Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh.
Giớithiệu
Bệnh dại là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus gây ra, ảnh hưởng đến động vật có vú và con người Virus dại lây từ động vật sang người chủ yếu qua vết cắn Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), mỗi năm có khoảng 59.000 người tử vong do bệnh dại trên toàn cầu, trong đó 99% trường hợp tử vong liên quan đến chó, 40% là trẻ em dưới 15 tuổi, và 95% ca tử vong xảy ra ở Châu Á và Châu Phi Hàng năm, 29 triệu người phải điều trị dự phòng sau khi phơi nhiễm với virus dại, gây tổn thất kinh tế khoảng 8,6 tỷ USD Ngày Thế giới phòng chống bệnh dại 28/9 được tổ chức nhằm nâng cao nhận thức và khuyến khích người dân hợp tác trong việc loại trừ bệnh dại.
Việt Nam là một trong những quốc gia chịu ảnh hưởng nặng nề bởi bệnh dại, với sự gia tăng số ca mắc bệnh từ năm 2014, đặc biệt do chó cắn Theo báo cáo của Ban phòng chống dại - Bộ Y tế, từ năm 2017 đến tháng 8/2021, cả nước ghi nhận 378 trường hợp tử vong vì bệnh dại tại 52/63 tỉnh, thành phố, trung bình mỗi năm có 76 người tử vong, trong đó nhiều nhất là ở các tỉnh thuộc Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL).
Theo báo cáo của Cục Thú y, từ năm 2017 - 8/2021 đã có 41 tỉnh, thành phố báo cáopháthiệndịchbệnhdạitrênđộngvật,buộctiêuhủy15.082conchó(chiếmkhoảng
Trong tổng đàn, tỷ lệ mắc bệnh dại là 0,04%, với trung bình mỗi năm xử lý khoảng 3.016 con, dao động từ 1.294 con vào năm 2021 đến 3.979 con vào năm 2019 Có 35 tỉnh, thành phố đã chủ động tổ chức lấy mẫu giám sát và xét nghiệm bệnh dại, với tổng cộng 2.068 mẫu được xét nghiệm.
Trong số 2.227 mẫu xét nghiệm, có 10,98% dương tính với virus dại, cho thấy tỷ lệ dương tính cao trong các mẫu từ chó nghi mắc bệnh Đặc biệt, khu vực Đồng bằng sông Cửu Long ghi nhận 49 mẫu được giám sát, phản ánh tình hình dịch bệnh cần được chú ý.
LongAn,ĐồngTháp,TràVinh,AnGiangvàCàMauvớisốmẫudươngtínhlà43mẫu chiếm87,75%. Đánh giá được mức độ nguy hiểm và tầm quan trọng của công tác phòng chống dịchbệnhdạiởđộngvật,đặcbiệtlàcôngtácphòng-chốngdịchbệnhdạitrênchó,ngày 13 tháng 02 năm
Năm 2017, Thủ tướng đã phê duyệt “Chương trình quốc gia khống chế và tiến tới loại trừ bệnh dại giai đoạn 2017-2021” Chương trình này được giao cho Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn cùng Bộ Y tế chủ trì, phối hợp với các bộ, ban, ngành và chính quyền địa phương trên toàn quốc để thực hiện.
Sự lưu hành của virus dại đã dẫn đến sự thay đổi vật chủ từ chó sang một số loài hoang dã Mặc dù có ít trường hợp tử vong do virus dại ở động vật hoang dã được báo cáo trên toàn cầu, nhưng việc lây nhiễm virus dại từ động vật hoang dã sang các loài khác, bao gồm động vật nuôi và gia súc, có thể xảy ra Điều này dẫn đến nguy cơ con người tiếp xúc với virus và cần thực hiện điều trị sau khi nhiễm.
Nghiên cứu bệnh dại ở động vật hoang dã đã được tiến hành rộng rãi tại nhiều quốc gia, đặc biệt là ở Châu Mỹ, tuy nhiên tại Việt Nam, đặc biệt là khu vực Đồng bằng sông Cửu Long, nghiên cứu về vấn đề này vẫn còn hạn chế Để đáp ứng nhu cầu thực tế, đề tài “Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh” đã được thực hiện.
- Xác định tổng đàn và tỉ lệ tiêm phòng bệnh dại trên chó từ năm 2017-2020 tại ĐBSCL;
- Xác định kháng thể kháng virus dại trên đàn chó thả rông và tỷ lệ đáp ứng miễn dịch sau tiêm phòng bệnh dại trênchó;
- Xác định kháng thể kháng virus dại ở một số động vật hoangdã;
Nghiên cứu đã xác định trình tự nucleotide của virus dại trên gen N và đăng ký trên NCBI, đóng góp vào việc hiểu rõ tình hình dịch tễ của bệnh dại Công trình này so sánh cơ sở di truyền giữa các chủng virus thực địa và các chủng liên quan, từ đó cung cấp nền tảng khoa học cho việc xây dựng và thực hiện các biện pháp phòng chống dịch bệnh hiệu quả Nghiên cứu không chỉ hướng tới việc loại trừ bệnh dại tại khu vực ĐBSCL mà còn góp phần quan trọng vào việc bảo vệ sức khỏe con người.
- Xác định kháng thể kháng virus dại của chó thả rong chưa tiêmphòng;
- Xác định kháng thể kháng virus dại trêndơi;
- XácđịnhđượctrìnhtựNucleoproteincủavirusdạiởđộngvậttạikhuvựcĐBSCL và đăng ký trình tự trênGenbank.
Tổng quantàiliệu
Virus gâybệnhdại
2.1.1 Sơ lược về lịch sử phát hiện virus gây bệnhdại
Dại là bệnh truyền nhiễm gây viêm não và màng não ở động vật có vú, được mô tả lần đầu bởi Nguyễn Thị Hồng Hạnh và Nguyễn Thị Kiều Anh (2014) Đây là căn bệnh cổ xưa, có thể lây truyền qua vết cắn, đặc biệt là từ chó, loài động vật chính gây bệnh ở châu Á Các thầy thuốc cổ phương Đông đã ghi nhận triệu chứng tương tự như bệnh dại, bao gồm sợ nước và sợ gió Theo Yuhong (2001), chó bị dại được xem là hiện thân của quỷ và không thể kiểm soát Ngoài chó, một số loài động vật hoang dã như chó sói, chó rừng và cầy mangut cũng là nguồn lây bệnh quan trọng (WHO, 2018).
