(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro

(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư của cao chiết cây Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) trong điều kiện in vitro

TRẦN XUÂN ĐẠT BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - SINH HỌC THỰC NGHIỆM Trần Xuân Đạt NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) TRONG ĐIỀU KIỆN INVITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM NĂM 2021 Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Xuân Đạt NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) TRONG ĐIỀU KIỆN INVITRO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : Hướng dẫn 1: PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo Hướng dẫn 2: TS Đồn Chính Chung Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tác giả xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu cá nhân tác giả thực hướng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo TS Đồn Chính Chung, Học viện Khoa học Cơng nghệ Số liệu, kết nghiên cứu kết luận luận văn hoàn toàn trung thực Tp Hồ Chí Minh, tháng 04 năm 2021 Tác giả Trần Xuân Đạt LỜI CẢM ƠN Tác giả xin chân thành cảm ơn Gia đình ln ủng hộ tinh thần tạo điều kiện thuận lợi suốt quãng đường học tập Gia đình nguồn động lực lớn để tác giả cố gắng học tập hoàn thiện thân ngày Tác giả xin chân thành cảm ơn Quý Thầy/Cô Học viện Khoa học Cơng nghệ tận tình dạy trang bị cho tác giả kiến thức cần thiết suốt thời gian vừa qua để luận văn hoàn thành cách tốt Tác giả xin trân trọng cảm ơn PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo TS Đồn Chính Chung tận tình giúp đỡ, định hướng tư cách làm việc khoa học Đó góp ý q báu khơng q trình thực luận văn mà cịn hành trang tiếp bước cho tác giá trình học tập lập nghiệp sau Trong trình thực nghiệm viết báo cáo luận văn khó tránh khỏi sai sót, mong Q Thầy/Cơ đọc giả thơng cảm Đồng thời, trình độ kiến thức kinh nghiệm thực tiễn hạn chế nên luận văn cịn thiếu sót, tác giả mong nhận ý kiến đóng góp để hồn thiện Chân thành cảm ơn! Tác giả Trần Xuân Đạt MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NGỒI NƯỚC 1.1.1 Tình hình sử dụng dược liệu hỗ trợ điều trị bệnh ung thư 1.1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Lan Kim Tuyến 11 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY LAN KIM TUYẾN 14 1.3 KỸ THUẬT CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 16 1.3.1 Nguyên liệu chiết xuất 18 1.3.2 Dung môi chiết xuất 18 1.3.3 Quá trình chiết xuất 19 1.4 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU HIỆN NAY 20 1.4.1 Phương pháp ngâm chiết 20 1.4.2 Phương pháp ngấm kiệt 20 1.4.3 Phương pháp chiết hồi lưu cất kéo nước 20 1.4.4 Phương pháp chiết Soxhlet 21 1.4.5 Phương pháp chiết siêu âm 21 1.4.6 Phương pháp chiết siêu tới hạn 22 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC 23 CHƯƠNG VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 27 2.1.1 Cây Lan Kim Tuyến 27 2.1.2 Các dòng tế bào sử dụng 27 2.1.3 Các kit sử dụng 27 2.1.4 Các mơi trường hóa chất 28 2.2 DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ SỬ DỤNG 28 2.2.1 Dụng cụ 28 2.2.2 Thiết bị 29 2.3 PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 30 2.3.1 Phương pháp thu nhận cao chiết Lan Kim Tuyến 30 2.3.2 Phương pháp phân tích sơ hợp chất cao chiết 30 2.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng flavonoid tổng 31 2.3.4 Phương pháp giải đông nuôi cấy tăng sinh tế bào 32 2.3.5 Phương pháp xác định độc tính tế bào hay ức chế tăng sinh tế bào in vitro 32 2.3.6 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng dịch chiết lên ức chế hình thành bào lạc tế bào 33 2.3.7 Phương pháp đánh giá thay đổi hình thái tế bào 34 2.3.8 Phương pháp nhuộm 4’,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI) 34 2.3.9 Phương pháp xác định chuyển dịch phân tử PS apoptosis tế bào 34 2.3.10 Phân tích thống kê 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ-BÀN LUẬN 36 3.1 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN CÁC NHÓM CHẤT TRONG CÂY LAN KIM TUYẾN 36 3.1.1 Kết phân tích thử tinh khiết 36 3.1.