Tài liệu Áp dụng tiến bộ khoa học kỹ thuật để nghiên cứu đặc điểm di truyền của người Việt Nam ở giai đoạn trước sinh pdf

ee DE TAT CAP BO ẤP DUNG C&C TTẾN BỘ KECA HOC KY THUẬT ĐỂ NGHIEN cửu DAC DIS DI TRUYEN GÙA NGUOL VIET NAM Ó GIÁT LOAN naưổớ S INH Human Genetica số những phất “hiện được coi la "những

Ê_ đÿ — la

1A fea

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌO Y HÀ sy ì yh pe io “a on i

AP DUNG CAC TIEN BO KHOA HOC KY THUAT

ĐỀ NGHIÊN CỨU

DAC DIEM DI TRUYEN CỦA NGƯỜI VIỆT NAM

Ở GIAI ĐOẠN TRƯỚC SINñ

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: PGS.PTS TRỊNH VĂN BẢO

HÀ NỘI - 1992

ee

DE TAT CAP BO

ẤP DUNG C&C TTẾN BỘ KECA HOC KY THUẬT ĐỂ NGHIEN cửu DAC DIS

DI TRUYEN GÙA NGUOL VIET NAM Ó GIÁT LOAN naưổớ S INH

(Human Genetica) số những phất “hiện được coi la "những mốc quan trọng

Vào năm 1956, Tjiỉo va Levan xae đị nh chính xác số lượng nhiễmsẵc thể của người 2n =46 (ở nam : 46, XY va o ow : 46, XX)

- Vao năm 1959, Lejeune lần đầu tiés phát hiện trong bộ nhiễm sắc the eta ngừờ'i mắc hội chứng Dow q só thưa một nhiễm sắc thể số 21

Vào năm 1960, Moorhead va CS dựa trần những tác dyug cua Cole hi-~

hình thận (Phaseolus: vulgaris) da đề xuât phương pháp sây lympho Bao

vat thế Y (hoặc son agi la vat thể P, đặc trưng cho giới cam được Carperssoa phát hiện vao căm 1970,

don (1963), ở Chicago (1966) xác định

Tử những, năm 7Ô của +tEê kỹ aay; ky thuật ghuậm bã ng {aadinz

thể troag bộ nhiễm sắc + thể của ngươi Hội nghị khoa học ở ®aris( 271

và các hội nghị sau dé da xác địah edo ky thuật băng va tân gọi của

togenetie Nomenclature (ISON, 1985)

(Sister chromatid Exchange : SCE)

triển của đi truyề a agườ2 3 mức độ ấ bao (Cyto genetics a)

6 trong ¢

~ Xỹ ở tauật PCR CR ( olynerase qhain Reactiog (Polymer +3» ao tỉ 7

đa tạo co sở sé đi sâu vao Di truya1 age ageod 3: mite độ phân tư.

ba -2-

Tử nấm 13Ö{, bộ môa Ý Bina học ~ Dị tru yề n đã đăng tý đề tai ;

DI TRUYỀN CỦA NGUOI VIET NAM,

cha nhiệm đề tải là Bac si Nee Gia Thạc a,

Tr ag thork gian từ 1984 dấu 1285; BS Ngô Gia Thạc h, đã sùng sa

sán bộ sùa bộ môn ấp đụng cáo tiếo bộ khoa học nghiên cfu nhiễm số

thé, vat thé gioi, o8p vân da ea ngươi Việt Nam

Phầo nay của đề tại da đươc aghiệm thu vao săm 1985,

lim 1282, G5 Ngô Gia Thạch chuyến vào công tác ở miền Nam, bộ

méo Y sinh hpe-Di truyền đăng ký đề tai tiếp theo:

Chủ nhiệm đề tài : 65,1 Trịnh Văn BẢO,

Sau day:

~ Ap đụng cáo sinh vao thục | “tế Việt Nam, ấn bộ về hương pháp nghiên sữu đị truyền trước