Bệnh dại trên chó được mô tả sớm nhất ở Thổ Nhĩ Kỳ vào năm 1586 Năm 1852, mộtconchósóinhiễmvirusdạiđãtấncônghơn100ngườitạithịtrấnAdaliaởAnatolia, một số người trong số đó
Bệnh dại, một căn bệnh nguy hiểm, đã gây ra nhiều cái chết từ những năm 1732 ở Nagasaki, Nhật Bản, và tiếp tục lây lan nhanh chóng, như trong đợt bùng phát ở Trung Quốc năm 1860 Vào đầu thế kỷ XIX, các nghiên cứu đã chứng minh rằng nước bọt của chó dại có khả năng lây nhiễm, thông qua việc gây bệnh trên thỏ bằng cách tiêm nước bọt từ chó bệnh Năm 1963, Atanasiu và các đồng nghiệp đã nghiên cứu cấu trúc và hình thái của virus dại trên động vật thí nghiệm Đặc biệt, Louis Pasteur đã có những bước tiến quan trọng trong điều trị dự phòng sau phơi nhiễm vào năm 1884, khi ông nghiền não tủy của chó mắc bệnh dại và gây nhiễm cho thỏ, từ đó tạo ra một virus biến đổi với thời gian ủ bệnh ngắn hơn, chỉ còn 6-7 ngày.
“virusdạicốđịnh”.Ngày6tháng7năm1885,lầnđầutiênPasteurđãdùngvaccinenão thỏbấthoạttiêmchocậubéJosephMeister7tuổi,bịmộtconchólêncơndạicắnnhiều vết.Saukhiđượcđiềutrị13mũitiêmvaccinedạicủaPasteurcậubéđãđượccứuthoát khỏi bệnh dại, sau đó vaccine nhanh chóng được nhân rộng trên toàn cầu (Chakrabarti, 2010).
Năm 1903, Negri phát hiện ra những thể vùi đặc hiệu trong tế bào thần kinh của động vật mắc bệnh dại, được gọi là thể Negri, là dấu hiệu quan trọng để xác định bệnh dại ở người và động vật (Phạm Nguyễn Minh Quý, 2007) Đến năm 1963, Atanasiu và cộng sự đã nghiên cứu cấu trúc và hình thái của virus dại thông qua kính hiển vi điện tử trên động vật thí nghiệm và nuôi cấy tế bào (Đinh Kim Xuyến, 2006).
Vào những năm 1980, sự tiến bộ trong kỹ thuật sinh học phân tử và công nghệ sinh học đã cho phép ứng dụng kỹ thuật kháng thể đơn dòng để chẩn đoán các chủng virus gây bệnh ở người và động vật Kỹ thuật PCR đã giúp mở rộng hiểu biết về trình tự gen của virus, đồng thời kỹ thuật sinh học phân tử đã mang lại nhiều tiến bộ trong việc sản xuất các vaccine dạng tái tổ hợp.
Vaccine phòng bệnh dại đầu tiên được sử dụng ở Ấn Độ là vaccine sống đã khô của Pasteur, sau đó được thay thế bằng vaccine Semple vào năm 1911, vaccine này đã trở thành loại vaccine phòng bệnh dại phổ biến nhất trên thế giới cho đến năm 2000 Vào năm 1984, virus dại được mô tả là một hạt ARN có lớp vỏ ngoài cần thiết cho khả năng lây nhiễm, đặc biệt có hình dạng giống viên đạn.
Virus dại (RABV) thuộc chi Lyssavirus, họ Rhabdoviridae và bộ Mononegavirales RABV là tác nhân gây ra bệnh dại cổ điển ở cả động vật và con người, và nó là một loại virus có khả năng xâm nhập vào hệ thần kinh cao ở động vật có vú.
Họ Rhabdoviridae có hơn 100 chủng virus phân bố rộng rãi trong tự nhiên, có khả năng gây nhiễm cho động vật Virus dại được phân loại thành hai loại chính: virus dại đường phố và virus dại cố định (Wunner, 2002).
Dựa trên mối liên quan giữa kháng nguyên và huyết thanh học, nghiên cứu đã áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử và kháng thể đơn dòng để nhận dạng các Lyssavirus từ một số loài động vật hoang dã Các chủng virus này được phân chia thành 7 genotype (từ genotype 1 đến genotype 7) dựa trên đặc tính kháng nguyên đa dạng, tương tự như virus dại và có khả năng gây viêm não tủy Ngoài ra, còn tồn tại 3 genotype (genotype 8, 9, 10) với tính chất kháng nguyên khác biệt so với virus dại và không gây viêm não tủy ở động vật Trong số 16 loại Lyssavirus, chỉ có RABV có khả năng gây bệnh trên nhiều vật chủ, trong khi các Lyssavirus khác chủ yếu gây bệnh trên dơi Dựa trên các phân tích, Lyssavirus được phân thành 2 nhóm.
Nhóm I gồm RABV cổ điển, Duvenhage virus (DUVV), European batLyssavirus type1(EBLV-1)vàtype2(EBLV-2),AustralianbatLyssavirus(ABLV),Aravanvirus
The Lyssavirus group includes several strains such as Aravan virus (ARAV), Khujand virus (KHUV), Irkut virus (IRKV), Bokeloh bat Lyssavirus (BBLV), Ikoma Lyssavirus (IKOV), Lleida bat Lyssavirus (LLEBV), and Gannoruwa bat Lyssavirus (GBLV) (Gunawardena et al., 2016; Hanlon et al., 2005) All Lyssaviruses in group I are transmitted by bats, with the exception of Rabies virus (RABV), which is also transmitted by carnivorous animals (Rupprecht et al., 2017).
Nhóm II của virus Lyssavirus bao gồm Lagos bat Lyssavirus (LBV), Mokolavirus (MOKV) và Shimonabat virus (SHIBV) (Kuzmin et al., 2011) Phân tích phát sinh loài cho thấy tất cả các Lyssavirus nhóm II đều có nguồn gốc từ một loại virus tiền thân của dơi (Rupprecht et al., 2017) Ngoài ra, West Caucasian virus (WCBV) không phản ứng chéo về mặt huyết thanh học với bất kỳ thành viên nào ở nhóm I và II, và dự kiến thuộc nhóm thứ ba (Freuling et al., 2011).
