vùng vỏ mang nhiều chất tiết Rải rác mơ mềm có giọt dầu sợi cứng Bó mạch gồm libe bao quanh mạch gỗ phát triển, mạ ch gỗ cấp I dạng mạch xoắn * Vi phẫu thân rễ: Lớp bần gồm tế bào hình trứng hình cầu, xếp lộn xộn Mơ mềm chiếm phần lớn thể tích thân rễ, gồm tế bào kích thước lớn, thành mỏng, chứa chất tiết giọt dầu, tập trung nhiều ở vùng ngồi Các bó mạch nằm rải rác mơ mềm phân cách bởi 4-5 hàng tế bào hóa gỗ, tế bào thường hẹp dài với kích thước khác Cấu tạo bó mạch giống với cấu tạo bó mạch ở rễ, nhiên mạch gỗ cấp I có kích thước nhỏ ở rễ; libe cấp I cấu tạo dạng kết tầng, đám sợi nằm rải rác libe Tia ruột tỏa từ tâm phân cắt bó mạch tạo thành hình nan quạt tỏa từ tâm * Vi phẫu lá: Thiết diện cắt ngang dạng hình thuyền, khơng có mấu lồi khơng có hệ gân Cấu tạo gồm chủ yếu tế bào mô mềm, mô nâng đỡ mơ mạch phát triển Biểu bì gồm lớp tế bào nhỏ, xếp sát Mơ mềm gồm tế bào kích thước khơng đều, xếp so le Trong mô mềm chứa giọt dầu, rải rác có sợi * Vi phẫu rễ: Lát cắt vi phẫu rễ tròn gần tròn Từ ngồi vào gồm có: lớp bần gồm 4-8 lớp tế bào hẹp dài Dưới lớp bần lớp mô mềm gồm – lớp tế bào, rải rác có đám mơ cứng Libe cấp I cấu tạo dạng kết tầng sợi tập trung thành đám bao quanh libe Gỗ cấp I gồm mạch lớn nhỏ xếp thành hàng, mạch lớn ở mạch nhỏ ở Libe gỗ xếp nối tiếp tạo thành hệ thống hình nan quạt tỏa từ tâm, xen bó libegỗ tia ruột * Đặc điểm bột dược liệu: Bột rễ màu vàng sậm vàng nâu, mùi thơm nhẹ Thành phần gồm: mảnh bần màu vàng sậm, tế bào vách dày Mảnh mô mềm tế bào vách mỏng, thường mang giọt dầu Các khối nhựa màu với nhiều hình dạng khác Lông che chở đa bào Các sợi nằm riêng lẻ với tế bào hẹp dài, thành mỏng, màu vàng Mảnh mạch xoắn Khối hạt phấn chứa hạt phấn dạng hình cầu 3.2 Kết nghiên cứu hóa học 3.2.1 Định tính nhóm hợp chất hữu Kết cho thấy nhóm hợp chất có loài Tỏa dương gồm: flavonoid, courmarin, tannin, acid hữu cơ, acid amin, sterol, chất béo 3.2.2 Chiết xuất, phân lập hợp chất Bằng phương pháp sắc ký tiến hành phân lập 27 hợp chất (BL1BL27) từ Tỏa dương Cấu trúc hợp chất xác định dựa việc phân tích kiện phổ so sánh với tài liệu cơng bố 3.2.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất * Hợp chất BL1: Salicifoliol tinh thể không màu Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 3,20 (1H, ddd, J = 2,0; 6,5; 7,0 Hz, H-1), 4,66 (1H, d, J = 6,5 Hz, H2); 4,35 (1H, dd, J = 2,0; 9,5, H-4a), 4,08 (1H, dd, J = 3,5; 9,5, H-4b), 3,53 (1H, dd, J = 3,0; 8,0, H-5), 4,28 (1H, t, J = 8,0, H-8a), 4,52 (1H, dd, J = 7,0; 9,5, H-8b), 6,96 (1H, d, J = 1,5; H-2'), 6,79 (1H, d, J = 8,0; H-5'), 6,83 (1H, dd, J = 1,5; 8,0, H-6'), 3,87 (3H, s, OCH3) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 47,5 (C-1), 87,7 (C-2), 71,8 (C-4), 49,5 (C-5), 181,0 (C-6), 70,9 (C-8), 132,3 (C-1'), 110,0 (C-2'), 149,2 (C-3'), 147,7 (C-4'), 116,1 (C-5'), 120,2 (C-6'), 56,4 (OCH3) * Hợp chất BL2: (8S,8ʹS)-secoisolariciresinol-9ʹ-O-β-ᴅ-glucopyranosid (chất mới) dạng bột màu vàng Phổ HR-ESI-MS: m/z 523,2188 [M+H]+, CTPT: C26H36O11 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 6,61 (1H, br s, H-2), 6,68 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5), 6,57 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6), 2,62* (1H, H-7), 1,97 (1H, m, H-8), 3,67 (1H, dd, J = 5,5; 11,0 Hz, H-9a), 3,58 (1H, dd, J = 6,0; 11,0 Hz, H-9b), 3,76 (3H, s, 3-OCH3), 6,62 (1H, br s, H-2'), 6,68 (1H, d, J = 8,0 Hz; H-5'), 6,59 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6'), 2,70 (1H, dd, J = 7,0; 14,0 Hz, H-7'a), 2,62* (1H, H-7'b), 2,13 (1H, m, H-8'), 4,07 (1H, dd, J = 6,0; 10,0 Hz, H-9'a), 3,49 (1H, dd, J = 6,0; 10,0 Hz, H-9'b), 3,76 (3H, s, 3'-OCH3), 4,24 (1H, d, J = 7,5 Hz; H-1''), 3,23 (1H, dd, J = 7,5; 9,0 Hz; H-2''), 3,37 (1H, dd, J = 9,0; 9,0 Hz; H-3''), 3,33 (1H, dd, J = 9,0; 9,0 Hz; H-4''), 3,26 (1H, m, H-5''), 3,87 (1H, dd, J = 2,0; 12,0 Hz; H-6''a), 3,70 (1H, dd, J = 5,5; 12,0 Hz; H-6'') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 134,1 (C-1), 113,5 (C-2), 148,8 (C-3), 145,4 (C-4), 115,8 (C-5), 122,8 (C-6), 35,5 (C-7), 43,9 (C-8), 62,6 (C-9), 56,3 (3-OCH3), 133,8 (C-1'), 113,6 (C-2'), 148,8 (C-3'), 145,5 (C-4'), 115,8 (C-5'), 122,8 (C-6'), 35,9 (C-7'), 41,4 (C-8'), 71,1 (C-9'), 56,3 (3'-OCH3), 104,7 (C-1''), 75,2 (C-2''), 78,2 (C-3''), 71,7 (C-4''), 77,9 (C-5''), 62,8 (C-6'') * Hợp chất BL3: (8R,8ʹR)-secoisolariciresinol-4-O-β-ᴅ-glucopyranosid dạng bột màu vàng Phổ HR-ESI-MS: m/z 547,2153 [M+Na]+, CTPT: C26H36O11 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 6,70 (1H, s, H-2), 7,05 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5), 6,68 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-6), 2,73 (1H, dd, J = 7,0; 13,5 Hz, H-7a), 2,62 (1H, dd, J = 7,5; 13,5 Hz, H-7b), 1,94 (1H, m, H-8), 3,61* (1H, H-9), 3,78 (3H, s, 3-OCH3), 6,63 (1H, br s, H-2'), 6,68 (1H, d, J = 8,0 Hz; H-5'), 6,56 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6'), 2,68 (1H, dd, J = 7,0; 13,5 Hz, H-7'a), 2,58 (1H, dd, J = 7,5; 13,5 Hz, H-7'b), 1,95 (1H, m, H-8'), 3,61* (1H, H-9'), 3,76 (3H, s, 3'-OCH3), 4,85 (1H, d, J = 7,5 Hz; H-1''), 3,51 (1H, dd, J = 8,0; 9,0 Hz; H-2''), 3,49 (1H, dd, J = 9,0; 9,0 Hz; H-3''), 3,42* (1H, H-4''), 3,42* (1H, H-5''), 3,90 (1H, br d, J = 12,0 Hz; H-6''a), 3,72 (1H, dd, J = 3,5; 12,0 Hz; H-6'') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 137,5 (C-1), 114,2 (C-2), 150,6 (C-4), 146,1 (C-5), 122,9 (C-6), 36,1 (C-7), 44,3 (C-8), 62,1 (C-9), 56,5 (3-OCH3), 133,8 (C-1'), 113,5 (C-2'), 148,7 (C-3'), 145,6 (C-4'), 115,9 (C-5'), 122,7 (C-6'), 36,0 (C-7'), 44,0 (C-8'), 62,0 (C-9'), 56,4 (3'-OCH3), 103,1 (C-1''), 74,9 (C-2''), 78,8 (C-3''), 71,4 (C-4''), 78,2 (C-5''), 62,5 (C-6'') * Hợp chất BL4: (8S,7ʹR,8ʹS)-isolariciresinol 4-O-β-ᴅ-glucopyranosid dạng bột màu vàng Phổ HR-ESI-MS: m/z 521,2023 [M-H]-, CTPT: C26H34O11 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 6,45 (1H, s, H-3), 6,77 (1H, s, H-6), 2,84 