Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
Địa điểm nghiên cứu
- Địa điểm lấy mẫu: các vùng trồng rau và các chợ trên địa bàn huyện Lý Nhân, huyện Bình Lục và thành phố Phủ Lý, tỉnh Hà Nam
- Địa điểm tiến hành các xét nghiệm và thí nghiệm: phòng thí nghiệm của khoa xét nghiệm – Trung tâm Y tế dự phòng tỉnh Hà Nam.
Thời gian nghiên cứu
Thời gian thực hiện đề tài từ tháng 12/2016 đến tháng 8/2017.
Đối tượng nghiên cứu
Trứng, ấu trùng giun, sán thường gặp trên rau xanh
Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu
+ Rau muống, cải, cần ta, xà lách và rau cải xoong
- Môi trường, hóa chất dùng trong phân lập và định loại trứng giun, ấu trùng giun, ấu trùng sán.
Nội dung nghiên cứu
Nghiên cứu này nhằm xác định thành phần trứng giun, ấu trùng giun và ấu trùng sán có mặt trên một số loại rau xanh tại các khu vực trồng rau và chợ ở tỉnh Hà Nam Việc phân tích này không chỉ giúp nhận diện mức độ ô nhiễm thực phẩm mà còn cung cấp thông tin quan trọng cho việc bảo vệ sức khỏe cộng đồng.
Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm trùng của các loại trứng giun, ấu trùng giun và ấu trùng sán trên một số loại rau xanh tại các khu vực trồng rau và chợ ở tỉnh Hà Nam.
Nghiên cứu cường độ nhiễm trùng của các loại trứng giun, ấu trùng giun và ấu trùng sán trên một số loại rau xanh tại các vùng trồng rau và chợ trong tỉnh nhằm đánh giá mức độ ô nhiễm thực phẩm Việc xác định sự hiện diện của các tác nhân gây bệnh này là cần thiết để bảo vệ sức khỏe cộng đồng và nâng cao chất lượng rau xanh tiêu thụ.
- Đánh giá hiệu quả một số biện pháp diệt mầm bệnh ký sinh trùng trên rau xanh.
Phương pháp nghiên cứu
- Số lượng mẫu lấy theo công thức dịch tễ học (Nguyễn Như Thanh và cs., 2001) n = (1,96) 2 x p x (1-p) d 2
Trong đó: p: Tỷ lệ ước đoán d: Sai số = 0,05
1,96 tương ứng với độ chính xác là 95%
Trong nghiên cứu, chúng tôi dựa vào tỷ lệ 50% rau nhiễm mầm bệnh ký sinh trùng theo tác giả Lê Thị Tuyết năm 2005 tại Thái Bình Từ đó, cỡ mẫu tối thiểu cần thiết là 390 mẫu, chia đều cho 5 loại rau, mỗi loại cần ít nhất 78 mẫu Cụ thể, mỗi loại rau sẽ được lấy 13 mẫu từ vùng trồng rau và 13 mẫu từ các chợ tại mỗi địa điểm nghiên cứu.
Tại khu vực trồng rau, mỗi mẫu rau thu hoạch cần lấy 500 gram vào buổi sáng từ nhiều vị trí khác nhau để đảm bảo đủ khối lượng Mỗi mẫu rau sẽ được đựng trong túi nilon có dán nhãn ghi rõ thông tin như ngày lấy, địa điểm và đặc điểm khu vực lấy mẫu Các mẫu rau này phải được xét nghiệm trong vòng 24 giờ sau khi thu thập.
Tại chợ buôn bán, khi chọn mua rau, bạn nên ghé thăm các hàng khác nhau và mua mỗi loại rau khoảng 500 gam Sau đó, hãy đựng chúng trong túi nilon có ghi rõ thông tin để đảm bảo chất lượng và an toàn thực phẩm, tương tự như quy trình ở vùng trồng rau.
3.5.2 Phương pháp xét nghiệm tìm mầm bệnh ký sinh trùng trên mẫu rau
Xét nghiệm rau để phát hiện trứng giun truyền lây giữa động vật và người, như giun đũa chó, giun đũa lợn và giun móc chó mèo, được thực hiện qua phương pháp rửa rau và ly tâm nước rửa Nghiên cứu này dựa trên phương pháp của Đặng Văn Ngữ (1992) kết hợp với phương pháp Darling do Phan Lục và Lê Thị Tuyết Minh (1999) phát triển.