~ Bước đầu xác định met gố chỉ sô đi truyềa trước sinh

- Góp, phần tạo sơ sở cho vige tare hién @hdn đoán di truyền

®

BANG TH BAO

1

L Hat

TẾ bao không quân and : 249,0 * 5,6 18,5 + 3,4

Ỗ tấ DBO aon Si, vật thể Barz số dạn vòng SJd8 9a dạng

thấp nắn ap Sát vaa mặt tong sủa mảng nhân,

Bang 6

-—.——>.eem— Trrrrrrrrxrmrrmmmmrrmrmeerrmrrmr=rpmrrarmrsr=mrnrmeemrmemmmremmmm==

, Thai vam Ị “hai au

¬ ' suas bình biên Ị sang binh biga

fac gia , phân h được

#ẽ bao 3i 1a dược dung nhỏ biên trong châu đoan tric gino

Chúng tâi da thực hiện xỹ thuật nay với một số sân, xaryot7p da đượs dựng Tuy aniéa xự Sauft nuôi cấy tế bạo ối phưe tạp, vêu

~ 8 -

phy thuôc vào chất lượng tiêu baa, chất lược các loại hoá 2 kất được

dùng và đặc biệt phụ thuộc trinh độ của ngươi đánh giá tiêu bán

đai An, 1981, nương đồng Vân, 1981)

sáo xỹ tauật chẩn đoán trươc sinh sae tiah trạng 1 truyÊ a, đặs biệt trong sắc trường hợp s6 aguy sơ sao, (Simoni,1986, Rumenie,1985, Liadsten, 1985)

Năm 1987, chúng t3i 34 giời thiệu một số shỉ số đi truyân vã

(?,V.5ão, 1987) 1992)

trong euéa sdeh : Pi

eae CS da triah bay m

Sau đây, chung >ôi tin

Zoi isn r3 2hườn n naa :

tua rau được lấy từ mỗi mảu, ỏ phong 2o, sao tua mau sau xai dựơc

dầu phda vidt cae tua rau vei cde why sye, 24¢ tua xơ sua nảng(sác

tua rau thương sói trong nôi trương)‹ ag 42 trương hợp eo: 11 trương hợp chưa +o son, 22 trươ 1g hep co 1-2 coa ya 8 trương hợp

đa so 3 con hoặc hơn 3 cone

~3-

Bang 9 giới thiệu mật số số liệu và đôi tượng :

Cac tua rau va manh [AGL Sau chỉ được lay 7d trùng, được cho ` , `

gay vao srodg bỉah võ trùng va huyền shana 4 >hoas thi ogni §m,0 1¬ ff 2 “2

1

8 vực hiện ao nghiên sứu thác nhau : cà “ aa z

a

nhẹ trêu giấy tham, roi lam

Gace tiêu sản dang đề “quan sất hình thái & TO, sau chi được

qhưệm bằng dematoxylia, dùng 3asin để qnu3m Sao vươgso

vhz 22 sua qua sriaa audi 2:47, nho

7 a 7? > ⁄ ;* ` a Cas tigu ban duow danh gia Khi tua ray con nguyên vea,troag =

nhân tròa aho, chất nhiễm sốc kết đặc thanh từng kHỏi sẵm

bao *?#90z tua mau? trong {0 mẫu tua vu đũ chất lượng đánh gia :

Bo Vat tas Barr o 23 bso tua 90 2

Các tế sao được đánh giá la những ‡Ế bao dang a Vat thé Bare

¢6 mau xaah sắm, so Binh thấp noặc Binh sung bám sát vao mặt

pao tua rau saúng tôi đánh gia tỷ lậ đo ở t bao taai của củng

Ty 18 vat the Barr o tế bảo tua mau và tả bao tai dage triah

bay > baag 11, voi 40 mau tua mau và 31 mẫu thai :

