Nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở đồng bằng sông cửu long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LỒI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62640102 NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ MÃ SỐ NCS: P1014005 NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LỒI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62640102 NGƯỜI HƯỚNG DẪN NĂM 2022 LỜI CẢM TẠ Tơi xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: Ban Giám hiệu Trường Đại học Cần Thơ, khoa Sau đại học, ban Chủ nhiệm Khoa Nông Nghiệp, Bộ môn Thú y, quý Thầy, Cô giảng dạy, hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy hướng dẫn PGS TS giảng dạy, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu, chăm bồi kiến thức hoàn thành luận án Xin chân thành cảm ơn anh, chị, em đồng nghiệp bạn ngành Thú y giúp đỡ tơi hồn thành nghiên cứu Tôi xin dành tất yêu thương lời cám ơn tới gia đình, người thân u tơi ủng hộ, chia sẻ buồn vui sống để tơi an tâm có thêm nghị lực để hồn thành luận án i TĨM TẮT Luận án nghiên cứu bệnh dại 13 tỉnh thành đồng sông Cửu Long từ năm 2014 đến 2021 để xác định tổng đàn, tỷ lệ tiêm phịng bệnh dại chó, tình hình điều trị dự phịng bệnh dại người tình hình bệnh dại người Thực phương pháp dịch tễ học phân tích (ELISA) để xác định kháng thể kháng virus dại Tiến hành sử dụng phương pháp sinh học phân tử (RT-PCR) để xác định diện virus dại giải trình tự gen N virus dại để so sánh với kiểu gen số chủng khu vực vaccine dại sử dụng cho động vật Việt Nam Kết giai đoạn từ năm 2017 đến 2020 tổng đàn chó trung bình hàng năm 335 072 con; tỷ lệ tiêm phịng trung bình cho động vật (chó) hàng năm 41,10%; số người điều trị dự phịng trung bình hàng năm 50 913 người Từ năm 2018 đến tháng năm 2021 có tổng cộng 37 trường hợp động vật (chó) xác định dương tính với virus dại có 67 người chết bệnh dại Tỷ lệ chó có kháng thể kháng virus dại 5,94% đàn chó thả rơng khơng tiêm phịng Bến Tre, khơng có khác biệt tỷ lệ kháng thể kháng virus dại chó giống, lứa tuổi, giới tính khu vực ni Tỷ lệ chó có kháng thể kháng virus dại điểm thu gom chó TP Cần Thơ 14,13%, yếu tố lứa tuổi, giống, giới tính, khu vực ni không ảnh hưởng đến khả sinh kháng thể kháng virus dại Tỷ lệ chó kháng thể bảo hộ sau tiêm phịng vaccine Rabisin®mono (Merial) tỉnh Kiên Giang 79,08%, yếu tố khu vực, lứa tuổi, giống, thời điểm lấy mẫu sau tiêm phịng vaccine dại có ảnh hưởng đến khả sinh kháng thể Chó mẹ có thời gian tiêm phòng truyền kháng thể thụ động cho chó đạt 100% Tỷ lệ có kháng thể kháng virus Dại dơi 3,33%; tỉnh Kiên Giang 10% Hậu Giang 2,5% Cả chủng 1230 2019, 20328-Ca Mau 18, 1231 2019 chủng 1229 2019 Trà Vinh có khoảng cách di truyền gần gũi tương đồng cao với chủng vaccine Pháp 93127FRA (vaccine RABISIN sử dụng rộng rãi Việt Nam) Từ khóa: Bệnh dại, vaccine, kháng thể, giải trình tự, Đồng sông Cửu Long ii ABSTRACT The research on rabies disease was conducted in 13 provinces of the Mekong Delta from 2014 to 2021 to determine the total herd, the rate of rabies vaccination in dogs, the rabies preventive vaccination in humans, and the rabies disease in humans The epidemiological analysis (using ELISA assay) was done to identify antibodies to the rabies virus The molecular biology method (using RT-PCR) was carried out to determine the presence of rabies virus and sequencing the N gene of the rabies virus