ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC HỮU CƠ LÊN QUÁ TRÌNH SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus Setaceus Blume) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO

Có thể nói trên thế giới, sự đa dạng sinh học có rất nhiều loại sinh vật phong phú và quý hiếm, có những loài chỉ phân bố ở một số nơi nhất định, có loài ưu ẩm, có loài chịu hạn,.... Việt Nam là một trong những quốc gia củng có nhiều loại sinh vật quý hiếm có giá trị về dinh dưỡng và có giá trị sinh học cao, ngoài ra còn có nhiều cây thuốc có giá trị cao về mặt kinh tế trong việc điều trị bệnh. Về y dược có nhiều loại cũng có giá trị kinh tế cao, một trong số đó không thể không nhắc tới nhà họ lan. khong những có giá trị riêng về mặt y học, lan còn có giá trị riêng về mặt kinh tế bởi vẽ đẹp vốn có của nó, có những loại quý hiếm người ta có thể săn lùng lên tới tiền tỉ một chậu. Mặc khác nói vè y học, các nhà khoa học đã chứng minh vè tác dụng thần kỳ chữa bệnh của cây lan gấm hay còn gọi là cây lan Kim Tuyến. Lan Kim Tuyến là một loại thảo dược quý của rừng núi Tây Bắc của Việt Nam. Lan Kim Tuyến phân bố ở những vùng ẩm thấp cao, được săn lùng với giá trị lên tới 100 triệu 1 kg. Nói về căn bệnh ung thư là một căn bệnh mang nỗi khiếp sợ của con người vì nó vẫn chưa có thuốc nào rị dứt điểm căn bệnh này, tuy nhiên giai đoạn đầu nếu phát hiện kiệp thời thì lan Kim Tuyến sẽ mangn lại kết quả khả quan hơn. Để đáp ứng nhu cầu này thì lan Kim Tuyến đã được những nhà khoa học nghiên cứu và đem vào nuôi cấy mô để nhân giống số lượng lớn, vừa bảo vệ được cho giống cây này không bị tuyệt chủng, mà ngược lại giá thành mềm đem lại sự tiếp cận dể dàng hơn tới người tiêu dùng, nhưng chất lượng vẫn đảm bảo.

ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC HỮU CƠ LÊN QUÁ TRÌNH SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus Setaceus Blume) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AC : Than hoạt tính BA : Benzyl adenine MS : Murashige Skoog, 1962 Mt : Môi trường NAA : Acid α-naphtaleneacetic NT : Nghiệm thức Nd : Nồng độ Tg : thời gian i DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Bảng kí hiệu nghiệm thức Bảng 2: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA Bảng 3: Khảo sát ảnh hưởng nước dừa pepton lên lan kim tuyến Bảng 4: Khảo sát ảnh hưởng chất rắn tạo nên trình tạo hoàn chỉnh Bảng 5: Ảnh hưởng trình khử khuẩn lên hình thành phát triển lan Kim Tuyến Bảng 6: Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống Bảng 7: Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến 10 Bảng 8: Ảnh hưởng chất tạo rắn lên trình tạo hồn chỉnh 11 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1: Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống Hình 2: Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến 11 Hình 3: Mơi trường agar 12 Hình 4: Mơi trường gelrite 13 Hình 5: Mơi trường bơng gịn 13 Hình 6: Kích thước mẫu 14 iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN Error! Bookmark not defined DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Lan Kim tuyến: 1.2 Phân loại thực vật: 1.3 Phân bố: 1.4 Tính công dụng: 1.5 Phương pháp nuôi cấy tạo chồi tạo hoàn chỉnh in vitro 1.6 Vai trò chất hữu 1.6.1 Nước dừa 1.6.2 Pepton 1.7 Điều kiện thống khí CHƯƠNG II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Nguồn mẫu 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 2.1.3 Môi trường nuôi cấy 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Khử trùng mẫu 2.2.2 Khảo sát auxin cytokinin lên trình nhân giống 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng chất tạo rắn lên q trình tạo hồn chỉnh 2.2.5 Khảo sát ảnh hưởng môi trường bổ sung thêm pepton lên trình sinh trưởng phát triển lan Kim Tuyến in vitro 2.2.6 Điều kiện nuôi cấy iv CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng trình khử khuẩn lên hình thành phát triển lan Kim Tuyến 3.2 Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống 3.3 Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến 10 3.4 Ảnh hưởng chất tạo rắn lên q trình tạo hồn chỉnh 11 3.5 Kết luận kiến nghị 14 TÀI LIỆU THAM KHẢO 16 v Lời mở đầu LỜI MỞ ĐẦU Có thể nói giới, đa dạng sinh học có nhiều loại sinh vật phong phú q hiếm, có lồi phân bố số nơi định, có lồi ưu ẩm, có lồi chịu hạn, Việt Nam quốc gia củng có nhiều loại sinh vật quý có giá trị dinh dưỡng có giá trị sinh học cao, ngồi cịn có nhiều thuốc có giá trị cao mặt kinh tế việc điều trị bệnh Về y dược có nhiều loại có giá trị kinh tế cao, số khơng thể khơng nhắc tới nhà họ lan khong có giá trị riêng mặt y học, lan cịn có giá trị riêng mặt kinh tế vẽ đẹp vốn có nó, có loại quý người ta săn lùng lên tới tiền tỉ chậu Mặc khác nói vè y học, nhà khoa học chứng minh vè tác dụng thần kỳ chữa bệnh lan gấm hay gọi lan Kim Tuyến Lan Kim Tuyến loại thảo dược quý rừng núi Tây Bắc Việt Nam Lan Kim Tuyến phân bố vùng ẩm thấp cao, săn lùng với giá trị lên tới 100 triệu kg Nói bệnh ung thư bệnh mang nỗi khiếp sợ người chưa có thuốc rị dứt điểm bệnh này, nhiên giai đoạn đầu phát kiệp thời lan Kim Tuyến mangn lại kết khả quan Để đáp ứng nhu cầu lan Kim Tuyến nhà khoa học nghiên cứu đem vào nuôi cấy mô để nhân giống số lượng lớn, vừa bảo vệ cho giống không bị tuyệt chủng, mà ngược lại giá thành mềm đem lại tiếp cận dể dàng tới người tiêu dùng, chất lượng đảm bảo Chương I Tổng quan tài liệu CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Lan Kim tuyến: Lan Kim tuyến (Anoectochilus) Carlvon Blume mô tả năm 1810 thuộc phân họ Orchidoideae Trên giới thống kê 51 loài, khu vực châu Á châu Úc phát 25 loài, Việt Nam thống kê 12 lồi, lồi lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) biết đến chủ yếu với công dụng làm thuốc với tác dụng trị bệnh kháng tế bào ung thư đặc biệt Lan kim tuyến thảo, có thân rễ mọc dài,thân đất mọng nước mang - mọc xoè sát đất Chiều dài thân rễ từ -12cm, trung