2.1.3 Đặc điểm hình thái và cấu trúcvirus
Virus dại có cấu tạo bao gồm protein (67-74%), lipid (20-26%), carbohydrate (3%) và RNA (2-3%) (Riede et al., 2019) Virus này có hình dạng viên đạn với bộ gen là RNA sợi đơn, không phân đoạn, phân cực âm, kích thước khoảng 75 x 180 nm và mã hóa 5 loại protein từ 3’ đến 5’: nucleoprotein (N), phosphoprotein (P), matrix protein (M), glycoprotein (G) và polymerase (L) (Ge et al., 2010) Tất cả các Rhabdovirus đều có hai thành phần cấu trúc chính: lõi ribonucleoprotein dạng xoắn (RNP) bên trong và một lớp vỏ bao quanh.
Trong lõi RNP của virus, các protein N, P và L đều tham gia vào RNA polymerase của virion Trong virus RABV, cả protein N và P đều được phosphoryl hóa, trong khi ở các loại Rhabdovirus khác chỉ có protein P được phosphoryl hóa (Gupta et al., 2000) Protein N là protein chiếm ưu thế nhất trong lõi RNP với 1325 hoặc 1800 bản sao, tiếp theo là protein P với 691 hoặc 950 bản sao và protein L với 25 hoặc 72 bản sao Phân tích cấu trúc của virion cho thấy tỷ lệ N:P trong RNP là 2:1 (Marriott và Dimmock, 2010).
Protein cấu trúc của virus RABV bao gồm G và M, được liên kết với lớp vỏ lipid kép bao quanh lõi RNP Protein G, với khoảng 400 gai được sắp xếp chặt chẽ trên bề mặt virus, đóng vai trò quan trọng trong việc nhận biết và liên kết với các thụ thể của tế bào, cần thiết cho khả năng gây bệnh và phản ứng miễn dịch G là protein duy nhất được glycosyl hóa, chiếm 10 - 12% tổng khối lượng protein Trong khi đó, protein M có kích thước nhỏ, một phần nằm ở vỏ virus và phần còn lại bên trong virion, nơi nó tương tác với N để tạo liên kết giữa vỏ và RNP M có khả năng kết hợp với cả RNP và G trong các tế bào bị nhiễm, tạo ra các virion thế hệ sau và có thể là protein trung tâm trong quá trình lắp ráp virion Rhabdovirus.
Hình 2.1: Cấu tạo virus dại (Fooks and Jackson, 2020)
Vào đầu những năm 1900, Adelchi Negri đã thực hiện các nghiên cứu chi tiết về não động vật bị nhiễm virus dại và mô tả các thể vùi nội chất tế bào thần kinh đặc trưng hiện nay mang tên ông Mặc dù ông hiểu rằng các thể xâm nhập này là một loại sinh vật đơn bào, nhưng ông cho rằng việc phát hiện chúng là chẩn đoán đặc biệt cho nhiễm virus dại Công trình của Negri đã mở đường cho nhiều nghiên cứu khác kéo dài đến nửa sau thế kỷ 20, tập trung vào bản chất của các thể Negri và ý nghĩa của chúng trong cơ chế bệnh sinh của bệnh dại.
Thể Negri là những hạt nhỏ có hình dạng thay đổi, thường gặp trong nơron thần kinh, đặc biệt là ở sừng Ammon, với kích thước dao động từ 0,5 - 30 µm Đây là dấu hiệu đặc trưng của bệnh dại, và khi phát hiện thể Negri trong tế bào não của động vật, có thể chẩn đoán rằng con vật mắc bệnh dại Đáng lưu ý, thể Negri thường được tìm thấy trong các trường hợp nhiễm virus dại “đường phố”, nhưng chưa từng phát hiện ở các chủng virus “cố định”.
Cơ chế bệnh sinh củavirusdại
2.2.1 Sự xâm nhập của virus vào hệ thầnkinh
Các nghiên cứu ban đầu về cơ chế bệnh sinh của virus dại (RABV) đã chỉ ra rằng việc xác định các con đường và tốc độ lây lan của virus là rất quan trọng Việc cắt cụt chi có thể giúp ngăn ngừa sự phát triển của bệnh dại, và thời gian phẫu thuật cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình này Những nghiên cứu sau đó cho thấy phẫu thuật cắt đuôi thần kinh tọa mang lại kết quả tương tự như cắt cụt chi Thí nghiệm cho thấy thời kỳ ủ bệnh của RABV đường phố phụ thuộc vào thời gian di chuyển của virus từ thần kinh ngoại vi đến thần kinh trung ương, trong khi các chủng RABV cố định có thời kỳ ủ bệnh ngắn hơn.
Thời gian ủ bệnh sau khi tiếp xúc với vết cắn của virus dại (RABV) ở người thường dao động từ 20 đến 90 ngày, nhưng có thể ngắn hơn hoặc kéo dài hơn một năm Nghiên cứu cho thấy đại thực bào có khả năng cô lập RABV in vivo, mặc dù điều này chưa được xác nhận trong thí nghiệm động vật Các thí nghiệm trên động vật cho thấy RNA của virus thường có mặt trong cơ thể nhưng không xuất hiện trong các mẫu tủy sống Hơn nữa, các nghiên cứu miễn dịch trước khi triệu chứng lâm sàng xuất hiện cho thấy sự nhiễm trùng ở các sợi cơ và tế bào sợi tại vị trí cấy lưng là không thường xuyên.
Mặc dù vẫn chưa rõ ràng, nhưng sự nhiễm trùng của các sợi cơ có thể là một bước quan trọng để virus xâm nhập vào hệ thống thần kinh ngoại vi Nghiên cứu trên chuột hamster bú sữa mẹ nhiễm RABV cho thấy rằng nhiễm trùng bắt đầu ở tế bào cơ vân gần vị trí cấy ghép, sau đó lan sang thần kinh cơ và các sợi thần kinh gần đó Bằng chứng cho thấy sự nhiễm trùng diễn ra ở các dây thần kinh nhỏ trong cơ, gân và mô liên kết lân cận Tuy nhiên, những sự kiện này chỉ xảy ra trong vòng vài ngày sau khi tiêm chủng và không kéo dài trong thời gian ủ bệnh thường gặp ở các bệnh nhiễm trùng tự nhiên.
