Tuyển chọn các chủng vi khuẩn azotobacter cho sản xuất phân bón hữu cơ vi sinh vật

Đánh giá ảnh hưởng của tổ hợp các chủng Azotobacter lựa chọn đến sinh trưởng, phát triển và năng suất của cây lạc thí nghiệm trong nhà lưới và ngoài đồng ruộng diện hẹp.. Keywords: Vi si

Tuyển chọn các chủng vi khuẩn Azotobacter cho sản xuất phân bón hữu cơ vi sinh vật

Trần Thị Linh

Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Vi sinh vật học; Mã số: 60 42 40

Người hướng dẫn: TS Lê Như Kiểu

Năm bảo vệ: 2012

Abstract: Phân lập, tuyển chọn các chủng Azotobacter từ đất canh tác Lựa chọn tổ

hợp chủng Azotobacter thích hợp để sản xuất phân bón Phân loại và mức độ an toàn của các chủng vi sinh vật nghiên cứu Đánh giá ảnh hưởng của tổ hợp các chủng Azotobacter lựa chọn đến sinh trưởng, phát triển và năng suất của cây lạc (thí nghiệm

trong nhà lưới và ngoài đồng ruộng diện hẹp)

Keywords: Vi sinh vật học; Vi khuẩn Azotobacter; Sản xuất phân bón; Phân bón hữu

cơ

Content

MỞ ĐẦU

Một thực trạng chúng ta đang thấy hiện nay là sự lạm dụng phân bón hóa học, thuốc bảo

vệ thực vật đã làm giảm khả năng chống chịu của cây trồng dẫn đến bùng nổ dịch bệnh, ảnh hưởng không tốt đến chất lượng nông sản và cũng là nguyên nhân tất yếu dẫn đến thoái hóa đất canh tác Các sản phẩm hóa học này đã để lại những tồn dư của chúng và đang được tích lũy trong hệ sinh thái, trở thành mối hiểm họa nghiêm trọng đe dọa sức khỏe của con người

và môi trường sống Sử dụng phân bón hữu cơ vi sinh vật (HCVSV) là giải pháp mà các nhà khoa học trên thế giới cũng như ở Việt Nam đang hướng đến

Đất nước ta có nền kinh tế nông nghiệp là chủ yếu thì việc quan tâm đến năng suất và chất lượng nông sản là mục tiêu hàng đầu vì không những giúp nâng cao đời sống của nông dân mà còn thúc đẩy sự phát triển nền kinh tế quốc gia Phân bón HCVSV (hay còn gọi là phân hữu cơ vi sinh) là sản phẩm được sản xuất từ các nguồn nguyên liệu hữu cơ khác nhau, nhằm cung cấp chất dinh dưỡng cho cây trồng, cải tạo đất, chứa một hay nhiều chủng vi sinh vật sống được tuyển chọn với mật độ đạt tiêu chuẩn quy định Phân bón HCVSV góp phần nâng cao năng suất cây trồng và chất lượng nông sản, giảm chi phí, tiết kiệm phân bón vô cơ, đóng góp quan trọng trong việc bảo vệ môi trường và phát triển nền nông, lâm nghiệp bền

vững Vì vậy, nghiên cứu và sử dụng nguồn dinh dưỡng tạo ra từ các hoạt động sống của vi sinh vật đã và đang được nhiều nước trên thế giới quan tâm và phát triển

Bên cạnh các sản phẩm phân HCVSV đơn chủng đã được nghiên cứu và sử dụng hiệu quả như: Nitragin, Rhizoda, Azogin, Rhizolu, Phosphobacterin, Azotobacterin một số nghiên cứu gần đây cho thấy chế phẩm phân bón tổng hợp bao gồm các nhóm cố định nitơ, phân giải photphat, kích thích sinh trưởng thực vật, đối kháng vi sinh vật gây bệnh (chế phẩm

EM, vi sinh vật tổng hợp) có tác dụng đối với cây trồng tốt hơn so với từng loại vi sinh vật riêng rẽ

