Sinh trưởng và phát triển của thực vật nằm ở nõn được gọi là mô phân sinh. Ở mô phân sinh xảy ra quá trình phân chia và kéo dài tế bào quá trình này sản sinh ra mô phân sinh sinh dưỡng và mô phân sinh sinh thực Mô phân sinh sinh dưỡng (vegetative meristems) tạo ra các bộ phận của cây như thân, lá và rễ , trong khi đó mô phân sinh sinh thực (reproductive meristems) tạo ra các cơ quan hoa, quả và hạt. Sinh trưởng và phát triển của thực vật nằm ở nõn được gọi là mô phân sinh. Ở mô phân sinh xảy ra quá trình phân chia và kéo dài tế bào quá trình này sản sinh ra mô phân sinh sinh dưỡng và mô phân sinh sinh thực Mô phân sinh sinh dưỡng (vegetative meristems) tạo ra các bộ phận của cây như thân, lá và rễ , trong khi đó mô phân sinh sinh thực (reproductive meristems) tạo ra các cơ quan hoa, quả và hạt.
SINH LÝ NẢY MẦM HẠT MỤC LỤC: CHƯƠNG I: Quá trình sinh sản thực vật CHƯƠNG II: Thành phần hóa học hạt CHƯƠNG III: Sự nảy mầm hạt CHƯƠNG IV: Trạng thái ngủ nghỉ hạt CHƯƠNG V: Sức sống hạt giống CHƯƠNG VI: Cách bảo quản hạt giống CHƯƠNG I: QUÁ TRÌNH SINH SẢN Ở THỰC VẬT Người thực hiện: Trần Quốc sỹ - Sinh trưởng phát triển thực vật nằm nõn gọi mô phân sinh Ở mô phân sinh xảy trình phân chia kéo dài tế bào q trình sản sinh mơ phân sinh sinh dưỡng mô phân sinh sinh thực - Mô phân sinh sinh dưỡng (vegetative meristems) tạo phận thân, rễ , mơ phân sinh sinh thực (reproductive meristems) tạo quan hoa, hạt I Các hình thức sinh sản thực vật - Giai đoạn sinh trưởng sinh thực thực chất trình sinh sản thực vật, có ý nghĩa to lớn đoạn bảo tồn nòi giống thực vật có ý nghĩa quan đến sống người - Thực vật nói chung trồng nói riêng có hai giai đoạn sinh trưởng : giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng sinh trưởng sinh thực - Giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng tính từ nảy mầm đến phân hoá hoa giai đoạn sinh trưởng sinh thực phân hố hoa đến hình thành quả, hạt chín - Hình thức sinh sản thực vật : sinh sản hữu tính sinh sản vơ tính II Sinh sản vơ tính Có Hai hình thức sinh sản vơ tính sinh sản sinh dưỡng (Vegetative reproduction) sinh sản vô phối Sinh sản sinh dưỡng Sinh sản sinh dưỡng khả tái sinh thực vật thành hồn chỉnh, từ phận tách khỏi mẹ đoạn thân, mắt, rễ, chồi… Sinh sản sinh dưỡng xảy tự nhiên mục đích nhân giống người A Các hình thức sinh sản sinh dưỡng - Sinh sản sinh dưỡng thân rễ: thân rễ lồi sinh sản theo hình thức mang chồi, chồi phát triển thành cành nhô lên mặt đất Những mẫu cành phát sinh nhiều rễ phụ nhánh phát triển thành sống độc lập.Ví dụ : cỏ tran , cỏ gừng - Sinh sản bồ: bồ thân sinh có lóng dài bị sát mặt đất, sau khoảng định gặp đất ẩm chồi thân đâm rễ vào đất sinh mới.Ví dụ: rau má,dâu tây - - - Sinh