bình 8,5cm Đường kính thân rễ từ 2,5 - 3,5mm, trung bình 3,28mm Số lóng thân rễ từ - lóng, trung bình 4,03 lóng Chiều dài lóng từ - 5cm, trung bình 2,14cm Thân rễ thường có màu xanh trắng, đơi có màu nâu đỏ, thường nhẵn, khơng phủ lông Rễ mọc từ mấu thân rễ Số rễ thường từ - rễ, chều dài rễ thay đổi từ - 9cm, rễ dài trung bình 6,37cm ngắn trung bình 1,04cm, chiều dài trung bình rễ 4,07cm Lá hình trứng, gần trịn gốc, chóp nhọn, có màu nâu đỏ mặt Hệ gân mạng lưới, thường có gân gốc Các gân thường có màu hồng mặt rõ Đơi gân có màu vàng nhạt Mặt có màu nâu đỏ nhạt, nhẵn với gân gốc Số lượng thay đổi từ - chiếc, thơng thường có Các thường có kích thước khác rõ rệt Chiều rộng trung bình 2,5cm.Cuống dài 0,6 – 1,2cm, thường nhẵn có màu trắng xanh, đơi đỏ tía bẹ Bẹ rõ nhẵn Hoa chùm mọc đầu thân, trục hoa dài từ - 20cm, thường phủ lông màu nâu đỏ, mang từ - 10 hoa 1.2 Phân loại thực vật: Giới (regnum): Plantae Bộ (ordo): Asparagales Chi (genus):Anoectochilus Họ (familia):Orchidaceae Chương I Tổng quan tài liệu Loài (species):A setaceus 1.3 Phân bố: Ở Việt Nam thống kê khoảng 15 loài có lồi thuốc q: Lan gấm ngọc vân bạc (Anoectochilus formosanus Hayata) Lan gấm ngọc vân hồng (Anoectochilus roxburghii) Các loài sinh sống dọc theo dãy Hoàng Liên Sơn dãy Trường Sơn, đặc điểm loài thường phân bố nơi có độ ẩm thấp cao, có nhiệt độ thấp 1.4 Tính cơng dụng: + Tăng cường sức khỏe, làm khí huyết lưu thơng + Có tính kháng khuẩn, chữa bệnh viêm khí quản, viêm gan mãn tính + Dùng chữa thần kinh suy nhược, + Chữa ho khan, + Đau họng, + Cao huyết áp, + Suy thận, + Chữa di tinh, + Đau lưng, + Phong thấp, + Làm tiêu đờm, + Giải độc, + Giải nhiệt, + Giúp bổ máu, dưỡng âm, chữa trị nóng phổi nóng gan + Tăng cường sức khỏe, chủ trị bệnh phổi, di tinh, xuất tinh sớm, yếu gan, + Vết thương rắn cắn, có tác dụng bổ máu, giải nhiệt, + Trẻ chậm lớn, suy thận, + Rượu lan gấm tiên tửu có tác dụng hỗ trợ điều trị yếu sinh lý, muộn 1.5 Phương pháp nuôi cấy tạo chồi tạo hoàn chỉnh in vitro Quả Lan kim tuyến già (có màu nâu đỏ) rửa vịi nước chảy, ngâm dung dịch xà phịng lỗng, rửa xà phòng Khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% dung dịch natri hypochlorid 20% với thời gian khác Tráng lại nước cất vô trùng ÷ lần, thấm khô giấy thấm vô trùng Tách đôi lấy Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng Chương I Tổng quan tài liệu phôi cấy vào môi trường nuôi cấy khởi đầu (Bảng 1) Sau ÷ tuần ni, phơi nảy mầm tạo thể chồi; cấy chuyển thể chồi sang môi trường nhân nhanh thể chồi Cấy chuyển thể chồi sang môi trường tạo chồi, cấy chuyển chồi sang môi trường nhân nhanh chồi Tách riêng chồi để cấy chuyển sang mơi trường kích thích tăng trưởng chồi Chọn chồi có chiều cao ≥ cm cấy sang mơi trường tạo rễ 1.6 Vai trị chất hữu 1.6.1 Nước dừa Nước dừa xác định giàu hợp chất hữu cơ, chất khống chất kích thích sinh trưởng (George, 1993; George, 1996) Nước dừa sử dụng để kích thích phân hóa