Đang tải... (xem toàn văn)
QUY TRÌNH KHẢO SÁT SƠ BỘ HÓA THỰC VẬT TRÁI NỔ (Ruellia tuberosa) Nguyên tắc Chiết tách hỗn hợp nguyên vật liệu thực vật thành 3 phân đoạn theo độ phân cực tăng dần kém phân cực, phân cực trung bình và phân cực mạnh bằng cách chiết nguyên liệu lần lượt với các dung môi CHCl3, ethanol và nước Xác định các nhóm hợp chất trong từng dịch chiết bằng các phản ứng Cách tiến hành Chuẩn bị dịch chiết Dịch chiết Bột cây Trái Nổ Cao cây Trái Nổ Chloroform Chiết 15g bột vỏ cây trái nổ bằng CHCl3 (lượng CHCl3.
QUY TRÌNH KHẢO SÁT SƠ BỘ HĨA THỰC VẬT TRÁI NỔ (Ruellia tuberosa) Nguyên tắc: Chiết tách hỗn hợp nguyên vật liệu thực vật thành phân đoạn theo độ phân cực tăng dần: phân cực, phân cực trung bình phân cực mạnh cách chiết nguyên liệu với dung môi: CHCl3, ethanol nước.Xác định nhóm hợp chất dịch chiết phản ứng Cách tiến hành: 1.1 Chuẩn bị dịch chiết Dịch chiết Chloroform Bột Trái Nổ Chiết 15g bột vỏ trái nổ CHCl3 (lượng CHCl3 cho ngập dược liệu cm) bình nón đun cách thủy 30p, đến dịch chiết sau bốc khơng cịn để lại lớp cắn mờ mặt kính đồng hồ Gộp dịch chiết,lọc lại bếp cách thủy đến khoảng 50ml dịch chiết CHCl3 Bã trái nổ chiết tiếp cồn cao độ bình nón (lượng cồn cho ngập dược liệu cm) đun bếp cách thủy 30p, thực 2-3 lần, gộp dịch chiết, lọc cô cách thủy đến khoảng 50ml Cồn cao độ Nước Bã dược liệu sau chiết cồn đem chiết nóng với nước bình nón (lượng nước cho ngập mặt dược liệu khoảng1cm) bếp cách thủy 30p Gộp dịch chiết, lọc cô cách thủy đến khoảng 50ml Cao Trái Nổ Tán 5g cao trái nổ với 5g cát ( tỉ lệ 1:1 1:1.5) cho vào bình nón với 100ml CHCl3, lắc Đun cách thủy 30 phút Lọc, thu dịch chiết CHCl3 (Nếu dịch chiết 50ml, thêm lượng CHCl3 vừa đủ 50ml.) Trong bình nón cịn lượng cát phần khơng tan CHCl3 Thêm 100ml cồn cao độ vào bình nón, lắc đun cách thủy 30 phút Sau lọc thu dịch chiết cồn (Nếu dịch chiết 50ml, thêm lượng cồn vừa đủ 50ml.) Trong bình nón cịn lượng cát phần không tan cồn Thêm vào 100ml nước vào bình nón, lắc đun cách thủy 30 phút Sau lọc thu dịch chiết nước (Nếu dịch chiết 50ml, thêm lượng nước vừa đủ 50ml.) Sơ đồ tóm tắt 15g bột trái nổ 5g cao chiết / 15g cao chiết cồn + 5g cát Cách thủy 30 phút, lắc Định tính Dịch chiết CHCl Nước/cách thủy 30 phútchiết tính Bã dược liệu Dịch Dịch chiếtnước cồn Định Định tính lắc Alkaloid Alkaloid Tannin Flavonoid Coumarin Flavonoid Saponin Tannin Anthrocyanosid Anthrocyanosid Acid hữu Saponin Proanthrocyanosid Proanthrocyanosid Chất béo Acid Polyuronid hữu Alkaloid Tinh dầu Coumarin Carotenoid Anthraquinon Flavonoid Ethanol 96%/cách thủy 30 phút lắc 1.2 Xác định nhóm hợp chất: (dịch chiết từ cao trái nổ làm tương