Nhiều kết quả nghiên cứu về phân bón HCVSV đã khẳng định, hiệu quả của phân HCVSV phụ thuộc hoạt tính sinh học, khả năng cạnh tranh với vi sinh vật có sẵn trong đất và khả năng thích ứng với điều kiện môi trường đất của các vi sinh vật sử dụng trong phân bón [13], [14], [15] Phân vi sinh vật đặc biệt có ý nghĩa sử dụng nếu các vi sinh vật sử dụng có nhiều hoạt tính sinh học

Azotobacter là nhóm có phổ phân bố khá rộng Các nghiên cứu trước đây đã phát hiện

ra nhiều đặc tính quý của Azotobacter như khả năng cố định nitơ tự do, kích thích sinh trưởng,

đối kháng, sinh polyshacarit v.v [5], [12]

Để sản xuất phân bón HCVSV tốt, phải có chủng vi sinh vật có hoạt tính sinh học cao,

đa hoạt tính, khả năng tồn tại lớn Vì vậy, việc phân lập, tuyển chọn đánh giá hoạt tính của các chủng vi sinh vật là việc làm không thể thiếu trong quy trình sản xuất chế phẩm phân bón vi sinh vật [11] Đây là đề tài nghiên cứu mà chúng tôi đang hướng tới

Mục đích nghiên cứu

Tuyển chọn các chủng Azotobacter có hoạt tính sinh học cao (cố định nitơ, kích thích

sinh trưởng và đối kháng bệnh héo xanh) để sản xuất phân bón hữu cơ vi sinh cho cây lạc

Nội dung nghiên cứu

- Phân lập, tuyển chọn các chủng Azotobacter từ đất canh tác

- Lựa chọn tổ hợp chủng Azotobacter thích hợp để sản xuất phân bón

- Phân loại và mức độ an toàn của các chủng vi sinh vật nghiên cứu

- Đánh giá ảnh hưởng của tổ hợp các chủng Azotobacter lựa chọn đến sinh trưởng, phát

triển và năng suất của cây lạc (thí nghiệm trong nhà lưới và ngoài đồng ruộng diện hẹp)

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Vi khuẩn Azotobacter

1.1.1 Đặc điểm hình thái và các đặc tính sinh lí, sinh hóa của Azotobacter

Họ Azotobacteraceae gồm 2 chi Azotobacter (Beijerinck, 1901) và Azomonas

(Winogradsky, 1938)

Azotobacter được phân lập lần đầu tiên vào năm 1901 Đó là loài Azotobacter chroococcum, về sau người ta tìm thấy nhiều loài khác trong chi Azotobacter (beijerinskii, vinelandii, agllis)

Azotobacter là vi khuẩn cố định nitơ sống tự do trong đất, hiếu khí, không sinh bào tử,

Gram âm Khi còn non tế bào thường có dạng hình que, kích thước khoảng 2,0- 7,0 × 10- 2,5

μm, đứng riêng rẽ hay xếp thành từng đôi chồng chất, tế bào nhuộm màu đồng đều, có khả

năng di động nhờ tiên mao mọc khắp cơ thể (chu mao) Khi già tế bào Azotobacter mất khả

năng di động, kích thước thu nhỏ lại trông giống như hình cầu Nguyên sinh chất xuất hiện nhiều hạt lổn nhổn Đó là các hạt volutin, granulose, các giọt mỡ… Quan sát dưới kính hiển vi

ta còn thấy khi già tế bào Azotobacter được bao bọc bởi một vỏ nhầy khá dày Vỏ nhầy của vi khuẩn Azotobacter chứa khoảng 75 % là chất hiđrit của axit uronic và chứa khoảng 0,023 % nitơ Lượng ADN trong tế bào Azotobacter thường thấp hơn so với nhiều loại vi khuẩn khác

(0,70- 0,81%) [4]