to compare with the genotype of some strains in the area and the rabies vaccine strains used for animals in Vietnam The results from 2017 to 2020 indicated that the annual average number of dogs was 335,072; the annual average vaccination rate (for dogs) was 41 10%; the annual average number of people got the preventive treatment was 50,913 peoples From 2018 to August 2021, a total of 37 confirmed cases of animals (dogs) were positive for rabies virus, and 67 peoples were died due to rabies disease The percentage of dogs harbored antibodies against rabies virus was 94% in the herd of unvaccinated free-grazing dogs in Ben Tre; there was no difference in the rate of rabies antibodies in dogs of different breeds, ages, and genders, and raising area The percentage of dogs with antibodies against rabies virus at the dog gathering places in Can Tho was 14 13%; those factors such as age, breed, gender, raising area did not affect the ability to produce antibodies against rabies virus The percentage of dogs with protective antibodies after vaccination with Rabisin®mono (Merial) in Kien Giang province was 79 08%; the regional factors, age, breed, and sampling time after rabies vaccination had an influence to the antibody production The mother dogs vaccinated previously could transmit the passive antibodies to the puppies, accounted for 100% The rate of antibodies against rabies virus in bats was 33%; including 10% in Kien Giang and 5% in Hau Giang All four strains including 1230 2019, 20328-Ca Mau 18, 1231 2019 and 1229 2019 Tra Vinh had a close genetic distance and high similarity to the French vaccine strain 93127FRA (RABISIN vaccine has been widely used in Vietnam) Keywords: Rabies, vaccine, antibodies, Sequencing, Mekong Delta iii MỤC LỤC Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Abstract iii Lời cam kết kết iv Mục lục v Danh mục bảng ix Danh mục hình xi Danh mục chữ viết tắt xiii Chương 1: Giới thiệu Chương 2: Tổng quan tài liệu Virus gây bệnh dại 1 Sơ lược lịch sử phát virus gây bệnh dại 2 Phân loại virus dại Đặc điểm hình thái cấu trúc virus Tiểu thể Negri virus dại Đặc điểm dịch tễ học Tính chất kháng nguyên sinh miễn dịch Sức đề kháng 10 Sự truyền lây chế gây bệnh virus dại 11 2 Cơ chế bệnh sinh virus dại 17 2 Sự xâm nhập virus vào hệ thần kinh 17 2 Sự truyền lây đến thần kinh trung ương 19 2 Sự truyền lây thần kinh trung ương 20 2 Sự truyền lây từ thần kinh trung ương 21 2 Rối loạn thần kinh động vật 21 2 Tổn thương cấu trúc nhiễm rabv thần kinh trung ương 22 Biểu lâm sàng 25 v Dạng bại liệt (paralytic form) 26 3 Những biểu lâm sàng theo loài vật 27 Các phương pháp dùng chẩn đoán bệnh dại 28 Chẩn đoán lâm sàng 28 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 28 Hệ gene virus dại 29 Nucleoprotein (n) 29 Phosphoprotein (p) 30 Large protein (l) 31 Matrix protein (m) 31 5 Glycoprotein (g) 32 Cấu trúc RNP virus 33 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 33 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 33 Tình hình nghiên cứu nước 38 Chương 3: Nội dung, vật liệu phương pháp nghiên cứu 42 Nội dung nghiên cứu 42 Thời gian địa điểm nghiên cứu 42 Thời gian 42 2 Địa điểm 42 3 Vật liệu nghiên cứu 42 3 Mẫu vật dùng nghiên cứu 42 3 Hóa chất sinh phẩm sử dụng nghiên cứu 44 3 Trang thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 44 3 Biểu mẫu thu thập thông tin 46 Phương pháp