tự dịch chiết từ bột trái nổ) 1.2.1 Xác định chất tan dịch chiết chloroform: 1.2.1.1 Xác định tinh dầu: Lấy 5ml dịch CHCl3 cho vào chén sứ, cô đến cắn bếp Nếu cắn có mùi thơm nhẹ, thêm cồn cao độ vào lại cho bốc đến cắn Cắn có mùi thơm nhẹ đặc trưng có tinh dầu 1.2.1.2 Xác định chất béo: Lấy vài dịch chiết CHCl3 nhỏ lên chỗ miếng giấy mỏng, hơ sấy nhẹ cho bay hết dung môi (và hết mùi tinh dầu dịch chiết có tinh dầu) Nếu nơi nhỏ dịch chiết có vết mờ có chất béo 1.2.1.3 Định tính carotenoid Lấy khoảng 5ml dịch chiết CHCl3 vào chén sứ, bốc nhẹ đến cắn (và hết mùi tinh dầu dịch chiết có tinh dầu) Thêm vào cắn vài giọt dung dịch SbCl3 (khan) bão hòa chloroform (thuốc thử Carr-Price) Dung dịch có màu xanh chuyển thành màu đỏ có carotenoid 1.2.1.4 Định tính triterpenoid: Lấy khoảng 5ml dịch chiết CHCl3 cho vào chén sứ, bốc đến cắn Hòa tan cắn với 0,5ml anhydrid acetic thêm vào dd 1ml CHCl3 Chuyển dd vào ống nghiệm khô Để nghiêng ống nghiệm giá đỡ, cho từ từ 1-2ml dd H2SO4 đậm đặc lên thành ống nghiệm Quan sát nơi tiếp xúc lớp dung dịch có màu đỏ nâu hay đỏ đến tím, lớp dung dịch phía chuyển thành màu xanh lục hay tím có triterpenoid dạng tự 1.2.1.5 Định tính alkaloid: Lấy khoảng 10ml dịch chiết CHCl3 cho vào chén sứ, tới cắn Hịa cắn 2-4 ml dung dịch acid hydroclorid 1% Chia dd acid vào ống nghiệm nhỏ, định tính alkaloid thuốc thử: Thuốc thử Cách tiến hành Mayer Nhỏ giọt thuốc thử vào ống nghiệm đến xuất Bertrand tủa Lưu ý: thuốc thử Bouchardat dư hịa tan tủa Dragendoff Hager So sánh kết với ống chứng khơng có thuốc thử Nếu Hiện tượng tủa trắng – vàng nhạt tủa trắng tủa đỏ nâu tủa đỏ cam Tủa vàng cam dung dịch đục so với ống chứng có tủa có alkaloid 1.2.1.6 Định tính coumarin Nhỏ vài giọt dịch chiết CHCl3 lên miếng giấy lọc Để CHCl3 bay tới khô, nhỏ lên vết từ giọt dung dịch KOH 10% /cồn sấy nhẹ đến khô Che nửa vết dịch chiết miếng kim loại soi đèn tử ngoại 365nm Sau vài phút, lấy miếng kim loại che nửa vết dịch chiết Nếu phần bị che có cường độ phát quang yếu hơn, sau sáng dần lên có cường độ tương đương có coumarin 1.2.1.7 Định tính anthraquinon (Phản ứng Borntrager) Lấy 5ml dịch chiết CHCl3 cho vào ống nghiệm + 1ml dd NaOH 10% lắc kỹ Nếu lớp kiềm có màu hồng tới đỏ có anthraquinon dạng tự 1.2.1.8 - Định tính flavonoid: Định tính dẫn chất có nhân -pyron -dihydropyron) Lấy 10ml dịch chiết CHCl3 cho vào chén sứ, cô đến cắn bếp cách thủy Hòa cắn với 2ml cồn gạn dịch cồn cho vào ống nghiệm Thêm vào dung dịch bột Mg thêm từ từ 0,5ml HCl đậm đặc Nếu sau phản ứng, dd có màu từ màu hồng tới đỏ có flavonoid 1.2.2 Xác định chất tan dịch chiết cồn: 1.2.2.1 Định tính alkaloid: Lấy khoảng 5ml