Sau khi chọn được pH dung dịch điện ly nền là 9,3, chúng tôi tiến hành khảo sát nồng độ dung dịch điện ly nền Natritetraborat.
Cùng với pH của dung dịch đệm, chất điện ly trong pha động cũng có vai trò quan trọng và phải có nồng độ phù hợp. Trên thực tế, người ta cố gắng chọn chất đệm pH cũng đồng thời là chất điện giải của sắc ký điện di. Như vậy thành phần pha động sẽ không phức tạp, không gây khó khăn, ảnh hưởng đến hiệu quả tách sắc ký.
Khi nồng độ đệm tăng, nghĩa là nồng độ các ion tăng, thường làm giảm độ lớn lớp điện kép, ảnh hưởng đến tương tác tĩnh điện của chất tan với thành mao quản. Mặt khác, nó làm tăng lực ion của dung dịch, làm lớp điện kép bị thu hẹp lại kết quả là làm giảm thế Zêta và giảm luôn tốc độ của dòng EOF.
Lực ion lớn lại tạo ra dòng điện cao và gây ra hiệu ứng nhiệt June lớn làm mao quản nóng lên và xuất hiện hiện tượng mở rộng vùng mẫu.
Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ đệm borat bằng cách cố định nồng độ SDS và các điều kiện điện di khác, rồi tiến hành phân tích hỗn hợp chuẩn Lamivudin 150µg/ml, Zidovudin 300µg/ml, Nevirapin 200µg/ml ở các nồng độ dung dịch natritetraborat khác nhau bao gồm: 5mM, 10mM và 20mM. Kết quả thu được được thể hiện ở Hình 11.
Borat 5mM SDS 50mM
Borat 10mM SDS 50mM
Hình 11: Điện di đồ hỗn hợp 3 chuẩn với dung dịch điện ly nền ở các nồng độ borat khác nhau
Nhận xét: Kết quả thu được cho thấy, nồng độ borat tăng từ 5mM đến 20mM thì thời gian lưu của các chất tăng dần, đồng thời khả năng tách của các chất cũng tăng. Tuy nhiên, ở đây, chúng tôi lựa chọn nồng độ borat 10mM để tiến hành cho các phép phân tích sau. Ở nồng độ borat 10mM, cả ba pic đều tách khỏi nhau, mặt khác, thời gian phân tích lại không dài (các pic đều xuất hiện trước phút thứ 10), pic nhọn, không bị doãng chân, dòng điện trong quá trình chạy điện di phù hợp. Khi tiến hành chạy với nồng độ borat 5mM, dòng điện trong mao quản không ổn định, hay xảy ra hiện tượng sụt dòng. Tiến hành phân tích với borat 20mM, dòng điện lại quá cao ~80 µA, thế áp vào mao quản không ổn định. Phân tích thử với borat 30mM, gần như không tiến hành phân tích được do dòng điện trong mao quản quá lớn, dẫn đến hiện tượng sụt dòng và phải dừng quá trình phân tích.