Nghiên cứu trên mô hình chuột cho thấy rằng sau khi cấy các chủng virus RABV cố định, không có dấu hiệu nhiễm trùng sớm ở cơ hoặc các mô ngoài màng cứng khác RNA virus không được phát hiện trong cơ chuột trưởng thành từ 6 đến 30 giờ sau khi cấy, mặc dù đã xác định RNA virus trong hạch lâm ba sau 18 giờ và trong thân não sau 24 giờ Điều này chứng tỏ RABV có khả năng xâm nhập trực tiếp vào dây thần kinh ngoại vi mà không cần tái tạo trong các tế bào ngoài màng cứng, đặc biệt trong thời gian ủ bệnh ngắn, cho thấy cơ chế xâm nhập của các chủng virus RABV cố định.
Phần lớn các trường hợp mắc bệnh dại ở người không có tiền sử phơi nhiễm, thường do vết cắn không rõ ràng hoặc bị quên Các chủng virus dại (RABV) phổ biến nhất thường xuất phát từ dơi lông bạc và dơi ba màu Nghiên cứu về virus dại ở dơi lông bạc (SHBRV) cho thấy virus này có khả năng sao chép tốt ở nhiệt độ cơ thể (34°C) và có khả năng lây nhiễm cao hơn so với các loại tế bào khác trong lớp hạ bì, bao gồm cả sợi nguyên bào và tế bào biểu mô Do đó, SHBRV có khả năng sao chép hiệu quả trong lớp hạ bì Tuy nhiên, các nghiên cứu thử nghiệm về dơi vẫn chưa được báo cáo, chủ yếu liên quan đến phơi nhiễm bề ngoài ở da và mô dưới da.
Virus RABV có thể xâm nhập qua đường khứu giác và đường miệng, nhưng hiếm hơn so với vết cắn Nghiên cứu cho thấy niêm mạc mũi là vị trí xâm nhập chính của virus, với kháng nguyên RABV được phát hiện trong tế bào niêm mạc mũi sau 6 ngày nhiễm Nhiễm trùng não bắt đầu từ các khứu giác, cho thấy virus lan truyền vào não qua con đường này Các kết quả tương tự cũng được ghi nhận khi sử dụng nhiều chủng RABV trên chuột và chuột đồng Kháng nguyên RABV đã được tìm thấy trong tế bào thụ cảm khứu giác của dơi ở Brazil, chứng minh niêm mạc mũi là cổng vào cho sự lây nhiễm tự nhiên của virus trong các hang động.
Sự lây truyền virus dại (RABV) qua đường miệng có thể xảy ra khi con người tiêu thụ thịt chó sống hoặc khi động vật như chuột và thỏ bị nhiễm qua đường uống hoặc ống thông dạ dày Mặc dù kháng nguyên RABV không được phát hiện trong tế bào niêm mạc ruột, nhưng lại có mặt trong các đám rối thần kinh ruột như Auerbach và Meissner Những phát hiện này cho thấy virus có thể xâm nhập qua đường miệng, tuy nhiên, tầm quan trọng của việc lây nhiễm qua đường miệng trong bệnh dại tự nhiên ở động vật vẫn còn chưa rõ ràng (Begeman et al., 2018; Ugolini, 2011).
2.2.2 Sự truyền lây đến thần kinh trungương
Sự truyền lây hướng tâm của virus RABV đến hệ thần kinh trung ương và dây thần kinh ngoại vi được chi phối bởi nhiều yếu tố Colchicine, một chất ức chế hiệu quả sự vận chuyển trục nhanh trong dây thần kinh tọa của chuột, cho thấy rằng sự vận chuyển ngược dòng của virus diễn ra với tốc độ từ 50 đến 100 mm/ngày Nghiên cứu cho thấy phosphoprotein RABV tương tác với dynein LC8, một thành phần quan trọng trong quá trình vận chuyển nội bào Sự tương tác này có ý nghĩa quan trọng đối với sự vận chuyển theo trục của RABV Tuy nhiên, việc xóa bỏ vùng liên kết dynein LC8 của chủng SAD-B19 làm giảm khả năng lây lan của virus Các vectơ dựa trên mô hình virus RABV có thể tăng cường chuyển gen đến các tế bào thần kinh thông qua việc cải thiện vận chuyển ngược trục, cho thấy glycoprotein RABV có thể đóng vai trò quan trọng hơn so với phosphoprotein.
Nghiên cứu trên chuột và chuột đồng cho thấy sự tham gia của các tế bào thần kinh vận động trong tủy sống và các tế bào cảm giác trong hạch thần kinh rễ lưng Sau khi tiêm virus dại (CVS) vào cơ chuột, nhiễm trùng được phát hiện ở hạch lâm ba, với kết quả RT-PCR cho thấy nhiễm trùng xuất hiện ở hạch lâm ba sau 18 giờ và ở thân não sau 24 giờ Tuy nhiên, các phương pháp đánh giá tế bào thần kinh sử dụng CVS trên chuột vàng không ghi nhận sự lây nhiễm ở các tế bào thần kinh cảm giác Ba ngày sau khi cấy, có sự di chuyển kháng nguyên đến các tế bào thần kinh đệm và vùng trung gian của tế bào thần kinh phó giao cảm ở xương cùng, nhưng virus không xuất hiện ở các nơron cảm giác chính trong hạch rễ cục bộ ở lưng (Udow et al., 2013; Kelly and Strick, 2000).
Có sự khác biệt trong các biểu hiện lâm sàng của bệnh dại do chó và dơi gây ra Bệnh dại từ dơi thường xuất hiện với triệu chứng run và giật cơ, trong khi bệnh dại từ chó lại có các triệu chứng như sợ nước và sợ hơi thở Mặc dù chưa có nghiên cứu cụ thể nào đánh giá con đường lây lan của virus dơi sau khi xâm nhập vào da, nhưng có thể có sự khác biệt quan trọng trong cách virus lây lan trong vật chủ so với khi bị chó cắn Điều này có thể giải thích một phần cho các triệu chứng lâm sàng khác nhau khi nhiễm các biến thể virus RABV (Udow et al., 2013; Begeman et al., 2018).