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa học 37 3.2 KẾT QUẢ THU NHẬN CAO CHIẾT TỪ CÂY LAN KIM TUYẾN 41 3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TĂNG SINH TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY LAN KIM TUYẾN 43 3.3.1 Ảnh hưởng cao tổng lên tăng sinh tế bào ung thư vú 43 3.3.2 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên hàm lượng enzyme LDH giải phóng từ tế bào ung thư vú 46 3.3.3 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên hình thái tế bào ung thư vú 48 3.3.4 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên hình thành bào lạc tế bào ung thư vú 50 3.3.5 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên tăng sinh nguyên bào sợi 51 3.4 ẢNH HƯỞNG CỦA CAO CHIẾT LAN KIM TUYẾN LÊN SỰ CẢM ỨNG APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ VÚ 54 3.4.1 Ảnh hưởng cao chiết lên hình thái nhân tế bào ung thư 54 3.4.2 Ảnh hưởng cao chiết lên tỉ lệ apoptosis tế bào ung thư 55 CHƯƠNG KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 58 4.1 KẾT LUẬN 58 4.2 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Dung mơi khác dùng chiết xuất nhóm hoạt chất từ dược liệu 19 Bảng 2.1 Danh sách dụng cụ sử dụng 28 Bảng 2.2 Các thiết bị sử dụng 29 Bảng 2.3 Các thuốc thử dùng để phân tích sơ thành phần hóa học 30 Bảng 3.1 Độ ẩm mẫu Lan Kim Tuyến 36 Bảng 3.2 Tro toàn phần mẫu thử Lan Kim Tuyến 36 Bảng 3.3 Số liệu phân tích sơ thử tinh khiết mẫu thử Lan Kim Tuyến 36 Bảng 3.4 Bảng phân tích sơ thành phần hóa thực vật mẫu dược liệu Lan Kim Tuyến 39 Bảng 3.5 Kết kiểm tra độ ẩm cao chiết hiệu suất tách chiết dung môi khác 41 Bảng 3.6 Kết định tính hợp chất có cao chiết Lan Kim Tuyến 41 Bảng 3.7 Kết định lượng hàm lượng flavonoid tổng cao chiết 42 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Mẫu Lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceus) 12 Hình 3.1 Phương trình đường chuẩn quercetin sử dụng định lượng flavonoid tổng 42 Hình 3.2 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên tăng sinh tế bào ung thư vú 45 Hình 3.3 Ảnh hưởng của cao chiết Lan Kim Tuyến lên hàm lượng enzyme LDH giải phóng mơi trường ni cấy từ tế bào 47 Hình 3.4 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên hình thái tế bào ung thư vú 49 Hình 3.5 Ảnh hưởng của cao chiết Lan Kim Tuyến lên hình thành bào lạc tế bào ung thư vú 51 Hình 3.6 Ảnh hưởng cao chiết lên tăng sinh nguyên bào sợi 52 Hình 3.7 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên hình thái nhân tế bào ung thư vú MCF7 54 Hình 3.8 Ảnh hưởng cao chiết Lan Kim Tuyến lên cảm ứng apoptosis tế bào ung thư vú 56 MỞ ĐẦU Theo thống kê Cơ quan Nghiên cứu Ung thư Quốc tế (International Agency for Research on Cancer – IARC ) năm 2018, tồn giới có 18,08 triệu người mắc ung thư, có 9,5 triệu người tử vong bệnh Số ca mắc ung thư Việt Nam ước tính 164.671 ca số ca tử vong 114.871 ca Các loại ung thư phổ biến nam giới ung thư gan (21,5%), ung thư phổi (18,4%), dày (12,3%), đại trực tràng (8,4%) ung thư vòm họng (5%); nữ giới ung thư vú (20,6%), đại trực tràng (9,6%), ung thư phổi (9,4%), dày (8,6%) gan (7,8%) Tỷ lệ mắc ung thư chuẩn hóa theo tuổi hai giới 151,4/ 100.000 người tỉ lệ tử vong 104,4/100.000 người Tại Việt Nam, ước tính có khoảng 70% bệnh nhân ung thư chẩn đoán giai đoạn muộn (III IV), có bệnh thể sàng lọc, phát sớm nhiều phương pháp khác Hiện nay, việc điều trị ung thư chủ yếu dựa hai phương pháp phương pháp truyền thống phương pháp đại Ở phương pháp đại, người ta sử dụng hai phương pháp là: phương pháp điều trị trúng đích (sử dụng liệu pháp kháng thể đơn dòng) phương pháp miễn dịch (sử dụng liệu pháp miễn dich liệu pháp tế bào gốc) Ngồi ra, ung thư cịn điều trị theo phương pháp truyền thống Trong phương pháp truyền thống chủ yếu dựa ba phương pháp bản, gồm phẫu thuật cắt bỏ khối u (có thể kết hợp với hóa trị xạ trị), xạ trị (sử dụng tia xạ để tiêu diệt khối u) hóa trị (sử dụng hóa chất gây độc để tiêu diệt tế bào ung thư) Bên cạnh việc sử dụng phương pháp việc sử dụng dược liệu tự nhiên việc điều trị hay hỗ trợ điều trị ung thư hướng nghiên cứu phương pháp điều trị truyền thống Phương pháp giúp nâng cao hiệu điều trị ung thư hai khía cạnh: tăng cường đáp ứng miễn dịch thể ức chế phát triển khối u, giúp tăng khả sống sót bệnh nhân [1][2] Sự kết hợp Y học đại Y học cổ truyền điều trị ung thư phát huy mạnh thuốc có nguồn gốc từ dược liệu tự nhiên, nâng cao sức đề kháng thể, hạn chế tối đa tình trạng tái phát di khối u tác dụng khơng mong muốn hóa - xạ trị, nên triệu chứng lâm sàng cải thiện Do vậy, hướng nghiên cứu Y học cổ ... Đạt NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) TRONG ĐIỀU KIỆN INVITRO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH... bào ung thư Lan Kim Tuyến Đây hướng nghiên cứu cần thiết Việt Nam giới Do vậy, luận văn ? ?Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư cao chiết Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) điều kiện in vitro? ??... tính kháng ung thư từ nguồn dược liệu tự nhiên Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư cao chiết Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) điều kiện in vitro Các nội dung nghiên cứu