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-7), 2,06 (1H, m, H-8), 3,74 (1H, dd, J = 5,0; 11,0 Hz; H-9a), 3,65* 8,5 Hz; H-5'), 6,87 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6'), 4,61 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-7'), 3,00 (1H, m, H-8'), 4,19 (1H, d, J = 6,5 Hz, H-9'), 3,94 (3H, s, 3'-OCH3), 1,82 (3H, s, CH3) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 130,0 (C-1), 112,4 (C-2), 149,4 (C-3), 153,8 (C-4), 116,0 (C-5), 125,1 (C-6), 199,6 (C-7), 51,1 (C-8), 72,0 (C-9), 56,4 (3-OCH3), 132,8 (C-1'), 111,5 (C-2'), 149,2 (C-3'), 147,8 (C-4'), 116,0 (C-5'), 121,1 (C-6'), 86,0 (C-7'), 51,2 (C-8'), 64,7 (C-9'), 56,5 (3'-OCH3), 20,5 (CH3), 172,5 (COO) * Hợp chất BL9: balanophorosid A (chất mới) dạng bột màu vàng nhạt, góc quay cực riêng [α]25D = +26,7 (c 0,1, MeOH) Phổ HR-ESI-MS: m/z 459,1274 [M+Na]+, CTPT: C21H24O10 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 5,32 (1H, s, H-1), 3,61 (1H, d, J = 16,2 Hz; H-3a), 3,61 (1H, d, J = 16,2 Hz; H-3b), 6,75 (1H, br s, H-3'), 6,50 (1H, br d, J = 7,8 Hz; H-5'), 7,07 (1H, br d, J = 7,8 Hz, H-6'), 6,88 (1H, dd, J = 7,8 Hz; H-2'', 6''), 6,66 (1H, dd, J = 7,8 Hz; H-3'', 5''), 4,87* (1H, H-1'''), 3,45 (1H, m, H-2'''), 3,46 (1H, m, H-3'''), 3,39 (1H, m, H-4'''), 3,43 (1H, m, H-5'''), 3,72 (1H, dd, J = 5,4; 12,0 Hz; H-6'''a), 3,92 (1H, br d, J = 12,0 Hz; H-6'''b) Phổ 13CNMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 76,6 (C-1), 210,0 (C-2), 44,9 (C-3), 120,6 (C1'), 157,9 (C-2'), 104,9 (C-3'), 160,6 (C-4'), 111,0 (C-5'), 132,1 (C-6'), 126,4 (C-1''), 131,7 (C-2'', 6''), 116,1 (C-3'', 5''), 157,2 (C-4''), 103,5 (C-1'''), 74,9 (C-2'''), 78,2 (C3'''), 71,7 (C-4'''), 77,9 (C-5'''), 62,8 (C-6''') * Hợp chất BL10: coniferin dạng bột màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS: m/z 365,1202 [M+Na]+, CTPT: C16H22O8 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,08 (1H, d, J = 2,0 Hz; H-2), 7,12 (1H, d, J = 8,0 Hz; H-5), 6,97 (1H, dd, J = 2,0; 8,0 Hz, H-6), 6,29 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-7), 6,58 (1H, dd, J = 6,0; 16,0 Hz, H-8), 4,23 (1H, d, J = 6,0 Hz; H-9), 3,89 (3H, s, 3-OCH3), 4,91 (1H, d, J = 7,6 Hz, H-1'), 3,50* (2H, H-2', 3'), 3,42* (2H, H-4', 5'), 3,90 (1H, br d, J = 12,0 Hz; H-6'a), 3,72 (1H, dd, J = 5,5; 12,0 Hz; H-6'b) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 130,4 (C-1), 112,9 (C-2), 151,1 (C-3), 150,9 (C-4), 117,3 (C-5), 124,4 (C-6), 33,6 (C7), 43,8 (C-8), 73,7 (C-9), 56,4 (3-OCH3), 139,6 (C-1'), 74,9 (C-2'), 77,8 (C-3'), 71,3 (C-4'), 78,2 (C-5'), 62,5 (C-6') * Hợp chất BL11: coniferyl aldehyd β-D-glucopyranosid dạng bột màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS: m/z 339,2001 [M-H]-, CTPT: C16H19O8 Phổ 1H NMR 11 (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,35 (1H, br s; H-2), 7,64 (1H, d, J = 15,5 Hz; H-5), 7,28 (1H, br d, J = 8,5 Hz, H-6), 7,64 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-7), 6,74 