sản giò: thân địa sinh, thân hình dĩa dẹp phía có nhiều rễ phụ, phía có chồi bao bọc bới nhiều vảy chứa chất dự trữ Những chồi phát triển thành Ví dụ: tỏi, hành tây - Sinh sản củ: Cây có củ thân địa sinh, củ có nhiều mắt che vảy nhỏ Mỗi mắt phát triển thành chồi thành hồn chỉnh Ví dụ: khoai tây, khoai lang - Sinh sản thai sinh: Một số lòng gần hoa, hoa phát sinh chồi đặc biệt Những chồi rơi xuống mặt đất gặp kiện thuận lợi mọc thành gọi hình thức sinh sản thai sinh.Ví dụ tỏi (Allium sativum) - Sinh sản chồi phụ: chồi phụ phát sinh từ rễ, chồi phụ phát triển thành hồn chỉnh Ví dụ : khoai lang, măng tây Một số khác chồi phụ mọc hay chồi phụ mọc từ thân dứa Sinh sản khúc thân: thân loài thương chia thành phân khú, khúc rơi xuống đất đâm chồi thành sống độc lập ví dụ: xương rồng ứng dụng nhân giống sinh dưỡng - Duy trì dịng vơ tính :phương pháp biết tạo vô tính tập hợp vơ tính nhân từ mẹ gọi dịng vơ tính - Nhân giống không hạt : cần thiết số chuối, dứa, nho… - B Sinh sản vô phối - Khái niệm: Vô phối hình thành hạt từ mơ nỗn mẹ, khơng trải qua trình giảm nhiễm thụ tinh có hoa để phát triển thành phơi - Ở thực vật bậc cao phát sinh phôi phát triển hạt tất loài sinh sản hữu tính kết q trình thụ tinh kép Một tế bào tinh trùng kết hợp với tế bào trứng hình thành hợp tử phát triển thành phôi, đồng thời tinh dịch kết hợp với tế bào trung tâm để phát triển nội nhũ tam bội Sinh sản vô phối chia thành hình thức chủ yếu: - Bào tử lưỡng bội (diplospory): Tế bào mẹ đại bào tử không vào phân chia giảm nhiễm ngừng giai đoạn đầu phân chia giảm nhiễm, trải qua phân chia ngun nhiễm khơng giảm genome - Hình thức vô bào tử (apospory): tế bào khởi đầu vô tính hình thành từ tế bào phơi tâm phân biệt, sau phân chia lần nguyên nhiễm hình thành túi phôi chứa tế bào trứng lưỡng bội trực tiếp phát triển thành phôi không thụ tinh Tuy nhiên số lồi cần q trình thụ tinh tế bào trung tâm để hình thành hạt - Hình thức phơi bất định (adventitious embryogenesis) : khởi đầu từ mô xô ma bầu nhụy, tế bào hạch vỏ Các tế bào phát triển tực tiếp thành phơi hồn chỉnh với phơi hữu tính hình thành sau thụ tinh - Cơ chế vơ phối: Cơ chế vô phối xảy đảm bảo yêu cầu là: 1) tế bào phát sinh có khả hình thành phơi trước phân chia giảm nhiễm, 2) tự phát sinh, phát triển thụ tinh đơn tính phơi 3) có khả tạo nội nhũ tự sinh nội nhũ qua thụ tinh Phương pháp nhân giống vơ tính - Giâm cành: hình thức cắt từ thân, nhánh hay từ đoạn có chồi ngọn.Nơi vết cắt z mọc từ mô sẹo - Chiết cành: chọn cành sau lột đoạn vỏ cành sau làm bầu đất bọc vào chỗ lột đợi cho chúng mọc rễ bắt đắt cắt xuống đem trồng xác định khả nảy mầm hạt ngũ cốc nhiễm nấm bệnh( Fusarium) Kết nghiên cứu sử dụng phương pháp