nhân nhanh chồi nhiều lồi Nước dừa thường lấy từ giống chọn lọc để sử dụng tươi sau bảo quản Nước dừa số cơng ty hố chất bán dạng đóng chai sau chế biến bảo quản 1.6.2 Pepton Ảnh hưởng peptone lên tạo chồi rễ in vitro từ đoạn thân non thân trưởng thành nghiên cứu Cả mẫu trưởng thành mẫu non sử dụng để nghiên cứu ảnh hưởng peptone tái sinh chồi Các mẫu vật bị hoại tử khơng có mơi trường MS với chất điều chỉnh tăng trưởng thực vật Trong môi trường MS bổ sung peptone benzyladenine acid dichlorophenoxyacetic, mẫu tồn chậm lại đáng kể trình tạo chồi Thêm peptone vào môi trường với lượng tối ưu 2.0% (w / v) gây hình thành chồi Sự hình thành chồi xảy phần thân từ mẫu trưởng thành tỷ lệ tái sinh thấp Tất chồi xuất phát từ thân non hình thành rễ mơi trường bổ sung với peptone axit naphthaleneacetic 1.7 Điều kiện thống khí Các bịch dùng để nuôi cấy phải thiết kế màng lọc thống khí điều kiện phải ngăn chặn xâm nhập vi khuẩn từ môi trường bên ngồi, có tác dụng trao đổi khí với mơi trường bên ngồi Nếu bịch dùng mơi trường nuôi cấy không duocdj thiết kế màng lọc thống khí ngăn ngừa xâm nhập vi khuẩn đồng thời củng ngăn ngừa trao đổi nước cây, q trình khiến rể bị tích nước làm ảnh hưởng đến q trình sinh trưởng phát triển mơ q trình quang hợp mẫu cấy Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng Chương II Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu CHƯƠNG II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Nguồn mẫu Nguồn mẫu lan Kim Tuyến (Anoectochilus Setaceus Blume) có viện sinh học phân tử Giống cấy chuyển nhiều lần đẻ tạo chồi có kích thước phù hợp sử dụng trình nghiên cứu 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất Thiết bị: Nồi hấp vơ trùng, tủ cấy vơ trùng, cân điện tử, hóa chất, máy đo pH Dụng cụ: Dao cấy, panh cấy, đĩa cấy, ống nghiệm thủy tinh, bịch ni cấy có màng thống khí, ghim cố định, găng tay, trang y tế, giá để vật mẫu, đèn có ánh sáng trắng Hóa chất: Các khoáng chất đa lượng, khoáng vi lượng, vitamin, NAA, BA Chất hữu cơ: giá, khoai tây, cà rốt 2.1.3 Mơi trường ni cấy Mơi trường ni cấy có bổ sung agar, đường, AC Các chất điều hòa sinh trưởng gồm có BA NAA, chất hữu gồm có pepton, nước dừa 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Khử trùng mẫu Mẫu rửa nước xà phòng rửa chén nồng độ 10ml/l lắc máy lắc 30p Các nghiệm thức khảo sát - Không tráng qua cồn - Tráng qua cồn 20s - Tráng qua cồn 40s Tiếp tục rửa nước javen với nồng độ 1%, 2%, 3% Chương II Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu Bảng 1: Bảng kí hiệu nghiệm thức Tg tráng cồn 20s 40s 1% a1.1 a2.1 2% a1.2 a2.2 3% a1.3 a2.3 Nd Javen Mỗi nghiệm thức đánh giá 10 mẫu Đánh giá tỉ lệ sống, tỉ lệ nhiễm 2.2.2 Khảo sát auxin cytokinin lên trình nhân giống Auxin đươc sử dụng nghiệm thức NAA nồng độ 0, 0.1, 0.5 (mg/l) kết hợp với cytokinin kết hợp với BA nồng độ 0, 0.5, 1, (mg/l) Bảng 2: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA NAA 0.1 0.5 b01 b11 