dịch chiết cồn cho vào chén sứ, tới cắn Hịa cắn 2-4 ml dung dịch acid hydroclorid 5% Chia dung dịch acid vào ống nghiệm nhỏ, định tính alkaloid thuốc thử: Thuốc thử Cách tiến hành Mayer Nhỏ giọt thuốc thử vào ống nghiệm đến xuất Bertrand tủa Lưu ý: thuốc thử Bouchardat dư hịa tan tủa Dragendoff Hager So sánh kết với ống chứng thuốc thử Nếu Hiện tượng tủa trắng – vàng nhạt tủa trắng tủa đỏ nâu tủa đỏ cam Tủa vàng cam dung dịch đục so với ống chứng có tủa có alkaloid 1.2.2.2 Định tính coumarin: Nhỏ vài giọt dịch chiết cồn lên miếng giấy lọc Để cồn bay tới khô, nhỏ lên vết dịch chiết – giọt dung dịch KOH 10%/ cồn sấy nhẹ đến khô Che nửa vết dịch chiết miếng kim loại soi đèn tử ngoại 365nm Sau vài phút, lấy miếng kim loại che nửa vết dịch chiết Nếu phần bị che có cường độ phát quang yếu hơn, sau sáng dần lên có cường độ tương đương có coumarin 1.2.2.3 - Định tính flavonoid: Định tính dẫn chất có nhân -pyron -dihydropyron) Lấy 5ml dịch chiết cồn cho vào chén sứ, cô đến cắn bếp cách thủy Hòa cắn với 2ml cồn gạn dịch cồn cho vào ống nghiệm Thêm vào dung dịch bột Mg thêm từ từ 0,5ml HCl đậm đặc Nếu sau phản ứng, dd có màu từ màu hồng tới đỏ có flavonoid 1.2.2.4 Định tính anthocyanosid Lấy 1ml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt dd acid hydrocloric 10% Nếu dd có màu hồng đỏ tới đỏ chuyển sang màu xanh kiềm hóa dung dịch natri hydroxid 10% có anthocyanosid 1.2.2.5 Định tính proanthocyanidin Lấy 5ml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm, thêm 2ml dd acid hydrocloric 10% đun bếp cách thủy 10p Nếu dd có màu hồng tới đỏ có proanthocyanidin 1.2.2.6 Định tính tannin: Lấy 2ml dịch chiết cho vào chén sứ, đến cắn Hịa tan cắn với 4ml nước bếp cách thủy Lọc, chia dịch vào ống nghiệm - Ống 1: pha loãng 0,5ml dịch chiết với nước cất, thêm 2-3 giọt thuốc thử FeCl3 5%, - lắc Nếu dung dịch có màu xanh đen hay xanh rêu có polyphenol Ống 2: Thêm vào dịch lọc giọt dung dịch gelatin muối, lắc đều, so sánh với ống chứng chứa dịch chiết ban đầu Nếu có tủa bơng trắng có tanin 1.2.2.7 Định tính saponin: Lấy 5ml dịch chiết cồn cho vào chén sứ, đến cắn Hịa cắn 5ml cồn 25% bếp cách thủy, lọc vào ống nghiệm Thêm 5ml nước lắc mạnh theo chiều dọc ống Nếu có bọt bền có saponin 1.2.2.8 Định tính acid hữu Lấy 2ml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm Pha loãng với 1ml nước thêm vào dung dịch tinh thể natri carbonat Nếu có bọt khí sủi lên từ tinh thể Na2CO3 có acid hữu 1.2.3 Xác định chất tan dịch chiết nước: 1.2.3.1 Định tính alkaloid: Lấy khoảng 10ml dịch chiết nước cho vào bình lắng gạn 50ml, kiềm hóa dịch chiết tới pH 10 dung dịch NH4OH 10%và chiết CHCl3 (10mlx lần) gộp