ñể xác ñịnh mức ñộ mạnh khỏe hay yếu hạt Phương pháp Hiltner sau: Hạt gieo gạch vụn ẩm hộp cát trải lên lớp gạch vụn ẩm dày cm đặt hộp phòng tối điều chỉnh nhiệt độ thời gian định tùy theo loài Những hạt bị bệnh, tổn thương giới hư hỏng nảy mầm xuyên qua lớp gạch vụn Phần trăm bình thường xem mức sức sống hạt giống Phương pháp sử dụng phổ biến Mỹ khơng cung cấp thơng tin tốt kiểm nghiệm nảy mầm chi phí cao, khoảng khơng gian kiểm tra cần rộng 1.4.10 Xử lý hạt dung dịch hạn chế thẩm thấu ( Osmotic Stress) Khi hạt gieo đồng ruộng thường bị phụ thuộc vào độ ẩm đồng ruộng điều kiện bất thuận hạn đất dẫn đến nảy mầm Như điều kiện hạn tạo phịng thí nghiệm đất hay dung dịch đất hệ thống dung dịch khác ( Sharma,1973) Điều kiện đất tiêu chuẩn khó nhận phịng thí nghiệm, hệ thống dung dịch khác thay hạn đất phù hợp để đánh giá phòng thí nghiệm Các dung dịch có tiềm thẩm thấu ñặc thù sodium clorid (NaCl), glycerol, sucrose, polyethylene glycol (PEG), manitol phù hợp để thay hạn đất thực đánh giá phịng thí nghiệm Nhưng chất thẩm thấu có khối lượng phân tử thấp (sodium clorid, glycerol, sucrose, manitol ) vào hạt nảy mầm nguyên nhân gây độc cho hạt sử dụng Các chất có khối lượng phân tử cao PEG (4000 hơn) hỗn hợp phù hợp thay điều kiện hạn đất sử dụng để đánh giá khơng có độc tố ảnh hưởng đến hạt (Manorha,1966 Moore,1968) Dung dịch PEG- 6000 nhiều nồng độ nhiệt độ khác dùng để xác định sức sống hạt giống(Michel Kaufmann,1973) Tỷ lệ nẩy mầm điều kiện giảm rõ rệt ảnh hưởng đến mầm nhiều rễ mầm Hạt giống có sức sống tốt có khả chống chịu tốt với điều kiện nhân tạo sử dụng PEG, phương pháp để xác định sức sống hạt giống + Ưu điểm phương pháp không cần phương tiện thiết bị đặc biệt huấn luyện kỹ thuật cho cán kiểm nghiệm + Nhược điểm hạt nhỏ hạt lớn nhu cầu nước khác nhau, hạt nhỏ cần nước nên có khả nảy mầm tốt ngâm PEG 1.4.11 Phương pháp kiểm tra hô hấp Sự nảy mầm hạt sinh trưởng yêu cầu sử lượng trao đổi chất nhận từ q trình hơ hấp Vì giảm tỷ lệ hô hấp hạt nảy mầm giảm sinh trưởng Tỷ lệ hô hấp đo 18 đầu hạt nảy mầm sử dụng để phát gây hại tia gama ngơ, lúa miến, lúa mì, củ cải đỏ lạnh gây hại đậu lima, cacao Có tương quan thuận tỷ lệ hút oxy trình hấp phụ sinh trưởng con, nghiên cứu khác lại cho mối liên hệ không chắn Phương pháp đánh giá sức sống hạt giống thông qua tỷ lệ hô hấp thực nhanh số lượng mẫu lớn yêu cầu thiết bị máy đo hô hấp đào tạo cán kỹ thuật Những hạt bị dập vỡ giới kết qủa đo khơng xác Bệnh hạt giống kiểm nghiệm bệnh hạt giống Nhiều quốc gia giới kiểm nghiệm bệnh quy định bắt buộc kiểm nghiệm chất lượng hạt giống, kiểm nghiệm bệnh hạt giống có yêu cầu trang thiết bị, dụng cụ điều kiện định Thứ có nhiễm bệnh lấy bệnh lây nhiễm hạt , xây dựng tiêu chuẩn nhiễm bệnh làm sở sở đánh giá Ví dụ 5% số hạt ảnh hưởng đến giá trị kinh tế hạt giống suất trồng mức có ý nghĩa Hơn quy định sản xuất hạt giống khu vực không nhiễm sâu bệnh sâu bệnh di chuyển từ vùng khác đến, kiểm nghiệm bệnh hạt giống cần thiết Phương pháp kiểm nghiệm bệnh hạt giống cải tiến nước phát triển kiểm nghiệm bệnh vi khuẩn số trồng quan trọng kết suất sản lượng trồng ñược cải thiện có ý nghĩa sử dụng hạt giống bệnh 2.1 Vi sinh vật hạt Theo Sinclair, 1979 hạt giống giới vi mô vi sinh vật , đặc biệt nấm bệnh, vi khuẩn, virus đơi giun trịn Những vi sinh vật hạt nhiều nguyên nhân gây bệnh trồng Một số vi sinh vật sống bề mặt hạt không làm sức sống hạt, chúng gây hại điều kiện môi trường thuận lợi Những vi sinh vật nguyên nhân làm yếu rễ ảnh hưởng đến kết kiểm nghiệm nảy mầm hạt giống Một số vi sinh vật khác sống phận hạt bắc, vỏ vỏ hạt xâm nhập vào con, mầm điều kiện thuận lợi Một số sống tồn bên hạt mô phôi nội nhũ, không gây hại cho hạt kìm hãm nảy mầm hay suy yếu con, số lây nhiễm vào trồng gây hại ảnh hưởng đến suất 2.2 Xử lý ngăn ngừa bệnh hạt giống 2.2.1 Xử lý trước thu hoạch Xử lý bệnh hạt giống trước thu hoạch biện pháp ngăn ngừa bệnh hạt giống hữu hiệu thực ba phương pháp sau: 1) Chọn khu vực sản xuất bệnh 2) Áp dụng kỹ thuật canh tác tiến 3) Kiểm tra kỹ lưỡng loại bỏ sớm bị sâu bệnh Một phương pháp sản xuất hạt giống môi trường hạn chế bệnh sản xuất hạt giống đậu nổ đậu thức ăn gia súc Califolia Mỹ thực khu vực khơ, có tưới hạt giống khơng bị bênh bạc (Pseudomonas vulgaris) Ngoài chọn nơi sản xuất cần áp dụng kỹ thuật sản xuất tiên giải pháp ngăn ngừa bệnh hạt giống như: + Trồng giống bệnh + Xử lý hạt giống (bằng thuốc hoá học) trước gieo trồng + Rắc hạt đồng với thuốc trừ nấm, vi khuẩn thuốc hoá học khác + Ngắt hay nhổ bỏ bị bệnh + Không tưới phun để tạo môi trường ẩm độ khơng khí thuận lợi cho nấm bệnh phát triển + Kiểm tra kỹ lưỡng ñồng ruộng để ngăn ngừa, xử lý loại bỏ bệnh trước thu hoạch 2.2.2 Xử lý trình thu hoạch Xử lý bệnh hạt giống trình thu hoạch sau thu hoạch giải pháp cuối diệt trừ tận gốc bệnh hại hạt gồm phương pháp: + Tẩy uế bề mặt hạt hoá chất + Phân loại hạt bệnh hạt + Xử lý nước nóng + Xử lý chất kháng sinh hữu Xử lý chất kháng sinh kháng sinh hữu không xử lý bề mặt hạt số chất thấm vào hạt nên diệt bệnh nằm mô hạt Xử lý nước nóng cần xem xét nhiệt độ nước diệt mầm bệnh không gây hại hạt giống 2.3 Nấm bệnh liên kết với hạt Nấm nguyên nhân lớn gây hại trồng, hạt phổ biến bệnh vi khuẩn virus Hơn 8000 loài nấm hại trồng có hạt giống nhận biết Nấm hại hạt giống gồm hai loại ký sinh hoại sinh Nấm hoại sinh không lựa chọn ký chủ nên tìm thấy hạt nhiều lồi trồng nấm ký sinh có lựa