2.2.3 Sự truyền lây trong thần kinh trungương
Khi các tế bào thần kinh trung ương trong tủy sống hoặc thân não bị nhiễm RABV, virus này lây truyền nhanh chóng qua các con đường tế bào thần kinh Nghiên cứu cho thấy RABV có thể vận chuyển ngược dòng theo trục với tốc độ từ 100 - 400 mm/ngày ở chuột Tuy nhiên, ở khỉ, sự lây lan của RABV chủ yếu diễn ra qua việc vận chuyển qua synap Các nghiên cứu với virus RABV tái tổ hợp thiếu glycoprotein cho thấy sự lây lan bị hạn chế trong não chuột, không có bằng chứng cho thấy sự truyền qua synap tới các tế bào thần kinh khác Do đó, glycoprotein RABV là yếu tố cần thiết cho sự truyền lây giữa các tế bào thần kinh.
Nghiên cứu siêu cấu trúc trên chồn hôi cho thấy virus RABV chủ yếu xâm nhập qua màng tiếp hợp và ảnh hưởng đến các dây thần kinh, với virion được phát hiện trong gian bào Mặc dù RABV có tính kích thích thần kinh cao, nhưng nó lây nhiễm tế bào Bergmann trong tiểu não nhiều hơn tế bào Purkinje ở chồn hôi nhiễm thực nghiệm Đối với chồn hôi nhiễm virus đường phố, sự lây nhiễm ban đầu xảy ra ở tủy sống thắt lưng, sau đó virus truyền lên não qua các dây thần kinh khác nhau, bao gồm liên kết giữa bó nhân đỏ-gai và vỏ não-tủy sống.
Bó gai - đồi bên, bó tiền đình gai, bó lưới gai, dịch não tủy, tủy sống (Begemanet al.,2018).
2.2.4 Sự truyền lây từ thần kinh trungương
Sự truyền lây ly tâm của virus dại (RABV) từ thần kinh trung ương đến các tuyến tế bào thần kinh ngoại vi là yếu tố quan trọng trong việc lây nhiễm virus đến vật chủ tự nhiên Nhiễm trùng tuyến nước bọt là cần thiết để truyền bệnh dại từ dịch miệng của động vật mắc bệnh, với các tuyến nước bọt chứa dây thần kinh phó giao cảm và thần kinh hầu họng Bằng chứng cho thấy virus lây lan qua các sợi trục tận cùng, không phải qua sự lan truyền giữa các tế bào biểu mô Kháng nguyên RABV tập trung ở vùng đỉnh tế bào niêm mạc, trong khi chất nền virus được phát hiện ở vùng đáy Nồng độ virus trong tuyến nước bọt thường cao hơn so với mô thần kinh trung ương (Ugolini, 2011; Begeman et al., 2018).
Nhiễm trùng có thể xảy ra trong tuyến nước bọt, lớp tế bào hạch của võng mạc và tế bào biểu mô giác mạc, với sự tham gia của các tế bào cảm giác qua dây thần kinh lâm ba Cả hai lớp biểu mô bề mặt và sâu của giác mạc đều có thể bị nhiễm trùng Phương pháp sinh thiết da cho thấy nhiễm trùng ở các đầu dây thần kinh cảm giác của lông xúc giác, là một trong những cách chẩn đoán bệnh dại ở động vật trước khi giết mổ Kháng nguyên có thể được phát hiện ở các dây thần kinh nhỏ quanh nang lông hoặc trong tế bào biểu mô của nang lông ở da Nhiễm trùng cũng có thể lan rộng đến các cơ quan đầu cuối của dây thần kinh cảm giác trong khoang miệng và mũi, bao gồm biểu mô khứu giác và các chồi vị giác trên lưỡi.
Nghiên cứu về bệnh dại đã chỉ ra rằng virus có thể lây lan qua các tế bào thần kinh ở nhiều cơ quan ngoài màng cứng, như tủy thượng thận, hạch tim, đám rối trong đường tiêu hóa, tuyến nước bọt chính, gan và tuyến tụy ngoại tiết Ngoài ra, virus cũng có thể lây nhiễm qua các tế bào không phải thần kinh, bao gồm acini trong tuyến nước bọt, biểu mô lưỡi, cơ tim, cơ xương, nang lông và các đảo của tuyến tụy Một số báo cáo cũng ghi nhận tình trạng viêm cơ tim ở người mắc bệnh dại (Udow et al., 2013; Hemachudha et al., 2013).
2.2.5 Rối loạn thần kinh ở độngvật
Biểu hiệnlâmsàng
Tất cả các loài động vật bị dại đều biểu hiện triệu chứng thần kinh điển hình, kèm theo một số triệu chứng khác như bỏ ăn, sợ hãi, dễ bị kích thích, và có xu hướng tìm chỗ vắng vẻ hoặc nằm ở nơi tối Quá trình diễn biến lâm sàng có thể chia làm ba giai đoạn: tiền triệu chứng, pha kích ứng và bại liệt Tuy nhiên, cách chia này ít có giá trị thực tiễn do sự biến động về triệu chứng lâm sàng và độ dài không đều giữa các giai đoạn.
Giai đoạn tiền triệu chứng của bệnh dại kéo dài từ 1 đến 4 ngày, với các biểu hiện như cảm giác sợ hãi, đau đầu, sốt, mệt mỏi và khó chịu, cũng như cảm giác tê và đau tại vị trí vết thương do virus xâm nhập Bệnh tiến triển nhanh chóng sang giai đoạn điên cuồng hoặc bại liệt, với một số trường hợp có thể diễn ra cả hai giai đoạn Sau khi bắt đầu triệu chứng liệt, bệnh nhân có thể tử vong chỉ sau vài ngày Một số con vật có thể chết rất nhanh mà không có biểu hiện lâm sàng rõ ràng Thuật ngữ “bệnh dại điên cuồng” được sử dụng để mô tả các dấu hiệu kích ứng mạnh mẽ và hành vi tấn công, trong khi “bệnh dại thầm lặng hoặc bại liệt” ám chỉ các trường hợp ít có biến đổi tính cách, gây mất khả năng vận động và dẫn đến bại liệt.
