Nghiên cứu xây dựng qui trình PCR đa mồi và chế tạo kít qui mô phòng thí nghiệm chẩn đoán Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae týp b, Streptococcus pneumoniae

ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm màng não bệnh lý nhiễm trùng nghiêm trọng, tỷ lệ tử vong cao khơng nghĩ đến, chẩn đốn điều trị kịp thời Viêm màng não vi khuẩn bệnh nhiễm trùng hệ thần kinh trung ương cấp tính với biểu lâm sàng đa dạng như: hội chứng màng não rầm rộ, sốt cao, dịch não tủy đục mủ, nhiễm khuẩn huyết Bệnh diễn biến nặng, không chẩn đốn, điều trị kịp thời tử vong để lại di chứng nặng nề như: hội chứng màng não, điếc, câm, mù, rối loạn tâm thần, động kinh [7] Bệnh hay gây thành dịch, nơi tập trung đơng người nguy lây nhiễm cao Sự hiểu biết tác nhân gây bệnh thường gặp hỗ trợ cho công tác điều trị xây dựng chương trình phịng chống bệnh tật Quốc gia Hầu hết liệu dịch tễ viêm màng não người lớn xuất phát từ quốc gia phát triển, tác nhân nguyên nhân quan trọng gây bệnh tử vong giới: Streptococcus pneumoniae (phế cầu) 30 - 60%, Neisseria meningitidis (não mô cầu) 13 - 37%, Listeria monocytogiens Haemophilus influenzae [34,18 ] Những năm gần nhiều loại kháng sinh tốt đưa vào sử dụng Tuy nhiên tỷ lệ tử vong trung bình nhiều nước vùng dịch tễ màng não cầu – 10%, phế cầu 30%, Haemophilus influenzae 10 – 14% [7] Tại Việt Nam, nghiên cứu viêm màng não H influenza, S pneumoniae N meningitidis người trưởng thành chưa nhiều, chủ yếu tập trung đối tượng trẻ em Thời gian gần nghiên cứu dịch tễ học mở rộng đối tượng, nhiên chưa có thống kê cụ thể Theo Lê Thanh Bình (Bệnh viện Trung ương Huế) từ 1999 – 2001 có 65 trường hợp tỷ lệ tử vong (9%), tỷ lệ di chứng 11%, nguyên nhân hàng đầu H influenza (35,3%), thứ đến não mô cầu (18,4%), phế cầu (9,2%) Nghiên cứu Phạm Nhật An cộng năm 2001 Viện Nhi Trung ương với bệnh nhân từ đến 15 tuổi chẩn đoán viêm màng não với tỷ lệ H influenzae (50%), S pneumoniae (22,06%), N meningitidis (11,76%), Streptococcus (5,88%) số loại vi khuẩn khác Để chẩn đoán ca bệnh trước chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng, yếu tố dịch tễ, xét nghiệm kỹ thuật nhuộm soi nuôi cấy phân lập từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng Các kỹ thuật có độ nhạy thấp, thời gian phân lập cần 48-72 Các kỹ thuật không đáp ứng điều kiện chẩn đốn nhanh, điều trị kịp thời, diễn biến ca bệnh xảy nhanh (đặc biệt não mô cầu từ xuất triệu chứng đến tử vong trung bình 18 giờ) [11 ] Thử nghiệm ngưng kết hạt latex phát kháng nguyên polysaccaride bệnh phẩm máu, dịch não tủy H influenza 78 – 100%, S pneumoniae 67100% N meningitidis 50 – 93% Kỹ thuật đơn giản, chẩn đoán nhanh kỹ thuật nuôi cấy (6)-linked N-acetyl-D-mannosamine-1-phosphate capsule of serogroup A Neisseria meningitidis Journal of Bacteriology 180:1533-1539 39 Sadler, F., A Fox, K Neal, M Dawson, K Cartwright, and R Borrow 2003 Genetic analysis of capsular status of meningococcal carrier isolates Epidemiology and Infection 130:59-70 40 WHO (2013), “Meningococcal disease: 2013 epidemic season in the African Meningitis Belt”, (http: //www.who.int/csr/don/2013_06_06_menin/en/index.html) 41 WHO (2002), “Prevention and control of epidemic meningococcal disease in Africa” 72 73 ... xét nghiệm, nâng cao chất lượng giám sát, tiên lượng nguy bùng phát dịch trước, sau vụ dịch, tiến hành: ? ?Nghiên cứu xây dựng qui trình PCR đa mồi chế tạo kít qui mơ phịng thí nghiệm chẩn đốn Neisseria. .. Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae týp b, Streptococcus pneumoniae? ?? Trên sở đó, tiến hành đề tài với mục tiêu: - Xây dựng qui trình mPCR1 phát N meningitidis; H influenzae týp b S pneumoniae. .. Sản xuất kít mPCR1, mPCR2 30 mPCR 1: phát Nm, mPCR 2: phát Hib, Sp nhóm huyết A, B, C Sơ đồ 2.2: Qui trình sản xuất sinh phẩm mPCR mPCR 2.3.2 Qui trình, kỹ thuật tuyển chọn chủng nghiên cứu - Các