Azotobacter có thể sử dụng nhiều loại hợp chất hữu cơ làm nguồn thức ăn cacbon

Chúng cũng cần nhiều nguyên tố khoáng, đặc biệt là 2 nguyên tố vi lượng bor (B) và molipden (Mo)(Mo cần cho quá trình cố định nitơ)

Khi sống trong điều kiện không có nitơ, Azotobacter sẽ dùng nitơ của không khí để

biến thành nitơ của cơ thể sống Khi sống trong môi trường đủ thức ăn nitơ hữu cơ hoặc vô cơ

thì tác dụng cố định nitơ sẽ rất thấp hoặc không có Azotobacter thích hợp với điều kiện hiếu

khí vừa phải và pH trung tính hoặc hơi kiềm

Khi nuôi trong môi trường thạch, vi khuẩn Azotobacter có khuẩn lạc nhầy, lồi hoặc tan,

lúc đầu không màu, sau biến thành màu nâu tối, thậm chí đến màu đen nhưng không làm

nhuộm màu môi trường Ngoài ra một số loài Azotobacter có dạng nhăn nheo, khuẩn lạc có

màu vàng lục, màu hồng

1.1.2 Nguồn dinh dưỡng

Nguồn cacbon

Cacbon chiếm tỷ lệ trên 50% vật chất khô của vi sinh vật Cacbon là yếu tố đặc biệt quan trọng trong cấu trúc tất cả các hợp chất có mặt trong tế bào Hợp chất cacbon là nguồn năng lượng quan trọng trong hoạt động sống của vi sinh vật Trong tự nhiên có hai dạng hợp chất cacbon cơ bản là: Cacbon vô cơ và cacbon hữu cơ Các loại vi sinh vật khác nhau sử dụng các nguồn cacbon không giống nhau Tuỳ theo nhóm vi sinh vật mà nguồn cacbon được cung cấp có thể là chất vô cơ (CO2, NaHCO3, CaCO3 …) hoặc hữu cơ

Nguồn nitơ

Nguồn dinh dưỡng nitơ có ý nghĩa rất quan trọng đối với sự phát triển của vi sinh vật Nguồn nitơ dễ hấp thụ đối với vi sinh vật là NH3 và NH4+ Muối nitrat là nguồn thức ăn nitơ thích hợp đối với nhiều loại tảo, nấm sợi và xạ khuẩn nhưng ít thích hợp với nhiều loại nấm men và vi khuẩn Sau khi vi sinh vật sử dụng hết gốc NO3- các ion kim loại còn lại: K+, Na+,

Mg2+,… làm kiềm hoá môi trường Để tránh hiện tượng này người ta sử dụng muối NH4NO3 làm nguồn nitơ cho nhiều loại vi sinh vật Tuy nhiên gốc NH4+ thường bị hấp thụ nhanh rồi mới hấp thụ đến gốc NO3

-Nguồn khoáng

Ngoài các chất hữu cơ, vô cơ, nước v.v… trong tế bào vi sinh vật còn chứa nhiều chất khoáng Lượng chất khoáng trong tế bào thường thay đổi tuỳ loài, tuỳ từng giai đoạn và điều kiện sinh trưởng, phát triển của vi sinh vật Mỗi nguyên tố đều có tác dụng nhất định đối với sinh trưởng, phát triển của tế bào mà các nguyên tố khác không thể thay thế được

Chất sinh trưởng

Muốn phát triển bình thường vi sinh vật không những đòi hỏi phải được cung cấp đầy

đủ protein, lipit, gluxit, muối khoáng… mà còn cần tới các chất sinh trưởng

1.1.3 Ảnh hưởng các nhân tố sinh thái đến sinh trưởng và phát triển của Azotobacter

1.2 Sự phân bố của Azotobacter trong đất

Đất là môi trường thuận lợi cho sinh trưởng và phát triển của các loài vi sinh vật Trong thành phần sinh vật đất, vi sinh vật chiếm tới 90% Trong thành phần cacbon hữu cơ của đất,

vi sinh vật chiếm khoảng 2% Số lượng vi sinh vật trong mỗi gam đất có tới hàng triệu, hàng

tỉ và tới vài chục tỉ tế bào Vi khuẩn là nhóm chiếm số lượng lớn nhất trong đất (106