b21 0.5 b02 b12 b22 b03 b13 b23 b04 b14 b24 BA Tốc độ nhân nhanh đánh gia số chồi mẫu 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến Mẫu nuối cấy bổ sung môi trường MS bổ sung 0.1 mg/l NAA, 1mg/l BA, 3mg/l đường sucrose, 7g/l agar điều chỉnh ph=5.8, bổ sung thêm pepton, nước dừa theo nghiệm thức sau: Bảng 3: Khảo sát ảnh hưởng nước dừa pepton lên lan kim tuyến pepton 1g/l c1 pepton 2g/l c2 nước dừa 100ml/l c3 nước dừa 200ml/l c4 pepton 1g/l+100ml/l nước dừa c5 Đánh giá ảnh hưởng chất dựa cân nặng, số chồi/mẫu mẫu Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng Chương II Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng chất tạo rắn lên q trình tạo hồn chỉnh Các chồi thu từ nghiệm thức nhân nhanh, tách cấy môi trường MS bổ sung 30g/l đường, 0.5 g/l than hoạt tính, chất tạo rắn khảo sát sau Gelrite: 3g/l Agar:7g/l Bơng gịn: thể tích bơng gịn thể tích mơi trường lỏng Mẫu nuôi cấy môi trường MS 2.2.5 Khảo sát ảnh hưởng môi trường bổ sung thêm pepton lên trình sinh trưởng phát triển lan Kim Tuyến in vitro Mục đích tiến hành thí nghiệm: để khảo sát nồng độ ảnh hưởng giá lên trình sinh trưởng phát triển lan Kim Tuyến Quá trình tiến hành: chồi đơn(cao khoảng 2cm) đươcc tách nuôi cấy môi trường có bổ sung thêm 0.5mg/L NAA, 1mg/L BA, bổ sung thêm giá xay nhuyển ép lấy nước theo nồng độ (0g/L, 0.5g/L, 1g/L, 1.5g/L, 2g/L) Bảng 4: Khảo sát ảnh hưởng chất rắn tạo nên q trình tạo hồn chỉnh Nghiệm thức Loại nồng độ chất hữu Giá (g/L) 0.5 1.5 Chỉ tiêu theo dõi: số chồi/mẫu, chiều cao(cm), khối lượng tươi(gam), số lá/cây, số rễ/cây, độ rộng mặt lá(cm) sau tháng 2.2.6 Điều kiện nuôi cấy Các mẫu phải nuôi cấy nơi có bóng râm, nhiệt độ ẩm thấp cao, phải tưới phun sương 3/5 lần ngày để trì độ ẩm Điều kiện khơng để q khơ, lồi ưa ẩm có chịu thích nghi với mơi trường có khí hậu ẩm ướt Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng Chương III Kết thảo luận CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng trình khử khuẩn lên hình thành phát triển lan Kim Tuyến Sau tháng nhập mẫu tỉ lệ mẫu nhiễm mẫu sống có bậc chồi mắc mũ thể bảng sau: Bảng 5: Ảnh hưởng trình khử khuẩn lên hình thành phát triển lan Kim Tuyến Tg tráng cồn 20s 40s NĐ javen tỉ lệ nhiễm tỉ lệ sống tỉ lệ nhiễm tỉ lệ sống 1% a1.1 7/10 a1.1 10/10 a2.1 7/10 a2.1 6/10 2% a1.2 2/10 a1.2 9/10 a2.2 2/10 a2.2 5/10 3% a1.3 2/10 a1.3 5/10 a2.3 2/10 a2.3 3/10 Theo bảng ta nhận thấy tỉ lệ mẫu nhiễm tỉ lệ nghịch với thời gian xử lí qua cồn nồng độ javen, cồn có khả giết chết khuẩn đẩy nước khỏi mẫu nên có khả len lỏi vào nách giúp diệt khuẩn sau Tuy nhiên xử lí cồn thời gian lâu mẫu nước nhiều dẫn tới tỉ lệ mẫu chết cao, nhiên cồn khơng có khả diệt bào tử nấm, thể rõ nghiệm thức kết hợp với nồng độ javen thấp, mẫu bị nhiễm nấm cao Ngược lại javen vừa có khả diệt khuẩn bào tử nấm đặc biệt nồng độ 2%, nồng độ javen cao tỉ lệ mẫu chết cao javen ăn sâu vào mẫu Ở nồng độ javen 2% có tỉ lệ nhỏ mẫu nhiễm