chọn ký chủ nên tìm thấy phạm vi số lồi định Cả hai loại tìm thấy bề mặt hạt, bắc vỏ hạt, nấm ký sinh tự phát sinh hạt nấm hoại sinh nguyên nhân lây nhiễm từ bên ngồi vỏ hạt, dụng cụ nảy mầm khơng khử trùng trước kiểm nghiệm nguyên nhân lây nhiễm nấm Nấm ký sinh gây thiệt hại sản lượng trồng lớn vấn đề quan trọng sản xuất nơng nghiệp vì: + Nấm ký sinh gây hại dẫn đến hạt không nảy mầm + Nấm ký sinh hạt sau phát tán bệnh đồng ruộng + Nấm ký sinh hạt trước thu hoạch làm giảm suất chất lượng hạt Nấm gồm tổ hợp sợi sinh dưỡng gọi sợi nấm, chúng sinh sản bào tử hạt thực vật bậc cao Cũng hạt trồng, bào tử nấm đa dạng kích thước,màu sắc, chúng có kích thước nhỏ phải quan sát kính hiển vi Một số nấm khơng có bào tử giới tính mà sinh sản cấu trúc sinh dưỡng 2.4 Phương pháp xác định bệnh nấm hạt giống 2.4.1 Kiểm tra nấm Agar Đây phương pháp lâu đời phổ biến để kiểm tra bệnh nấm hạt Agar cacbohydrat trung tính chế từ rong biển, chứa lượng nhỏ dinh dưỡng cho sinh trưởng nấm, kiểm tra cần bổ xung thêm chất chiết từ củ khoai tây, rau Agar trung tính pha chế sau: agar dạng bột cộng lượng nước phù hợp bổ sung dinh dưỡng làm môi trường Hỗn hợp khử trùng nồi hấp 15 - 20 phút làm lạnh đến 50oC cho thêm chất kháng sinh Hỗn hợp rót cẩn thận vào đĩa petri , tránh làm nhiễm bẩn, để nguội sau 20 phút sử dụng được.Hạt kiểm tra làm bề mặt trước NaOCl 1% (dung dịch Sodium Hypochlorite) Chuẩn bị dung dịch chất tẩy sau: pha 20 phần nước tẩy (NaOCl = 5,25%) với 85 phần nước, loại ký sinh ăn ngầm pha đặc Cơng việc để loại trừ nấm hoại sinh vỏ hạt phát triển nhanh agar ngăn cản che lấp nấm bệnh hạt phát triển chậm Thông thường 10 hạt vệ sinh sau kiểm tra, hạt kẹp đặt lên mặt agar, đỉnh kẹp vệ sinh cách nhúng cồn 70% hơ qua lửa đèn cồn Đôi vi khuẩn phát triển agar giấy thấm chiếm môi trường nấm, ngăn cản nấm không phát triển dẫn đến nhận biết khó khăn Khắc phục cách cộng thêm chất kháng sinh steptomycine sulfate vào nồi hấp agar trung tính để nguội 50 - 55oC sử lý nước trường hợp kiểm tra giấy thấm Sau cấy đĩa petri ủ 20 - 25oC khoảng ngày với hạt nhiễm bệnh nhận biết sở đặc điểm quan sinh dưỡng bào tử Ngày sử dụng đĩa petri nhựa thay thuỷ tinh cho phép tiết kiệm lao động làm sau hay trước nuôi cấy 6.2.4.2 Phương pháp giấy thấm Phương pháp kiểm tra bệnh hạt giấy thấm tương tự kỹ thuật kiểm tra nảy mầm, đặt hạt giấy thẩm ẩm ủ điều kiện thuận lợi cho nấm phát triển Phương pháp bao gồm thấm nước khử trùng cho nước bão hoà vào giấy thấm, nước đậm gạn bớt trước đặt hạt với kẹp, tránh hạt dính liền Hạt giấy thấm nảy mầm sinh trưởng giấy thấm khó khăn kiểm tra bệnh hạt giống Tình trạng khắc phục kỹ thuật lạnh, cho hạt hập thụ 24 (48 đến 72 ngô) 24 nhiệt - 15oC sau ủ bình thường cho nấm bệnh phát triển.