– 1010 tế bào/gam đất) nhưng vì kích thước nhỏ (khoảng 1µm) nên chúng chỉ chiếm không quá 20% trọng lượng của vi sinh vật trong đất [23], [29]

1.3 Khả năng cố định nitơ của Azotobacter

1.3.1 Quá trình cố định nitơ sinh học

Trong một thời gian dài, cơ chế của quá trình cố định nitơ phân tử là một bí ẩn đầy hấp dẫn của tự nhiên Quá trình cố định nitơ phân tử là quá trình khử N2 thành NH3có xúc tác của enzym nitrogenaza, khi có mặt của ATP

N2 + AH2 + ATP nitrogenaza NH3 + A + ADP +P

Năm 1992 các nhà khoa học đã hoàn thiện được cơ chế của quátrình cố định nitơ phân

tử như sau [4]

N = N NH = NH H2N-NH2 NH3

N2 + 8H+ + 8e- + 16 Mg.ATP + 16º nitrogenaza 2NH3 + H2 +16 Mg.ADP + 16P

1.3.2 Vi khuẩn cố định nitơ tự do Azotobacter

Azotobacter có tác dụng tăng cường thức ăn nitơ cung cấp cho cây trồng Trung bình

khi tiêu thụ hết 1g các chất sinh năng lượng, Azotobacter có khả năng đồng hoá được khoảng

10 – 15 mg nitơ phân tử [4]

1.4 Khả năng kích thích sinh trưởng của Azotobacter

1.4.1 Chất kích thích sinh trưởng ở thực vật

Các chất kích thích sinh trưởng của thực vật là những chất ở nồng độ sinh lí có tác dụng kích thích quá trình sinh trưởng của cây Các chất kích thích sinh trưởng thực vật gồm

có các nhóm chất: auxin, gibberellin, cytokinin

1.4.2 Vi khuẩn sinh AIA: Azotobacter

AIA là một hợp chất hóa học có khả năng kích thích sinh trưởng thực vật Để điều chế

ra AIA có nhiều con đường, trong đó chúng ta có thể sử dụng các vi sinh vật tổng hợp AIA Đặc điểm nổi bật của con đường này, rẻ tiền nhưng vẫn cho hiệu quả khá cao

1.5 Tính kháng vi khuẩn gây bệnh héo xanh Ralstonia solanacearum

1.5.1 Vi khuẩn R.solanacearum

Là vi khuẩn gây bệnh mạch dẫn gây hại trên 200 loài cây cỏ Halted đã nghiên cứu bệnh

này vào năm 1982, đến năm 1986 E.F.Smith nghiên cứu, mô tả, định tên R.solanacearum Ở Việt Nam bệnh do vi khuẩn R.solanacearum còn được gọi là bệnh héo xanh, héo rũ Những

năm sau đó, bệnh héo xanh được nhiều nhà khoa học trên thế giới đi sâu và nghiên cứu một cách toàn diện [26], [25], [8]

1.5.2 Tính kháng R.solanacearum của Azotobacter

Thực tế cho thấy chỉ cần sử dụng thuốc hoá học, con người có thể kiểm soát được hầu hết sâu, bệnh hại cây trồng Biện pháp này giữ vị trí khá quan trọng trong phòng trừ dịch hại cây trồng Vì vậy, việc phòng trừ sâu bệnh hại bằng thuốc hoá học ở nhiều nước đã bị lạm dụng, có khi còn khá tuỳ tiện Dẫn tới sâu bệnh hại có chiều hướng gia tăng bởi vì chúng đã quen dần với thuốc hoá học, bên cạnh đó năng suất cây trồng đã không thể tăng lên được nữa

mà bị chững lại [31]