eon tua rau mã nh thai

troag ca 2 ahom au os0 hon so you & thai Vaouog sy 1a vat tha

Bamm ở tế bao tea mau và tế bào thai, bila động pau hao vod ansua

net 2 Ẫ_ cự 1 f,

Do khéog auae Coleemid 285 ¢troq “Leu Dan co thé 2% + & s € tat

e& cdc Xỹ của giấn nhân,

7 on gla 7% x3 040 Dhan celta “a o,f a +

Ghú ng tôi lam tiêu panu niêm sac thé theo ahuoug phap audi

thự “aide được ở Việt dam,

Gac mau cay duge coi la thank a6ag khi co tw 5 saa ky giva

so thể phân sich được Xết qua được trich bày o sang 14:

eke pean taka

muầna thai So mau cay 3õ mâu taana cong Sẽ me ta phase/mầu

- Nzghidgo cưu cua chủng tôi nhu hợp với nhận xet cua Simoai 5 Ss >

gusi cay va 1442 sao hơn nea cnat lượng lân ti3u van (ST cy +4

bao tua 740 372D 2nän xác định tính trạng {i truyền trườa 3221‹

-1 TIT1, MỌT SỐ GHỈ SỐ DI TRUYỀN "ế ^

NGOT CAY

Đồng thơi với nghiên sữu sắc ehÌ số đi

bao

if

ehi sé di truyền tế bảo a Bao

Thực hiện đề tải aay , Sung tôi nhằm sắc mye dich

miét

và đã qua nuôi ear,

bao ca ¬- audi cấy,

1a 9 được nguồn tả bao bao oe

Suu khac ahau

Đối tượng trong qghHiê a sử

thân dược lấy ra ty 25 phụ nữ cố

nhất hoặc lần thư hai

Tuổi thai là 8~132 tan

Kae định các dạng tả bao bao thai qgươi trên tiêu

sẽ phân pao o +4 bào bao thai aguo

guất Vvật tha Sarr, o t

ong tin ke trên; so

3

SẠO Ổ mổ SẠO

chẳng tôi qgHiền sữu một

thai ngươi đã qua nuôi cấy,

ago dé@ tiên aaah cae azhian «iu

tiêu bao a8 aaah gia sy phan chia cua +4 báo:

Tiểu trinh sơ baa cia Dhucn qg pháp aay là dựa vao phương

“ ? \

phap cua Schwarzacner (1974) :

"Direct Preparation of Embryonie Tissue",

Trong phương phấp của mì nh,

như phần chi, hoxs tác giá đã

vơi cáo sơ quan bần

phổi Trong thực la nh voi edo mã nh

thưg hiện vơi mệnh thai

trang như sau, láoh, thận

14

tôi co cai tiến chú ite tế báo được phân tan trong môi trường va

được ưu ẩm đ nhiệt độ 57 trong 5 giờ Sau đo bế bào được giữ trong

dung địch nhược trương; rỗi, định hì nh bằng dung địch carno7

2- Lam giêu bản để đanh gia tần sua E vật thể giới nữ :

Đặt manh bhai Lên phiển kính sạch, dung đầu mui đao mổ cao nhẹ lên miếng mo dé tach rod tử ng vế bão; dan té bho lên phiến kính sạch Định nÌnh ogay bằng alcol-8te (5:4) trong 30'+60' Nhudm bằng

xanh toLuiđin, hoặc bằ ing hematoxylin oxyt thuy ngân

Các phượúE pháp co qua suôi cấy: đài ngay :

4 Phuong 2hee nuôi Sal 331 ne27_ tố bag bag thai người ‹

Khá nhiều bác gia đề ra nhứng phương pháp nuôi cấy fibroblast

tu bao thai người khac nhau, chung tôi đẳng phương phép cay bể bào một lp sau khh đa bạch bế bao bằng trypsin Lạnh va khuấy bù :