( nhiệt độ 20 - 25oC với 12 tối sáng chu kỳ - ngày) Nhiều loại nấm kích thích phát triển ánh sáng xanh tối xen kẽ xác dịnh phương pháp agar 6.2.4.3 Phương pháp tính độc Kiểm tra tính độc tách nấm bệnh nghi ngờ từ kiểm tra agar giấy thấm Nuôi cấy agar để nhận biết bào tử quan dinh dưỡng nấm lây nhiễm lên trồng (thường con) để quan sát triệu chứng bệnh, tiếp sau lại lấy nuôi cấy bệnh lại mơi trường phù hợp để xác định xác Phương pháp Koch nêu thành lý thuyết phương pháp nhận biết loại bệnh hạt Lây nhiễm mầm bệnh lên chích phương pháp khác (Phun, rắc trà học) 6.2.4.4 Phương pháp không nuôi cấy Một số loại bệnh hạt quan sát qua mẫu hạt kỹ thuật không nuôi cấy đặc biệt, ví dụ nấm cựa gà quan sát thấy thấy có mặt vẩy sừng tối lớn tạo nên thể, nấm mốc loại hạt hầu hết quan sát mắt thường Kiểm tra quan sát thể có hiệu với nấm than lúa mỳ, nấm hoa cúc lúa nước, nấm thường vỡ tuốt làm hạt giống, phát tán đến hạt khác lô hạt ảnh hưởng nghiêm trọng đến chất lương hạt giống Phương pháp xác định tỷ lệ nấm bệnh lô hạt quan sát sau: Làm mềm hạt ngâm dung dịch NaOH qua đêm Tách phôi qua tia nước ấm gạn lọc lại qua rây kiểu giây bột Rửa nhanh với dung dịch lactophenol nước, phơi cịn vỏ trấu nội nhũ chìm xuống đáy gạn Đặt phôi tách đĩa thuỷ tinh đáy dày khử trùng trước đun lactophenol 10 đến 20 phút Xếp phôi theo trật tự kiểm tra sợi nấm kính kiển vi phóng đại Phương pháp kiểm tra loại nấm bệnh ăn sâu vào phôi hạt, nhiên kiểm nghiệm bệnh hạt cần có cán chuyên môn đào tạo để thực phân loại chủng loại bệnh, chủng nấm gì? 2.5 Bệnh nấm hoại sinh hạt giống Nấm hoại sinh sinh trưởng mơ chết, tồn tồn hạt, chúng khơng ngun nhân gây bệnh trồng nấm ký sinh, bào tử nấm hoại sinh tồn khắp nơi hạt khơng khí Chúng có số lượng lớn hạt bảo quản nẩy mầm, sinh trưởng với số lượng vô lớn với điều kiện bảo quản không vượt độ ẩm 75% 15oC 6.2.6 Bệnh vi khuẩn 6.2.6.1 Bệnh vi khuẩn hạt giống Bệnh vi khuẩn hạt kiểm nghiệm nhiều phịng thí nghiệm giới bắc Mỹ có 20 phịng thí nghiệm kiểm nghiệm bệnh vi khuẩn, hầu hết kiểm nghiệm bệnh bạc đậu, rau, cà chua bắp cải Bốn phương pháp kiểm nghiệm bệnh vi khuẩn là: 1) Quan sát nhiễm vi khuẩn đặc điểm vỏ hạt 2) Chuẩn đoán triệu chứng lây nhiễm từ dịch chiết vi khuẩn từ lô hạt giống 3) Tách chiết vi khuẩn ñể nhận biết trực tiếp 4) Phối hợp phương pháp 6.2.6.2 giống Phương pháp kiểm nghiệm bệnh vi khuẩn hạt a) Kỹ thuật huyết Kỹ thuật huyết sở chuỗi phản ứng kháng nguyên kháng thể Kỹ thuật nhận biết dương tính vi khuẩn virus, huyết miễn dịch chứa kháng thể đặc thù chuẩn bị sau : Kháng nguyên nhiễm vào (vi khuẩn hay virus) máu động vật, thường thỏ, máu chống lại kháng nguyên tạo kháng thể Huyết miễn dịch dùng để