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-8), 9,63 (1H, d, J = 7,5 Hz; H-9), 3,94 (3H, s, 3-OCH3), 5,03 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1'), 3,42-3,54* (4H, H-2', 3', 4', 5'), 3,90 (1H, br d, J = 11,0 Hz; H-6'a), 3,71 (1H, dd, J = 4,5; 11,0 Hz; H-6'b) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 133,7 (C-1), 111,4 (C-2), 150,9 (C-3), 147,6 (C-4), 117,9 (C-5), 124,4 (C-6), 155,2 (C-7), 128,2 (C-8), 196,1 (C-9), 56,8 (3-OCH3), 102,1 (C-1'), 74,8 (C-2'), 77,8 (C-3'), 71,3 (C-4'), 78,2 (C-5'), 62,5 (C-6') * Hợp chất BL12: trans-p-coumaryl aldehyd dạng bột màu trắng Phổ ESIMS: m/z 149,15 [M+H]+, CTPT: C9H8O2 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,57 (2H, d, J = 9,0 Hz; H-2, 6), 6,87 (2H, d, J = 9,0 Hz; H-3, 5), 7,61 (H, d, J = 16,0 Hz; H-7), 6,64 (H, dd, J = 8,0; 16,0 Hz; H-8), 9,59 (2H, d, J = 8,0 Hz; H-9) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 127,1 (C-1), 132,0 (C-2, 6), 117,1 (C3, 5), 162,3 (C-4), 156,0 (C-7), 126,5 (C-8), 196,2 (C-9) * Hợp chất BL13: ferulic aldehyd dạng tinh thể hình kim khơng màu Phổ ESIMS: m/z 179,15 [M+H]+, CTPT: C10H10O3 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,28 (1H, d, J = 2,0 Hz; H-2), 6,88 (1H, d, J = 9,0 Hz; H-5), 7,19 (1H, dd, J = 2,5; 8,5 Hz; H-6), 7,61 (1H, d, J = 15,5 Hz; H-7), 6,68 (1H, d, J = 15,5 Hz; H-8), 9,59 (1H, d, J = 8,0 Hz; H-9), 3,93 (3H, s, OCH3) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 126,6 (C-1), 109,5 (C-2), 149,0 (C-3), 147,0 (C-4), 115,0 (C-5), 124,0 (C-6), 153,2 (C-7), 126,3 (C-8), 193,7 (C-9), 56,0 (OCH3) * Hợp chất BL14: ethyl caffeat dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS: m/z 231,0 [M+Na]+, CTPT: C11H12O4 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,05 (1H, d, J = 2,0 Hz; H-2), 6,79 (1H, d, J = 8,5 Hz; H-5), 6,95 (1H, dd, J = 2,0; 8,5 Hz; H-6), 7,61 (1H, d, J = 16,0 Hz; H-7), 6,28 (1H, d, J = 16,0 Hz; H-8), 4,23 (2H, dd, J = 7,0; 8,0 Hz; OCH2CH3), 1,32 (3H, t, OCH2CH3) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 127,7 (C-1), 115,1 (C-2), 146,8 (C-3), 149,5 (C-4), 116,5 (C-5), 122,9 (C-6), 146,7 (C-7), 115,2 (C-8), 169,3 (C-9), 61,4 (OCH2CH3), 61,4 (OCH2CH3) * Hợp chất BL15: 1-O-E-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose dạng bột màu trắng Phổ HR-ESI-MS: m/z 341,0889 [M-H]-, CTPT: C15H17O9 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 12 MHz) H (ppm): 5,62 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 3,43-3,54* (4H, H-2, 3, 4, 5), 3,89 (1H, br d, J = 12,0 Hz; H-6a), 3,74 (1H, br d, J = 12,0 Hz; H-6b), 7,09 (1H, br s, H2'), 6,81 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 6,97 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6'), 7,67 (1H, d, J = 15,5 Hz; H-7'), 6,31 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-8') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 95,7 (C-1), 73,9 (C-2), 77,9 (C-3), 71,0 (C-4), 78,6 (C-5), 62,3 (C-6), 127,5 (C-1'), 115,3 (C-2'), 146,6 (C-3'), 149,7 (C-4'), 116,5 (C-5'), 123,2 (C-6'), 148,4 (C7'), 114,3 (C-8'), 167,8 (C-9') * Hợp chất BL16: 4-O-galloyl-1-O-E-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose dạng bột màu trắng Phổ HR-ESI-MS: m/z 495,1111 [M+H]+, CTPT: C22H22O13 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 5,70 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1), 3,57* (1H, H-2), 3,81 (1H, dd, J = 9,0; 9,0 Hz; H-3), 5,05 (1H, dd, J = 9,0; 9,0 Hz; H-4), 3,74 (1H, m, H-5), 3,67 (1H, br d, J = 12,0 Hz, H-6a), 3,57* (1H, H-6b), 7,09 (1H, br s, H-2'), 6,81 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 7,00 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6'), 7,70 (1H, d, J = 16 Hz; H7'), 6,34 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-8'), 7,13 (1H, s, H-2'', 6'') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 95,7 (C-1), 74,3 (C-2), 75,9 (C-3), 72,1 (C-4), 77,0 (C-5), 62,1 (C-6), 127,5 (C-1'), 115,3 (C-2'), 146,9 (C-3'), 150,1 (C-4'), 116,6 (C-5'), 123,3 (C-6'), 148,6 (C-7'), 114,2 (C-8'), 167,7 (C-9'), 120,9 (C-1''), 110,4 (C-2'', 6''), 146,6 (C-3'', 5''), 140,4 (C-4''), 167,8 (C-7'') * Hợp chất BL17: 6-O-galloyl-1-O-E-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS: m/z 493,0098 [M-H]-, CTPT: C22H22O13 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 5,64* (1H, H-1), 3,54* (3H, H-2, 3, 4), 3,73 (1H, m, H-5), 4,56 (1H, br d, J = 11,5 Hz, H-6a), 4,42 (1H, br d, J = 11,5 Hz, H-6b), 7,09 (1H, br s, H-2'), 6,81 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 7,00 (1H, br d, J = 8,0 Hz, H-6'), 7,70 (1H, d, J = 16 Hz; H-7'), 6,34 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-8'), 7,13 (1H, s, H-2'', 6'') Phổ 13CNMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 95,7 (C-1), 74,3 (C-2), 75,9 (C-3), 72,1 (C-4), 77,0 (C-5), 62,1 (C-6), 127,5 (C-1'), 115,3 (C-2'), 146,9 (C-3'), 150,1 (C-4'), 116,6 (C5'), 123,3 (C-6'), 148,6 (C-7'), 114,2 (C-8'), 167,7 (C-9'), 120,9 (C-1''), 110,4 (C-2'', 6''), 146,6 (C-3'', 5''), 140,4 (C-4''), 167,8 (C-7'') * Hợp chất BL18: balanolaxin (chất mới) dạng bột màu trắng, góc quay cực riêng [α]25D = +19,3 (c 0,1, MeOH) Phổ HR-ESI-MS: m/z 183,1016 [M+H]+, CTPT: 13 C10H14O3 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 4,71 (1H, d, J = 11,5 Hz, H3a), 4,81 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-3b), 4,71 (1H, ddd, J = 8,0; 9,0; 10,0 Hz, H-5), 1,52 (1H, ddd, J = 10,0; 10,0; 12,5 Hz, H-6a), 2,36 (1H, ddd, J = 5,5; 8,0; 12,5 Hz, H-6b), 3,71 (1H, ddd, J = 5,5; 8,5; 10,0 Hz, H-7), 2,13 (1H, m, H-8), 2,74 (1H, dd, J = 9,0; 11,0 Hz, H-9), 1,20 (1H, d, J = 6,5 Hz, H-10), 5,09 (3H, s, H-11a), 5,19 (3H, s, H11b) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 176,4 (C-1), 71,9 (C-3), 143,7 (C-4), 38,6 (C-5), 40,4 (C-6), 78,7 (C-7), 46,9 (C-8), 46,7 (C-9), 17,5 (C-10), 113,9 (C-11) * Hợp chất BL19: acid deacetyl asperulosidic dạng bột màu trắng Phổ HRESI-MS: m/z 389,1095 [M-H]-, CTPT: C16H22O11 