2.3.1 Dạng điên cuồng (Furiousform) Đâylà“hộichứngchóđiên”cổđiểnnhưngcũngcóthểthấyởtấtcảcácloàiđộng vật khác Con vật trở nên dễ bị kích thích, tăng tính cảnh giác và lo lắng, đồng tử mắt dãnrộng.Tiếngồncóthểkíchthíchsựtấncôngcủaconvật.Nhómđộngvậtănthịtmắc dạng bệnh dại thường đi lang thang khắp nơi, tấn công các động vật khác, người và những vật đang di chuyển. Chúng có thể ăn phân, rơm rạ và sỏi đá Chó dại có thể cắn cácsợidâyxích,thanhkhungchuồng,tựbẽgãyrăngvàluôntìmcáchcắnbàntayđang dichuyểnphíatrướcchuồng.Chóconcóthểvuiđùatháiquávớingườitiếpxúc,nhưng cắn ngay khi được vuốt ve và thường trở nên hung tợn sau đó vài giờ Mèo nhà và mèo hoang bị dại có thể tấn công bất thình lình, cắn và cào hungtợn.
Bại liệt cơ hầu-họng và cơ nhai ở chó dẫn đến mất khả năng phối hợp các cơ vận động, chảy nhiều nước bọt và khó khăn trong việc nuốt Triệu chứng thường thấy là trễ hàm dưới, và tình trạng này có thể tiến triển nhanh chóng, ảnh hưởng đến các phần khác của cơ thể, gây hôn mê và có thể dẫn đến tử vong trong vài giờ.
Hình 2.5: Chó mắc bệnh dại dạng bại liệt (Wildeet al., 2016)
2.3.3 Những biểu hiện lâm sàng theo loàivật
Bò mắc bệnh dại dạng điên cuồng rất nguy hiểm, có thể tấn công người và động vật khác, đồng thời gây ra sự ngừng tiết sữa đột ngột Một triệu chứng lâm sàng điển hình là tiếng rống bất thường, diễn ra không liên tục cho đến khi chết Ngựa và lừa thường biểu hiện buồn bã, lo lắng, kèm theo tiếng rống giống triệu chứng bệnh xoắn ruột ngựa (colic) Cũng như các loài khác, ngựa có thể cắn và tấn công, khiến gia chủ khó kiểm soát.
Cáo thường tấn công nhím, cho thấy một tính cách bất thường ở loài này Các loài chồn bị dại có thể trở nên hung tợn, không sợ người và mất khả năng tự chủ, hoạt động cả ngày lẫn đêm Hành vi bất thường của động vật trên cạn, như tấn công các động vật làm cảnh, có thể là dấu hiệu của bệnh dại.
Các động vật thuộc bộ Gặm nhấm như chuột, sóc, nhím và bộ Thỏ (Lagomorpha) ít bị nhiễm virus dại, nhưng khi xuất hiện các triệu chứng bất thường liên quan đến hệ thần kinh, cần tiến hành đánh giá nghiêm túc Diễn biến bệnh dại trên động vật hoang dã, bao gồm chuột ở Nhật Bản gần đây, cho thấy sự cần thiết phải chú trọng nghiên cứu các chu trình truyền lây bệnh dại trong tự nhiên đối với nhóm động vật này.
Hình 2.6: Lên cơn động kinh trong bệnh dại ở người (www.cdc.gov)
Các phương pháp dùng trong chẩn đoánbệnhdại
Chẩn đoán bệnh dại và lâm sàng gặp nhiều khó khăn, đặc biệt ở những khu vực có bệnh dại không phổ biến Ở giai đoạn đầu, bệnh dại thường bị nhầm lẫn với các bệnh khác, do đó cần áp dụng các kỹ thuật chẩn đoán phòng thí nghiệm khi có nghi ngờ Đối với động vật nghi ngờ mắc bệnh dại, cần phải gây mê, sau đó giết chết và cắt đầu để gửi đến các phòng thí nghiệm chẩn đoán.
Chẩn đoán bệnh dại được thực hiện tại các phòng thí nghiệm chất lượng cao, theo chỉ định của các cơ quan y tế hoặc thú y có thẩm quyền, và tuân thủ các nghị định chuẩn hóa hiện hành Để chẩn đoán lâm sàng bệnh dại, cần xem xét các đặc điểm như tiền sử bị chó cắn, sau đó chó chết do bệnh dại, cùng với các triệu chứng như sợ nước và sợ gió.
Cần chẩn đoán phân biệt bệnh dại với các bệnh khác có biểu hiện sợ nước và sợ gió, như sốt phát ban do Rickettsia, sốt rét ác tính, và sảng nhiễm trùng Biểu hiện này cũng có thể xuất hiện ở phụ nữ mang thai hoặc viêm màng tim Bệnh nhân uốn ván có triệu chứng cứng hàm và co cứng cơ liên tục, trong khi nhiều trường hợp dại bị nhầm lẫn với rối loạn tâm thần Sảng rượu có các triệu chứng loạn thần nhưng không có co thắt hầu họng và rối loạn hô hấp, và tình trạng bệnh diễn ra liên tục Một số trường hợp bị chó cắn nhưng không bị dại vẫn có thể sống, tuy nhiên bệnh nhân có thể lo sợ quá mức dẫn đến biểu hiện như sợ gió, sợ nước mà không có co thắt cơ hầu họng Dại thể bại liệt cần phân biệt với hội chứng Guillain-Barré và các nguyên nhân gây liệt khác, bao gồm viêm tủy và ép tủy, cũng như khả năng tai biến liệt do vaccine.
2.4.2.1 Phương pháp giải phẫu vithể
Tiểu thể Negri là dấu hiệu đặc trưng của bệnh dại, thường được tìm thấy trong tổ chức não của chó mắc bệnh Chúng có hình dạng đa dạng, bao gồm hình tròn, hình trứng và hình bầu dục, với kích thước dao động từ 0,5 đến 30 micromet Tiểu thể này chủ yếu xuất hiện trong neuron thần kinh, đặc biệt là ở sừng Amon, trong khi số lượng ở tiểu não ít hơn Để chẩn đoán bệnh dại, cần kiểm tra cuống não và tiểu não, và các mẫu phải được bảo quản trong thùng lạnh.
2.4.2.2 Phương pháp phát hiện kháng nguyênvirus
Xác định bệnh dại qua việc phát hiện kháng nguyên virus dại trong mẫu bệnh phẩm là một kỹ thuật quan trọng, bao gồm miễndịch huỳnh quang và tiêm truyền động vật thí nghiệm Tại Việt Nam, chỉ một số ít trung tâm như VVSDTTƯ và Trung Tâm Chẩn đoán Thú y trung ương ở Hà Nội, Viện Pasteur, cùng Viện Vệ sinh được trang bị công nghệ hiện đại để chẩn đoán chính xác bệnh dại.