kiểm tra có mặt vi khuẩn hạt giống Phương pháp thực hiện: hạt giống ñược nghiền với nước tạo thành dung dịch trộn môi trường agar, huyết đối kháng cho loại vi khuẩn đặc thù đưa vào môi trường xảy kết tủa chứng tỏ có mặt kháng nguyên ( vi khuẩn gây hại) Nếu không xảy kết tủa tác nhân bệnh khơng có mặt b) Gây nhiễm trồng Gây nhiễm trồng phương pháp hữu ích để nhận biết vi khuẩn virus đặc thù gây hại hạt giống Phương pháp kiểm tra đơn giản dễ thực Hạt kiểm tra ngâm nước khử trùng vài sau chắt lọc lấy nước lây nhiễm vào con, khoẻ mạnh Đôi nghiền hạt thành dung dịch đồng để lây nhiễm vào Lây nhiễm vào libe để dịch nhiễm chuyển ñi toàn Sau lây nhiễm theo dõi chặt chẽ triệu chứng bệnh để đánh giá thông qua triệu chứng biểu để xác định tác nhân gây bệnh Một phương pháp thường sử dụng, đặc biệt đánh giá bệnh virus hại hạt giống chà sát hỗn hợp dịch hạt (dịch mẫu hạt) chất độn kim loại lên bề mặt lá, chất độn châm vào mô đưa nguồn bệnh vào triệu chứng bệnh biểu Yêu cầu phương pháp sử dụng khoẻ, bệnh, trồng điều kiện vơ trùng( nhà kính nhà lưới) Triệu chứng bệnh biểu sau - tuần lây nhiễm 2.7 Bệnh virus hạt giống Corroll, 1979 ghi nhận có khoảng 200 loại virus gây bệnh trồng 100 loại biết, cịn 500 loại virus khác không gây bệnh hạt giống Trong số có 80 loại virus chuyển qua hạt, số bề mặt hạt cịn lại tồn bên bên ngồi phơi 2.7.1 Kiểm nghiệm sinh học Kiểm nghiệm sinh học gồm quan sát trực tiếp hạt trồng quan sát triệu chứng trồng + Kiểm nghiệm qua triệu chứng quan sát triệu chứng phát triển bệnh con, kiểm nghiệm đơn giản, tốn phù hợp để kiểm nghiệm hạt Kiểm nghiệm thông qua biểu triệu chứng thực cách nghiền hạt hay từ lô hạt kiểm tra, bột nghiền lây nhiễm học vào khoẻ, quan sát triệu chứng bệnh phát triển nhận biết nguyên nhân gây bệnh + Kiểm nghiệm trực tiếp hạt thực hạt bình thường hạt khơng bình thường, chiết dịch hạt lây nhiễm lên thị hay trồng theo dõi phát triển đặc điểm triệu chứng bệnh Có thể kiểm tra hạt hay hỗn hợp số hạt 2.7.2 Kiểm nghiệm bệnh virus hạt huyết Nguyên lý kiểm nghiệm bệnh virus hạt giống huyết tương tự kiểm nghiệm bệnh vi khuẩn Phương pháp sở phản ứng virus hạt dịch hạt với mẫu huyết miễn dịch máu động vật (thỏ) Có kỹ thuật thử huyết ñược Carroll ñề xuất năm 1979 a) Kỹ thuật khuyếch tán kép: Kỹ thuật khuếch tán kép ñược sử dụng phổ biến phương pháp huyết miễn dịch Nó xét nghiệm hạt đơn phần hạt Thông thường hạt kiểm nghiệm ngâm nước rỉ nhẹ Khi toàn hạt phần hạt nghiền chuyển vào khoang cắt môi trường khuyếch tán (thường gel agar) sau đưa vào huyết miễn dịch chuyên biệt virus nghi ngờ cần kiểm tra vào khoang riêng Trong thời gian phân tử virus kháng nguyên kháng thể khuếch tán hai phía khác Sự khuếch tán hai hướng khác gọi