1.6 Chế phẩm phân bón chứa Azotobacter và hiệu quả trong trồng trọt trong những

nghiên cứu ban đầu

Hoạt động của vi sinh vật có ích giúp đẩy nhanh quá trình khoáng hóa các hợp chất hữu

cơ trong đất, nâng cao độ phì nhiêu của đất, phù hợp với mọi loại đất Đặc biệt là làm tăng độ mùn, cung cấp các chất dinh dưỡng và giúp cải tạo đất xám, đất xám bạc màu, đất phèn Khắc phục hiện tượng chai đất do sử dụng phân bón hóa học lâu ngày, giúp cho đất tơi xốp màu mỡ trở lại Bảo vệ đất chống rửa trôi xói mòn Cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết giúp cho cây tăng trưởng, phát triển khỏe mạnh, có khả năng chống chịu tốt với sâu bệnh, nâng cao năng suất cây trồng Cung cấp các hệ vi sinh vật có ích, khả năng thích ứng cao, cải tạo đất đồng thời có thể kìm hãm sự phát triển của các vi sinh vật gây hại từ đó làm giảm mầm mống sâu bệnh (nấm, mốc ) Bên cạnh đó một số chủng vi sinh vật có khả năng tiết ra hoạt chất có tác dụng kích thích sinh trưởng giúp cây phát triển nhanh, tốt, hạn chế sâu bệnh Giúp bộ rễ phát triển nhanh, sâu rộng, chắc khỏe, nâng cao năng suất, sản lượng cho cây trồng

1.7 Tình hình nghiên cứu và sử dụng phân bón hữu cơ vi sinh vật ở trong nước và ngoài nước

Ở trong nước

Chiến lược an toàn dinh dưỡng cho cây và đất trồng là sử dụng cân đối phân bón hoá học và phân bón sinh học cho cây trồng phù hợp với nhu cầu dinh dưỡng và điều kiện đất đai, khí hậu, trong đó phân bón sinh học có vai trò vô cùng quan trọng

Trên thế giới

Ðến nay nhiều nước trên thế giới đã sản xuất chế phẩm vi sinh vật theo nhiều hướng, nhiều dạng khác nhau Phụ thuộc vào điều kiện tự nhiên, kinh tế xã hội, khoa học công nghệ

và trình độ dân trí của mỗi nước Nhưng tất cả đều sản xuất theo hướng tiện cho người sử dụng và cho hiệu quả kinh tế cao nhất

Ưu điểm

Tăng năng suất cây trồng, chất lượng sản phẩm tốt hơn, giảm ô nhiễm của hàm lượng

NO3

Cải tạo đất, trả lại độ phì nhiêu cho đất bằng cách làm tăng hàm lượng photpho và kali

dễ tan trong đất canh tác

Giá thành hạ

Nhược điểm

Phân bón có hiệu quả chậm

Điều kiện bảo quản nghiêm ngặt

Phân bón HCVSV thường chỉ phát huy tác dụng trong những điều kiện đất đai và khí hậu thích hợp

Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 Vật liệu

2.1.1 Mẫu đất và vi sinh vật

Các chủng Azotobacter phân lập từ những khu vực đất phù sa sông Hồng chuyên canh rau

màu tại một số địa điểm quanh Hà Nội và đất trồng lúa tại Xuân Mai – Hà Nội

2.1.2 Hóa chất, dụng cụ

Trong quá trình thực hiện đề tài này, tôi đã sử dụng các dụng cụ và hóa chất của Bộ môn Vi sinh vật – Viện Thổ Nhưỡng Nông Hóa

2.2 Phương pháp

2.2.1 Lấy mẫu đất

Phương pháp lấy mẫu đất và chuẩn bị mẫu đất theo TCVN 5960-1995:

2.2.2 Xác định khả năng cố định nitơ của vi sinh vật

2.2.3 Xác định khả năng sinh tổng hợp AIA của vi sinh vật

2.2.4 Xác định khả năng đối kháng vi khuẩn gây bệnh héo xanh

Phương pháp xác định hoạt tinh đối kháng của vi sinh vật với vi khuẩn gây bệnh héo xanh cây trồng cạn Ralstonia solanacearum [10TCN 867:2006]