chung rửa lớp dung môi hữu với 10ml nước cất Lắc lớp CHCl3 với dung dịch acid hydrocloric 5% (2ml x lần) Chia dung dịch acid vào ống nghiệm nhỏ Định tính alkaloid thuốc thử: Thuốc thử Mayer Bertrand Bouchardat Dragendoff Hager 1.2.3.2 - Cách tiến hành Nhỏ giọt thuốc thử vào ống nghiệm đến xuất tủa Lưu ý: cho vừa đủ lượng thuốc thử tránh dư Hiện tượng tủa trắng – vàng nhạt tủa trắng tủa đỏ nâu tủa đỏ cam Tủa vàng cam Định tính flavonoid : Định tính dẫn chất có nhân -pyron -dihydropyron) Lấy 10ml dịch chiết nước cho vào chén sứ, đến cắn bếp cách thủy Hịa cắn với 2ml cồn gạn dịch cồn cho vào ống nghiệm Thêm vào dung dịch bột Mg thêm từ từ 0,5ml HCl đậm đặc Nếu sau phản ứng, dd có màu từ màu hồng tới đỏ có flavonoid 1.2.3.3 Định tính anthocyanosid: Lấy 1ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt dd acid hydrocloric 10% Nếu dd có màu hồng đỏ tới đỏ chuyển sang màu xanh kiềm hóa dung dịch natri hydroxid 10% có anthocyanosid 1.2.3.4 Định tính proanthocyanidin: Lấy 5ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm, thêm 2ml dd acid hydrocloric 10% đun bếp cách thủy 10p Nếu dd có màu hồng tới đỏ có proanthocyanidin 1.2.3.5 Định tính tannin - Ống 1: Lấy 0,5ml dịch chiết với nước, thêm 2-3 giọt thuốc thử FeCl3 5%, lắc - Nếu dung dịch có màu xanh đen hay xanh rêu có polyphenol Ống 2: Lấy 2ml dịch chiết, thêm vào dịch lọc giọt dung dịch gelatin muối, lắc đều, so sánh với ống chứng chứa dịch chiết ban đầu Nếu có tủa bơng trắng có tanin 1.2.3.6 Định tính saponin Lấy 5ml dịch chiết nước cho vào chén sứ, đến cắn Hịa cắn 5ml cồn 96% bếp cách thủy, lọc vào ống nghiệm Cô bớt pha loãng với 10ml nước, lắc mạnh theo chiều dọc ống 15 giây Nếu có bọt bền 15 phút có saponin 1.2.3.7 Định tính acid hữu Lấy 2ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm Pha loãng với 1ml nước thêm vào dung dịch tinh thể natri carbonat Nếu có bọt khí sủi lên từ tinh thể Na2CO3 có acid hữu 1.2.3.8 Định tính polyuronid: Nhỏ giọt 2ml dịch chiết nước vào ống nghiệm có chứa 10ml cồn 95% Nếu có nhiều tủa bơng tạo thành có polyuronid Tóm tắt kết phân tích Nhóm hợp chất Chất béo Thuốc thử Cách thực Phản ứng dương tính Nhỏ dung dịch lên Vết mờ giấy Carotenoid H2SO4 Xanh dương hay xanh lục ngả sang xanh dương Tinh dầu Bốc tới cắn Có mùi thơm Triterpenoid tự LiebermannĐỏ nâu- tím, lớp có màu Burchard xanh lục Alkaloid Thuốc thử chung Kết tủa Alkaloid Courmarin Phát quang Phát quang mạnh kiềm Anthraglycosid KOH 10% Dung dịch kiềm có màu hồng tới đỏ Flavonoid Mg/HClđđ Dung dịch có màu hồng tới đỏ Anthocyanosid HCl Đỏ KOH Xanh O Proanthocyanidi HCl/t Đỏ n Tanin DD FeCl3 Xanh rêu hay xanh đen (Polyphenol) Dung