Sau khi thu hoạch, mẫu rau cần được nhặt sạch, loại bỏ phần già và úa Tiến hành rửa từng lá và cọng rau dưới vòi nước chảy, thu nước từ bốn lần rửa và lọc qua vải màn hai lớp, để lắng trong bốn giờ Sau đó, gạn bỏ phần nước trong và sử dụng máy ly tâm quay tay trong hai phút để thu cặn Tiếp theo, gạn bớt nước trong ống nghiệm, dùng đũa thủy tinh quấy đều phần cặn và đổ vào đĩa Petri Cuối cùng, sử dụng công tơ hút để lấy một lượng nước rửa vừa đủ và đưa lên lam kính để quan sát dưới kính hiển vi.
Nhận biết trứng giun có thể dựa vào các đặc điểm hình thái, cấu tạo và màu sắc của chúng Các tài liệu của Trịnh Văn Thịnh (1963) và Đỗ Dương Thái, Trịnh Văn Thịnh (1978) cung cấp thông tin quan trọng giúp phân loại và nhận diện trứng giun một cách chính xác.
Trứng giun đũa người (Ascaris lumbricoides) có hình dạng tròn hoặc bầu dục, kích thước từ 40-50 x 50-75 mm, với màu vàng sẫm hoặc vàng nhạt Chúng có vỏ dày gồm 4 lớp, trong đó lớp ngoài cùng là lớp vỏ albumin xù xì Đôi khi, có thể gặp trứng giun đũa mất lớp vỏ albumin, chỉ còn lại lớp vỏ dày nhẵn Khi mới bài xuất, nhân trứng có hình khối tròn và màu sẫm.
Trứng giun đũa lợn (Ascaris suum) có hình dạng ô van, màu vàng cánh dán, với 4 lớp vỏ dày và lớp ngoài gợn sóng Kích thước của trứng khoảng 0,087 x 0,067mm Lớp vỏ ngoài cùng là tầng vỏ albumin xù xì, trong một số trường hợp có thể gặp trứng bị mất vỏ albumin, chỉ còn lớp vỏ dày nhẵn Nhân trứng khi mới bài xuất có dạng khối tròn và sẫm màu.
+ Trứng giun đũa chó Toxocara canis
Trứng hỡnh gần trũn, mầu vàng, vỏ dầy, dài 80àm, rộng 70àm Lớp vỏ ngoài cùng lỗ trỗ như tổ ong
+ Trứng giun múc chú (Ancylostomacaninum): Hỡnh bầu dục, dài 60 à, rộng 40à, vỏ mỏng, màu xỏm trong, nhõn đó phõn chia 4- 8 nhõn, sau 24- 48 giờ có hình ảnh ấu trùng
+ Ấu trùng giun móc (Ancylostomacaninum):
* Ấu trùng L1 hình gậy, vỏ mỏng, thực quản hình ụ phình ở đáy, dài 0,17mm
* Ấu trùng L2 hình gậy, vỏ dầy, mầu xám thực quản hình trụ, dài 0,31mm
* Ấu trùng L3 hình gậy, vỏ dầy mầu xám đậm, thực quản hình trụ, dài 0,59mm
Xét nghiệm rau nhằm phát hiện ấu trùng sán lá gan lớn và sán lá ruột lớn được thực hiện bằng cách nạo vét bề mặt thân và cọng rau trong nước, sau đó ly tâm nước rửa rau để tìm kiếm ấu trùng.
Để nhận biết ấu trùng sán lá gan lớn và sán lá ruột lớn, cần chú ý đến hình thái cấu tạo của ấu trùng Các nghiên cứu của Đỗ Dương Thái và Trịnh Văn Thịnh (1978) cùng với Nguyễn Văn Thọ (2006) cung cấp những thông tin quan trọng về đặc điểm hình thái này Những tài liệu này giúp phân biệt rõ ràng giữa hai loại ấu trùng, từ đó hỗ trợ trong việc chẩn đoán và điều trị các bệnh liên quan.
Sán lá gan lớn (Fasciola hepatica) có trứng hình bầu dục, màu vàng sẫm với kích thước 140 x 80 µm Khi trứng rơi xuống nước, chúng nở thành ấu trùng lông và ký sinh trong ốc Tại đây, ấu trùng phát triển thành ấu trùng đuôi, sau đó thoát khỏi ốc và bám vào các loại rau mọc dưới nước, tạo thành nang trùng hoặc trôi nổi trong nước.