nghiên cứu 46 Phương pháp điều tra tình hình tiêm phịng bệnh dại chó tình hình tiêm phịng bệnh dại người từ 2017 đến 2020 46 Phương pháp khảo sát nhận thức cộng đồng bệnh dại 47 vi Khảo sát diện kháng thể kháng virus dại đàn chó, mèo thả rơng điểm giết mổ 47 4 Phương pháp khảo sát đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm vaccine dại rabisin miễn dịch thụ động chó 53 Phương pháp đánh giá khả tồn trữ mầm bệnh dại tự nhiên đề xuất biện pháp phòng chống 54 Phương pháp khảo sát mối tương quan di truyền chủng virus dại thực địa với chủng vaccine sử dụng chủng virus dại khu vực 55 Chương 4: Kết thảo luận 62 Kết điều tra tình hình tiêm phịng bệnh dại chó tình hình tiêm phòng bệnh dại người từ 2017 đến 2020 62 1 Tổng đàn chó tỷ lệ tiêm phịng chó 13 tỉnh/thành vùng ĐBSCL từ năm 2017-2020 62 Tình hình tiêm phịng vaccine dại người từ năm 2017-2020 ĐBSCL 68 Kết điều tra bệnh dại động vật từ năm 2017 đến tháng năm 2021 71 4 Kết điều tra số người chết bệnh dại từ năm 2014 đến tháng 08 năm 2021 72 Khảo sát cộng đồng tình hình bệnh dại 73 Khảo sát cộng đồng tiêm phịng dại cho chó nhận thức bệnh dại tỉnh Đồng Tháp 73 2 Khảo sát nhận thức chủ vật nuôi bệnh dại 74 Kết khảo sát kháng thể kháng virus dại đàn chó, mèo thả rơng điểm giết mổ Bến Tre TP Cần Thơ 78 Khảo sát kháng thể kháng virus dại chó ni thả rơng chưa tiêm phòng tỉnh Bến Tre 78 Khảo sát kháng thể kháng virus dại chó nơi thu gom chó TP Cần Thơ 3 Khảo sát kháng thể kháng virus dại mèo nơi thu gom TP Cần Thơ 83 86 4 Kết khảo sát đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm vaccine dại Rabisin Kiên Giang 87 4 Kết khảo sát đáp ứng miễn dịch sau tiêm vaccine rabisin phòng dại chó Kiên Giang 87 4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo khu vực ni 88 vii 4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo nhóm tuổi 89 4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giống 90 4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giới tính 91 4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo thời gian sau tiêm phòng 91 4 Kết khảo sát miễn dịch thụ động chó từ chó mẹ tiêm phòng vaccine dại 92 Kết đánh giá khả tồn trữ mầm bệnh dại tự nhiên 95 Khảo sát kháng thể kháng virus dại động vật hoang dã tỉnh Kiên Giang, Hậu Giang Vĩnh Long 95 Khảo sát kháng thể kháng virus dại dơi tỉnh Kiên Giang, Hậu Giang Vĩnh Long 97 Khảo sát mối tương quan di truyền chủng virus dại thực địa với chủng vaccine sử dụng với chủng virus dại khu vực đề xuất biện pháp phòng chống 98 Kết thực phản ứng rt-pcr đăng ký genbank (ncbi) 98 Phân tích phát sinh lồi 103 Khoảng cách di truyền phân tích trình tự 105 Đề xuất biện pháp phòng chống 107 Chương 5: Kết luận đề nghị 111 Kết luận 111 Đề nghị 111 Tài liệu tham khảo 112 Phụ lục 127 viii Bảng: tỷ lệ chó nhiễm virus dại theo giống Giống Giống chó nội Giống chó ngoại Tổng hàng 14 17 Âm tính 193 76 269 Tổng cột 207 79 286 Dương tính m= Trị số Chi Bình Phương Độ Tự 50008 P (Ho) = n= 454747 NS Bảng: tỷ lệ ch ó nhiễm virus dại theo lứa tuổi Tuổi 12 tháng Tổng hàng 10 17 Âm tính 47 92 130 269 Tổng cột 49 97 140 286 Chi-Square Test: 12 tháng 12 tháng Total 2 91 286 5 77 102 10 32 338 17 47 46 09 018 92 91 23 006 130 131 68 021 269 97 140 Total 49 Chi-Sq = 772, DF = 2, P-Value = 680 133 286 Bảng: tỷ lệ chó nhiễm virus dại theo nhóm 3 Tuổi 44 42 71 039 10 11 29 148 54 Chi-Square Test: < Tuổi, 1-3 Tuổi < Tuổi 1-3 Tuổi 