¬ấy sơ khợi : danh thai được rửa ky trong duag dich Hanks

Đế bào được bạch ra bàng trypsin lạnh và : khuấy tù

Đánh gia ti Lệ bế bào sống/caếb bằng nhuộm

Luc wrypan

cay sế bao vao binh carreL vơi moi trương Fy

37° trong 72 giờ,

- Gấy truyền ¿

thường thường, sau 72h tế bao đa mọc kắn đấy bình

„ đùng trypsin-versén để tách bế bào khoi nơi bám -

đanh gia t& bao sống/chết, rồi cấy truyền sang bình

carrel khac trong mdi trương nêu ở trên

„ ủ biếp ðrong ta 4m 37°

khi bế bào 4ễ mọc kin day dink thi lai tiép tue cấy truyềc

sang bình khếc a8 co cac thé hệ tế bào mới,

~ Đanh gia cat sé phân bao vou bung Ky cua qua trì nh phân bao

- Đánh gia tăn suất vật thé gici nf ; sau khi đa định hinh

băng saznoy va nhuộm bằng xanh toluidine

- Đạc điển hinh thai tế bao trong các thế hệ, cha ý hiện tượng

lão noa, ban ra va enét cia tế baoa

15

DOL vơi cac mẫu để đanh gia sự phân chia cưa tế bào, trung

bình mỗi mẩu đanh gia 200 bế ao Đối vơi các mẫu để đánh gia tần

suat vat thé gioi nữ; đanh gia 300 về bao

KET Qua:

4 Hình bpai ~¬==~-—== bế bào bạo baai người trên tiêu bạn mì ad a mg ae OL i a a at ta Dn» Be

Trên tiéu baa miét da duge nhiém bằng xenh toluidin hodc hema- toxylia oxyt thuỷ ngân, bão tuojg không ro net, nhưng hình thai cua

nhân bế bao rất rõ, vì vậy người ta căn cứ vao nhân để xếp tha nh

5 loại sau : loại nhân lon, đo hình tron hoặc hÌ nh bầu duc, chat

nhiễm sắc trong nhân mịn (Dane A) - Loại nhân có kich thươc nho

hơn 1oai kể trên, nhân hình tròa hoặc bầu due, trong nhaAn eo Cac đảm chất nhiễm so (Cđạng 3) TLoại nhân co hình 8alip, chất nhiễm

sốc tương đổi nịn (đạng Ø) ~ boại nhân and, trong nhân co cac dam

chấ% nhiễm sắc gần kết đặc (dang D) Loai nhân nhỏy nhâa kết đặo

thanh một khối sâm, không phân biệt được cấu true bén trong (Dang E)

Seu Khi nuôi cay, nÌnh thai tS Dao biến đổi bao Không coa cac đạng té bao nhân san kết dae hoặc nhân kết face Xuất hien cao dạng vế bão hình voi hoặc co 5-4 tua hương về cáo nướng kbhae nhau

số nhân tròn noặc bầu duc Kết qua về oinh thai tế bạo trong tiéu baa được trình bay ở bảng 15

—_———————— _—_—xxnnxnuun Tuổi thal Số sể Đạo

qua bảng trên nhận thay : cac dang sé bBo tương đếi giếng nhau ở

2 nhóm tuổi thai Nhìn chung bế bảo dang A va dang B chiến đa số,

Các bể bạo co nhân lợn hơn bình thương va xốp la alng tế bào đang

bude vao phân chia, Trên biêu bản chủng tôi bhấy tỷ lệ bế bao chuẩn

bị bước vao phân chia sao hơn hẳn : ở bhể hệ %ế bao chứ nhấp, tŸ Lệ

đó là : 67,78 + 5,09 Ở tiế hệ thứ hai : 74,16 + 6,85, và Ở thể bệ

Guỉ số phân bào bao gồm tat ca cac té bao dang trong thoi ky

QPodao chia, kể tủ kỳ dầu đến kỹ cudie Bang 16 trình bay vỉ Lệ t& bao

sdag-caét, cni sé phan bao va nbing bế bào bị biến đạng :¡ trong bao

= Số tế bảo Tế bào Chi sé Tế bao

“nom đánh gia sống : phân bao taaa

The he I 5.000 96,24 6,73h2, 16 1,56 Nuôi dây Thế hệ IT 5.000 98,92 7,4221,75 ;11

Thế nệ TIT 5.000 93,10 5,06+2, 21 3,3

Bang 17; :

Thê hệ 1Ð 93,96+4,77 3,88+2,12 2,03+0,98 1,03£0,8% Nuôi cấy Thế hệ II 91,7621,47 4,57£1,13 1,18+0,61 1,49+0,5