Sán lá ruột (Fasciolopsis buski) là loại ký sinh trùng có trứng lớn nhất trong số các loại giun sán ký sinh ở lợn, với kích thước từ 125 – 140 μm chiều dài và 75 – 90 μm chiều ngang, có màu vàng sẫm Trong quá trình phát triển ở ốc, trứng sẽ nở thành nhiều ấu trùng đuôi, và nang ấu trùng của sán lá ruột có đường kính từ 120 – 135 μm.
Hình 3.1 Trứng giun đũa lợn có chứa nhân
Hình 3.2 Ấu trùng giun đũa lợn có khả năng gây bệnh
Hình 3.3 Trứng giun móc chó (độ phóng đại 100 lần)
Hình 3.4 Trứng sán lá Fasciola
Nguồn: Internet 3.5.3 Phương pháp xác định cường độ nhiễm mầm bệnh ký sinh trùng trên rau xanh
- Đánh giá cường độ nhiễm trứng, ấu trùng giun trên 100g rau:
Để tiến hành phân tích trứng trong rau, trước tiên, bạn cần cân 100 g rau đã được nhặt sạch và rửa kỹ dưới vòi nước chảy Sau đó, thu nước rửa và lọc qua vải màn 2 lớp, để lắng trong 4 giờ Tiếp theo, gạn bỏ nước trong và sử dụng máy ly tâm quay tay trong 2 phút để thu cặn Gạn bỏ bớt nước trong ở ống nghiệm, sau đó dùng đũa thủy tinh quấy đều phần cặn và đổ vào đĩa Petri Cuối cùng, sử dụng công tơ hút để lấy một lượng nước rửa vừa đủ, đưa lên lam kính và soi trên kính hiển vi để tìm và đếm số trứng của từng loại trên tất cả các vi trường cho đến khi hết nước rửa.
3.5.4 Phương pháp thử nghiệm các biện pháp diệt mầm bệnh ký sinh trùng trên rau xanh
Phương pháp thu thập trứng giun bao gồm ngâm và rửa rau trong các dung dịch hóa chất Sau đó, trứng và ấu trùng giun được phân ly thông qua quy trình ly tâm để xác định sự hiện diện của chúng.
Đánh giá sức sống của trứng giun đũa được thực hiện qua phương pháp nuôi trứng trong nước sinh lý, nhằm xác định tỷ lệ trứng không phát triển thành trứng có ấu trùng.
- Địa điểm và số lượng mẫu thu thập
+ Địa điểm thu mẫu rau
Bảng 3.1 Địa điểm thu mẫu rau
TT Tên vùng trồng rau/chợ Địa điểm
1 Hợp tác xã dịch vụ Đức Huy Xã Nhân Nghĩa, huyện Lý Nhân
2 C.ty Trách nhiệm Hữu hạn đầu tư Sản xuất Phát triển nông nghiệpVinEco
Xã Xuân Khê, huyện Lý Nhân
3 Hộ trồng rau Nguyễn Văn Tín Xã Văn Lý huyện Lý nhân
4 Chợ Vĩnh Trụ Thị trấn Vĩnh Trụ, huyện Lý Nhân
5 Chợ Mạc Hạ Xã Công Lý, huyện Lý Nhân
6 Chợ Chanh Xã Chân Lý, huyện Lý Nhân
7 Hợp tác xã nông nghiệp Cát Lại Xã Ngô Khê, huyện Bình Lục
8 Hộ trồng rau Đặng Xuân Thế Xã Mỹ thọ, huyện Bình Lục
9 Chợ Vọc Xã Vũ Bản, huyện Bình Lục
10 Chợ Bình Mỹ Xã Bình Mỹ, huyện Bình Lục
11 Chợ Song Xã Ngô Khê, huyện Bình Lục
12 Hợp tác xã nông sản hữu cơ Phù Vân Xã Phù Vân, tp Phủ Lý
13 Hộ trồng rau Nguyễn Văn Sơn Xã Phù Vân, tp Phủ Lý
14 Chợ Bầu P Lương Khánh Thiện, tp Phủ Lý
15 Chợ Châu Sơn P Lê Hồng Phong, tp Phủ Lý
16 Công ty thực phẩm sạch GreenFood Đ Lê Công Thanh, tp Phủ Lý
+ Số lượng và chủng loại rau thu thập
