Giới thiệu 1
Bệnh dại là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus gây ra, lây từ động vật sang người chủ yếu qua vết cắn Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), mỗi năm có khoảng 59.000 người tử vong do bệnh dại, với 99% trường hợp là do chó gây ra, 40% trong số đó là trẻ em dưới 15 tuổi, chủ yếu ở Châu Á và Châu Phi Ngoài ra, 29 triệu người phơi nhiễm cần điều trị dự phòng, trong đó 40% cũng là trẻ em dưới 15 tuổi Bệnh dại gây thiệt hại kinh tế ước tính khoảng 8,6 tỷ USD Ngày Thế giới phòng chống bệnh dại 28/9 được tổ chức nhằm nâng cao nhận thức và kêu gọi sự đoàn kết trong việc loại trừ bệnh dại toàn cầu.
Việt Nam đang đối mặt với tình trạng gia tăng bệnh dại, đặc biệt là do chó cắn, sau một thời gian giảm trong những năm 1990 Theo báo cáo của Ban phòng chống dại - Bộ Y tế, từ năm 2017 đến tháng 8/2021, cả nước đã ghi nhận 378 trường hợp tử vong do bệnh dại tại 52/63 tỉnh, thành phố, với trung bình 76 người tử vong mỗi năm, trong đó có nhiều ca ở Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL).
Theo báo cáo của Cục Thú y, từ năm 2017 đến tháng 8 năm 2021, đã có 41 tỉnh, thành phố phát hiện dịch bệnh dại trên động vật, buộc tiêu hủy 15.082 con chó, chiếm khoảng 0,04% tổng đàn Trung bình mỗi năm xử lý 3.016 con, dao động từ 1.294 con (năm 2021) đến 3.979 con (năm 2019) Cả nước có 35 tỉnh, thành phố chủ động lấy mẫu giám sát, với tổng cộng 2.068 mẫu được xét nghiệm, trong đó 227 mẫu (10,98%) dương tính với virus dại Tại khu vực Đồng bằng sông Cửu Long, 49 mẫu được giám sát, trong đó 43 mẫu dương tính, chiếm 87,75% Điều này cho thấy mức độ nguy hiểm và tầm quan trọng của công tác phòng chống dịch bệnh dại ở động vật, đặc biệt là ở chó.
Vào ngày 13 tháng 02 năm 2017, Thủ tướng đã phê duyệt "Chương trình quốc gia khống chế và tiến tới loại trừ bệnh dại giai đoạn 2017-2021" Chương trình này được giao cho Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (BNN&PTNT) và Bộ Y tế chủ trì, phối hợp với các Bộ, Ban, Ngành và Chính quyền địa phương trên toàn quốc để thực hiện.
Virus dại lưu hành tự nhiên trong vật chủ là động vật hoang dã (Rupprecht et al ,
Sự lưu hành của virus dại đã chuyển từ chó sang một số loài hoang dã, dẫn đến ít trường hợp tử vong ở người do động vật hoang dã so với chó nhà Virus dại ở động vật hoang dã có thể lây lan sang các loài khác, làm tăng nguy cơ tiếp xúc với con người và cần điều trị sau phơi nhiễm Mặc dù bệnh dại ở động vật hoang dã đã được nghiên cứu rộng rãi ở nhiều quốc gia, nhưng tại Việt Nam, đặc biệt là ở Đồng bằng sông Cửu Long, việc nghiên cứu này còn hạn chế Do đó, đề tài "Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở Đồng bằng sông Cửu Long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh" được thực hiện nhằm đáp ứng nhu cầu thực tế.
- Xác định tổng đàn và tỉ lệ tiêm phòng bệnh dại trên chó từ năm 2017-2020 tại ĐBSCL;
- Xác định kháng thể kháng virus dại trên đàn chó thả rông và tỷ lệ đáp ứng miễn dịch sau tiêm phòng bệnh dại trên chó;
- Xác định kháng thể kháng virus dại ở một số động vật hoang dã;
Nghiên cứu xác định trình tự nucleotide của virus dại trên gen N và đăng ký trên NCBI mang ý nghĩa khoa học và thực tiễn quan trọng trong việc hiểu biết về dịch tễ bệnh dại Công trình này so sánh cơ sở di truyền giữa các mẫu thực địa và các chủng virus liên quan, từ đó cung cấp cơ sở khoa học cho việc phát triển và thực hiện các biện pháp phòng chống dịch bệnh hiệu quả Mục tiêu cuối cùng là loại trừ bệnh dại tại khu vực Đồng bằng sông Cửu Long, góp phần bảo vệ sức khỏe con người Điểm mới của nghiên cứu này là việc ứng dụng công nghệ gen trong việc phân tích và quản lý dịch bệnh.