Thé hg ITI 94,06 3,11+22,44 1,21+0,42 1,64¢1, 14%

Qua bang trên nhận thay : chi sd phân bao ơ tế pao nuôi cây que

ea 3 tha hé déu cao hoa nfo so với các mẫu không qua nuôi cây

Tế bạo ở ky đầu của cac mẫu trực tiễp cao hơn so với cáo mẫu

qua nuôi cấy, Ta thây ở cao mẫu trực tiếp tỉ lệ tế Bao ghuda

bị phân chia Ít, và khi da buoe vao qua trình phân chia thi tié

triển cham, ngừng lại lâu ở xy đâu Tuy nhiên qua bang 16 thay

ở các mẫu trực tiếp tỉ lê tế bao sống cao hơn so với các mẫu

qua nuôi sấy, mỉ lệ các tê bào biên đạng cao đần qua quá trinh nuôi cấy

3 vas thể siới tính dữ (vật thê Barr)

Bảng 18 trình bầy tần suât vật thể gioi nữ :

thé ng IIT 4566 23,6047 ,84 1,510, 24

1?

Qua pang trên nhận tHây : tần svat vat thể giot nữ ở cao mẫu

thai đã qua nuôi sấy, nHẬt la ở thể hệ thứ nhất va thế hệ thứ

hai cao horn so với ở các mẫu thai chưa qua nuôi cấy Đằng

phương pháp nhuậm bằng xanh toluidia hoặc hematoxylin oxyt

thuy agana hinh anh vật thể giới aw kha ro

NHẬN XÉT VÀ BẠN LUẬN :

2_pauoma phút 3 BA og phương pháp đùng trypsia lạnh va khuấy

từ đa tách rok được sác tế bão thích hep sho sây một lớp trong moi trương thích hợp« Với điều kiện Sa định về điện va cae

phương tiện khae, bằng phương pháp nay cỡ thé auy tri nguyên

bao sợi (fibroblast) dai ogey Ổ thê hệ thứ dnất và thế hệ thứ

hai chỉ số phân bao sao sơn nẫn so với phương pháp trực tiếp Với phương pháp nay, số thể dung cáo tê Wao bao thai aa qua nuôi cây dã thực hiện eae nghiên cứu khác nhau, vi đụ : thứ

tha hé thữ hai tương đốt Ôn định về hì nh thai, tuy đã xuất hiêc

một it tế bao bị biên dgng, nhưng chỉ ở thế hệ thứ ba ti lệ tế

bao bién dang moi dang we O thd hệ thứ ba đa xuất hiện sác tế

bao ahaa xất đặc (ohana đông), sáo tấ bảo go shưa cáo khang bao

Bằng, phương pháp trực tiếp so tnd xet nehiệm nhanh vật

nỗ giới nữ; n hư 0g qua nuôi cây tần suat vật thé cao horn, ễ

hễ hệ 1, II và TT1, Boe akov (1973) da dung phương p hap đanh

ia

a

tân suất vật thể giới nu o té bao Bao thai nuôi dây để đán:

tỉ lệ nam/nưữ la 125-135 nam/100 na o giai đoạn lao thai

mỉ 18 sáo tế bao mang nhiễm she thể pat thường ớ glai-

tế bao bạo thai không qua nuôi cây; nhiều tac gia aa quan sát

tioy 20-215 tế bao số mang NÊŸ bất thường (2€11z8ser, 1977),

ohung qua oudi cây sáo dạng bất thương sua NOT bị dao thai nâu

hết VÌ vậy phương pháp trực tiếp cũng cô sÍa trị của co

Các tần sưât vê sáo dang tê bao hoặc age chi sé: ¢

sống/2 kê t, end sô phân Bao, chỉ số tế bao chuận bị phân cnia

so tne taay đổi theo tuôi thai, va phụ thuộc vao cơ thể của

người mẹ va dua coo Trong điêu kiên nuôi cay một lớp, sáo tế

gal số phần bao tăng ro rét Bén canh những tế bào phần shia