28 49 35 00 42 00 400 167 17 10 00 12 00 900 083 45 54 Total Chi-Sq = 11 550, DF = 1, P-Value = 001 Chi-Square Test: < Tuổi, >3 Tuổi < Tuổi >3 Tuổi 28 44 32 73 39 27 683 569 17 10 12 27 14 73 821 517 45 54 Total Chi-Sq = 590, DF = 1, P-Value = 032 Chi-Square Test: 1-3 Tuổi, >3 Tuổi 1-3 Tuổi >3 Tuổi 49 44 46 50 46 50 134 134 10 50 50 833 833 54 54 Total Total 77 22 99 139 Total 72 27 99 Total 93 32 108 Total 121 32 153 Chi-Sq = 935, DF = 1, P-Value = 164 Descriptive Statistics: < Tuổi, 1-3 Tuổi, > Tuổi Variable Mean SE Mean < Tuổi 093 212 1-3 Tuổi 055 522 > Tuổi 651 498 Minimum 688 959 667 Maximum 399 17 359 13 088 Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giống Giống chó Chó tiêm phịng Chó đáp ứng miễn dịch Tỷ lệ (%) Giống nội 85 62 72,94a Giống ngoại 68 59 86,76b 153 121 79,08 Tổng Chi-Square Test: Giống nội, Giống ngoại Giống nội Giống ngoại 62 59 67 22 53 78 406 507 23 17 78 14 22 534 918 68 Total 85 Chi-Sq = 364, DF = 1, P-Value = 037 Total 121 32 153 Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo độ dài thời gian Độ dài thời Số mẫu huyết Số mẫu huyết gian sau có đáp khảo sát tiêm phòng ứng miễn dịch Tỷ lệ (%) xx±SD < tháng 61 56 91,80a 3,775±0,438 – 12 tháng 52 41 78,85b 3,612±0,547 >12 tháng 40 24 60,00c 2,438±0,434 153 121 79,08 3,454±0,289 Tổng 140 Chi-Square Test: 12 Tháng < Tháng 6-12 Tháng > 12 Tháng 56 41 24 48 24 41 12 31 63 248 000 842 11 16 12 76 10 88 37 718 001 966 61 52 40 Total Chi-Sq = 14 775, DF = 2, P-Value = 001 Chi-Square Test: 12 Tháng 56 24 48 32 31 68 222 863 16 12 68 32 654 098 61 40 Total Chi-Sq = 14 837, DF = 1, P-Value = 000 Chi-Square Test: 6-12 Tháng, >12 Tháng 6-12 Tháng > 12 Tháng 41 24 36 74 28 26 494 642 16 11 15 26 11 74 190 547 Total 80 21 101 Total 65 27 141 Total 52 Total 121 32 153 40 92 Chi-Sq = 873, DF = 1, P-Value = 049 Descriptive Statistics: < Tháng, 6-12 Tháng, > 12 Tháng Variable Mean Minimum SE Mean Maximum < Tháng 775 438 831 15 590 6-12 Tháng 612 547 667 17 359 > 12 Tháng 438 434 688 969 Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giới tính Giới tính Chó đáp ứng miễn Chó tiêm phịng dịch Tỷ lệ (%) Đực 71 58 81,69a Cái 82 63 76,83a 153 121 79,08 Tổng Chi-Square Test: Đực, Cái Đực 58 56 15 061 13 14 85 Cái 63 64 85 053 19 17 15 230 199 82 71 Total Chi-Sq = 544, DF = 1, P-Value = 461 Total 121 32 153 142 PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Lấy mẫu máu dơi Lấy mẫu máu chuột cóng 143 Lấy huyết sau ly tâm Ly tâm mẫu huyết trước chạy ELISA 144 Vô hoạt mẫu huyết máy điều nhiệt 560C/30 phút Phủ film sau cho huyết vào giếng Pha loãng mẫu đối chứng 145 Thêm chất peroxidase PS Thêm dung dịch dừng phản ứng Máy ELISA Epoch 146 Hệ thống máy ELISA phòng Chẩn đốn bệnh động vật - Chi Cục Chăn ni - Thú y Thành phố Cần Thơ Đọc kết hệ thống ELISA 147 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ MÃ SỐ NCS: P1014005 NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LOÀI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH LUẬN... trên, đề tài: ? ?Nghiên cứu tình hình bệnh dại vài lồi động vật Đồng sơng Cửu Long xây dựng qui trình phòng chống bệnh? ?? thực Mục tiêu nghiên cứu: - Xác định tổng đàn tỉ lệ tiêm phòng bệnh dại chó từ... án nghiên cứu bệnh dại 13 tỉnh thành đồng sông Cửu Long từ năm 2014 đến 2021 để xác định tổng đàn, tỷ lệ tiêm phịng bệnh dại chó, tình hình điều trị dự phịng bệnh dại người tình hình bệnh dại