Thực hiện trên 30 g được liệu, lần lượt chiết kiệt các hoạt chất với các dung môi có độ phân cực tăng dần, thu được các dịch chiết tương ứng. Xác định các nhóm hoạt chất trong từng dịch chiết bằng các phản ứng hóa học đặc trưng. Kết quả xác định sơ bộ các nhóm chất có trong mẫu dược liệu cây Lan Kim Tuyến (Bảng 3.4). Theo kết quả nghiên cứu của He cho thấy Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii có chứa một số hợp chất như p- hydroxybenzaldehyd, axit ferulic, quercetin, daucosterol, cirsilineol được phát hiện thấy cao phân đoạn CHCl3. Trong khi đó, cao phân đoạn Hexan có chứa các hợp chất sorghumol, friedelin, axit palmitic, hỗn hợp 2 sterol (24- isopropenylcholesterol và 26-methylstigmasta-5,22,25,(27) trien-3-beta-ol), sitosterol, stigmasterol, campesterol. Trong đó, sorghumol, friedelin là những hợp chất lần đầu tiên được tìm thấy trong một loài thuộc chi Anoectochilus. sp.
[8]. Tương tự, nhóm nghiên cứu cũng phát hiện thấy một số hợp chất flavonoid glucosid mới trong loài này như quercetin-7-O-β-D-[6''-O-(trans-feruloyl)]- glucopyranosid, 8-C-p-hydroxybenzylquercetin, isorhamnetin-7-O-β-D- glucopyranosid, isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranosid, kaempferol-3-O-β-D- glucopyranosid, kaempferol-7-O-β-D-glucopyranosid, 5-hydroxy-3',4',7- trimethoxyflavonol-3-O-β-D-rutinosid, và isorhamnetin-3-O-β-D-rutinosid. Trong các hợp chất nêu trên, quercetin-7-O-β-D-[6''-O-(trans-feruloyl)]- glucopyranosid có hoạt tính oxy hóa mạnh nhất [9]. Tương tự như vậy, nghiên cứu của Yang và cs cho thấy 10 đơn chất gồm beta-sitosterol, ferulic acid, oleanolic acid, lanosterol, p-hydroxybenzaldehyde, 3-methoxyl-p- hydroxybenzaldehlde, daucosterol,3',4',7-trimethoxy-3, 5-dihydroxyflavone, isorhamnetin-3-O-beta-D-rutinoside và rutin được phát hiện thấy trong cao chiết nước của cây Lan Kim Tuyến Anoectochilus formosanus [29]. Ngoài ra, nghiên cứu Huang cho thấy hợp chất ergosterol và stigmasterol được phân tách từ loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii bằng phương pháp sắc ký phân bố ngược dòng tốc độ. Đây là hai hợp chất sterol chính của loài Lan Kim Tuyến và được chứng minh có nhiều hoạt tính sinh học quan trọng [30]. Ngoài ra, các nghiên cứu gần đây về thành phần hóa học của cây Lan Kim Tuyến đều phát hiện thấy Lan Kim Tuyến chứa một số nhóm hợp chất chính gồm nhóm alkaloids, flavonoids, terpenoids, glycosides, và steroids [31][32].
38
Như vậy, kết quả đánh giá sơ bộ của nghiên cứu phù hợp với các kết quả nghiên cứu trước đó. Trong các nhóm hợp chất có trong dược liệu Lan Kim Tuyến gồm triterpenoid, alkaloid, flavonoid, glycosid, chất khử và acid hữu cơ. Trong đó, nghiên cứu chú ý tới nhóm hợp chất flavonoid và tiến hành nghiên cứu cụ thể nhóm chất này trong các nghiên cứu tiếp theo. Hơn nữa, một số nghiên cứu gần đây khi tiến hành nghiên cứu nhóm hợp chất flavonoid cũng cho thấy một số kết quả đáng chú ý. Nghiên cứu của Budluang cho thấy cao chiết nước cây Lan Kim Tuyến chứa các chất thuộc nhóm axit phenolic như axit vanillic, axit ferulic, axit chlorogenic axit coumaric. Nghiên cứu của Chac và cs cho thấy cây Lan Kim Tuyến chứa 3 đơn chất nhóm flavonoid gồm quercetin, isorhamnetin và axit ferulic với hàm lượng lần lượt là 106,8 µg/ g cao chiết, 187,2 µg/ g cao chiết và 51,9 µg/g cao chiết [33].
39
Bảng 3.4. Bảng phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật của mẫu dược liệu cây Lan Kim Tuyến
Nhóm hợp
chất Thuốc thử /phản ứng Phản ứng dương tính
Kết quả định tính trên các cao chiết Cao ether Cao cồn Cao nước
Tinh dầu Bay hơi tới cắn, có mùi thơm – – –
Chất béo Nhỏ dd trên giấy Vết trong mờ – – –
Carotenoid Thuốc thử Carr–Price Xanh chuyển sang đỏ –
(chỉ xanh lục) – –
H2SO4 Xanh dương hay xanh lục ngả
sang xanh dương
–
(chỉ xanh lục) – –
Triterpenoid Lieberman – Burchard Lớp giữa đỏ nâu/tím + + –
Alkaloid
Mayer (Valse–Mayer) Tủa đục – + +
Bouchardat Tủa đục – + +
Dragendoff Tủa đục – + +
Coumarin Phát quang trong kiềm Phát quang mạnh hơn – – –
Anthraquinon NaOH 10% Dd kiềm có màu hồng tới đỏ – (màu vàng)
– * (màu cam)
– * (màu cam)
Flavonoid Mg/HCl đđ Dd có màu hồng tới đỏ + ++ ++
Glycosid tim Thuốc thử vòng lacton và
đường desoxy – + +
40
*: dịch thủy phân - : Âm tính
+: Dương tính; ++: Dương tính mạnh
Kết luận: Trong dược liệu Lan Kim Tuyến có: triterpenoid, alkaloid, flavonoid, glycosid, chất khử và acid hữu cơ Một chất cho kết quả âm tinh có thể do:
Chất thực sự không có mặt trong cây
Hàm lượng chất quá ít, ngoài giới hạn phát hiện của thuốc thử Bị các chất khác trong dịch chiết làm mờ phản ứng
Do vậy kết quả chỉ mang tính khảo sát đánh giá sơ bộ
Dung dịch gelatin muối Tủa bông trắng – – –
Saponin Lắc mạnh trong nước Bọt bền – – –
Các chất khử Thuốc thử Fehling Tủa đỏ gạch – + ++
Acid hữu cơ NaHCO3 Sủi bọt – – +
41