Y tế Công cộng, Chi cục Thú y thành phố Hồ ChíMinh.
Hệ gene củavirusdại
Nucleoprotein (N) của virus dại (RABV) có cấu trúc gồm 450 acid amin, trong đó vị trí 389 (S389) được phosphoryl hóa và có trọng lượng phân tử 57 kDa Phosphoryl hóa N trong RABV dường như do casein kinase II của tế bào thực hiện (Marston et al., 2007) Trình tự acid amin của N được bảo tồn tốt nhất trong số các protein của virus và giữ vai trò quan trọng trong chức năng của virus Mặc dù bản chất của N được bảo tồn, vẫn tồn tại sự đa dạng di truyền cao trong các đoạn ngắn của gen N Đột biến acid amin trên gen N có thể tạo ra các loại kháng nguyên khác nhau giữa các chủng virus, dẫn đến sự hình thành các kháng thể đơn dòng kháng N (MAbs) (Kuzmin et al., 2005).
Vị trí tương tác trực tiếp của N với vRNA tại các acid amine 149, 161, 168, 225, 235,
Sau khi liên kết với vRNA, protein N sẽ thay đổi cấu trúc tại vị trí Ser389 Sự phosphoryl hóa tại Ser389 không chỉ tăng cường tương tác giữa N và P trong RNP của virus mà còn đóng vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh quá trình phiên mã và sao chép vRNA.
Gen N đóng vai trò quan trọng trong việc tạo ra miễn dịch chống lại virus dại, một loại virus gây chết người ở động vật (Liu et al., 2004) Các vị trí liên kết với kháng thể ở các dạng khác nhau của gen này cũng được nghiên cứu để hiểu rõ hơn về khả năng miễn dịch.
N là biểu hiện sự phân bố trong tế bào chất liên quan đến virus RNP N gắn kết với tế bào chất của IB hoặc NB, và N trưởng thành là một kháng thể đơn dòng (Mab) đặc hiệu cho vị trí kháng nguyên II, cho phép nhận diện vị trí liên kết kháng thể cụ thể trên kháng nguyên.
NliênkếtvớiIB.VịtríliênkếtvớikhángthểphụthuộccấutrúckhángnguyênIIvàIII tại Ser389 của N- RNA (Lahayeet al.,2012).
NRABV là một thành phần chính trong các tế bào Th hỗ trợ, có vai trò quan trọng trong việc thực hiện các phản ứng chéo giữa bệnh dại và các virus liên quan Nó được coi là siêu kháng nguyên ở người và có khả năng ngoại sinh NRABV không chỉ kích hoạt tế bào lympho máu ngoại vi trong vaccine ở người mà còn tạo ra phản ứng VNA nhanh chóng và mạnh mẽ hơn khi tiêm vaccine phòng dại bất hoạt Ngoài ra, nó còn kích hoạt và huy động các tế bào TCD4+ Vb8 để hỗ trợ sản xuất VNA, đồng thời có khả năng liên kết với các kháng nguyên HLAII biểu hiện trên bề mặt tế bào.
Phosphoprotein (P) của virus RABV chứa 297 acid amin (38 kDa) và có sự đa dạng lớn nhất trong các loại protein của virus này, với tỷ lệ biến đổi từ 43-97% Hai vùng có sự đột biến lớn nhất nằm trong khoảng 52-78 và 155-178 P là một loại protein đa chức năng, kết hợp với N để hình thành phức hợp N-P, hoạt động như một chaperone trong việc tổng hợp N mới, đồng thời ngăn chặn quá trình tự lắp ráp và liên kết không đặc hiệu với RNA tế bào, đóng vai trò quan trọng trong việc gấp khúc N của vRNA Ngoài ra, P còn là một tiểu đơn vị của phức hợp RNA polymerase (P-L) và đóng vai trò quan trọng như một đồng yếu tố không xúc tác trong quá trình phiên mã và sao chép bộ gen virus Nếu thiếu P, protein L không thể hoạt động hiệu quả.
The proteins HaidạngPnổibậthiệndiện, associated with the rabies virus (RABV), are found within the virus virion and infected cells, with molecular weights of 37 kDa and 40 kDa (Toriumi and Kawai, 2004) RABV undergoes phosphorylation at its N-terminus by two distinct protein kinases, specifically a 71-kDa kinase and protein kinase C Additionally, phosphorylation occurs at residues S63 and S64 of the 36 kDa protein, which is expressed in E coli, as well as in the 37 kDa protein found in mouse kidney tissues.
Quá trình phosphoryl hóa ảnh hưởng đến tính linh động của protein P (36 kDa và 37 kDa) trong điện di SDS-PAGE, dẫn đến sự di chuyển chậm hơn của chúng.
P RABV kết nối với N và L thông qua các miền đặc trưng của P cho từng loại Nghiên cứu cho thấy có ít nhất hai vị trí liên kết độc lập với N trên P (Castelet al., 2009) Một vị trí nằm ở đầu C của N trong phức hợp RNA-N (giữa các acid amin 267 và 297) và một vị trí ở đầu N giữ các acid amin 69 và 177 Cả hai vị trí này tương tác với N một cách độc lập Sự tương tác liên quan đến vị trí liên kết đầu N (40 acid amin đầu tiên) của P có thể cạnh tranh với RNA nội sinh và hình thành các dimer kéo dài (Gerard et al., 2007).
Trong quá trình hình thành RNP mới, protein P liên kết với protein L để tạo thành phức hợp mã hóa RNA polymerase virus hoạt động Vị trí liên kết của P nằm trong 19 acid amin đầu tiên Quá trình oligome của P RABV diễn ra ở 52 acid amin đầu tiên của protein N Một đặc điểm nổi bật của protein P RABV là khả năng tương tác với nhiều protein của tế bào chủ, trong đó LC8 tương tác mạnh với P của RABV và MOKV, góp phần vào quá trình vận chuyển nội bào của các bào quan P tương tác với LC8 tại vùng acid amin 138 và 172.
