5. Ý nghĩa khoa học thực tiễn của luận án
3.2.Nhân dòng và biểu hiện gen meglA từ chủng Aspergillus niger VTCC-
F021 trong Pichia pastoris
Chủng A. niger VTCC-F021 có khả năng sinh tổng hợp cellulase mạnh nhất đã được tuyển chọn trong số những chủng A. niger do Bảo tàng Giống chuẩn vi sinh vật Việt Nam cung cấp. Chủng A. niger VTCC-F021 đã được tối ưu môi trường lên men thích hợp, tinh sạch và đánh giá tính chất của cellulase tự nhiên do chủng A. niger VTCC-F021 sinh tổng hợp [139], [140]. Năm 2011, Pham và đtg đã nhân dòng và biểu hiện gen eglA có chiều dài 720 bp mã hóa cho endoglucanase A chứa peptide tín hiệu từ chủng A. niger VTCC-F021 trong
P. pastoris GS115. Endoglucanase A tái tổ hợp (rEglA) có kích thước khoảng 33-34 kDa, hoạt tính riêng 16,2 U/mg protein. rEglA hoạt động cao nhất ở 55C và pH 5, bền ở 30-37C và pH 3,5-4,5. rEglA có ái lực cao với -glucan. Ion Cu2+ và EDTA hoạt hóa rEglA. Các ion kim loại khác đều làm giảm hoạt tính của rEglA. Enzyme rEglA giữ được 70-98% khi ủ với ethanol, acetone 10-20% (v/v) và Tween 20, Tween 80 0,5-2% (v/v). Chủng P. pastoris GS115/pPeglA tái tổ hợp có năng suất biểu hiện endoglucanase A thấp, chỉ đạt 1,67 U/ml [9], [141]. Peptide tín hiệu là đoạn peptide nằm ở đầu N của chuỗi polypeptide có vai trò trong quá trình tiết protein qua màng và được cắt bỏ bởi peptidase khu trú bề mặt phía ngoài của màng tạo ra phân tử protein có hoạt tính sinh học [4], [7]. Việc biểu hiện đồng thời cả peptide tín hiệu có thể làm giảm năng suất biểu hiện, ảnh hưởng đến hoạt tính và tính chất của enzyme tái tổ hợp. Do đó, biểu hiện endoglucanase tái tổ hợp không chứa peptide tín hiệu tự nhiên có thể nâng cao năng suất biểu hiện enzyme tái tổ hợp và thay đổi một số tính chất của enzyme tái tổ hợp. Vì vậy, chúng tôi đã tiến hành biểu hiện gen meglA mã hóa endoglucanase A tái tổ hợp không chứa peptide tín hiệu (rmEglA) của chủng A. niger VTCC-F021 trong P. pastoris GS115 với mục đích nhằm cải thiện năng suất biểu hiện và thay đổi tính chất của enzyme tái tổ hợp phù hợp với định hướng ứng dụng.