- Xác định kháng thể kháng virus dại của chó thả rong chưa tiêm phòng;
- Xác định kháng thể kháng virus dại trên dơi;
- Xác định được trình tự Nucleoprotein của virus dại ở động vật tại khu vực ĐBSCL và đăng ký trình tự trên Genbank
Nội dung, vật liệu và phương pháp nghiên cứu 42
Nội dung 1: Điều tra tình hình tiêm phòng và bệnh dại ở chó và tình hình tiêm phòng bệnh dại trên người từ 2017 đến 2020
Nội dung 2: Khảo sát nhận thức cộng đồng về bệnh dại
Nội dung 3: Khảo sát sự hiện diện của kháng thể kháng virus dại trên đàn chó, mèo thả rông và tại điểm giết mổ
Nội dung 4: Khảo sát đáp ứng miễn dịch trên chó sau tiêm phòng vaccine dại và miễn dịch thụ động của chó con
Nội dung 5: Đánh giá khả năng tồn trữ mầm bệnh dại ngoài tự nhiên
Khảo sát mối tương quan di truyền giữa các chủng virus dại thực địa và chủng vaccine hiện tại là cần thiết để hiểu rõ sự tương đồng và khác biệt Nghiên cứu này sẽ so sánh các chủng virus dại trong khu vực nhằm xác định tính hiệu quả của vaccine Dựa trên kết quả khảo sát, các biện pháp phòng chống dịch bệnh sẽ được đề xuất, nhằm nâng cao hiệu quả bảo vệ sức khỏe cộng đồng và giảm thiểu nguy cơ lây lan virus dại.
3 2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
3 2 1 Thời gian Đề tài được thực hiện từ tháng 8 năm 2014 đến tháng 6 năm 2021
Đề tài nghiên cứu được thực hiện tại các tỉnh thuộc vùng Đồng bằng Sông Cửu Long, bao gồm An Giang, Bạc Liêu, Cà Mau, TP Cần Thơ, Đồng Tháp, Hậu Giang, Kiên Giang, Sóc Trăng, Trà Vinh, Vĩnh Long, Long An, Tiền Giang và Bến Tre.
Các mẫu khảo sát được tiến hành xét nghiệm tại các phòng thí nghiệm: Bộ môn
Trường Đại học Cần Thơ, cùng với Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển của công ty Vemedim, Chi cục Thú y vùng VI tại thành phố Hồ Chí Minh và Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh, đang hợp tác chặt chẽ trong lĩnh vực thú y nhằm nâng cao chất lượng nghiên cứu và phát triển trong ngành.
3 3 1 Mẫu vật dùng trong nghiên cứu
Mẫu khảo sát đánh giá tỷ lệ bảo hộ và miễn dịch sau tiêm phòng bệnh dại, cũng như khả năng tồn trữ mầm bệnh dại ngoài tự nhiên, bao gồm huyết thanh từ chó, mèo và một số động vật hoang dã như chuột cống, sóc nhen và dơi.
Mẫu động vật hoang dã như chuột, sóc nhen và dơi được thu thập để nghiên cứu mối liên hệ di truyền giữa các chủng virus dại tự nhiên và các chủng vaccine hiện tại, bao gồm 93127FRA (GU992320 1, Pháp) và sadWistar_3_var01 (LN713659, Đức), cũng như các chủng virus dại trong khu vực.