khéch tán kép Khi hai phản ứng huyết tiếp cận đến điểm gel nơi tập trung tương đối loại đương lượng huyết học Phức hợp phân tử kháng nguyên kháng thể kết tủa cố định Sự kết tủa xuất dải trắng số điểm hai khoang Để phát virus có cấu trúc kéo dài kỹ thuật khuếch tán, chuẩn bị hạt phải xử lý số tác nhân phá vỡ làm suy giảm virus kháng nguyên để tăng khuếch tán virus hạt (kháng nguyên) agar.Tác nhân suy giảm virus thường sử dụng sodium dodecyn sulfat ( Na2SO4) Phương pháp đặc thù độ nhạy chuẩn đốn nồng độ virus 10 - 25 µg/ml b) Kỹ thuật khuyếch tán toả tròn ( Radial difussion Test) Phương pháp khuyếch tán toả tròn khuyếch tán đơn giống kỹ thuật khuyếch tán kép khuyếch tán virus kháng nguyên khoang môi trường agar Huyết chứa kháng thể với virus đặc thù đưa vào môi trường agar khoang với hạt con, virus có mặt chúng khuyếch tán khoang Khi chúng kéo dài đến bề mặt khoang chúng phối hợp với kháng thể để kết tủa vùng gặp hình thành chuỗi quầng xung quanh khoang Thông thường huyết miễn dịch từ thỏ cho phép kiểm nghiệm với virus làm suy yếu sử dụng thực phương pháp Phương pháp nhạy, nhanh phát virus với lượng nhỏ µg/ml virus suy yếu vài phút hay vài c) Phương pháp Kiểm tra nhựa mủ ( Latex flocculation test) Sự kết nhựa mủ phương pháp huyết sinh học khác thực sau: xay 100 hạt sau 0,1g hạt xay cho vào ml dung dịch đệm vào cối giã nghiền Khoảng 20 ml dịch chiết hạt cho vào pipet 100ml 10 ml với nhựa mủ đánh dấu có Nhựa mủ đánh dấu bao gồm huyền phù polystyrence nhựa mủ hình cầu (đường kính khoảng 0,81 µm) Nhựa mủ hình cầu nhạy cảm bao trùm tế bào kháng thể cho virus đặc thù lắc pipet khoảng 15 phút quan sát kính hiển vi phân lớp Khi virus có mặt mẫu kiểm tra Nhựa mủ huyền phù kết d) Phương pháp ELISA) Enzyme-linked immunosorbent Assay ( Kỹ thuật ELISA có độ nhạy cao, số nghiên cứu cho phát virus nồng độ 0,1 µg/ml Phương pháp sử dụng phát virus đốm vòng hạt thuốc lá, khảm hạt đậu tương với tỷ lệ thấp ( - 4%) Phương pháp cần có kỹ thật, trang thiết bị tốn thường sử dụng kiểm nghiệm hạt giống trồng quý giá trị cao ... có hai giai đoạn sinh trưởng : giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng sinh trưởng sinh thực - Giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng tính từ nảy mầm đến phân hoá hoa giai đoạn sinh trưởng sinh thực phân hố... sinh sinh dưỡng mô phân sinh sinh thực - Mô phân sinh sinh dưỡng (vegetative meristems) tạo phận thân, rễ , mơ phân sinh sinh thực (reproductive meristems) tạo quan hoa, hạt I Các hình thức sinh. .. CHƯƠNG I: Quá trình sinh sản thực vật CHƯƠNG II: Thành phần hóa học hạt CHƯƠNG III: Sự nảy mầm hạt CHƯƠNG IV: Trạng thái ngủ nghỉ hạt CHƯƠNG V: Sức sống hạt giống CHƯƠNG VI: Cách bảo quản hạt giống