2.2.5 Xác định tên vi sinh vật

2.2.6 Thí nghiệm ở quy mô nhà lưới và đồng ruộng diện hẹp với cây lạc

Phương pháp bố trí thí nghiệm ở quy mô nhà lưới và đồng ruộng diện hẹp theo 10TCN 216-2003 Thời gian theo dõi thí nghiệm là một chu kỳ sinh trưởng phát triển của cây trồng (từ khi gieo trồng cho đến khi thu hoạch xong) Số liệu nghiên cứu được xử lý Microsoft Exel

2003 và phần mềm IRRISTAT

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Phân lập, tuyển chọn các chủng Azotobacter hữu hiệu

Thu được 25 mẫu đất từ những khu vực trồng lúa tại Xuân Mai và khu vực trồng rau màu tại đất phù sa sông Hồng ở Hà Nội Trước khi phân lập, mẫu lấy về đem hong khô ở nhiệt độ phòng để tăng tính chọn lọc Việc hong khô đất là rất cần thiết vì các chủng phân lập

từ đất khô có khả năng tồn tại tốt hơn trong điều kiện nuôi cấy nhân tạo Các chủng phân lập

từ đất ẩm dễ bị chết sau một thời gian dài bảo quản và dễ bị nhầm với Azomonas, một loại vi khuẩn cũng cố định nitơ, có hình dạng giống Azotobacter nhưng không hình thành bào nang

[5]

Từ 25 mẫu đất này, đã phân lập được 09 chủng Azotobacter với đặc điểm hình thái

khuẩn lạc được tổng hợp tại bảng sau:

3.1.1 Tuyển chọn các chủng Azotobacter có khả năng cố định nitơ

Các chủng vi khuẩn Azotobacter được cấy truyền trên môi trường Ashby để xác định

thuần chủng và ổn định hoạt tính sinh học Sau đó đánh giá lại khả năng cố định nitơ tự do dựa vào phản ứng màu Nessler Kết quả ở hình 3.2

Kết quả ở hình 3.2 cho thấy cả 09 chủng đều có phản ứng màu với thuốc thử Nessler Trong đó, chủng AT10 có phản ứng mạnh nhất với thuốc thử Nessler, sau đó lần lượt là các chủng AT4, AT7, AT2, AT6, AT9 và cuối cùng là 3 chủng AT1, AT3, AT8

Để xác định hoạt tính cố định nitơ của các chủng Azotobacter mới phân lập được, 06

chủng AT10, AT4, AT7, AT2, AT6 và AT9 được cấy vào môi trường bán lỏng AT ở 30 0

C trong 24 giờ, sau đó xác định hoạt tính khử axetylen trên máy sắc ký khí Kết quả đo hoạt tính khử axetylen của từng chủng được thể hiện ở bảng 3.2 và biểu đồ 3.1

Như vậy, kết quả thử phản ứng màu của các chủng Azotobacter với thuốc thử Nessler

hoàn toàn phù hợp với kết quả xác định hoạt tính khử axetylen trên máy sắc ký khí

Kết quả ở bảng 3.2 cho thấy, các chủng Azotobacter đều có khả năng cố định nitơ Khả

năng hình thành etylen đạt từ 1071,6 đến 4345,6 mol/ml/ngày Trong đó chủng AT10 có khả năng cố định nitơ cao nhất, đạt 4345,6 mol/ml/ngày Các chủng này được chọn làm đối tượng cho các nghiên cứu sau

3.1.2 Tuyển chọn các chủng Azotobacter có khả năng sinh tổng hợp AIA

Từ 09 chủng vi khuẩn phân lập được, đã tiếp tục tiếp tục tuyển chọn các chủng có khả năng sinh tổng hợp AIA, dựa vào phản ứng với thuốc thử Salkowski Kết quả ở hình 3.3