Sự liên kết của P với LC8 không theo quá trình vận chuyển trục của RABV, vì việc xóa vùng liên kết LC8 không làm thay đổi sự xâm nhập của RABV vào thần kinh trung ương Tuy nhiên, việc xóa vùng liên kết LC8 đã ức chế đáng kể sự sao chép của virus, dẫn đến mất khả năng lây nhiễm của virus trong thần kinh trung ương (Kammouni et al., 2015; 2017).
P RABV đóng vai trò quan trọng trong việc chống lại miễn dịch bẩm sinh của vật chủ, đặc biệt là hệ thống interferon loại I/III Các interferon này được sản xuất trong các tế bào bị nhiễm virus khi nhận diện sự xâm nhập của các PAMP hoặc DAMP, cũng như acid nucleic của virus Sau đó, các interferon kích hoạt tín hiệu JAK/STAT, thúc đẩy quá trình phiên mã của hàng trăm gen để tạo ra kháng thể, dẫn đến trạng thái kháng virus mạnh mẽ Tuy nhiên, RABV không kích hoạt các tín hiệu hoá học trong quá trình phiên mã của các gen interferon và các con đường truyền tín hiệu interferon, từ đó hạn chế khả năng thiết lập phản ứng kháng virus của vật chủ.
L RABV chứa khoảng 2142 acid amin, chiếm 54% khả năng mã hóa của bộ gen Thành phần L đóng vai trò xúc tác trong việc tạo phức hợp polymerase, cùng với P, chịu trách nhiệm cho các hoạt động enzyme liên quan đến quá trình sao chép và phiên mã của virus RNA, bao gồm cả RNA phụ thuộc RNA polymerase (RdRP) được hình thành từ sự kết hợp giữa PRNTase và MTase.
So sánh trình tự L của các virus RNA sợi âm khác nhau giúp xác định sự tương đồng chức năng nhằm xác định vị trí hoạt động của enzyme RNA polymerase của virus RABV, giống như các virus RNA sợi âm khác, kết hợp với virion để khởi đầu quá trình lây nhiễm Quá trình này bắt đầu bằng phiên mã sơ cấp của RNA bộ gen sau khi lõi RNP được phóng thích vào tế bào chất của tế bào chủ (Morin et al., 2017; Ogino et al., 2016).
Một trong những điểm nổi bật của L là số lượng acid amin được bảo tồn dọc theo protein trong các khối từ I đến VI Một số vùng có tỷ lệ cao các acid amin được duy trì ở vị trí giống hệt nhau, trong khi các miền khác có sự thay đổi để phù hợp với tính đa chức năng của L Các trình tự được bảo tồn như GDN (glycine, acid aspartic và asparagin) được tìm thấy rộng rãi ở tất cả các virus RNA sợi âm không phân đoạn Hai trình tự khác giữa các acid amin 754 đến 778 và 1332 đến 1351 trong L đã được xác định là các vị trí liên kết và sử dụng ATP Ba hoạt động thiết yếu do L mã hóa tham gia vào quá trình liên kết và sử dụng ATP bao gồm: (1) hoạt động phiên mã liên kết với các rNTPs, (2) polyadenyl hóa, và (3) hoạt động protein kinase để phosphoryl hóa P trong quá trình phiên mã (Ogino et al., 2010).
Tình hình nghiên cứu trong vàngoàinước
2.6.1 Tình hình nghiên cứu ngoàinước
Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), trung bình mỗi năm, thế giới ghi nhận khoảng 59.000 người tử vong do bệnh dại, với tốc độ cứ 10 phút lại có một người chết vì căn bệnh này, đáng chú ý là gần 50% các ca tử vong thuộc về trẻ em dưới 15 tuổi.
Theo báo cáo tại Hội nghị quốc tế lần thứ 4 về Giám sát bệnh dại ở châu Á diễn ra tại Hà Nội vào tháng 3 năm 2001, Ấn Độ ghi nhận khoảng 3 triệu người cần tiêm vaccine Dại hàng năm, trong đó 40% là trẻ em dưới 14 tuổi và 92-95% trường hợp do chó cắn Tình hình ở Trung Quốc cũng đáng lo ngại, với số ca tử vong trong 5 năm qua là 200 ca vào năm 1995, 159 ca năm 1996, 234 ca năm 1998, 341 ca năm 1999, và 226 ca tính đến tháng 7 năm 2000, trong khi tỷ lệ tiêm vaccine đạt 95-98% do chó cắn Tình trạng tương tự cũng xảy ra ở Nepal, Sri Lanka, Bangladesh, và Indonesia, với các nước Đông Nam Á chiếm tới 80% số ca tử vong vì bệnh dại trên toàn thế giới (Viện Pasteur TP HCM, 2001).
Theo báo cáo tại Hội nghị quốc tế về bệnh dại năm 2013 ở Bangkok, Thái Lan, cứ mỗi 15 phút lại có một người châu Á tử vong vì bệnh dại, trong đó 40% là trẻ em dưới 15 tuổi Bác sĩ Meslin cho biết, mỗi giờ có khoảng 800 người châu Á nghi bị súc vật dại cắn và cần tiêm vaccine Ngoài châu Á, các khu vực có nguy cơ mắc bệnh dại cao còn có châu Phi và Nam Mỹ Một số nước châu Âu như Bỉ, Đan Mạch, Pháp, Đức, Luxembourg, Hà Lan và Thụy Sĩ vẫn còn tồn tại bệnh dại, nhưng ở mức độ thấp và nguồn bệnh chủ yếu từ các loài thú khác như chồn, cáo, và dơi chuyển sang chó.
Chương trình phòng chống bệnh dại ở khu vực này đã sử dụng kỹ thuật ELISA gián tiếp để khảo sát 156 mẫu, trong đó có 92 mẫu (58,3%) cho thấy có đáp ứng miễn dịch với hàm lượng kháng thể > 0,5 IU/ml Kết quả cho thấy chó tại tỉnh Soria có tỷ lệ đáp ứng miễn dịch cao hơn (77,1%) so với tỉnh Léon (50%) Các yếu tố như tuổi, giới tính, môi trường sống và mục đích sử dụng cũng đã được đánh giá liên quan đến khả năng sinh kháng thể sau tiêm phòng.
Mansfield et al (2004) đã tiến hành khảo sát 16.073 mẫu huyết thanh của chó và mèo sau khi tiêm vaccine dại, cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P