((U0520629 (KM366216 1), V0808656 (KM366221 1) và V0627625 (KM366222 1)) là mẫu não (sừng Amon, tiểu não, bán cầu não) của động vật nghi mắc bệnh dại
Mẫu não của động vật nghi mắc bệnh dại được thu thập dựa trên thông tin triệu chứng lâm sàng từ các cơ quan Thú y tại ĐBSCL Sau khi xin ý kiến từ cơ quan Thú y có thẩm quyền địa phương, động vật sẽ được xử lý và lấy mẫu não Mẫu não được cho vào 3 lớp ni lon, bảo quản trong thùng đá và ngay lập tức vận chuyển đến Chi cục Thú y vùng VI tại TP HCM để tiến hành chẩn đoán xét nghiệm.
3 3 2 Hóa chất và sinh phẩm chính sử dụng trong nghiên cứu
Các hóa chất và sinh phẩm được sử dụng trong nghiên cứu bao gồm: Kháng thể kháng Nucleocapside virus dại gắn huỳnh quang (Bio-Rad cung cấp) (Bảo quản ở 2-
The article discusses various laboratory reagents and materials essential for research, including Glycerol buffer stored at 2-8 °C, phosphate buffer solution (PBSx10) at pH 7.4, and 1% Evans Blue from Bio-Rad It also mentions the use of distilled water, acetone, ethanol, crezyl, NaCl, KH2PO4, and positive and negative controls Additionally, it highlights the SERELISA® Rabies Ab Mono Indirect kit from France, the QIAamp* Viral RNA Mini Kit (Cat No 52904), and various Qiagen kits including the QIAquick® PCR Purification kit (Cat 28104) and the QIAquick Gel Extraction kit (Cat 28704).
3 3 3 Trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong nghiên cứu
The article discusses essential laboratory equipment, including autoclaves, incubators, drying ovens, -20°C freezers, 37°C incubators, centrifuges, real-time PCR machines, ELISA machines, vortex mixers, ultraviolet lamps, Class II biosafety cabinets, BIO-TEX wavelength measurement devices (model Epoch), Gelmate 2000 electrophoresis systems (Toyobo), Chemdoc XRS gel imaging systems, and thermal cyclers These instruments play a critical role in various scientific research and diagnostic applications.
Minicycler (MJ Research), máy giải trình tự 3130 genetic analyzer…
Hình 3 2: Hệ thống máy ELISA (máy rửa, máy ủ, máy đọc)
Hình 3 3: Máy giải trình tự gen
Hình 3 4: Hệ thống Real time PCR (Viện Pasteur TP HCM, 2020)
Hình 3 5: Tủ cấy an toàn sinh học cấp II
Hình 3 6: Máy ly tâm Hermle
Essential laboratory tools include screw-cap test tubes, Petri dishes, Erlenmeyer flasks, alcohol lamps, acetone-resistant slides, Lammel devices, blotting paper, dissecting forceps, pens, scissors, and Eppendorf tubes that are free from RNase and DNase Additionally, single-channel micropipettes are available in various volumes: 0.5 - 10 µl, 2 - 20 µl, 20 - 200 µl, and 200 - 1000 µl, along with filter tips for 10 µl, 20 µl, 200 µl, and 1000 µl Multi-channel micropipettes are also essential for efficient liquid handling in the lab.
3 3 4 Biểu mẫu thu thập thông tin
Nghiên cứu tiến hành thu thập thông tin thông qua các biểu mẫu được thể hiện qua phụ lục, bao gồm:
- Phiếu điều tra tổng đàn chó, tỷ lệ tiêm phòng, tỷ lệ chó mắc bệnh dại các năm từ
2017 đến 2020 và tình hình tiêm phòng dại trên người do chó, mèo cắn (cào);
- Phiếu lấy mẫu máu xét nghiệm kháng thể kháng virus dại;
- Phiếu khảo sát cộng đồng về bệnh dại
3 4 1 Phương pháp điều tra tình hình tiêm phòng và bệnh dại ở chó và tình hình tiêm phòng bệnh dại trên người từ 2017 đến 2020
Phương pháp dịch tễ học mô tả, bao gồm điều tra hồi cứu, điều tra cắt ngang và phỏng vấn trực tiếp, đã được thực hiện qua các phiếu điều tra tại 13 tỉnh/thành phố thuộc Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) nhằm thu thập dữ liệu quan trọng.