Kết quả hình 3.3 cho thấy cả 09 chủng đều phản ứng màu với thuốc thử Salkowski Dễ dàng nhận thấy, các chủng AT10, AT9, AT1, AT7 và AT2 có phản ứng mạnh với thuốc thử

Để xác định hoạt tính sinh tổng hợp AIA thô của các chủng Azotobacter mới phân lập,

06 chủng AT10, AT9, AT1, AT7 và AT2 được nuôi cấy trong điều kiện kị ánh sáng, trên máy lắc tốc độ 150 vòng / phút ở 30oC trên môi trường nuôi cấy AT có bổ sung trytophan 0,1% Nuôi cấy và theo dõi lượng AIA sinh ra theo thời gian là: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ngày Sau đó xác định hàm lượng AIA thô sinh ra bằng phương pháp so màu ở bước sóng 530nm với đồ thị chuẩn AIA Kết quả thể hiện tại bảng 3.3 và biểu đồ 3.2

3.1.3 Tuyển chọn các chủng Azotobacter có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh héo xanh

Từcác chủng vi khuẩn phân lập được, đã tiếp tục tuyển chọn các chủng có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh héo xanh Kết quả thu được 03 chủng có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh héo xanh, đó là : AT2, AT7, AT10

Bảng 3.5: Hoạt tính sinh học của các chủng Azotobacter lựa chọn

Ký hiệu

chủng

Cố định nitơ (nmol

etylen/ml/ngày)

Sinh AIA

(gAIA/ml)

Ức chế vi khuẩn gây bệnh héo

xanh lạc (vòng vô khuẩn D-d, mm)

AT4 3281,6 39 -

Ghi chú: (+): Vòng phân giải nhỏ (< 0,1 cm)

3.2 Lựa chọn tổ hợp chủng Azotobacter để sản xuất chế phẩm

Qua các thí nghiệm xác định hoạt tính sinh học của 09 chủng Azotobacter phân lập được, chúng tôi đã tiến hành lựa chọn các chủng Azotobacter tối ưu nhất để sản xuất phân bón

HCVSV là: AT2, AT4, AT7, AT9 và AT10

3.2.1 Mối quan hệ của các chủng lựa chọn

Đã tiến hành xác định mối quan hệ giữa các chủng vi khuẩn lựa chọn theo phương

pháp cấy vạch tiếp xúc giữa các chủng vi khuẩn trên môi trường đặc hiệu

Khả năng sinh trưởng và phát triển của các chủng vi khuẩn trong môi trường dịch thể

Ba chủng vi khuẩn lựa chọn được nuôi cấy riêng rẽ và hỗn hợp trên môi trường dịch đặc hiệu Sau 48 giờ đánh giá khả năng sinh trưởng phát triển của các chủng theo phương pháp đã nêu ở trên

Khả năng sinh trưởng và phát triển của tổ hợp chủng lựa chọn trong chất mang

Ba chủng vi khuẩn lựa chọn được cấy theo tỷ lệ 1% vào các túi than bùn đã khử trùng Nuôi ở 300C, tiến hành kiểm tra mật độ tế bào các chủng sau 15, 30 và 45 ngày Kết quả ở bảng 3.8

ỗn hợp và riêng rẽ trong điều kiện cơ chất vô trùng đều tăng trong 15 ngày đầu Sau 30 ngày mật độ tế bào của các chủng lựa chọn giảm dần Tốc độ giảm mật độ tế bào khi nuôi riêng rẽ nhanh hơn so với khi nuôi hỗn hợp

3.2.1 Hoạt tính sinh học của các chủng vi khuẩn lựa chọn khi nuôi cấy ở dạng riêng rẽ và

hỗn hợp trong dịch thể và trong chất mang

Hoạt tính của các chủng được kiểm tra sau 2 ngày nuôi cấy, còn trong cơ chất khử trùng thì được kiểm tra sau 15 ngày