khuẩn, nguyên nhân khuẩn tồn mạch dẫn Dựa vào bảng ta thấy việc khử trùng tốt kết hợp vào mẫu nhanh qua cồn thời gian 20 giây, sau rửa mẫu qua javen 2% 10 phút tráng lại ba lần nước cất vô trùng cắt bỏ phần mẫu chết khử trùng trước cấy vào môi trường 3.2 Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống Mẫu sau hai tháng cấy môi trường BA NAA cho thấy đa chồi rõ rệt thể bảng sau: Chương III Kết thảo luận Bảng 6: Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống NAA kí hiêu BA mt 0.1 số chồi kí hiêu mẫu mt 0.5 số chồi mẫu kí hiêu mt số chồi mẫu b0.1 b1.1 b2.1 0.5 b0.2 1.2 b1.2 1.3 b2.2 1.2 b0.3 3.4 b1.3 3.8 b2.3 3.0 b0.4 3.8 b1.4 3.9 b2.4 2.8 Ở bảng cho thấy nồng độ BA lớn 1mg/l cho tỉ lệ đa chồi hẳn Mặc khác việc kết hợp với NAA nồng độ thấp tăng hiệu nhân nhanh kích thước chồi lớn Tuy nhiên nồng độ NAA cao 0,5mg/l mẫu tiếc phenol gây hóa nâu mơi trường làm đen gốc ức chế phát triển mẫu, cịn nồng độ BA 2mg/l mẫu có tỉ lệ đa chồi cao chồi bị ngắn khó tách tạo hoàn chỉnh, số mẫu có dấu hiệu đột biến dính nhiều chồi Hình 1: Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng Chương III Kết thảo luận 3.3 Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến Các chất hữu bổ sung vào môi trường củng thể rõ hiệu qua bảng sau: Bảng 7: Ảnh hưởng mơi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến Kí hiệu mt Số chồi(chồi/mẫu) Cân nặng (g/mẫu) Pepton 1g/l c1 3.7 0.75g Pepton 2g/l c2 3.2 0.42g Nước dừa 100ml/l c3 3.9 0.84g Nước dừa 200ml/l c4 3.8 0.67g c5 3.9 1.01 Pepton 1g/l+100ml/l nước dừa Việc bổ sung pepton vào môi trường giúp chồi mập nhiên nhỏ Ở nồng độ pepton lớn 2g/l mẫu tiếp xuc phenol gây hóa nâu môi trường Hiện tượng không bổ sung môi trường bổ sung nước dừa, nồng độ 100ml/l nước dừa thích hộ nhất, kết hợp nước dừa 100ml/l pepton 1g/l cho kết vượt trội hẳn, việc thể qua tỉ lệ đa chồi cao hơn, chồi có thân mập Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 10 Chương III Kết thảo luận Hình 2: Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát triển lan kim tuyến 3.4 Ảnh hưởng chất tạo rắn lên q trình tạo hồn chỉnh Các chất tạo rắn khac củng ảnh hưởng đáng kể đến q trình tạo hồn chỉnh thể bảng sau: Bảng 8: Ảnh hưởng chất tạo rắn lên q trình tạo hồn chỉnh Cân nặng Chiều cao (g/mẫu) (cm) Gelrite 3g/l 0.65(g/mẫu) Agar 7g/l Thí nghiệm Bơng gịn 40g/l Số rể Chiều dài 8.9cm 1.8 1.1 0.51(g/mẫu) 7.1cm 1.5 0.7 0.77(g/mẫu) 9.9cm 2.2 1.3 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 11 Chương III Kết thảo luận Sau ba tháng cấy môi trường bổ sung chất tạo rắn khác cho thấy môi trường lỏng với giá đở bơng gịn cho thấy hiệu vượt trội hẳn hấp thu dinh dưỡng tốt chất khống linh hoạt mơi trường lỏng Mặc khác bơng gịn củng tạo độ thống khí phù hợp bề mặt giúp rể phát triển dài Cây phát triển bề mặt có gelrite củng phát triển tốt nhiên giá thành gelrite cao Hình 3: Mơi trường agar Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 12 Chương