dịch Gelatin Tủa trắng ( Tanin) muối Saponin Lắc mạnh dung dịch Bột bền nước Kết định tính dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết CHCl3 cồn nước Kết định tính chung Aicd hữu Na2CO3 Sủi bọt Hợp chất Pha lỗng với cồn Tủa bơng trắng – vàng nâu polyuric 96% Có thể đánh giá theo mức sau: (+) có; (-) khơng; (±)nghi ngờ Chú thích Y Có thể có phản ứng khơng thực X Khơng có mặt nhóm hoạt chất dịch chiết Bảng Bảng tóm tắt kết quả phân tích sơ thành thần hóa thực vật từ bột trái nổ Nhóm hợp chất Chất béo Carotenoid Tinh dầu Triterpenoid Alkaloid Thuốc thử Cách thực Phản ứng dương tính Nhỏ dung dịch lên Vết mờ giấy H2SO4 Xanh dương hay xanh lục ngả sang xanh dương Bốc tới cắn Có mùi thơm tự LiebermannĐỏ nâu- tím, lớp có màu Burchard xanh lục Thuốc thử chung Kết tủa Kết định tính dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết CHCl3 cồn nước Kết định tính chung Courmarin Anthraglycosid Flavonoid Anthocyanosid Proanthocyanidi n Tanin Alkaloid Phát quang kiềm KOH 10% Mg/HClđđ HCl KOH HCl/tO Phát quang mạnh Dung dịch kiềm có màu hồng tới đỏ Dung dịch có màu hồng tới đỏ Đỏ Xanh Đỏ DD FeCl3 Xanh rêu hay xanh đen (Polyphenol) Dung dịch Gelatin Tủa trắng ( Tanin) muối Saponin Lắc mạnh dung dịch Bột bền nước Aicd hữu Na2CO3 Sủi bọt Hợp chất Pha lỗng với cồn Tủa bơng trắng – vàng nâu polyuric 96% Có thể đánh giá theo mức sau: (+) có; (-) khơng; (±)nghi ngờ Chú thích Y Có thể có phản ứng khơng thực X Khơng có mặt nhóm hoạt chất dịch chiết Bảng Bảng tóm tắc kết quả phân tích sơ thành thần hóa thực vật từ cao trái nổ TÀI LIỆU THAM KHẢO - Giáo trình phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh, Trần Hùng 2016 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật, độc tính cấp tác động giảm đau cao chiết chuối hột rừng Musa acuminata - Colla., Musaceae : Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học / Nguyễn Trần Hưng Yên; Võ Thị Thu Hà hướng dẫn Giáo trình thực hành Dược liệu 1, 2, trường Đại học Nguyễn Tất Thành, Phan Thiện Vy ... thể có phản ứng khơng thực X Khơng có mặt nhóm hoạt chất dịch chiết Bảng Bảng tóm tắc kết quả phân tích sơ thành thần hóa thực vật từ cao trái nổ TÀI LIỆU THAM KHẢO - Giáo trình phương pháp nghiên... thích Y Có thể có phản ứng khơng thực X Khơng có mặt nhóm hoạt chất dịch chiết Bảng Bảng tóm tắt kết quả phân tích sơ thành thần hóa thực vật từ bột trái nổ Nhóm hợp chất Chất béo Carotenoid... phố Hồ Chí Minh, Trần Hùng 2016 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật, độc tính cấp tác động giảm đau cao chiết chuối hột rừng Musa acuminata - Colla., Musaceae : Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại