Phương pháp đánh giá các quy trình phân tích, kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm ... Tiến hành phân tích các đặc trưng: tính đặc hiệu, độ tuyến tính, khoảng xác định, độ đúng, độ chính xác, LOD, LOQ, độ sai lệch, thử độ ổn định hệ thống.
PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CÁC QUI TRÌNH PHÂN TÍCH Nội dung Giải thích thuật ngữ (Glossary) Giới thiệu Các loại qui trình phân tích cần đánh giá (Types of Analytical Procedures to be Validated) Tiến hành phân tích đặc trưng (Analytical Performance Characteristics) Tính đặc hiệu (Specificity) Độ tuyến tính (Linearity) Khoảng xác định (Range) Độ (Accuracy) Độ xác (Precision) Giới hạn phát (Limit Of Detection = LOD) Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation = LOQ) Độ sai lệch (Robustness) Phép thử độ ổn định hệ thống (System Suitability Testing) I Giải thích thuật ngữ Qui trình Procedure) phân tích (Analytical Qui trình phân tích cách tiến hành phân tích Trong mơ tả chi tiết bước cần thiết để tiến hành thí nghiệm Qui trình bao gồm nội dung khơng giới hạn cho mẫu thử, chất đối chiếu chuẩn bị thuốc thử, máy móc sử dụng, cách thiết lập đường chuẩn, cơng thức tính kết Tính đặc hiệu (Specificity) đặc hiệu khả phân biệt rõ chất phân tích có mặt thành phần khác có mẫu thử Thơng thường thành phần gồm tạp chất, sản phẩm phân huỷ , chất Một qui trình phân tích đặc hiệu bổ trợ nhiều qui trình phân tích khác Định nghĩa có liên quan đến phép thử sau: Tính Định tính để khẳng định có mặt chất phân tích Thử tinh khiết để khẳng định tất qui trình phân tích cho phép xác định xác hàm lượng tạp chất chất phân tích ví dụ phép thử tạp chất liên quan, kim loại nặng , hàm lượng tồn dư dung môi Định lượng (hàm lượng hoạt lực) đưa kết xác hàm lượng hoạt lực chất phân tích mẫu thử Độ (Accuracy) Độ qui trình phân tích biểu diễn đồng giá trị tìm thấy với giá trị thực giá trị đối chiếu chấp nhận Đơi khái niệm cịn gọi độ xác thực (trueness) Độ xác (Precision) Độ xác qui trình phân tích diễn tả thống (mức độ phân tán) kết loạt phép đo từ nhiều lần mẫu thử đồng điều kiện đề Độ xác chia thành cấp: độ lặp lại, độ xác trung gian độ tái lặp Độ xác nên thử mẫu thử thật đồng Tuy nhiên, khơng có mẫu đồng dùng mẫu tự tạo dung dịch mẫu thử Độ xác thường biểu thị dạng độ lệch chuẩn hệ số độ dao động loạt phép đo Độ lặp lại (Repeatability) Độ xác trung gian (Intermediate precision) Độ lặp lại diễn tả độ xác qui trình phân tích điều kiện thí nghiệm khoảng thời gian ngắn Độ lặp lại cịn gọi độ xác định lượng Độ xác trung gian diễn tả mức dao động kết phịng thí nghiệm thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên khác thiết bị khác Độ tái lặp (Reproducibility) Độ tái lặp diễn tả độ xác phịng thí nghiệm (Phối hợp nghiên cứu phịng thí nghiệm thường áp dụng để tiêu chuẩn hoá phương pháp) Giới hạn phát (Limit Of Detection) Giới hạn phát qui trình phân tích lượng nhỏ chất phân tích mẫu thử phát khơng thiết để định lượng Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation) Giới hạn định lượng qui trình phân tích lượng nhỏ chất phân tích mẫu thử để định lượng với độ độ xác thích hợp Giới hạn định lượng thông số phép định lượng chất có nồng độ thấp mẫu thử, đặc biệt thường dùng để xác định tạp chất và/hoặc sản phẩm phân huỷ Độ tuyến tính Độ tuyến tính qui trình phân tích diễn tả kết phân tích thu tỷ lệ với nồng độ (trong khoảng định) chất phân tích mẫu thử Khoảng tuyến tính Khoảng tuyến tính qui trình phân tích khoảng cách nồng độ chất phân tích mẫu thử (bao gồm nồng độ này) nhằm chứng minh qui trình phân tích đáp ứng độ xác, độ độ tuyến tính Độ sai khác (Robustness) Độ sai khác qui trình phân tích để đánh giá khả trì qui trình phân tích khơng bị ảnh hưởng biến đổi nhỏ có tính chủ quan thông số phương pháp mức tin cậy qui trình điều kiện sử dụng bình thường Giới thiệu Việc đánh giá qui trình phân tích nhằm chứng minh qui trình có phù hợp với mục đích ứng dụng khơng Bản hướng dẫn đưa các hướng dẫn gợi ý cho việc đánh giá qui trình phân tích nhằm đệ trình xin chấp nhận khu vực ASEAN Tài liệu chủ yếu trích dẫn từ hai hướng dẫn ICH “Q2A: Đánh giá phương pháp phân tích: Các định nghĩa thuật ngữ, ngày 27 tháng 10 năm 1994 Q2B: Đánh giá qui trình phân tích: Phương pháp luận, ngày tháng 11 năm 1996” Phương pháp luận áp dụng cho chế phẩm sinh học công nghệ sinh học khác đơi chút so với chế phẩm hoá học II Tất số liệu liên quan thu trình đánh giá công thức sử dụng để tính tốn đại lượng đặc trưng đánh giá cần đưa thảo luận Các chất đối chiếu sử dụng trình đánh giá cần phải có tính chất rõ ràng kèm theo tài liệu độ tinh khiết Mức độ tinh khiết phụ thuộc vào mục đích sử dụng Trong thực tế, thường phác thảo cơng việc thực nghiệm nhằm xem xét tiến hành đánh giá cách thích hợp đồng thời nhiều thuộc tính để đưa hiểu biết lực qui trình phân tích, ví dụ: tính đặc hiệu, tuyến tính, khoảng áp dụng, độ độ xác Những phương pháp rút gọn để kiểm lại tính phù hợp chúng điều kiện thực tế sử dụng khơng u cầu phải đánh giá phương pháp 10 Độ Độ cần thiết lập khoảng tuyến tính xác định qui trình phân tích a Định lượng Nguyên liệu thuốc Một số phương pháp xác định độ sau thường sử dụng: Áp dụng qui trình phân tích để định lượng chất phân tích biết rõ độ tinh khiết ( ví dụ nguyên liệu đối chiếu) So sánh kết qui trình phân tích đề xuất với kết qui trình phân tích chuẩn có độ cơng bố và/hoặc xác định (qui trình độc lập xem mục 4.1.2) Độ suy độ xác, độ tuyến tính tính đặc hiệu thiết lập 27 Các chế phẩm thuốc Một số phương pháp xác định độ sau thường sử dụng: dụng qui trình phân tích để định lượng hỗn hợp mẫu tự tạo thành phần chế phẩm thuốc mà có lượng biết trước nguyên liệu cần phân tích thêm vào Áp trường hợp khơng có đầy đủ thành phần để làm mẫu tự tạo thêm lượng biết chất cần phân tích vào chế phẩm so sánh kết thu với qui trình thống thứ hai có độ cơng bố và/ xác định (qui trình độc lập xem mục 4.1.2) Trong Độ suy độ xác, độ tuyến tính tính đặc hiệu thiết lập 28 b Các tạp chất (định lượng) Độ tiến hành mẫu thử (nguyên liệu chế phẩm) thêm lượng biết tạp chuẩn Trong trường hợp khơng có tạp và/hoặc sản phẩm phân huỷ chuẩn so sánh kết thu với qui trình độc lập (xem mục 4.1.2) Hệ số đáp ứng nguyên liệu thuốc sử dụng Cần phải xác định rõ tạp tổng tạp tính so với chất phân tích ví dụ khối lượng / khối lượng phần trăm diện tích 29 c Số liệu cần có Độ tính dựa tối thiểu lần định lượng mức nồng độ khác nằm khoảng nồng độ xác định qui trình phân tích (ví dụ nồng độ, nồng độ tiến hành lần) Độ biểu thị phần trăm tìm thấy chất phân tích thêm vào mẫu thử dạng sai khác giá trị trung bình đo giá trị thực có tính đến khoảng tin cậy 30 Độ xác Đánh giá phép thử định lượng phép thử xác định hàm lượng tạp chất cần xác định độ xác a Độ lặp lại (Repeatability) Độ lặp lại đánh giá kết của: b Tối thiểu lần định lượng khoảng nồng độ xác định qui trình (ví dụ nồng độ, nồng độ tiến hành lần) Tối thiểu lần định lượng 100% nồng độ thử Độ Precision) xác trung gian (Intermediate Việc xác định độ xác trung gian phụ thuộc vào tình hình cụ thể qui trình phân tích áp dụng ảnh hưởng tình ngẫu nhiên đến độ xác qui trình phân tích Những tình bao gồm: sai khác kết ngày, kiểm nghiệm viên, thiết bị Thực tế không cần phải nghiên cứu ảnh hưởng cách riêng rẽ Sử dụng qui hoạch thực nghiệm để trợ 31 giúp c Độ tái lặp (Reproducibility) Độ tái lặp xác định cách so sánh kết phịng thí nghiệm Độ tái lặp tiến hành đánh giá trường hợp tiêu chuẩn hố qui trình phân tích ví dụ để kết luận qui trình dược điển Những số liệu không nằm hồ sơ cơng bố thức d Số liệu cần có Độ xác qui trình cần phải đưa số liệu sau: Độ lệch chuẩn (standart deviation), độ lệch chuẩn tương đối (Relative standart deviation hay hệ số biến thiên = coefficient of variation) khoảng tin cậy 32 Giới hạn phát (Limit of detection = LOD) Một số cách dùng để xác định giới hạn phát tuỳ thuộc vào qui trình phân tích phương pháp phân tích dụng cụ hay khơng dụng cụ Ngồi cách nêu đây, cách khác chấp nhận để xác định giới hạn phát a Dựa vào quan sát Phương pháp thường dùng cho phương pháp phân tích khơng dụng cụ, dùng cho phương pháp phân tích dụng cụ Giới hạn phát xác định phân tích mẫu thử có chất phân tích biết nồng độ xác định nồng độ tối thiểu mà đọc đáp ứng chất phân tích 33 b c Dựa vào tỉ lệ đáp ứng so với nhiễu Phương pháp áp dụng cho phương pháp phân tích có nhiễu đường Việc xác định tỉ lệ đáp ứng nhiễu tiến hành cách so sánh đáp ứng đo mẫu thử có nồng độ chất phân tích thấp biết với đáp ứng mẫu trắng từ tính nồng độ tối thiểu chất phân tích phát Tỷ lệ đáp ứng nhiễu nằm 2:1 chấp nhận để thiết lập gới hạn phát Dựa vào độ lệch chuẩn đáp ứng độ dốc Giới hạn phát LOD tính sau: s 3.3 LOD = S Trong : s độ lệch chuẩn đáp ứng S độ dốc đường chuẩn Độ dốc S tính dựa vào đường chuẩn chất phân tích Cũng tính theo nhiều cách khác ví dụ như: 34 Dựa vào độ lệch chuẩn mẫu trắng Tiến hành số lượng thích hợp phân tích mẫu trứng, đo giao động đáp ứng tính độ lệch chuẩn đáp ứng Dựa vào đường chuẩn Dựa vào đường chuẩn đặc trưng mẫu thử có chứa chất phân tích có nồng độ nằm gần khoảng LOD Số dư độ lệch chuẩn đường hồi qui độ lệch chuẩn giá trị giao điểm với trục tung đường hồi qui sử dụng độ lệch chuẩn d Các số liệu cần có Cần đưa giới hạn phát (LOD) cách xác định giới hạn phát Nếu LOD xác định dựa vào quan sát dựa vào tỷ lệ đáp ứng nhiễu cần đưa sắc kí đồ biểu đồ có liên quan Trong trường hợp ước tính giá trị LOD tính tốn ngoại suy sau ước tính cần đánh giá cách phân tích độc lập số lượng mẫu thử thích hợp có nồng độ gần pha cho có nồng độ gần với giới hạn phát 35 Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation = LOQ) Một số phương pháp dùng để xác định giới hạn định lượng (LOQ) tuỳ thuộc vào qui trình phân tích phương pháp phân tích dụng cụ hay khơng dụng cụ Ngồi phương pháp nêu đây, phương pháp khác chấp nhận để xác định giới hạn định lượng a Dựa vào quan sát Phương pháp thường dùng cho phương pháp phân tích khơng dụng cụ, dùng cho phương pháp phân tích dụng cụ Giới hạn định lượng (LOQ) xác định phân tích mẫu thử có chất phân tích biết nồng độ xác định nồng độ tối thiểu mà định lượng chất cần phân tích với độ độ xác chấp nhận 36 b c Dựa vào tỉ lệ đáp ứng so với nhiễu Phương pháp dùng cho phương pháp phân tích có nhiều đường Việc xác định tỉ lệ đáp ứng nhiễu tiến hành cách so sánh đáp ứng đo mẫu thử có nồng độ chất phân tích thấp biết so với đáp ứng mẫu trắng xác định nồng độ tối thiểu chất phân tích định lượng Tỷ lệ đáp ứng nhiễu thông thường 10:1 Dựa vào độ lệch chuẩn đáp ứng độ dốc Giới hạn định lượng (LOQ) tính sau: 10 s LOQ = S Trong : s độ lệch chuẩn đáp ứng S độ dốc đường chuẩn Độ dốc S tính dựa vào đường chuẩn chất phân tích Cũng tính theo nhiều cách khác ví dụ như: 37 Dựa vào độ lệch chuẩn mẫu trắng Tiến hành số lượng thích hợp phân tích mẫu trắng, đo dao động đáp ứng tính độ lệch chuẩn đáp ứng Dựa vào đường chuẩn Xây dựng đường chuẩn đặc trưng mẫu thử có chứa chất phân tích có nồng độ nằm gần khoảng LOQ Số dư độ lệch chuẩn đường hồi qui độ lệch chuẩn giá trị giao điểm với trục tung đường hồi qui sử dụng độ lệch chuẩn d Các số liệu cần có Cần đưa giới hạn định lượng (LOQ) cách xác định giới hạn định lượng Giới hạn sau cần đánh giá cách phân tích số lượng mẫu thử thích hợp có nồng độ biết gần pha để có nồng độ gần với LOQ 38 Độ sai lệch (Robustness) Việc đánh giá độ sai lệch cần xem xét giai đoạn phát triển phương pháp tuỳ thuộc vào loại qui trình phân tích nghiên cứu Độ sai lệch mức độ tin cậy phương pháp có thay đổi nhỏ thơng số có liên quan đến phương pháp Nếu phép đo nhạy cảm với thay đổi điều kiện phân tích, điều kiện phân tích cần khống chế thích hợp dẫn điểm cần lưu y trình phân tích Một kết đánh giá độ sai lệch hàng loạt thông số phù hợp hệ thống (ví dụ phép thử độ hồ tan) phải thiết lập để đảm bảo tính hiệu lực qui trình phân tích trì sử dụng Những ví dụ biến đổi thường gặp phân tích là: Tính ổn định dung dịch phân tích Thời gian chiết 39 Trong gặp là: trường hợp sắc kí lỏng, biến đổi thường Ảnh hưởng thay đổi pH pha động Ảnh hưởng thay đổi thành phần pha động cột khác (do nhà cung cấp và/hoặc lô khác nhau) Các Nhiệt Tốc Trong độ độ dòng trường hợp sắc kí khí, biến đổi thường gặp là: cột khác (do nhà cung cấp và/hoặc lô khác nhau) Các Nhiệt Tốc độ độ dòng 40 Phép thử ổn định hệ thống Kiểm tra độ ổn định hệ thống phần tách rời qui trình phân tích Đánh giá độ ổn định hệ thống phép thử nhằm đánh giá độ ổn định toàn hệ thống phân tích cấu thành yếu tố máy móc thiết bị, hệ thống điện, cách tiến hành phân tích mẫu thử Các thơng số phép thử độ thích hợp hệ thống thiết lập cho qui trình riêng biệt phụ thuộc vào loại qui trình đánh giá Các thơng số đặc biệt quan trọng phương pháp sắc kí, xem dược điển để có thêm thơng tin 41 ... phương pháp rút gọn để kiểm lại tính phù hợp chúng điều kiện thực tế sử dụng khơng u cầu phải đánh giá phương pháp 10 III Các loại qui trình phân tích cần đánh giá Thảo luận đánh giá qui trình phân. .. dẫn ICH “Q2A: Đánh giá phương pháp phân tích: Các định nghĩa thuật ngữ, ngày 27 tháng 10 năm 1994 Q2B: Đánh giá qui trình phân tích: Phương pháp luận, ngày tháng 11 năm 1996” Phương pháp luận áp... đặc trưng đánh giá định nghĩa Glossary Danh sách đặc trưng đánh giá đặc trưng quan trọng cho việc đánh giá loại khác qui trình phân tích Danh mục xem điển hình với hầu hết qui trình phân tích, nhiên