- Tổng đàn chó từ các năm 2017 - 2020;
- Tỷ lệ tiêm phòng dại chó 2017 - 2020;
- Tình hình tiêm phòng dại trên người do chó, mèo cắn (cào);
- Tình hình bệnh dại trên chó và người
Dữ liệu được thu thập từ nhiều cơ quan như Chi cục Chăn nuôi và Thú y, Trung tâm Y tế Dự phòng, Cục Thống kê, các bệnh viện, cùng với các hộ nuôi chó, mèo tại 13 tỉnh/thành thuộc Đồng bằng sông Cửu Long, bao gồm TP Cần Thơ, Long An, Tiền Giang, Bến Tre, Kiên Giang, Đồng Tháp, Hậu Giang, Vĩnh Long, Trà Vinh, Sóc Trăng, Bạc Liêu, An Giang và Cà Mau.
Phương pháp khảo sát nhận thức của cộng đồng về bệnh dại bao gồm việc lập phiếu khảo sát và thực hiện khảo sát tại các hộ nuôi thú cưng Mục tiêu là thu thập và thống kê thông tin liên quan đến nhận thức của chủ vật nuôi về bệnh dại.
- Hiểu biết bệnh dại là truyền chủ yếu từ chó;
- Bệnh dại có gây chết người;
- Cần phải tiêm phòng dại cho chó,
- Tiêm phòng dại đúng lịch cho chó;
- Gia đình có người bị chó cắn;
- Số trẻ em nhỏ hơn 15 tuổi bị chó cắn;
- Tiêm phòng dại sau khi bị chó cắn, …
3 4 3 Khảo sát sự hiện diện của kháng thể kháng virus dại trên đàn chó, mèo thả rông và tại điểm giết mổ
Khảo sát tỷ lệ bảo hộ của chó, mèo thả rông và tại điểm giết mổ đối với virus bệnh dại được thực hiện thông qua phương pháp điều tra cắt ngang Nghiên cứu này bao gồm việc lấy máu từ chó, mèo thả rông và tại nơi thu gom để kiểm tra hiệu giá kháng thể chống virus dại Các địa phương được khảo sát bao gồm TP Cần Thơ và Bến Tre, nhằm đánh giá tình hình bảo vệ sức khỏe động vật và nguy cơ lây lan bệnh dại.
Bến Tre, một trong 13 tỉnh thuộc vùng Đồng bằng sông Cửu Long, nổi bật với hệ thống sông ngòi dày đặc và là tỉnh có tổng đàn chó lớn nhất khu vực Tuy nhiên, tỷ lệ tiêm phòng bệnh dại cho chó ở đây lại thấp, dưới 10% Do đó, nghiên cứu này tập trung vào việc lấy mẫu huyết thanh từ chó chưa tiêm phòng và thả rông tại thành phố Bến Tre cùng 5 huyện: Giồng Trôm, Châu Thành, Ba Tri, Mỏ Cày Nam và Chợ Lách Mẫu được thu thập ngẫu nhiên phi xác suất, với kế hoạch thu mẫu cụ thể được trình bày trong Bảng 3.
Bảng 3 1: Bố trí lấy mẫu máu chó nuôi (thả rông) tại Bến Tre
TP Bến Tre Huyện Châu Thành Huyện Giồng Trôm Huyện Mỏ Cày Bắc Huyện Ba Tri
Cần Thơ, thành phố lớn thứ 4 cả nước và là đô thị loại 1, nổi bật với sự phát triển hiện đại tại Đồng Bằng Sông Cửu Long Là trung tâm công nghiệp, thương mại, dịch vụ, giáo dục, khoa học công nghệ, y tế và văn hóa của vùng ĐBSCL, Cần Thơ có tổng đàn chó thấp nhất nhưng tỷ lệ tiêm phòng dại đạt trên 80% trong những năm qua Mẫu máu chó được thu thập từ 6 quận/huyện, trong khi mẫu máu mèo (59 mẫu) được lấy ngẫu nhiên tại một số điểm thu gom mèo ở thành phố.
Cần Thơ được thu thập và bố trí theo Bảng 3 2
Bảng 3 2: Bố trí lấy mẫu máu chó, mèo tại nơi thu gom ở TP Cần Thơ
Ninh Kiều Bình Thủy Cái Răng Phong Điền Ô Môn Vĩnh Thạnh