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 5,02 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-1), 7,53 (1H, s, H-3), 3,04 (1H, t, J = 6,5 Hz, H5), 4,86* (1H, H-6), 6,02 (3H, s, H-7), 2,56 (1H, t, J = 8,0 Hz, H-9), 4,47 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-10a), 4,23 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-10b), 4,74 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 101,2 (C-1), 153,1 (C-3), 112,0 (C-4), 43,5 (C-5), 75,9 (C-6), 129,8 (C-7), 151,5 (C-8), 46,3 (C-9), 61,8 (C-10), 175,3 (C11), 100,4 (C-1'), 75,0 (C-2'), 78,5 (C-3'), 71,7 (C-4'), 77,8 (C-5'), 62,8 (C-6') * Hợp chất BL20: lupeol dạng bột màu trắng Phổ APCI-MS: m/z 427,1 [M+H]+, CTPT: C30H50O Phổ 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H (ppm): 2,30 (1H, dt, J = 6,0; 11,5 Hz, H-19), 0,69 (3H, s, H-23), 0,72 (3H, s, H-24), 0,76 (3H, s, H-25), 0,87 (3H, s, H-26), 0,90 (3H, s, H-27), 0,96 (3H, s, H-28), 4,62 (3H, s, H-29a), 4,50 (3H, s, H-29b), 1,61 (3H, s, H-30) Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δC (ppm): 38,7 (C-1), 27,4 (C-2), 79,0 (C-3), 38,9 (C-4), 55,3 (C-5), 18,3 (C-6), 34,3 (C-7), 40,9 (C-8), 50,5 (C-9), 37,2 (C-10), 21,0 (C-11), 25,2 (C-12), 38,1 (C-13), 42,9 (C-14), 27,5 (C-15), 35,6 (C-16), 43,0 (C-17), 48,3 (C-18), 48 (C-19), 150,1 (C-20), 29,9 (C-21), 40,0 (C22), 28,0 (C-23), 15,4 (C-24), 16,1 (C-25), 16,0 (C-26), 14,6 (C-27), 18,0 (C-28), 109,3 (C-29), 19,3 (C-30) * Hợp chất BL21: β-amyrin dạng bột màu trắng Phổ APCI-MS: m/z 427,1 [M+H]+, CTPT: C30H50O Phổ 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H (ppm): 3,23 (1H, t, J = 6,5 Hz, H-1), 5,18 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-12), 0,83 (3H, s, H-23), 0,79 (3H, s, H-24), 0,94 (3H, s, H-25), 1,00 (3H, s, H-26), 1,14 (3H, s, H-27), 0,97 (3H, s, H-28), 0,87 14 (3H, s, H-29), 0,87 (3H, s, H-30) Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δC (ppm): 38,6 (C-1), 26,2 (C-2), 79,0 (C-3), 38,8 (C-4), 55,2 (C-5), 18,4 (C-6), 32,7 (C-7), 39,8 (C8), 47,7 (C-9), 36,9 (C-10), 23,6 (C-11), 121,8 (C-12), 145,2 (C-13), 41,8 (C-14), 27,3 (C-15), 27,0 (C-16), 32,5 (C-17), 47,3 (C-18), 46,9 (C-19), 31,1 (C-20), 34,8 (C21), 37,2 (C-22), 28,1 (C-23), 15,5 (C-24), 15,6 (C-25), 16,8 (C-26), 26,0 (C-27), 28,4 (C-28), 33,3 (C-29), 23,7 (C-30) * Hợp chất BL22: (21β)-22-hydroxyhopan-3-on dạng tinh thể không màu Phổ APCI-MS: m/z 425,4 [M+H]+, CTPT: C30H50O2 Phổ 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H (ppm): 1,93 (1H, m, H-1), 1,81 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-21), 1,08 (3H, s, H-23), 1,03 (3H, s, H-24), 0,94 (3H, s, H-25), 1,10 (3H, s, H-26), 0,97 (3H, s, H-27), 0,82 (3H, s, H-28), 1,12 (3H, s, H-29), 1,23 (3H, s, H-30) Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δC (ppm): 39,6 (C-1), 34,2 (C-2), 218,2 (C-3), 47,3 (C-4), 54,8 (C-5), 19,7 (C-6), 33,9 (C-7), 41,3 (C-8), 49,7 (C-9), 36,8 (C-10), 22,0 (C-11), 29,0 (C-12), 37,6 (C-13), 43,6 (C-14), 27,6 (C-15), 35,5 (C-16), 48,3 (C-17), 44,6 (C-18), 40,2 (C-19), 28,7 (C-20), 50,0 (C-21), 73,5 (C-22), 26,7 (C-23), 21,1 (C-24), 16,0 (C-25), 16,0 (C-26), 14,8 (C27), 19,2 (C-28), 24,8 (C-29), 31,7 (C-30) * Hợp chất BL23: (21α)-22-hydroxyhopan-3-on dạng bột màu vàng Phổ APCI-MS: m/z 425,4 [M+H]+, CTPT: C30H50O2 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 1,93 (1H, m, H-1), 1,81 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-21), 1,07 (3H, s, H-23), 1,03 (3H, s, H-24), 0,97 (3H, s, H-25), 1,11 (3H, s, H-26), 1,01 (3H, s, H-27), 0,85 (3H, s, H-28), 1,14 (3H, s, H-29), 1,20 (3H, s, H-30) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 40,7 (C-1), 35,0 (C-2), 221,1 (C-3), 48,8 (C-4), 56,0 (C-5), 20,8 (C-6), 34,9 (C-7), 42,4 (C-8), 51,0 (C-9), 37,9 (C-10), 23,1 (C-11), 29,7 (C-12), 39,1 (C-13), 44,7 (C-14), 28,9 (C-15), 36,7 (C-16), 49,6 (C-17), 45,5 (C-18), 41,0 (C-19), 29,2 (C-20), 51,3 (C-21), 73,9 (C-22), 27,2 (C-23), 21,4 (C-24), 16,6 (C-25), 16,6 (C-26), 15,4 (C27), 19,8 (C-28), 25,2 (C-29), 31,7 (C-30) * Hợp chất BL24: p-hydroxy benzaldehyd dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS: m/z 123,05 [M+H]+, CTPT: C7H6O2 Phổ 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,79 (2H, d, J = 8,5 Hz; H-2, 6), 6,94 (2H, d, J = 8,5 Hz; H-3, 5), 9,78 (1H, s, H-7) 15 Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 130,3 (C-1), 133,4 (C-2, 6), 116,9 (C3, 5), 165,2 (C-4), 192,9 (C-7) * Hợp chất BL25: piceol dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS: m/z 137,10 [M+H]+, CTPT: C8H8O2 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 7,90 (2H, d, J = 9,0 Hz; H-2, 6), 6,86 (2H, d, J = 9,0 Hz; H-3, 5), 2,54 (3H, s, OCH3) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 132,1 (C-1), 130,0 (C-2, 6), 116,2 (C-3, 5), 163,9 (C4), 199,5 (C-7), 26,3 (OCH3) * Hợp chất BL26: 5-hydroxymethyl-2-furaldehyd dạng keo màu trắng Phổ EI-MS: m/z 127,5 [M+H]+, CTPT: C6H6O3 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 9,55 (1H, s, H-1), 7,40 (1H, d, J = 3,5 Hz, H-3), 6,59 (1H, d, J = 3,5 Hz, H-4), 4,63 (1H, s, H-6) Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 179,4 (C-1), 153,9 (C-2), 124,7 (C-3), 110,7 (C-4), 163,2 (C-5), 57,6 (C-6) * Hợp chất BL27: 1-O-(3-methylbutyl)-6-O-β-ᴅ-xylopyranosyl-β-ᴅglucopyranose dạng bột màu vàng nhạt Phổ ESI-MS: m/z 382 [M+H]+, CTPT: C16H30O10 Phổ 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H (ppm): 3,95 (1H, dt, J = 7,0; 9,5 Hz, H-1a), 3,59 (1H, dt, J = 7,0; 9,5 Hz, H-1b), 1,54 (1H, ddd, J = 7,0; 7,0; 7,0 Hz, H2), 1,77 (1H, m, H-3), 0,94 (1H, d, J = 6,5 Hz; H-4), 0,94 (1H, d, J = 6,5 Hz; H-5), 4,27 (1H, d, J = 7,5 Hz; H-1'), 3,21 (1H, dd, J = 7,5; 9,0 Hz; H-2'), 3,32-3,36* (2H, H-3', 4'), 3,45 (1H, m, H-5'), 4,10 (1H, dd, J = 2,0; 11,5 Hz, H-6'a), 3,76 (1H, dd, J = 6,0; 11,5 Hz, H-6'b), 4,35 (1H, d, J = 7,5 Hz; H-1''), 3,22* (1H, H-2''), 3,32-3,36* (1H, H-3''), 3,51 (1H, m, H-4''), 3,88 (1H, dd, J = 5,0; 11,0 Hz; H-5''a), 3,22* (1H, H5'') Phổ 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δC (ppm): 69,4 (C-1), 39,7 (C-2), 26,0 (C-3), 23,0 (C-4), 23,1 (C-5), 104,4 (C-1'), 75,1 (C-2'), 78,0 (C-3'), 77,0 (C-4'), 69,8 (C-5'), 105,5 (C-1''), 74,9 (C-2''), 77,7 (C-3''), 71,2 (C-4''), 66,9 (C-5'') 16 Hình 2.1 Cấu trúc hóa học 27 hợp chất phân lập từ loài Tỏa dương 3.3 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm Tỏa dương 3.3.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm in vitro Tỏa dương 3.3.1.1 Kết sàng lọc tác dụng chống viêm in vitro cao toàn phần phân đoạn Phân đoạn EtOAc (BLEA, nồng độ 30 µg/ml) ức chế mức độ biểu COX-2 so với chứng viêm LPS có xu hướng tốt phân đoạn thử 17 Hình 3.36 Tác dụng ức chế mức độ biểu gen COX-2 cao toàn phần cao phân đoạn ở nồng độ 30 µg/ml Trong đó: BLE: cao tồn phần ethanol; BLH: phân đoạn n-hexan; BLEA: phân đoạn ethyl acetat; BLW: phân đoạn nước; ***: p < 0,001 so sánh với chứng trắng; #: p < 0,05 so sánh với chứng viêm LPS 3.3.1.2 Kết sàng lọc tác dụng chống viêm in vitro cao toàn phần phân đoạn Trong hợp chất (ở nồng độ 10 µM) phân lập từ phân đoạn EtOAc thử nghiệm, hợp chất BL23 BL25 có tác dụng ức chế mức độ biểu gen COX-2 so với chứng viêm LPS có ý nghĩa thống kê, BL23 (10 µM) ức chế mức độ biểu COX-2 mRNA gây bởi LPS đại thực bào RAW 264.7 mạnh Hình 3.37 Tác dụng ức chế mức độ biểu protein COX-2 hợp chất phân lập từ phân đoạn EtOAc nồng độ 10 µM ***: p < 0,001 so sánh với chứng trắng; #: p < 0,05, ##: p < 0,01 so sánh với chứng viêm LPS 18 Ở nồng độ thử 1, 3, 10, 30 µM hợp chất BL23 có khơng có LPS khơng ảnh hưởng đến khả sống sót tế bào RAW 264.7 Hình 3.38 Ảnh hưởng BL23 đến khả sống sót tế bào RAW264.7 Hợp chất BL23 làm giảm mức độ biểu COX-2 phụ thuộc theo nồng độ nồng độ 10 µM hợp chất BL23 thể ức chế mức độ biểu COX-2 tốt Hình 3.39 Tác dụng BL23 biểu COX-2 phụ thuộc theo nồng độ ***: p < 0,001 so sánh với chứng trắng; #: p < 0,05, ##: p < 0,01, ###: p < 0,001 so sánh với chứng viêm LPS Hợp chất BL23 ở nồng độ 10 µM có tác dụng ức chế mức độ biểu số gen tiền viêm iNOS, IL-1β, INF-β TNFα khơng có tác dụng ức chế mức độ biểu gen IL-6 19 Mức độ biểu gen mRNA (So với lơ có LPS) Chứng LPS LPS + BL23 1.2 1.0 * * * * * 0.8 0.6 0.4 # # INF- TNF # # 0.2 0.0 iNOS IL-1 IL-6 Hình 3.40 Tác dụng BL23 (10 µM) mức độ biểu gen iNOS, IL-1β, IL-6, INF-β TNFα *: p < 0,05 so sánh với chứng trắng; #: p 300 > 300 19,12 (6,46 - 34,47) 5,69 (2,95 - 8,77) > 300 32,14 (26,69 - 39,17) 4,48 (3,60 - 5,57) 0,53 (0,34 - 0,82) * chất đối chứng dương, IC50 (khoảng tin cậy 95% IC50) 3.3.3 Kết đánh giá tác dụng chống viêm in vivo Tỏa dương Cao toàn phần ethanol, phân đoạn ethyl acetat tỏa dương ở mức liều 150 mg/kg 300 mg/kg; hợp chất BL23 ở mức liều 40 mg/kg 80 mg/kg thể tác dụng ức chế mức độ phù bàn chân chuột thời điểm 1, 3, 5, sau gây viêm mơ hình gây viêm cấp 21 Hình 3.43 Tác dụng chống viêm cấp phân đoạn chất phân lập từ Tỏa dương *: p