III Kết thảo luận Hình 4: Mơi trường gelrite Hình 5: Mơi trường bơng gịn Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 13 Chương III Kết thảo luận Hình 6: Kích thước mẫu Theo kích thước từ trái sang phải gelrite, agar, gòn 3.5 Kết luận kiến nghị Dựa vào kết thí nghiệm tơi đưa quy trình nhân giống lan kim tuyến sau: Mẫu thu hái tự nhiên sau hóa, để mẫu vóng cao đưa khử trùng cách lắc nhanh qua cồn 70 độ giây đưa qua dung dịch javen 2% bổ sung 0.05% tween 80 10p cho tỷ lệ mẫu sống cao số mẫu nhiễm thấp, tiếp mẫu nhân nhanh mơi trường MS bổ sung 1BA, 0.1 NAA, 100ml/l nước dừa+1g/l pepton+30g/l đường cho tốc độ nhân nhanh cao nhất, chồi đạt chất lượng tốt nhất, chồi tiếp tục tách tạo hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung 0.5g/l than hoạt tính, 30g/l đường giá đở bơng gịn cho chất lượng tốt hẳn Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 14 Chương III Kết thảo luận Vì thời gian có hạn tơi khơng có đủ thời gian tiến hành khảo sát ngồi vườn ươm Tơi kiến nghị khảo sát loại giá thể vỏ thông, dớn, sơ dừa, rong thủy đài để ươm giống lan Kim Tuyến invitro Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Hải Đăng 15 Tài liệu tham khảo TÀI LIỆU THAM KHẢO https://khonggiansinhhoc.com/nuoi-cay-mo-thuc-vat-va-cac-chat-bo-sung-vaomoi-truong-nuoi-cay-phan-ii/ https://khonggiansinhhoc.com/peptone-kich-thich-tao-choi-va-re-vitro-cua-bopersea-americana-mill/ https://visitech.vn/moi-truong-don-trong-nuoi-cay-mo-thuc-vat5046-2/ https://vi.wikipedia.org/wiki/Agar https://nongdanbinhthuan.com/auxin-la-gi-iaa-naa-iba-24d-cong-dung-va-cachsu-dung.html https://www.researchgate.net/publication/314371635_NHAN_GIONG_LAN_K IM_TUYEN_ANOECTOCHILUS_SETACEUS_BLUME_BANG_KY_THUAT_NU OI_CAY_IN_VITRO https://vi.wikipedia.org/wiki/Lan_kim_tuy%E1%BA%BFn https://khonggiansinhhoc.com/nghien-cuu-nhan-nhanh-invitro-loai-lan-kimtuyen-anoectochilus-setaceus-blume-nham-bao-ton-nguon-duoc-quy-hiem/ https://khonggiansinhhoc.com/nuoi-cay-mo-thuc-vat-va-cac-chat-bo-sung-vaomoi-truong-nuoi-cay-phan-ii/ https://www.sbc-vietnam.com/san-pham/hoa-chat-dung-cu-nuoi-cay-mo-thucvat/anh-huong-cua-nuoc-cot-dua-casein-hydrolysate-va.aspx http://bimetech.vn/cao-thit-peptone.html https://www.giacongthucphambaovesuckhoe.com/pepton-la-gi-cong-dung-cuapepton/ http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=1053 16 ... sát ảnh hưởng môi trường bổ sung thêm pepton lên trình sinh trưởng phát triển lan Kim Tuyến in vitro Mục đích tiến hành thí nghiệm: để khảo sát nồng độ ảnh hưởng giá lên trình sinh trưởng phát triển. .. thành phát triển lan Kim Tuyến Bảng 6: Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống Bảng 7: Ảnh hưởng môi trường bổ sung pepton, cao nấm men, nước dừa lên trình sinh trưởng phát. .. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng q trình khử khuẩn lên hình thành phát triển lan Kim Tuyến 3.2 Ảnh hưởng auxin cytokinin lên trình nhân giống 3.3 Ảnh hưởng